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informacion, novedades, nuevos métodos relacionados con los medios de cultivo, Microbiología de alimentos, aguas, medicamentos, cosméticos y ambiente:

FOSFATASA ALCALINA LACTOGNOST

Método cualitativo para detectar Fosfatasa Alcalina en leche pasteurizada.

INSTRUCCIONES DE USO
1- En dos tubos de ensayo (P problema y C control) se introducen:

  • 10 ml de agua destilada.
  • 1 tableta de Lactognost I.
  • 1 tableta de Lactognost II.
    Al agitarse deben deshacerse las tabletas; si no, machacarlas con una varilla de vidrio.

2- En el tubo de ensayo P se pipetea 1 ml de la muestra de leche y en el tubo de ensayo C 1ml de leche que se ha liberado con seguridad de fosfatasa, calentándola previamente a 85 ºC.
3- Ambos tubos se mantienen en baño de agua o incubadora durante 1 hora a 37 ºC.
4- A cada tubo (PyC) se añade con una cucharilla dosificadora Lactognost III hasta enrasar.
5- Transcurridos 10 minutos comparar, en caso de resultado positivo, el color azul en el tubo P frente a la muestra de control C y determinar la intensidad del color mediante la escala de colores adjunta.Determinación de la fosfatasa en la nata y cuajo: como en la leche.Determinación de la fosfatasa en mantequilla: derretir 10 g de mantequilla en el tubo de centrífuga introducido en baño de agua de 40 ºC, centrifugar y seguir como con la leche.

OBSERVACIONES
Debida la gran sensibilidad del reactivo frente a vestigios de fenol es necesario proceder siempre con la máxima limpieza:
1- Emplear para cada muestra de leche una pipeta aparte.
2- Cuidado al agitar (transferencia de leche conteniendo fosfatasa).
3- Al tomar los reactivos ha de evitarse cualquier contaminación entre los mismos.
Además debe tenerse en cuenta qué materias plásticas o gomas pueden contener fenol y también se evitará todo contacto de las muestras con saliva, sudor (fosfatasa) o humo de tabaco (fenoles).
La pureza de los reactivos está garantizada, siempre que sean conservados bien cerrados en lugar fresco y protegidos contra luz y humedad.
El contenido del envase, una vez abiertos los tapones de origen, debe gastarse dentro de un máximo de 2 meses.
Referencia: SLC002. Kit para 100 pruebas.
Si desea seguir el Reglamento UE 2-2019 que entrará en vigor en 2021 mediante el cual los lobbies del laboratorio han conseguido barrer la innovación que aporta el milagro mediterráneo (la PIME), al exigir a los inventores de productos/métodos para industria alimentaria, el inviable pago de cientos de miles de € a AOAC, AFNOR o similar por cada referencia innovadora; puede seguir pidiendo este kit, al ser el método utilizado en todo el mundo desde hace muchas décadas, y por tanto ningún inspector ni auditor puede impedirle emplearlo. La mejor solución sería externalizar una proporción adecuada de los análisis a un laboratorio acreditado en este tema, para presentar sus informes a inspección de Sanidad, y así poder seguir usando internamente en paralelo este kit en esas y en las demás muestras para la mejora y rapidez de sus resultados de autocontrol. A fin de cuentas, este reglamento que corta de cuajo el I+D que no provenga de multinacionales no es nada nuevo, los kits de autocontrol nunca han servido para obtener resultados oficiales, pero ayudan a la industria a tomar las mejores decisiones para la rapidez y fiabilidad en la liberación de sus lotes.
Fabricado en la UE para LABORATORIOS MICROKIT desde 1990. Revisado en Mayo 2020

MICROKIT P/A COLICULT-MCC

COLIFORMES/ Escherichia coli.

Detección Presencia/Ausencia (P/A) en 100 (250) ml de agua.

INTRODUCCIÓN
Medio estéril COLICULT Cromofluorogénico (MCC Broth DMT900) para detección P/A (o recuento NMP empleando cubetas NMP Ref:1001020) de E.coli (fluorescente azul bajo luz de 366 nm VMT050 e indol + con reactivo de Kovacs SBH056) y demás coliformes (viraje a azul), que puede elegir en tres formatos diferentes:
a) RPL303 Frascos tomamuestras con caldo estéril hidratado y tapón a rosca para añadir en ellos 100 mL de la muestra de agua. Cajas 10u ó 9x10u
b) FPA900 Viales prepesados de polvo estéril con tapón a rosca para añadir a 100 mL de la muestra de agua (no incluido bote 100 mL VML155 o bolsa standup 100 mL B2787B estériles). Cajas 40u ó 10x40u
c) DMTI900- Botes 100 g de polvo estéril y cucharilla dosificadora para añadir a 100 mL de la muestra de agua (no incluido bote 100 mL VML155 o bolsa standup 100 mL B2787B estériles), Bote para 100 test

De gran utilidad como screening negativo de muestras rutinarias, al ser un método más fácil de emplear que la filtración de membrana y más fiable (escasez de falsos positivos y de falsos negativos, que en filtración de membrana es de nada menos que el 21% de las muestras analizadas en el mundo, por el estrés provocado durante la filtración).
También muy útil para que las potabilizadoras no dejen de analizar en festivos y fines de semana, ya que este método puede ser empleado por personal no especialista en microbiología, el mismo guarda de la depuradora puede hacerlo. La única precaución es que
el operario no toque ni el agua ni el polvo con sus manos, para evitar contaminaciones artificiales.

