HRS Rapid sporothermodurans Agar

HRS Rapid sporothermodurans Agar

HRS Rapid sporothermodurans Agar permite detectar las esporas ultratermorresistentes de los alimentos UHT, antes de que salgan al mercado

https://www.microkit.es/fichas/HRS-RAPID-Cromogenic-sporothermodurans-Agar.pdf

INTRODUCCIÓN

La presencia de esporas altamente resistentes al calor de Bacillus sporothermodurans en leche pasterizada por el método Ultra Hight Temperature (UHT) se ha convertido en un problema importante en la industria láctea.

Su presencia se considera indeseable, ya que obstaculizan los requisitos de esterilidad comercial.

En un estudio (APPLIED AND ENVIRONMENTAL MICROBIOLOGY, Mar. 2005, p. 1480–1494), se han evaluado, mediante el uso de un selectivo tratamiento térmico de 30 minutos a 100°C, la presencia, fuentes, y naturaleza de las esporas potencialmente muy resistentes al calor en la leche cruda.

Se detectaron altos números de estas esporas en la tela del filtro del equipo de ordeño y en muestras de cultivos y forrajes verdes.

Se aislaron aproximadamente 700 cepas después del calentamiento selectivo. La colección de cepas mostró una notable diversidad, con representantes de siete géneros que forman esporas aerobias.

Las más frecuentes esporas aisladas de leche UHT han sido Bacillus sporothermodurans (aerobio facultativamente anaerobio), Brevibacillus borstelensis, Paenibacillus lactis, Bacillus sphaericus, Bacillus licheniformis, y Brevibacillus brevis.

El 23% de las 603 cepas formadoras de esporas pertenecen a 18 nuevas especies.

La reducción de esta carga de esporas por buenas medidas higiénicas durante el ordeño probablemente podría reducir aún más el nivel de contaminación de la leche cruda.

Y de esta manera reducir al mínimo el recuento aeróbico de formadores de esporas de bacterias que podrían conducir al deterioro de la leche y los productos lácteos.

Las HRS (Heat Resistant Spores) o más coloquialmente “termorresistentes”, aparecen en muestras de leche UHT, sobre todo si el método de tratamiento térmico es “indirecto” (intercambiador de calor).

Los métodos “directos” con inyección de vapor sobrecalentado son más eficaces, pero estas esporas también aparecen de vez en cuando.

No son un problema para la salud (son microorganismos de riesgo biológico 1: sin riesgo para la salud) y aparentemente no alteran la leche, de modo que nos hemos acostumbrado a beber leche contaminada por estos microorganismos.

El problema no es para el consumidor, sino para la imagen de la industria.

MEDIO DE CULTIVO RÁPIDO

MICROKIT ha desarrollado un nuevo medio de cultivo cromogénico, HRS RAPID Cromogenic Agar derivado del HRS Cromogenic Agar original…

…con un nuevo factor “doping” adicional, que permite, de forma muy rápida (en sólo 36h en vez de las 72 h propias del Agar HRS), la visión de estas esporas germinadas, en forma de colonias, que suelen ser grandes, con forma de volcán y rojas, gracias a un cromógeno termoestable.

Este medio no es selectivo para B. sporothermodurans, de modo que también crecen en el mismo Bacillus licheniformis, Bacillus sphaericus (otras esporas termorresistentes o HRS) y los demás esporulados, así como otros alterativos de la leche UHT:

Por eso debe emplearse en leche UHT o en leche cruda o pasteurizada a la que sometamos previamente a un calentamiento UHT o similar que elimine los acompañantes no esporulados.

Haga sus consultas de este medio en: microkit@microkit.es

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ACIDOLACTIC HOMO-HETEROFERMENTATIVE-AGAR

ACIDOLACTIC HOMO-HETEROFERMENTATIVE-AGAR

ACIDOLACTIC HOMO-HETEROFERMENTATIVE-AGAR es un medio de cultivo que permite distinguir estos dos grandes grupos de bacterias acidolácticas

SIEMBRA E INTEPRETACIÓN DE RESULTADOS:

Sembrar 0’1 ml de las diluciones decimales en superficie y extender con un asa de siembra.

Incubar a 37 ºC aproximadamente, durante 72h en anaerobiosis.

Diferenciar las colonias según su morfología y su color.

Streptococcus thermophilus: colonias redondas, incoloras o verdes oscuras, opacas, planas.

Bifidobacterias: colonias circulares, transparentes, traslúcidas, regulares y claramente convexas (como “una gota de agua”).

Lactobacillus acidophilus: colonias irregulares, verde claro, con centro verde oscuro y piramidales o cónicas.

Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus: colonias irregulares, verdes uniformes y planas.

Lactobacillus plantarum: colonias circulares, mucosas, convexas, con centro verde y una amplia corona periférica amarillenta.

Lactobacillus casei subsp. casei: colonias circulares, mucosas, convexas, con centro verde oscuro y una pequeña corona periférica poco evidente. Se diferencia de Lactobacillus plantarum por tener colonias más pequeñas y un centro verde más grande que la corona.

