Confirmación de las colonias azules de presuntos E.coli en CCA, el mismo día, gracias al test del Citrato acelerado (Simmon´s Citrate Agar clásico)
Los test negativos suelen estar infravalorados, para el potencial que suponen a la hora de diferenciar positivos de falsos positivos.
Por ejemplo la catalasa es una prueba magnífica para confirmar sus negativos (Enterococos, Clostridios y Lactobacilos),
ya que son mucho más escasos que sus positivos que burbujean (casi todas las bacterias típicas de microbiología de alimentos, aguas, cosméticos, medicamentos… excepto las mencionadas arriba)
Lo mismo sucede con el test del Citrato de Simmon´s: E.coli es negativo;
y eso lo diferencia de los falsos positivos en, por ejemplo, el medio oficial de aguas CCA
que en MICROKIT llamamos MugPlus desde que lo creamos en 1995.
https://www.microkit.es/fichas/MUGPLUS%20COLIFORM-E.COLI%20AGAR%20CCA.pdf
Así, para confirmar las colonias azuladas de E.coli en CCA (MugPlus), el método ISO 9308-1, habla de realizar el test del indol.
De este modo, los falsos positivos, que crecen con colonias de colores cercanos al azul en CCA (MugPlus), si son indol negativos, quedan descartados, ya que E.coli es indol positivo.
En el CCA (MugPlus) de MICROKIT, el test del indol se puede realizar directo en las colonias que hayan crecido en tonos azules,
ya que nuestra peptona es muy rica en triptófano, lo que ahorra las 18-24 horas de incubación adicional en agua de triptona con triptófano:
https://www.microkit.es/fichas/TRYPTONE-TRYPTOPHAN-WATER-PEPTONE-WATER-polvo.pdf
Pero en realidad para hacer las cosas 100% bien, se tardan 24 horas adicionales, ya que para que sea realmente confirmativo, el test de indol debe realizarse reincubando a 44ºC:
dado que algunas Klebsiellas de colonias lila o violáceo, son indol positivas a 35-37ºC,
que es la temperatura a la que habremos incubado el CCA-(MugPlus) para detectar tambien los demás coliformes totales.
Existe otra prueba definitiva para descartar colonias azuladas en CCA (MugPlus) que no son E.coli, que se puede acelerar a sólo 4-6 horas con la técnica que explicamos a continuación:
El test del Citrato acelerado
https://www.microkit.es/fichas/SIMMONS-CITRATE-AGAR.pdf
Esta aceleración no es un invento de MICROKIT:
algunos microbiólogos veteranos lo hacen y nosotros sólo hemos tenido el privilegio de haberles escuchado antes de que se jubilaran,
y lo transmitimos aquí a todos los microbiólogos que nos sigan y no lo sepan.
Además, hemos dado un paso adicional y facilitamos su uso estandarizado en viales preparados de Simmon´s Citrate Agar,
con el volumen y pH ideales, viales que hemos bautizado con la referencia KV1CIT.
Izda: E.coli, tras 4-6 horas sigue verde lima;
Dcha: falso positivo (Klebsiella pneumoniae), tras 4-6 horas ha virado a verdeazulado
CÓMO USAR EL TRUCO DE LOS VIALES MICROKIT PARA ACELERACIÓN EN LA CONFIRMACIÓN DE E.coli
1-Diluir 5 (o más) colonias azuladas del mismo aspecto y tono (pedir opinión a los compañeros del laboratorio, ya que cada persona ve diferente los colores), crecidas en MugPlus CCA, en un tubo Eppendorf al que hayamos añadido 0,1-0,2 mL de solución salina o Ringer. ¡Agitar bien!
2-Añadir con una pipeta o jeringa todo el contenido mezclado, en un vial de Agar Citrato de Simmons acelerador (MICROKIT Ref: KV1CIT),
verificando que el inóculo se esparza por la superficie del medio. Cuantas más colonias se añadan en los 0,1-0,2 mL de salina, más rápida será la reacción.
3-Incubar 4-6 h a 35ºC.
4-Si a las 4 h ya hay viraje a verde-azulado, no hace falta seguir incubando otras 2 horas: las colonias NO son de E.coli; si no, seguir incubando 2 horas más.
5-Comparar con el color verde lima de un vial sin inocular y decidir:
6-Citrato Agar sigue de un color similar lima (y además es Indol + a 44ºC, las colonias no son mucosas): definitivamente es E.coli
7- Citrato Agar ha virado a verde azulado o azul, (y es indol – a 44ºC y/o las colonias son mucoides):
no es E.coli, puede ser alguna cepa de Klebsiella, o también de Enterobacter, Citrobacter, incluso de alguna Salmonella…
El color pistacho o azulado se mantiene durante al menos 48 horas adicionales:
si empieza a realizarlo tarde en su jornada laboral, también puede usar este test sin tener que quedarse más tiempo en el laboratorio,
y leerlo al día siguiente.
A veces la innovación no necesita un nuevo medio o kit, y simplemente es la forma en que se sabe utilizar mejor un medio de cultivo clásico.
Si desea información y precios actualizados de estos viales estandarizados para acelerar el test del Citrato,
y descartar falsos positivos de E.coli (en CCA-MugPlus o en el medio que sea),
consulte a: microkit@microkit.es