MODO DE EMPLEO

Es necesario tratar previamente el agua clorada, mediante
Tiosulfato Sódico, para que las células dañadas subletalmente se recuperen, excepto en los frascos tomamuestras RPL303, que ya lo incluyen.
Añadir los 100 mL de agua de muestra en el frasco o en el recipiente estéril que se va a utilizar; en el caso de los viales, añadir todo el contenido sobre el agua; en el caso de los botes de 100g, añadir una cucharadita rasa sobre el agua y cerrar el bote con la cucharilla
dentro para los posteriores usos. Agitar para homogeneizar. Incubar 8-48 horas a 35-37° C (Coliformes totales y E.coli) ó a 44° C (Coliformes Fecales y E.coli). La muestra inoculada sirve también de medio de transporte, por lo que no es necesario incubar inmediatamente después de la toma de la muestra, pudiendo transcurrir varias horas entre toma e incubación.
Para aguas envasadas o de baño, se analizan 250 mL, por lo que debe añadir 2 viales ó dos cucharaditas por muestra (no se pueden usar los frascos RPL303 para 250 mL, al haber sido diseñados sólo para 100 mL). El medio funciona correctamente desde mitad hasta
el doble de concentración, por lo que no es necesario afinar 2,5 viales ó 2,5 cucharaditas)

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

El viraje a color azul (XGal) demuestra la Presencia de Coliformes (totales o fecales según la Tª de incubación) en la muestra de agua. La Fluorescencia azul (luz azul por MUG) que se observa en la oscuridad bajo U.V.A. de 366 nm (linterna VMT050) demuestra la presencia de E.coli en la muestra de agua (confirmar con 0,5 ml de KOVACS-SBH056): anillo rojo de Indol en superficie es prueba positiva. E.coli O157 H7 se detecta por ser XGal + (vira a azul), de acuerdo con la definición moderna de coliforme; MUG – (no fluorescente a pesar de ser E.coli) e indol + (anillo rojo).
Es necesaria la ausencia (no viraje), que equivale a 0 ufc/100 mL (ó en 250 mL). Sólo en caso positivo debería repetirse la muestra por método cuantitativo si se requiere un recuento concreto, aunque la legislación exige 0 y por tanto no importa si hay 2 ó 950, en ambos casos el agua no es potable.

Material necesario no incluído: Tiosulfato Sódico para eliminar el cloro (SMT976) excepto en los frascos tomamuestras RPL303, que ya lo incluyen. Bote estéril 100ml (VML155), o bolsa estéril autosellable Stand-Up (B2787B). Estufa o incubador 35-37ºC (SIL12AR ó SIL24AR).
En homenaje a nuestro querido amigo, el Dr. Juan José Marcén, que falleció antes de conocer el éxito mundial de la fantástica idea que nos regaló en los años 90, este kit se regala a todas las ONGs que nos los pidan junto con otros parámetros P/A.
PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO O PARA ANÁLISIS DE CAMPO. MANTENER FUERA DEL ALCANCE Y DE LA VISTA DE LOS NIÑOS Y ANIMALES.
EXTREMADAMENTE HIGROSCÓPICO: MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO. AGITE EL BOTE ANTES DE USAR. EN ZONAS DE ELEVADA HUMEDAD AMBIENTAL, GUARDAR EL BOTE BIEN CERRADO EN UN TUPPER HERMÉTICO CON SILICAGEL.
VER TAMBIEN LAS NUEVAS REFERENCIAS FPA575 (COLICULT PLUS) y FPA537 (COLICULT-ISO 9308 ONPG+MUG) Puede convertir este kit en cuantitativo simplemente añadiéndolo antes de incubar a NMP-RACKS o a CLIPCOUNTER + QUANTIBAG

CONTROL DE CALIDAD

Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar laboratorio, tras largos fletes, tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,…)
DESHIDRATADO: Polvo crema PREPARADO: Paja
CONTROL DE CRECIMIENTO 8-24 h a 37°C aproximadamente:
E. coli WDCM 000013, vira a azul, da fluorescencia azul en la oscuridad bajo 366 nm y genera anillo rosa de indol, en 8h si el inóculo es alto y no procede de muestras estresadas, en 18-24h en caso contrario.
Enterobacter aerogenes WDCM 00175: Vira a azul-turquesa en 18 h. No da fluorescencia con 366 nm. Indol – (no rojo en superficie)
Pseudomonas aeruginosa WDCM 00026, no vira a azul, no da fluorescencia azul en la oscuridad bajo 366 nm y no genera anillo rosa de indol.
Enterococcus faecalis WDCM 00009: Inhibido.
Si desea seguir el Reglamento UE 2-2019 que entrará en vigor en 2021 mediante el cual los lobbies del laboratorio han conseguido barrer la innovación que aporta el milagro mediterráneo (la PIME), al exigirnos a los inventores de productos/métodos para industria alimentaria, el inviable pago de cientos de miles de € a AOAC, AFNOR o similar por cada referencia innovadora; nos puede pedir CCA Agar ISO 9308-1:2014 (Ref: DMT400 en deshidratado, TPL400 en tubo, ECOP23J en Ecoplacas, ECOPQ08J en Ecoplaquis MF…), ya que de este modo no es un método alternativo y por tanto ningún inspector ni auditor puede impedirle emplearlo. Aunque perderá el valor añadido del kit: su extraordinario poder de detección sin falsos negativos, el ahorro de filtración de membrana…. La mejor solución sería realizar una proporción residual pero razonable de muestras con el medio ISO en formato clásico, para presentar sus informes a inspección de Sanidad, y asi poder seguir usando internamente en paralelo este kit en esas y en las demás muestras, para la mejora, fiabilidad y rapidez de sus resultados de autocontrol. A fin de cuentas, este reglamento que corta de cuajo el I+D que no provenga de multinacionales, no es nada nuevo: los kits de autocontrol nunca han servido para obtener resultados oficiales, pero ayudan a la industria a tomar las mejores decisiones para la rapidez y fiabilidad en la liberación de sus lotes.
El usuario es el único responsable de la eliminación de los microorganismos según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.
Diseñado, Validado y Fabricado en la UE por MICROKIT bajo ISO 9001, ISO 11133 y GMPs desde 1994, revisado en Mayo de 2020