Enterococcus faecium: colonias circulares, ligeramente mucosas, convexas, color verde oscuro con margen verde claro o color verde azulado con margen aguamarina

https://www.microkit.es/fichas/HOMO-HETEROFERMENTATIVE-ACIDOLACTIC-AGAR.pdf

Si busca distinguir específicamente Lactobacillus acidophilus de otros, use el medio Cromokit Lactobacillus Agar, en el cual esta especie crece con colonias verdes:

https://www.microkit.es/fichas/cromokit-lactobacillus-agar.pdf

Y si prefiere identificar las diferentes cepas de acidolácticas, puede confirmar las colonias con las galerías ultra-rápidas (4 h al ser enzimáticas en vez de bioquímicas) Rapid-STR (Leuconostoc, Pediococcus…) y Rapid-ANA (Bifidobacterim, Lactobacillus…):

https://www.microkit.es/fichas/Galerias-RAPID.pdf

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YEA NUTRIENT AGAR ISO 6222

YEA NUTRIENT AGAR ISO 6222

YEA NUTRIENT AGAR ISO 6222 es el medio de cultivo empleado oficialmente para recuento total de aerobios en aguas de consumo y envasadas.

El YEA (Yeast Extract Nutrient Agar) tambien es llamado PCA-Water.

Aunque a diferencia del PCA, la ausencia de glucosa permite detectar mejor los microorganismos oligotrofos propios del agua.

Lo mismo que el R2A de farmacopea que se emplea para recuento de aerobios en aguas de calidad farmacéutica, con resultados sorprendentemente mayores a los del PCA o TSA (hasta un 1.100 % mayores recuentos, mucho más cercanos a la realidad del agua purificada).

En MICROKIT ofrecemos el YEA en todas las posibles versiones:

-Medio deshidratado

-Tubos preparados para fundir en agua hirviendo y hacerse una placa para siembra en masa

-Frascos preparados para fundir en agua hirviendo y hacerse varias placas para siembra en masa de varias muestras a la vez

https://www.microkit.es/fichas/YEAST-EXTRACT-AGAR-YEA-NUTRIENT-AGAR.pdf

 

Por otra parte, también diseñamos el medio cromogénico con base YEA que permite realizar los recuentos con mayor fiabilidad, comodidad y rapidez.

Mayor fiabilidad porque las colonias salen rojas y así los artefactos (burbujas, partículas…) no dan falsos positivos

Mayor comodidad porque el ojo no se cansa, dado el enorme contraste entre las colonias rojas y el medio crema, a diferencia que en YEA clásico, donde las colonias crecen color crema en medio crema. Por el tema de RRLL, todos los laboratorios deberían emplear esta mejora del YEA.

Y mayor comodidad porque el medio se emplea igual que el YEA (es termoestable), sin tener que añadir aditivos termolábiles como el clásico TTC.

Mayor rapidez porque el contraste colonia-medio es tal, que las colonias se ven desde las primeras 18 horas.

En MICROKIT ofrecemos el YEA cromogénico en todas las posibles versiones:

-Medio deshidratado

-Tubos preparados para fundir en agua hirviendo y hacerse una placa para siembra en masa

-Frascos preparados para fundir en agua hirviendo y hacerse varias placas para siembra en masa de varias muestras a la vez

https://www.microkit.es/fichas/YEA-NUTRIENT-AGAR-CROMOGENICO.pdf

Diferencia visual entre contar con YEA y contar con YEA cromogénico:

 

 

 

 

Y para colmo, también lo ofrecemos en las únicas placas preparadas deshidratadas que incluyen este medio a nivel mundial: Las DryPlates-TC Water, con YEA cromogénico:

Con estas placas Ud. realiza la siembra en masa de 1 mL de muestra de agua sin necesidad de calentar/enfriar agares. Y sin ese punto crítico de la fusión de agares, que puede reducir drásticamente el recuento con respecto al valor real.

Porque los microorganismos no se queman a 47-50ºC, punto de gelificación del agar-agar bacteriológico, pero muchos se hacen inviables. En cambio en las DryPlates se siembra a temperatura ambiente:

DryPlates-TC Water no es un método destructivo, como lo es la siembra en masa por fusión/enfriamiento de agares en YEA.

Máxime ahora que ya no hay suficiente alga Gelidium sesquipedale para elaborar el agar-agar bacteriológico que demandan todos los laboratorios del mundo.

Y en muchas marcas el agar-agar bacteriológico es sustituido (en mayor o menor proporción) por un sucedáneo (agar alimentario procedente de otras algas rojas como Gracillaria confervoides)…

…el cual solidifica hasta 5 ºC por encima del agar-agar bacteriológico, haciendo inviables muchos más aerobios, que no crecen en forma de colonias (falsos negativos).

https://www.microkit.es/fichas/Dry-Plates-TC-Water-Prospecto.pdf

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Cetrimida CN Rapid Cromogenic Agar

Cetrimida CN Rapid Cromogenic Agar

Cetrimida CN Rapid Cromogenic Agar (CN Agar con cromógeno) permite descartar la presencia de Pseudomonas aeruginosa en sólo 18-24 h

Las envasadoras de aguas están de enhorabuena, ya que este medio les permite descartar desde las primeras 18 h de incubación, la presencia de Pseudomonas aeruginosa.