LISTERIA CHROMOCYTOGENES (OTTAVIANI AND AGOSTI) AGAR

(ISO 11290-1 Amendment 1 (15-10-2004), ISO 11290-2:2000/ A1:2004)

Ottaviani & Agosti Agar fue desarrollado por estos dos investigadores italianos antes de que una marca francesa les comprase los derechos para prepararlo en placa; luego, al publicarse en la addenda 2004 de la Norma ISO 11290, se liberó su fabricación para cualquier otro laboratorio. Sus extraordinarias sensibilidad, especificidad, eficacia, precisión, exactitud y rapidez… respecto al Oxford o al Palcam, acabaron con los graves problemas que éstos daban, sobre todo de falsos positivos con numerosos Enterococos y Micrococos. MICROKIT fue una de las primeras marcas que fue capaz de desarrollarlo (con la marca Cromocytogenes) no sólo en placa preparada, también en otros formatos preparados y ADEMAS, fuimos los primeros en comercializarlo en medio deshidratado (Dic-2004), cuando todo el mundo usaba (porque sólo podían usar) placas preparadas de escasa caducidad.


Actualmente los laboratorios acreditados ISO 17025 que lo emplean con marca Cromocytogenes de MICROKIT, nos dicen que recupera muchas más ufcs que las demás marcas y que nuestra extraordinaria caducidad de 3 meses a su recepción, les permite haber vuelto al uso de la placa preparada. Que una fórmula sea idéntica en diferentes marcas no significa que los resultados sean idénticos, hay más puntos débiles en la fabricación de medios de cultivo que pueden llevar a resultados tan dispares.


Agosti Listeria and Ottaviani Agar, preparado con los suplementos selectivos y diferenciales adecuados, es el más moderno, rápido, selectivo y diferencial medio de cultivo para el aislamiento e identificación presuntiva y diferencial de Listeria monocytogenes a partir de muestras alimentarias.

El sustrato cromogénico detecta la beta-glucosidasa, enzima común en todas las especies de Listeria y unas pocas cepas de Enterococos y Bacilos, provocando la aparición de colonias verde-azuladas. Un sustrato adecuado detecta la fosfolipasa propia de L.monocytogenes, provocando un halo de lisis/precipitación alrededor de sus colonias. La combinación de ambos sustratos permite diferenciar las colonias de Listeria spp, (verde-azuladas sin halo opaco) de las de Listeria monocytogenes (verde-azuladas rodeadas de un halo opaco). Dado que algunas cepas de L.ivanovii son capaces de provocar halo de fosfolipasa, se requiere confirmación de las colonias presuntivas (verdes con halo), con la simple prueba: Rhamnosa + / Xylosa – para L.monocytogenes (al revés para L.ivanovii): Kit completo KMT012, tambien disponible en tubos preparados, TPL014, TPL015, y en medio deshidratado DMT167 + suplementos DMT169 y DMT171. Ahorre el coste de las galerías de identificación y el agar sangre, que menciona la ISO 11290 porque esto se redactó antes de la addenda 2014 de dicha ISO sobre este nuevo medio cromogénico.
Bacillus circulans es capaz de dar falso positivo de Listeria spp. (colonias verdes sin halo), pero es X/R +/+
CÓDIGO del medio CHROMOCYTOGENES base DMT700. Concentración: 70,5 g/l. Ajustar a pH 7,2. Autoclavar 15 minutos a 121°C. Enfriar a 48-50°C. Se añaden una pareja de viales SMT700 (uno de cada uno de los dos tipos) por cada 500 ml de medio BASE esterilizado y enfriado a 45°C aprox. El suplemento selectivo, que es polvo, se hidrata con 5ml de agua estéril calentada a 50 ºC y filtrada por pirindola y cuando está disuelto, se añade tanto este suplemento como el fosfolipídico líquido, también precalentado a 50ºC, al medio chromocytogenes agar que ya está disuelto y esterilizado previamente y atemperado a 48-50 grados.
Agitar bien y verter en placas. Plaquitas herméticas con larga caducidad PPL970. Placas preparadas PPLM70 con 3 meses de caducidad a la entrega. Tubos preparados BASE TPL700 + suplemento SMT700. Frascos preparados BASE RPL700 + suplemento SMT700.