El mismo medio oficial Cetrimida CN ISO 16266 / ISO 12780, al que hemos añadido un cromógeno que permite ver antes las colonias de Pseudomonas aeruginosa. Porque al crecer rojas en sus primeras 18 h de incubación, permite detectarlas de esta forma tan fulminante.

Aunque luego haya que esperar otras 24 h para confirmarlas con su típica fluorescencia alrededor de las colonias. Pero eso permite descartar todas las muestras negativas, sin crecimiento en sólo 18 horas, de esas colonias rojas.

https://www.microkit.es/fichas/CROMOKIT-RAPID-CN-PSEUDOMONAS-AGAR.pdf

Si le salen colonias rojas en 18-24 horas, con fluorescencia alrededor de la colonia en las primeras 48 horas, puede acabar de confirmar según Norma ISO 16266 / ISO 12780 con el kit que reúne todo lo necesario en tubos preparados para uso inmediato:

https://www.microkit.es/fichas/PS-AERUGINOSA-M-IDENT-KIT-ISO-12780–ISO-16266.PDF

Oxidasa, Acetamida-Nessler y King B

Si teme que inspección de Sanidad no le deje sustituir el método oficial, le comentamos que ya está validado en algunas de las mayores envasadoras de aguas de nuestro país.

Y además siempre puede emplearlo como método complementario al oficial: el oficial para cumplir la legislación sin tener que validar el complementario, y éste para poder liberar antes sus lotes de producto final.

Por otra parte, empleando también nuestro Rapid Bilis Esculina Azida Agar (Rapid BEA) directamente, sin paso previo por Slanetz-Bartley Agar (SB)…

…podrá dar los resultados completos de su agua envasada en las primeras 18-24h.

https://www.microkit.es/fichas/BILE-ESCULIN-AZIDE-AGAR-BEA-RAPID.pdf

Método corto también validado en algunas de las mayores plantas envasadoras de nuestro país.

Esto le ahorrará tener que invertir en costosas obras de aumento de espacio de almacén.

Sustituya o complemente ya los medios clásicos lentos por Cetrimida CN Rapid Cromogenic Agar y Rapid Bilis Esculina Azida Agar de MICROKIT.

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Bacteriófagos ARN-F específicos

Bacteriófagos ARN-F específicos: ISO 10705-1

Bacteriófagos ARN-F específicos: Medios para su detección y recuento según ISO 10705-1, complementarios a los colífagos somáticos ISO 10705-2

Estos virus infectan a su huésped en el pili F; los pili son los «pelos» ligeramente más largos que los fimbria de adhesión, que se utilizan en la conjugación bacteriana para transferir material genético a otras bacterias. Son virus no patógenos para el ser humano, capaces de infectar bacterias como Escherichia coli y Salmonella Typhimurium. Estos bacteriófagos, así como los colífagos somáticos (ISO 10705-2), se utilizan como indicadores de la calidad microbiológica del agua: Su presencia indica una contaminación fecal del agua.

https://www.microkit.es/fichas/BACTERIOFAGOS-ARN-F-Especificos-AGAR-BASE.pdf

https://www.microkit.es/fichas/BACTERIOFAGOS-ARN-F-Especificos-CALDO-BASE.pdf

https://www.microkit.es/fichas/BACTERIOFAGOS-ARN-F-Especificos-SEMISOLID-MEDIUM-BASE.pdf

PREPARACIÓN del Agar

Disolver 31 gramos de medio en 1 litro de agua bidestilada tibia. Calentar, agitando, hasta ebullición, para la total homogeneización. Ajustar el pH a 7,2 ± 0,1. Distribuir en frascos de 200 mL. Autoclavar a 121 ºC durante 15 minutos. Conservar los frascos en la oscuridad a 4ºC ± 2ºC durante un máximo de 6 meses. No congelar!

 PRESENTACION: DESHIDRATADO CODIGO: DMT805 + Supl SMT800F

 SIEMBRA: Añadir 2 mL de la solución CaCl2-Glucosa a 200 mL de medio BASE fundido y atemperado a 45ºC. Agitar para homogeneizar y dispensar en placas (20 ml/placa de 90 mm para hacer 10 placas y 50 mL/placa de 140 mm para hacer 4 placas). Dejar solidificar.

PREPARACIÓN del Caldo

Disolver 19 gramos de medio en 1 litro de agua bidestilada tibia. Calentar, agitando, hasta ebullición, para la total homogeneización. Ajustar el pH a 7,2 ± 0,1. Distribuir en frascos de 200 mL. Autoclavar a 121 ºC durante 15 minutos. Conservar los frascos en la oscuridad a 4ºC ± 2ºC durante un máximo de 6 meses. No congelar!