MODO DE EMPLEO: El medio final es crema opaco. Sembrar, dada su alta selectividad, incluso un inóculo concentrado en Fraser o LEB (nunca en Aguas peptonadas sin intermedio selectivo). Incubar 18-48 horas a 30-37°C aproximadamente. Confirmar sólo las colonias regulares, redondeadas, de 1-2 mm, verde-azuladas, con halo opaco. Según ISO 11290, algunas cepas estresadas (en particular por acidez) o fosfolipasa-débiles pueden generar halos estrechos, que se sólo ven bien tras 4 días de incubación. Se han reportado raras cepas de L.monocytogenes, especialmente procedentes de productos cárnicos, que crecen con colonias atípicas, de color blanco. En nuestra validación de Microstick-Listeria, pudimos testificar que tras solo 18 h de enriquecimiento en LEB de MICROKIT de 8 ufc de L.monocytogenes con 102-103 ufc de flora acompañante e interferente, la siembra directa en Agar Cromocytogenes no produjo ni un solo falso negativo en 20 tipos diferentes de alimentos, lo que nos permite proponer un protocolo de detección en solo 36h con 18 h LEB + 18 h Cromocytogenes. También hemos comprobado reiteradamente que añadiendo 18 ml de nuestro caldo LEB [x5] en 225 ml de nuestra Buffered Peptone Neutralizing Water, acortamos el enriquecimiento (revitalizador + selectivo) a sólo 18 horas y esta combinación obtiene las estrías más densas y las colonias más intensas de todas las permutaciones que hemos probado con Agua Peptonada Tamponada, Agua Peptonada Tamponada Neutralizante, LEB y Semifraser/Fraser. El tercer mejor método que hemos detectado es pasar 1 ml de pre-enriquecimiento de 18 h en 225 ml de Agua Peptonada Tamponada, a post-enriquecimiento en 9 ml de LEB otras18 h. Las dos temperaturas de incubación (primero a 30 ºC y luego a 35ºC) mencionadas en la ISO 11290 no han mejorado nuestros resultados, incubando todo a 35ºC. En todos los casos LEB de MICROKIT funciona mejor que semiFraser y Fraser.


COMPOSICIÓN: La composición de este medio es la aprobada en la versión 2004 de la Norma ISO 11290. La referencia SMT700+ de suplemento cromocytogenes engloba una pareja de viales. Contiene las cantidades indicadas en la ISO 11290-1:1996/Amd.1:2004 (E) de Ácido Nalidíxico, Ceftazidina, Polimixina B, Cicloheximida y L--phosphatidylinositol, que suplementan el medio base Ottaviani & Agosti DMT700- (enzimatic digest of animal tissues 18g, enzimatic digest of casein 6 g, yeast extract 10 g, sodium piruvate 2 g, glucose 2 g, magnesium glycerophosphate 1 g, magnesium sulfate anhydrous 0,5 g, sodium chloride 5 g, lithium chloride 10 g, disodium hydrogen phosphate anhydrous 2,5 g, 5-bromo-4-chloro-3-indolyl--D-glucopyranoside 0,05 g, Agar-agar 13,5 g en 930 ml de agua bidestilada).


CONTROL DE CALIDAD:
Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar laboratorio, tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,…)
DESHIDRATADO: Polvo grueso, Beige PREPARADO: Estéril, Beige
EVALUACIÓN DEL RENDIMIENTO ISO/TS 11133-2 24-48 h a 30-37 ºC, aplicando el método ISO 4831, o el indicado en el Manual MICROKIT actualizado:
Listeria monocytogenes WDCM 00019 y WDCM 00021, Colonias verdes con halo. Con respecto a PCA estandarizado*, recuento 277-424%, pero de forma más selectiva y diferencial. * El que cumple con recuperación superior al 92-125%
Listeria innocua WDCM00017, Correcto, Colonias verde-azuladas sin halo opaco.
Enterococcus faecalis WDCM00087, colonias incoloras.
Staph. aureus WDCM00033, colonias incoloras.
E. coli WDCM0013, inhibido completamente, tras añadir 103 ufc, no aparece ni una sola colonia.
El usuario es el único responsable de la eliminación de los microorganismos según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.

MICROKIT P/A ENTEROCULT

Enterococos fecales
Detección Presencia / Ausencia (P/A) en 100 (250) ml de agua

INTRODUCCIÓN:
Medio estéril ENTEROCULT diseñado por MICROKIT con base BEA para detección P/A (o recuento en su formato Quanti-P/A Ref: QPA-ETC) de Enterococos fecales (el agua vira de ámbar a negro opaco y pierde su iridiscencia), que puede elegir en tres formatos
diferentes:

a) RPL301 Frascos tomamuestras con caldo estéril hidratado y tapón a rosca para añadir en ellos 100 mL de la muestra de agua. Cajas 10u ó 9x10u
b) FPA901 Viales prepesados de polvo estéril con tapón a rosca para añadir a 100 mL de la muestra de agua (no incluido bote 100 mL VML155 o bolsa standup 100 mL B2787B estériles). Cajas 40u ó 10x40u.
c) DMTI901- Botes 100 g de polvo estéril y cucharilla dosificadora para añadir a 100 mL de la muestra de agua (no incluido bote 100 mL VML155 o bolsa standup 100 mL B2787B estériles), Bote para 100 test.
De gran utilidad como screening negativo de muestras rutinarias, al ser un método más fácil de emplear que la filtración de membrana y más fiable (escasez de falsos positivos y de falsos negativos, que en filtración de membrana es de nada menos que el 6% de las
muestras analizadas en el mundo, por el estrés provocado durante la filtración).
También muy útil para que las potabilizadoras no dejen de analizar en festivos y fines de semana, ya que este método puede ser empleado por personal no especialista en microbiología, el mismo guarda de la depuradora puede hacerlo. La única precaución es que
el operario no toque ni el agua ni el polvo con sus manos, para evitar contaminaciones artificiales.

MODO DE EMPLEO:

Es necesario tratar previamente el agua clorada, mediante
Tiosulfato Sódico, para que las células dañadas subletalmente se recuperen, excepto en los frascos tomamuestras RPL301, que ya lo incluyen.
Añadir los 100 mL de agua de muestra en el frasco o en el recipiente estéril que se va a utilizar; en el caso de los viales, añadir todo el contenido sobre el agua; en el caso de los botes de 100g, añadir tres cucharaditas rasas sobre el agua y cerrar el bote con la cucharilla
dentro para los posteriores usos. Agitar para mezclar. Incubar 18-24 horas a 35-37° C.
La muestra inoculada sirve también de medio de transporte, por lo que no es necesario incubar inmediatamente después de la toma de la muestra, pudiendo transcurrir varias horas entre toma e incubación.
Para aguas envasadas o de baño, se analizan 250 mL, por lo que debe añadir 2 viales ó dos cucharaditas por muestra (no se pueden usar los frascos RPL301 para 250 mL, al haber sido diseñados sólo para 100 mL). El medio funciona correctamente desde mitad hasta
el doble de concentración, por lo que no es necesario afinar 2,5 viales ó 2,5 cucharaditas).

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS:

El viraje del color ámbar inicial, transparente e iridiscente, a color negro-opaco (y pérdida de la iridiscencia que adquiere el agua en este medio) demuestra la Presencia de Enterococos fecales en la muestra de agua. Puede confirmar observando al microscopio que son cadenas de cocos Gram positivos y/o que son microorganismos catalasa negativos.
Es necesaria la ausencia (no viraje), que equivale a 0 ufc/100 mL (ó en 50 mL). Sólo en caso positivo debería repetirse la muestra por método cuantitativo si se requiere un recuento concreto, aunque la legislación exige 0 y por tanto no importa si hay 2 ó 950, en ambos casos el agua no es potable. Si aún asi debe cuantificar (muestras positivas con Enterocult P/A), utilice Quanti-P/A-ETC (Ref: QPA-ETC), que contienen este mismo medio con gelificantes en frío en una bolsa hermética.

Material necesario no incluído:

Tiosulfato Sódico para eliminar el cloro (SMT976) excepto en los frascos tomamuestras RPL301, que ya lo incluyen. Bote estéril 100ml (VML155), o bolsa estéril autosellable Stand-Up (B2787B). Estufa o incubador 35-37ºC (SIL12AR ó SIL24AR).
En homenaje a nuestro querido amigo, el Dr. Juan José Marcén, que falleció antes de conocer el éxito mundial de la fantástica idea que nos regaló en los años 90, el kit de coliformes/E.coli se regala a todas las ONGs que nos los pidan junto con otros parámetros P/A.
PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO O PARA ANÁLISIS DE CAMPO. MANTENER FUERA DEL ALCANCE Y DE LA VISTA DE LOS NIÑOS Y ANIMALES.
EXTREMADAMENTE HIGROSCÓPICO: MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO. AGITE EL BOTE ANTES DE USAR. EN ZONAS DE ELEVADA HUMEDAD AMBIENTAL, GUARDAR EL BOTE BIEN CERRADO EN UN TUPPER HERMÉTICO CON SILICAGEL.


CONTROL DE CALIDAD:

Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar laboratorio, tras largos fletes, tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,…)
DESHIDRATADO: Polvo crema PREPARADO: Ámbar, transparente
CONTROL DE CRECIMIENTO 18-24 h a 37°C aproximadamente:
Enterococcus faecalis MKTA 29212, Correcto, medio opaco y negro, sin iridiscencia en el menisco Escherichia coli MKTA 25922, inhibido completamente.
Bacillus subtillis MKTA 6633, Inhibido completamente.
Staphylococcus aureus MKTA 6538P, Inhibido completamente.


VER TAMBIEN EL NUEVO DISEÑO DE 2019 FPA580, EL X-Plus Enterocult EPA Broth

Puede convertir este kit en cuantitativo simplemente añadiéndolo, antes de incubar, a NMP-RACKS o a CLIPCOUNTER + QUANTIBAG

El usuario es el único responsable de la eliminación de los microorganismos según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.
Si desea seguir el Reglamento UE 2-2019 que entrará en vigor en 2021 mediante el cual los lobbies del laboratorio han conseguido barrer la innovación que aporta el milagro mediterráneo (la PIME), al exigirnos a los inventores de productos/métodos para industria alimentaria, el inviable pago de cientos de miles de € a AOAC, AFNOR o similar por cada referencia innovadora; nos puede pedir Bilis Esculina Azida Agar ISO 7899 (Ref: DMT160 en deshidratado, TPL002 en tubo, ECOPQ01J en Ecoplaquitas MF…), o bien Slanetz Bartley Agar ISO 7899 (Ref: DMT117 en deshidratado, ECOPQ13C en Ecoplaquita MF…) ya que de este modo no es un método alternativo y por tanto ningún inspector ni auditor puede impedirle emplearlo. Aunque perderá el valor añadido del kit: su extraordinario poder de detección sin falsos negativos, el ahorro de filtración de membrana…. La mejor solución sería realizar una proporción residual pero razonable de muestras con el medio ISO en formato clásico, para presentar sus informes a inspección de Sanidad, y asi poder seguir usando internamente en paralelo este kit en esas y en las demás muestras, para la mejora, fiabilidad y rapidez de sus resultados de autocontrol. A fin de cuentas, este reglamento que corta de cuajo el I+D que no provenga de multinacionales, no es nada nuevo: los kits de autocontrol nunca han servido para obtener resultados oficiales, pero ayudan a la industria a tomar las mejores decisiones para la rapidez y fiabilidad en la liberación de sus lotes.