 PRESENTACION: DESHIDRATADO CODIGO: DMT806 + Supl. SMT800F

PREPARACIÓN del Semisólido

Disolver 25 gramos de medio en 1 litro de agua bidestilada tibia. Calentar, agitando, hasta ebullición, para la total homogeneización. Ajustar el pH a 7,2 ± 0,1. Distribuir en frascos de 200 mL. Autoclavar a 121 ºC durante 15 minutos. Conservar los frascos en la oscuridad a 4ºC ± 2ºC durante un máximo de 6 meses. No congelar!

 PRESENTACION: DESHIDRATADO CODIGO: DMT807 + Supl SMT800F

Seguir las directrices de la norma ISO 10705-1.

PARA COLÍFAGOS SOMÁTICOS (ISO 10705-2) consultar los medios adecuados de MICROKIT

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Galerías de identificación

Galerías de identificación enzimática

Galerías de identificación enzimática: conozca en sólo 4 h la especie a la que pertenece su colonia (Gram negativo, Gram positivo o levadura)

Hoy queremos ofrecerles las clásicas galerías de Identificación de colonias de bacterias No Fermentadoras RAPID-NF. Como sabe, los NF son los Gram negativos que no fementan los azúcares (como hacen las Enterobacterias), es decir, los microorganismos oxidasa positivos que suelen salir en las plaquitas de aguas: Acinetobacter-Aeromonas-Alcaligenes-Brevundimonas- Burkholderia-Moraxella-Ochrobactrum-Plesiomonas- Pseudomonas-Sphingomonas-Stenotrophomonas-Vibrio

Sus ventajas:

1-tardan sólo 4 h en dar los resultados, no 24-48h como las demás galerías, ya que son enzimáticas en vez de bioquímicas ¡sabrá el mismo día si se trata de un inocuo o por el contrario es un patógeno!

2-se siembran en un solo paso, no necesita pipetear cada pocillo gracias a su diseño “en tejado”

3-se complementan  con otras galerías de las mismas características para Enterobacterias (E.coli, Salmonella, Shigella, Pluralibacter, Klebsiella, Enterobacter, Serratia…), otras para Estafilococos, otras para otros Gram positivos (Estreptococos, Enterococos, Listeria, Acidolácticas…), otras para Anaerobios (Clostridium, acidolácticas anaerobias…) y otras para levaduras (Candida-Kluyveromyces-Pichia-Rhodotorula-Saccharomyces-Yarrowia…).  Ver pdf con todas ellas:

https://www.microkit.es/fichas/Galerias-RAPID.pdf

4-son galerías procedentes de USA (ABL) con más de 40 años de implantación en el mercado Norteamericano, con mucho más éxito allá que las más famosas galerías bioquímicas de Europa, a causa de la rapidez de obtención de resultados y al hecho de emplear la misma base de datos (BACDIVE)

Si una vez identificada la colonia, desea  saber rigurosamente si se trata de un patógeno o por el contrario es un inocuo del grupo I de riesgo biológico, puede consultar su TRBA en internet (o bien mirar en su colección favorita, ya que muchas colecciones TIPO lo indican en su oferta de cepas). No se fíe de otras fuentes, ya que la mayoría de microorganismos inocuos pueden provocar enfermedades en inmunodeprimidos y salen en internet con artículos publicados que dan la falsa sensación de que se trata oficialmente de graves patógenos, cuando muchas veces no se consideran como tales (al menos para la población general).

A veces en los medios selectivos salen sorpresas, no podemos fiarnos de los aspectos coloniales, hemos visto hasta microorganismos Gram positivos como Bacillus cereus creciendo en agar Cetrimida, por ejemplo. Si antes de elegir una galería u otra, desea estar segur@ de que no perderá su tiempo y su dinero, porque la colonia finalmente no era del grupo que sospechaba, consulte en el link de abajo el folleto “Pre-identificación” con pruebas inmediatas de MICROKIT para discernir de qué grupo se trata, que aunque tenga el membrete obsoleto, sigue siendo una de las herramientas más apreciadas por numerosos laboratorios de su sector, que la emplean como poster en sus paredes

https://www.microkit.es/pdf/pre-identificacion.pdf

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ISO 15213-3:2024 Clostridium perfringens en alimentos

ISO 15213-3:2024 Clostridium perfringens en alimentos

Medios RPM y LENA

Nace una nueva Norma ISO para la búsqueda de Clostridium perfringens en alimentos, que recopila varios medios antiguos (FTM, Lactosa-gelatina-rojo fenol, movilidad, Crosley Milk Medium…) formulados en dos nuevos medios, ya disponibles en MICROKIT:

1-PERFRINGENS RAPID MEDIUM BASE (RPM) DMT293

Aislamiento y cultivo de Clostridium perfringens en alimentos según ISO 15213-3:2024