Diseñado, Validado y Fabricado en la UE por MICROKIT bajo ISO 9001, ISO 11133 y GMPs, desde 1994, Actualizado en Mayo de 2020

MICROKIT MANIPULADORES-KIT

Si desea seguir el Reglamento UE 2-2019 que entrará en vigor en 2021 mediante el cual los lobbies del laboratorio han conseguido barrer la innovación que aporta el milagro mediterráneo (la PIME), al exigirnos a los inventores de productos/métodos para industria alimentaria, el inviable pago de cientos de miles de € a AOAC, AFNOR o similar por cada referencia innovadora; nos puede pedir por un lado Ecoplacas de PCA ISO 4833 (Ref: ECOP26J), de Agar CCA (MugPlus) ISO 9308-1:2014 (Ref: ECOP23J), de Agar Baird Parker ISO 6888 (Ref: ECOP01C) y de Agar XLD ISO 6579 (Ref: ECOP43C) y por otro lado escobillones (Ref: VSN251), ya que de este modo no es un método alternativo y por tanto ningún inspector ni auditor puede impedirle emplearlo. Aunque perderá el valor añadido del kit: su extraordinariamente larga fecha de caducidad y el ahorro de falsos positivos de sus medios cromogénicos. La mejor solución sería externalizar una proporción residual pero razonable de sus análisis a un lab.externo vinculante, para presentar sus informes a inspección de Sanidad, y asi poder seguir usando internamente en paralelo este kit en esas y en las demás muestras, para la mejora y rapidez de sus resultados de autocontrol. A fin de cuentas, este reglamento que corta de cuajo el I+D que no provenga de multinacionales, no es nada nuevo: los kits de autocontrol nunca han servido para obtener resultados oficiales, pero ayudan a tomar las mejores decisiones para la rapidez y fiabilidad en la liberación de sus lotes.

INTRODUCCIÓN:

La actual legislación (y cada vez más Normas Técnicas ISO, UNE, BRC…) EXIGE el control periódico de la higiene de los manipuladores de alimentos, a fin de garantizar que no son portadores de microorganismos indeseables que pueden contaminar cualquier tipo de alimentos o incluso bebidas alcohólicas como el vino o la cerveza. La falta de higiene de un manipulador irresponsable, que se lava mal las manos tras entrar a trabajar, comer, ir al baño, etc. es la fuente principal de intoxicaciones alimentarias; por ello debe hacerse especial hincapié en el control de las manos, pero sin descuidar las fosas nasales y la ropa de trabajo. La higiene de un manipulador responsable no garantiza que no se convierta en contaminante cuando está enfermo o convaleciente; por ello es imprescindible su re-control periódico. El responsable de calidad o del laboratorio, o el Director Técnico de cada empresa fijará el calendario de controles de los distintos manipuladores que estén en contacto o cercanía de los alimentos, y deberá registrar los resultados para poder presentarlos ante cualquier inspección sanitaria, ante cualquier problema sanitario o incluso de cara a sus clientes, que cada vez se lo exigirán más y con más rigor. Laboratorios MICROKIT, como responsable desde hace ya dos décadas del diseño y la fabricación de numerosos kits microbiológicos que triunfan en el mercado internacional, lanza dos nuevos kits especialmente destinados al control de la higiene de los manipuladores:

KIT COMPLETO para 8 análisis completos de todos los parámetros de riesgo: detección y recuento de bacterias aerobias, de estafilococos, de coliformes-E.coli y de Salmonella: Ref. KMT020

KIT BÁSICO para 8 análisis indicadores de los parámetros microbiológicos imprescindibles: detección y recuento de estafilococos y de coliformes-E.coli: Ref. KMT033

Cada empresa elegirá uno u otro kit en función del rigor y del riesgo que los diferentes microorganismos puedan provocar en sus fabricados; ante la duda, utilice el kit completo. Recomendamos realice un análisis semanal de cada manipulador para verificar que no contamina los alimentos o productos que su fábrica elabora. Las ventajas de estos kits son tres: 1-Su extraordinaria caducidad 2-El empleo de caldo inactivador (lo que permite eliminar bacteriostáticos, realizar recuentos más precisos y no multiplicar las bacterias presentes) 3-El empleo de placas deshidratadas Dry Plates® (lo que permite sembrar en masa por inclusión sin tener que fundir agares y sin depender de placas de escasa caducidad, que además no dejarían sembrar en masa, por lo que su sensibilidad sería 10 veces inferior). Según las recomendaciones actuales, un manipulador mantiene una higiene adecuada si:

  • No es portador de estafilococo dorado (Staphylococcus aureus) o cuando lo es, toma las medidas adecuadas para no contaminar el ambiente y los alimentos (uso riguroso y continuo de guantes, máscara, gorro e higiene extrema),
  • Si no incluye coliformes-E.coli en sus manos, que demostrarían una higiene muy descuidada (contaminación por aguas fecales)
  • Si no es portador de Salmonella, microorganismo del máximo riesgo para cualquier alimento; cuidado! hay personas que son peligrosas portadoras sin padecer ya la enfermedad!
  • Si el recuento de aerobios no supera ciertos límites, que podemos aconsejar sean siempre inferiores a 5 ufc/mano en industrias de alto riesgo y a 25 ufc/mano en las demás; en cualquier caso, se registrarán las tendencias en cuanto a recuentos totales de bacterias de los diferentes manipuladores.
    Es habitual buscar el estafilococo en las fosas nasales o la garganta, mientras los otros tres parámetros se buscan principalmente en las manos y ropas. Por eso se añaden 2 escobillones por test (uno para las fosas nasales o garganta y otro para las manos).

MODO DE EMPLEO:

  1. Tome una torunda ENVIROSWABB, y un tubo con 9 ml del caldo especialmente diseñado para absorber los microorganismos, a la vez que inactiva los residuos de desinfectantes y jabón, por lo que resulta ideal para detectar con la máxima sensibilidad los microorganismos presentes. Abra el tapón, moje el escobillón con el líquido y barra la palma de la mano o una superficie de la ropa de unos 10 x 10 cm. Restriegue con fuerza, para extraer los microorganismos adheridos, pero sin llegar a dañar el escobillón.
    Repita con el otro escobillón en el interior de la fosa nasal o garganta. Introduzca ambos escobillones en el tubo con líquido, agítelos muy bien, para que los microorganismos pasen al tubo, cierre éste y llévelo al laboratorio. El caldo actúa como medio de transporte, por lo que, si se mantiene refrigerado, no es relevante realizar el siguiente paso de forma inmediata, pudiendo pasar 1-4 horas desde la toma hasta la inoculación de las placas.
  2. Agite con fuerza el tubo bien cerrado y añada 1 ml del caldo a cada una de las placas Dry Plates® incluidas en su kit: TC para aerobios, EC para coliformes-E.coli, XSTAPH para estafilococos y SAL para Salmonella (si utiliza el kit básico, sólo usará EC y XSTAPH); el caldo que sobra no es relevante para el análisis: no debe añadirse más de 1 ml por placa. Utilice una pipeta estéril de 1 ml por cada tubo, ya que la misma pipeta sirve para las 4 (ó 2) Dry Plates® de un mismo manipulador. Añada cada mililitro en el centro de cada placa Dry-Plate ®, añada el disco nutritivo encima, deje embeber el medio deshidratado estéril y cierre la placa. Incubar cada placa 24-48 h a 37 ºC aprox. Contar todas las colonias: En TC, las bacterias aerobias crecen con colores de la gama del rojo (rosa, naranja, rojo). En EC, E.coli crece con colonias azules y los demás coliformes con colonias rosas. En XSTAPH, S.aureus crece con colonias azules. En SAL, Salmonella crece con colonias verdes. Si desea recuentos, multiplique por 9 el número de colonias detectadas, a fin de dar el recuento por toda la superficie muestreada por el ENVIROSWABB con sus 9 ml de caldo inactivador:

MANTENER LOS KITS A TEMPERATURA AMBIENTE (4-25ºC). ES MUY IMPORTANTE MANTENERLOS AL RESGUARDO DE LA LUZ Y DE LA HUMEDAD.
CONTENIDO DEL KIT:
-16 torundas (8 para manos y 8 para fosas nasales) + 8 tubos de caldo inactivador (ENVIROSWABBS)
-8 pipetas estériles de 3 ml, graduadas en 1ml
-8u Dry Plates ® TC (no en kit básico) -8u Dry Plates ® EC -8u Dry Plates ® SL (no en kit básico) -8u Dry Plates ® XSTAPH


Para usuarios con muchos manipuladores, todo ello también está disponible por separado en cajas de 100 Enviroswabbs (torunda + tubo de caldo inactivador) y de 60 Dry Plates ® de cada tipo.
MATERIAL CONVENIENTE NO INCLUÍDO:
Estufa o incubador a 35-37ºC aprox (Ref Microkit PT2499).
Lejía, alcohol u otro desinfectante concentrado, o bien autoclave para los residuos.


El usuario es el único responsable de la destrucción de los microorganismos generados en el interior del kit durante su uso, de acuerdo con la legislación medioambiental vigente. Sumerja en lejía o alcohol, o bien autoclávelos, antes de desecharlos a la basura. Mantener fuera del alcance de los niños. No ingerir.
Diseñado y fabricado en la UE bajo ISO 9001, ISO 11133 y GMPs por MICROKIT en Abril de 2008, actualizado con DryPlates® desde Noviembre-2014. Folleto revisado en Mayo-2020

ENVIROSWABBS (ISO 18593:2019)

La técnica de control microbiológico de superficies que ha demostrado
bibliográficamente ser la más efectiva en lugares de difícil acceso, es la de los escobillones o torundas. Otras técnicas (Placas de contacto ENVIROCOUNT, kits en laminocultivo o dipslide DESINFECTEST) son más cómodas de utilizar, e incluso más sensibles, pero sólo en superficies lisas.
Además, la torunda permite acceder a lugares escondidos: interiores de tuberías, esquinas, superficies muy rugosas, interiores convexos de recipientes… Por fin, permite la búsqueda directa de patógenos lábiles que
no serían capaces de crecer por contacto directo con el medio selectivo (Placas de contacto o laminocultivos)

Los escobillones ENVIROSWABBS han sido diseñados y perfeccionados para todo tipo de usos: para control de higiene-ARICPC, como medio de transporte, para usos clínicos…, y en respuesta a la creciente demanda de métodos más efectivos para el control microbiológico de superficies.