COMPOSICION

Yeast Extract                                                      11,0 g

Enzimatic Digest of casein                                  15,0 g

Enzymatic digest of animal tissue                       10,0 g

Glucose/Dextrose                                               10,5 g

Sodium thiogycollate  C2H3NaO2S                     0,5 g

Sodium chloride NaCl                                         5,5 g

L-cystine C6H12N2O4S2                                       0,5 g

Resazurin Sodium salt C12H6NNaO4                            0,001 g

Dipotassium hydrigenophosphate HK2PO4                 10,0 g

Iron (II) Sulphate heptahydrate (H14FeO11S)                1,0 g

Gelatin (AlH3KO8S2)                                          120,0 g

Agar-agar                                                           1,5 g

(Fórmula en g/L)

Ajustar a pH final tras autoclavado: 6,6 ± 0,2

PREPARACION                           

1-Disolver 185,5 g  de medio en 1 litro de agua bidestilada. Calentar hasta ebullición, agitando para su total homogeneización. Dispensar en tubos o frascos herméticos y esterilizar en autoclave a 121ºC durante 5 min. No sobrecalentar. El color final del medio es  crema-ámbar. Se puede hacer stock de este RPM base esterilizado, manteniendo hasta 4 semanas a 5ºC.

2-Llevar hasta 47-50 ºC, 300 mL de RPM base y añadir 6 mL de una solución de Neomycina sulfato (0,75 g) y Polymyxina B sulfato (0,125 g) SMT014 esterilizada por filtración (por 0,2 µ) en 100 mL de agua destilada estéril. Esta solución antibiótica se puede mantener a 5ºC durante 4 semanas en tubos o frascos herméticos.

3-Añadir a los dos anteriores 300 mL de leche en polvo entera (DMT294), llevada a 44-47ºC (100 g en 1000 mL de agua destilada, que haya sido esterilizada por autoclavado de 5 minutos a 121ºC). Se puede hacer stock de esta leche esterilizada, manteniendo hasta 4 semanas a 5ºC en recipientes herméticos.

4- Agitar hasta que los 3 ingredientes queden homogéneos. Dispensar 9 mL en tubos estériles o bien 90 mL en frascos estériles

USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO. MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO, EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO. AGITAR ANTES DE USAR PARA ASEGURAR LA HOMOGENEIZACIÓN DE LOS eventuales gradientes de densidad de los COMPONENTES.

PRESENTACIÓN:

-Medio deshidratado RPM BASE, botes 500 g, CÓDIGO: DMT293

-Neomycina + Polimixina NO estéril en viales de 0,75 + 0,125 g, caja 40 viales CÓDIGO: SMT014

-Agua destilada estéril en Frascos de 100 mL CÓDIGO: RPL001

-Filtros estériles de carcasa para jeringa (lúer), 0,2 µm y 30 mm de diámetro, CÓDIGO: VHU237

-Jeringas estériles 50 mL para los filtros VHU237, CÓDIGO: VPL090

-Leche entera en polvo,  CÓDIGO: DMT294

CONTROL DE CALIDAD

Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar laboratorio, tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,…)

DESHIDRATADO: Polvo de color crema PREPARADO: Estéril, color crema-ámbar. Enrojece si se oxigena

CONTROL DE CRECIMIENTO CUANTITATIVO 18 horas a 46ºC aproximadamente:

Clostridium perfringens WDCM00007     Crecimiento correcto

MODO DE EMPLEO E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

Seguir las directrices de la Norma ISO 15213-3:2024

Emplear también el Agar LENA (Lactose Egg-Yolk Neomycin Agar): Ver  DMT295

 

2-PERFRINGENS LACTOSE AGAR BASE (LENA) DMT295

Aislamiento y cultivo de Clostridium perfringens en alimentos según ISO 15213-3:2024

COMPOSICION

Enzimatic digest of casein                                   10,0 g

Meat extract                                                                 10,0 g

Sodium chloride NaCl                                        5,0 g

Lactose C12H24O12                                                        10,0 g

Phenol Red C19H14O5S                                        0,1 g

Agar-agar                                                           15 g

(Fórmula en g/L)

Ajustar a pH final tras autoclavado: 7,3 ± 0,2

PREPARACION                           

1-Disolver 50,1 g  de medio en 1 litro de agua bidestilada. Calentar hasta ebullición, agitando para su total homogeneización. Dispensar en tubos o frascos herméticos y esterilizar en autoclave a 121ºC durante 15 min. No sobrecalentar. El color final del medio es  naranja. Se puede hacer stock de este LENA base esterilizado, manteniendo hasta 4 semanas a 5ºC.

2-Llevar hasta 44-47 ºC, 100 mL de LENA base y añadir 1 mL de una solución de Neomycina sulfato (0,25 g) SMT015 esterilizada por filtración (por 0,2 µ) en 10 mL de agua destilada estéril. Esta solución antibiótica se puede mantener a 5ºC durante 4 semanas en tubos o frascos herméticos.

3-Añadir a los dos anteriores 5 mL de emulsión estéril de yema de huevo SBH010. Agitar hasta que los 3 ingredientes queden homogéneos

4-Dispensar en placas Petri estériles. Las placas así preparadas se pueden mantener en tuppers de cierre hermético (para que no pierdan humedad) durante 4 semanas a 5ºC.

USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO. MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO, EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO. AGITAR ANTES DE USAR PARA ASEGURAR LA HOMOGENEIZACIÓN DE LOS eventuales gradientes de densidad de los COMPONENTES.

PRESENTACIÓN

-Medio deshidratado LENA BASE, botes 500 g, CÓDIGO: DMT295

-Neomycina NO estéril en viales de 0,25 g, caja 40 viales CÓDIGO: SMT015

-Agua destilada estéril en Tubos de 10 mL CÓDIGO: TPL001+

-Filtros estériles de carcasa para jeringa (lúer), 0,2 µm y 30 mm de diámetro, CÓDIGO: VHU237

-Jeringas estériles 20 mL para los filtros VHU237, CÓDIGO: VPL089

-Emulsión de yema de huevo estéril CÓDIGO SBH010

CONTROL DE CALIDAD

Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar laboratorio, tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,…)

DESHIDRATADO: Polvo de color crema PREPARADO: Estéril, color crema-ámbar. Enrojece si se oxigena

CONTROL DE CRECIMIENTO CUANTITATIVO  24 horas a 46ºC aproximadamente:

Clostridium perfringens WDCM00007 Colonias con halo amarillo precipitado

E.coli WDCM00012     Completamente inhibido

Bacillus subtilis WDCM00003        Colonias amarillas sin halo de precipitación

MODO DE EMPLEO E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

Seguir las directrices de la Norma ISO 15213-3:2024

Emplear también el Rapid perfringens Medium BASE (RPM): Ver  DMT293

Tambien hay que emplear otros medios clásicos (TSC Agar, Columbia Blood Agar, SIM Agar) y reactivos (Indol Kovacs, fosfatasa ácida -cancerígena- la cual imaginamos permitirán sustituir por MUP como en la búsqueda de C.perfringens en aguas por demostrarse como método equivalente)

https://www.microkit.es/fichas/TSC-AGAR-MUP.pdf

https://www.microkit.es/fichas/COLUMBIA-AGAR.pdf

https://www.microkit.es/fichas/SIM-MEDIUM.pdf

Haga sus consultas de RPM y LENA y demás temas mencionados de Clostridium perfringens en: microkit@microkit.es

Haga sus pedidos de RPM y LENA y demás temas mencionados de Clostridium perfringens en pedidos@microkit.es

Salmonella, caldo de enriquecimiento selectivo

Salmonella, caldo de enriquecimiento selectivo: minimice falsos positivos y falsos negativos

Salmonella, caldo de enriquecimiento selectivo: minimice falsos positivos y falsos negativos; del Selenito-MK Tetrationato-Rappaport al SS Broth

La detección certera de Salmonella requiere de 4 pasos:

 

1-Preenriquecimiento

Este primer paso revitaliza las células dañadas de Salmonella y permite que después se expresen. Se suele hacer con Agua de Peptona Tamponada. Pero si además  se quiere minimizar el efecto matriz debido a los conservantes alimentarios, a menos de la mitad de resultados falsamente negativos, debe emplearse un Agua de Peptona Tamponada que además neutralice los conservantes del alimento (sean naturales como las especias, sean artificiales): patente MICROKIT Agua de Peptona Tamponada Neutralizabnte (APTN, BPNW)

https://www.microkit.es/fichas/BUFFERED-PEPTONE-NEUTRALIZING-WATER.pdf

2-Enriquecimiento selectivo

En este segundo paso se favorece el crecimiento diferencial de Salmonella con respecto a la microbiota acompañante. Los caldos clásicos de enriquecimiento selectivo han sido el Selenito (cancerígeno y ya casi en desuso), Mueller-Kauffman Tetrationato (caldo verde con un gran precipitado de carbonato cálcico) y Rappaport-Vassiliadis (caldo azul que es demasiado selectivo y no permite el crecimiento de algunas cepas de Salmonella, ni de Shigella). Ante estos problemas, MICROKIT creó hace ya 3 décadas un caldo de enriquecimiento selectivo para Salmonella sin ninguno de estos problemas: el SS Broth. Tras probar la versión en caldo de todos los agares selectivos para Salmonella, MICROKIT eligió el SS Broth  como el mejor, ya que no inhibe el crecimiento de ninguna de las cepas de Salmonella ni de las de Shigella (tan olvidada pero incluso más importante que Salmonella en diversos alimentos).

https://www.microkit.es/fichas/SALMONELLA-SHIGELLA-MICROKIT-BROTH.pdf

De izquierda a derecha: SS Broth sin inocular, E. coli, Shigella (turbio), y Salmonella (negro)

 

 

 

3-Aislamiento de colonias en placa

En este tercer paso se busca estriar el caldo enriquecido para aislar colonias típicas. Los medios clásicos son:

XLD: excelente y elegido por la ISO, pero precipita en numerosas marcas comerciales en forma de cristales alargados, aparte de hundirse fácilmente el asa de siembra en el agar ya solidificado.