A diferencia de las otras torundas, típicamente clínicas con medios de transporte, basan su método en la posterior inoculación del líquido, no del barrido de la torunda sobre un medio sólido, por lo cual son las únicas que permiten realizar recuentos fiables. Cada torunda va empaquetada, de forma unitaria y estéril, junto con un tubo que contiene 9 ml de solución revitalizante, enriquecedora y neutralizante de los desinfectantes. La torunda es de algodón, con varilla de plástico y tapón. Ambos van separados para que el algodón no esté empapado de un caldo que contaminaría la superficie y para que el usuario pueda rascar para extraer de verdad el biofilm de la superficie problema. La solución es LPT Neutralizing Broth Purple, el mejor medio para revitalización de microorganismos totales en superficies (la Norma ISO 100012 aconseja este mismo medio en Agar).
Al contener una solución tamponada, inactivadora de todo tipo de desinfectantes, detergentes, conservantes e inhibidores antimicrobianos, se evitan los graves falsos negativos, tan frecuentes en los recuentos mediante otros kits o torundas clásicas de
microbiología clínica (Amies, Stuart, Cary-Blair…) o no (Buffered Peptone Water), y debidos a las células dañadas subletalmente, que no sobreviven en medios convencionales, porque en ellos nada impide que continúe la acción letal del microbicida. Inactiva derivados
de amonio cuaternario, cloro, lejía, cetrimida, clorhexidina, compuestos fenólicos, polimixina B, ácido benzoico, compuestos fosforados… Su color purpura alerta en las primeras horas de incubación (si vira a crema), de carga microbiana elevada, que no se detectaría hasta días después, con los elevados recuentos obtenidos en placa.
Por estar todo preparado y estéril, se evita, con un coste muy económico, el trabajo rutinario de preparar medios, añadir numerosos inactivadores, comprar tubos y torundas secas, esterilizar el conjunto…

El protocolo ideal para control cuantitativo de superficies consiste en abrir un ENVIROSWABB y RASCAR con fuerza con la torunda, la superficie húmeda (si está seca, pulverizar antes con agua estéril), aprox. 10 x 10 (=100) cm2 de superficie. Sumergir la torunda en el tubo con caldo, agitar contundentemente para que los microorganismos se desprendan del algodón y pasen al líquido; devolverla a su tubo plástico. Los microorganismos se mantendrán en el caldo perfectamente durante varias horas, la mayoría de cepas durante muchos días, y en frío se multiplicarán menos, por lo que ENVIROSWABBS puede considerarse también un medio de transporte en frío apto para recuentos. Sin embargo para recuentos no es aconsejable mantener más de 24 h en frío sin procesar, porque se multiplicarían los resultados.

Una vez en el laboratorio, se inoculan los 9 ml en las placas (1ml/placa) sobre las que se añadirán 20 ml de medio fundido y atemperado para recuento del microorganismo buscado (bacterias totales PCA, hongos Rosa de Bengala CAF Agar, Listeria Palcam Agar, Enterobacterias VRBG, Coliformes y E.coli MUGPLUS, Pseudomonas Cetrimida Agar, Staphylococcus Mannitol Salt Agar, Bacillus cereus Mossel Agar, Lactobacillus TJA, Dermatofitos DTM…). O mejor aún, 1 ml a cada placa.

Tras incubar en las condiciones standard para cada tipo de microorganismo, se obtiene el resultado en ufc/10 cm2, ya que se inocula en cada placa 1 de los 10 ml/100 cm2. Para obtener las ufc/100 cm2 de cada microorganismo, sólo hay que multiplicar por 10 el número de colonias obtenidas en el medio para el microorganismo en cuestión.
Paquete de 40 ENVIROSWABBS-10 ml, con 2 años de caducidad desde fabricación, ref: BSL570.
Idem Enviroswabs-1 ml, caja 80 test, ref: BSL375.
El usuario es el único responsable de la eliminación de los microorganismos según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.
Si desea seguir el Reglamento UE 2-2019 que entrará en vigor en 2021 mediante el cual los lobbies del laboratorio han conseguido barrer la innovación que aporta el milagro mediterráneo (la PIME), al exigirnos a los inventores de productos/métodos para industria alimentaria, el inviable pago de cientos de miles de € a AOAC, AFNOR o similar por cada referencia innovadora; nos puede pedir Tubos de Agua Peptonada Tamponada ISO 6579 por un lado (Ref: ECOT02), o bien de Caldo Neutralizante ISO 21148 (Ref: ECOT45) y escobillones por otro lado (Ref: VSN251), ya que de este modo no es un método alternativo y por tanto ningún inspector ni auditor puede impedirle emplearlo. Aunque perderá el valor añadido del kit: la coincidencia entre el número de tubos y número de escobillones. La mejor solución sería externalizar una proporción residual pero razonable de sus análisis a un lab.externo vinculante, para presentar sus informes a inspección de Sanidad, y asi poder seguir usando internamente en paralelo este kit en esas y en las demás muestras, para la mejora y rapidez de sus resultados de autocontrol. A fin de cuentas, este reglamento que corta de cuajo el I+D que no provenga de multinacionales, no es nada nuevo: los kits de autocontrol nunca han servido para obtener resultados oficiales, pero ayudan a la industria a tomar las mejores decisiones para la rapidez y fiabilidad en la liberación de sus lotes.


Fabricado en la UE por MICROKIT desde 4-2011, bajo ISO 9001, ISO 11133 y GMPs. Actualizado en Mayo, 2020