SS Agar: ideal en productos cárnicos

Bismuth Sulfite Agar: perfecto para productos del mar

Hektoen: el mejor diferencial de aislamiento primario para distinguir los acompañantes típicos (otras Enterobacterias) de Salmonella

Y de los más modernos cromogénicos, hay dos:

El elegido por casi todas las marcas de medios de cultivo, con Magenta-Gal, inventado por Rambach y con múltiples denominaciones actuales según sea la marca

El de MICROKIT, CromoSalm Agar, que aparece ya en la ultima versión de la Norma ISO como «ABC Agar», que a diferencia del anterior, distingue las colonias verdes/azules de Salmonella de las negras e incoloras de todas las demás Enterobacterias, incluidos los falsos positivos del otro agar cromogénico (numerosas cepas de Proteus y de Citrobacter)

https://www.microkit.es/fichas/ABC-CROMOSALM-MICROKIT-AGAR.pdf

4-Confirmación bioquímica e inmunológica de colonias sospechosas

Las colonias verdes en CromoSalm o negras en XLD se confirman para ver si son falsos positivos de cepas que parecen Salmonella, con medios como TSI, KIA, LIA, Urea… o bien con kits que incluyen esas mismas pruebas, como los clásicos Enterotubos creados por Roche o los modernos Rapid enzimáticos creados por ABL:

https://www.microkit.es/fichas/Enterotubos.pdf

https://www.microkit.es/fichas/Galerias-RAPID.pdf

Y además debe confirmarse toda colonia sospechosa con pruebas inmunológicas, como los antisueros o los látex:

https://www.microkit.es/fichas/ANTISUEROS-para-ANTIGENOS-COLONIALES.pdf

 

 

 

 

 

 

https://www.microkit.es/fichas/SALMONELLA-M-IDENT-RAPID-SCREENING-LATEX-UE-2-2019-alimentos.pdf

 

 

 

 

 

 

Por fin, MICROKIT diseñó un kit, el Salmoquick, que permite realizar los pasos 1-3 en sólo 36 horas con total fiabilidad, demostrada en sus validaciones. De este modo, cualquier laboratorio puede acelerar sus resultados sin necesidad de costosos equipos  y al precio  más económico del mercado, ya qaue se ofrece como pack de 4 medios deshidratados: APTN, SS Broth, XLD y Cromosalm:

https://www.microkit.es/pdf/Salmoquick-2016.pdf

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Haga sus consultas de SS Broth y demás temas mencionados de Salmonella en: microkit@microkit.es

Haga sus pedidos de SS Broth y demás temas mencionados de Salmonella en pedidos@microkit.es

 

RECUENTO DE HONGOS EN COSMÉTICOS, MÁS FIABLE Y MÁS RÁPIDO

RECUENTO DE HONGOS EN COSMÉTICOS, MÁS FIABLE Y MÁS RÁPIDO, SIN INVERSIÓN EN EQUIPOS PARA TÉCNICAS ESPECIALES

RECUENTO DE HONGOS (LEVADURAS Y MOHOS) EN COSMÉTICOS, MÁS FIABLE Y MÁS RÁPIDO, SIN INVERSIÓN EN EQUIPOS PARA TÉCNICAS ESPECIALES

Rapid Sabouraud RYM Agar (base Sabouraud) permite contar en cosmética colonias con halo amarillo sobre fondo violeta, distinguiéndolas de partículas de muestra y en sólo 18-36 horas. Siempre se trata de hongos (levaduras y mohos), ya que las bacterias quedan completamente inhibidas.

Las validaciones realizadas sobre este medio, tanto por MICROKIT como por los laboratorios que lo emplean, demuestran estas tres afirmaciones:

1-Aumenta la fiabilidad,

ya que las colonias crecen con su aspecto típico y ademas un halo amarillo alrededor, sobre el fondo violeta del medio, lo que permite contrastar respecto al color crema del clásico Sabouraud. Esto además ayuda a forzar/desgastar mucho menos la vista de los analistas al realizar los recuentos de levaduras y mohos. Las partículas de muestra y burbujas no son interpretadas como colonias falsamente positivas. Y las colonias diminutas no pasan desapercibidas como falsos negativos.

2-Permite mayor comodidad al analista,

por lo ya explicado sobre el contraste de las colonias con halo amarillo sobre el medio violeta (ver fotografía)

3-Aumenta la rapidez de resultados,

ya que precisamente ese mismo contraste halos/medio, se hace patente mucho antes de la aparición de las colonias: ¡desde las primeras 18 horas! En s´lo 18 h ya sabremos si vamos a tener hongos en la placa y en sólo 36 horas ya podremos hacer el recuento de levaduras y mohos.

Candida albicans  crece en las primeras 18 horas en RYM Agar con este inconfundible aspecto blanco-verdoso que la distingue de otras levaduras, que siempre dan falso positivo en otros medios

Aspergillus niger se detecta en las primeras 18 horas con estos halos amarillos sobre el fondo violeta del medio

Y sus colonias ya se ven, algunas incluso esporulando (centro negro), en las primeras 36 horas

Rapid Sabouraud RYM Agar tambien está disponible en las cómodas placas deshidratadas DryPlates-RYM: siembra en masa de 1 mL sin tener que calentar ni enfriar agares,  ¡de la muestra a la estufa en 10 segundos!

DryPlates RYM viran de violeta a amarillo en las primeras 18 h si hay presencia de hongos

Empleando Rapid Sabouraud YM Agar para recuento de hongos (levaduras y mohos) y Rapid Cromogenic Agar para recuento de aerobios en cosmética (o PCA Cromogénico en alimentos), el laboratorio deja de sufrir los recuentos como freno durante 5 días a la liberación de los lotes. Y el nuevo freno pasa a ser la detección de patógenos tras enriquecimiento (3-4 días). Lo que ahorra 1-2 dias de stock de producto final en cuarentena. A un coste similar al de la liberación en 5 días.

https://www.microkit.es/fichas/rapid-ym-agar.pdf

¿Qué pensará el empresario si sabe que puede ahorrarse la millonada de 2 dias de stock, sin inversión en técnicas caras, pero su laboratorio todavía no lo está aprovechando?

Haga sus consultas de Rapid Sabouraud RYM Agar en: microkit@microkit.es

Haga sus pedidos de Rapid Sabouraud RYM Agar en pedidos@microkit.es

RECUENTO DE AEROBIOS EN COSMÉTICOS, MÁS FIABLE Y MÁS RÁPIDO

RECUENTO DE AEROBIOS EN COSMÉTICOS, MÁS FIABLE Y MÁS RÁPIDO, SIN INVERSIÓN EN EQUIPOS PARA TÉCNICAS ESPECIALES

RECUENTO DE AEROBIOS EN COSMÉTICOS, MÁS FIABLE Y MÁS RÁPIDO, SIN INVERSIÓN EN EQUIPOS PARA TÉCNICAS ESPECIALES

Del mismo  modo que el PCA cromogénico de MICROKIT permite un recuento más cómodo, fiable y rápido en alimentos. Y que el YEA cromogénico lo hace en aguas. Maxim Rapid Cromogenic Agar (base TSA) permite contar en cosmética colonias rojas sobre fondo crema, distinguiéndolas de partículas de muestra y en sólo 18-36 horas.

https://www.microkit.es/fichas/CROMOKIT-MAXIM-AGAR-CROMOGENICO.pdf

PCA-Cromogenic Agar
YEA-Cromogenic Nutrient Agar

Las validaciones realizadas sobre este medio, tanto por MICROKIT como por los laboratorios que lo emplean, demuestran estas tres afirmaciones:

1-Aumenta la fiabilidad, ya que las colonias crecen rojas y contrastan con el color crema del medio, a diferencia del TSA o del Eugon Agar, Letheen Agar, etc. Esto además ayuda a forzar/desgastar mucho menos la vista de los analistas al realizar los recuentos. Las partículas de muestra y burbujas no son interpretadas como colonias falsamente positivas. Y las colonias diminutas no pasan desapercibidas como falsos negativos.

2-Permite mayor comodidad al analista, por lo ya explicado sobre el contraste de las colonias rojas sobre el medio crema (ver fotografía comparativa)

3-Aumenta la rapidez de resultados, ya que precisamente ese mismo contraste colonias/medio, permite verlas mucho antes, incluso desde las primeras 18 horas si se incuba a 35ºC (aerobios asociados al hombre) y desde las primeras 36 h si se incuba a 22ºC (aerobios saprófitos, alterativos a las temperaturas de almacenamiento).

Maxim Rapid Cromogenic Agar tambien está disponible en las cómodas placas deshidratadas: siembra en masa de 1 mL sin tener que calentar ni enfriar agares,  ¡de la muestra a la estufa en 10 segundos!

https://www.microkit.es/fichas/Dry-Plates-TSA-crom-y-SDA-Caf-Prospecto.pdf

El medio cromogénico es un invento de Microkit de 1995. Y como pioneros en el tema, ofrecemos la gama más completa del mercado de estos medios enzimáticos/específicos, incluido este para recuento de aerobios, además de los más conocidos para patógenos, los caldos cromogénicos para P/A y NMP, etc.

Empleando Maxim Rapid Cromogenic Agar para recuento de aerobios y Rapid Sabouraud YM Agar para recuento de hongos (levaduras y mohos), el laboratorio de cosmética deja de tener los recuentos como freno durante 5 dias a la liberación de los lotes. Y el nuevo freno pasa a ser la detección de patógenos tras enriquecimiento (3-4 días). Lo que ahorra 2 dias de stock de producto final en cuarentena. A un coste similar al de la liberación en 5 días.

https://www.microkit.es/fichas/rapid-ym-agar.pdf

También disponible en DryPlates-RYM

¿Qué pensará el empresario si sabe que puede ahorrarse la millonada de 2 dias de stock, sin inversión en técnicas caras, pero su laboratorio todavía no lo está aprovechando?

Haga sus consultas de MAXIM Rapid Cromogenic Agar en: microkit@microkit.es

Haga sus pedidos de MAXIM Rapid Cromogenic Agar en pedidos@microkit.es