PRE-IDENTIFICACIÓN

IDENTIFICACIÓN DE COLONIAS PREVIA AL USO DE GALERÍAS, CON 4 REACTIVOS DE RESPUESTA INMEDIATA PARA ELEGIR BIEN LA GALERÍA ADECUADA

¿Por qué pre-identificar colonias?

Una vez obtenemos una colonia típica en un medio de cultivo, la probabilidad de que finalmente no sea del microorganismo buscado es del 30% como media en medios clásicos y del 0,5% como media en medios cromogénicos.

Por eso debemos identificar toda colonia sospechosa antes de decidir si hay que destruir el lote afectado.

Pero a menudo no tenemos ni idea de qué grupo de microorganismo es la colonia sospechosa, ya que los falsos positivos a veces nos sorprenden, de modo que incluso aparecen Gram positivos en medios selectivos para Gram negativos (en la foto, ejemplo de Bacillus cereus en Agar Cetrimida cromogénico),

o No-fermentadores como Pseudomonas aeruginosa en medios selectivos para coliformes, por poner un par de ejemplos.

Por ello elegir directamente la galería que creemos adecuada para el microorganismo buscado,  muchas veces supone una pérdida de tiempo (y el coste de la galería mal elegida) que no nos lleva a ningún nombre de cepa.

La solución de MICROKIT

¿Sabía que existen 4 reactivos de respuesta inmediata para orientarle cuál de las galerías de identificación debe elegir y después saber de qué especie es una colonia? En MICROKIT lo llamamos PRE-Identificación:

Neogram, Oxidasa, Catalasa y Coagulasa.

Eso sí, usarlos puede acabar con la viabilidad de la colonia, de modo que aconsejamos usarlos sólo en colonias que tenemos resembradas-multiplicadas y por tanto no requieren pruebas posteriores más que en otras colonias hermanas

Veamos uno por uno:

Neogram 

es un reactivo, que en contacto con la pared celular de los Gram negativos, genera un filamento visible a simple vista. Lo cual no sucede con los Gram negativos. Así de simple, sin tinciones ni microscopio, y 100% correlación con la tinción de Gram. Precaución: es corrosivo, cuidado no toque la piel, ojos, boca…

Oxidasa 

es un reactivo que muestra el metabolismo de las bacterias frente al oxígeno. Ofrecemos dos versiones, la tira impregnada y también lo tenemos en ampollas de uso unitario.

Es un reactivo muy lábil y en otras marcas se estropean todos los test tras abrir el bote, al oxigenarse con el aire. En nuestro caso las tiras no se estropean, abramos las veces que abramos, porque estás estabilizadas.

Con esta prueba distinguiremos la mayoría de microorganismos  oxidativos, como Pseudomonas, Burkholderia, Vibrio, Campylobacter, Legionella… (No fermentadores y algunos otros, que viran el cuadro de la tira a color azul oscuro) de los fermentadores y anaerobios, que no lo viran a azul oscuro.

Catalasa

es otro reactivo, que muestra el metabolismo de defensa de ciertas bacterias contra el oxígeno, en este caso contra el peróxido de hidrógeno.

Al añadirlo a la colonia de un microorganismo catalasa positivo, burbujea con potencia (crea una efervescencia), eliminando oxígeno alrededor de las células de la colonia.

Casi todos los aerobios y fermentadores son catalasa positivos.

De los microrganismos con los que solemos trabajar en micro industrial y ambiental, sólo son catalasa negativos los Enterococos-Estreptococos, los Lactobacilos y los Clostridium, por lo que resulta una prueba muy concluyente para éstos.

Coagulasa  

en este caso más que para elegir galería, sirve para ver si la colonia de estafilococos es probablemente Staphylococos aureus o no, ya que la mayoría de sus cepas es coagulasa + y la mayoría de otras especies no lo son.

Y si nos vale con saber eso, nos ahorramos la galería.

En la foto vemos a la izquierda un resultado negativo negativo (aspecto homogéneo) y a la derecha un resultado positivo: la colonia ha generado coágulos en el círculo

Si aún así quiere conocer de qué cepa concreta de estafilococo se trata, para ver si es o no patógeno, use las galerías Rapid Staph y lo sabrá en sólo 4 horas

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En este video le explicamos el modo de empleo de los 4 componentes de Pre-identificación:

https://youtu.be/knxE5wH-kCI

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Enterotube, las galerías originales para la Identificación de colonias de Enterobacterias, con una ingeniosa forma de inocularlas

Enterotube. Galerías diseñadas hace mas de 60 años por Roche, han pasado por varios fabricantes, pero estas galerías son las únicas del mercado que contienen medios de cultivo preparados, hidratados, no liofilizados…

…y eso las convierte en referente porque fueron con las que los autores describieron las especies de la mayoría de bacterias.

Son galerías de pruebas bioquímicas. Sólo ha sobrevivido la galería de identificación de Enterobacterias, que sigue siendo un referente,

Y desaparecieron los míticos Oxiferm para No fermentadores y Mycotube para levaduras.

Para ellos, y para estafilococos, enterococos y anaerobios… utilice nuestras galerías RAPID, que al ser enzimáticas, sólo tardan 4 horas en darle el resultado.

Modo de empleo

Las Enterotube son las más fáciles de usar, mediante una ingeniosa patente de picadura, y por eso, las más queridas por los microbiólogos más veteranos, que las conocen como las únicas galerías de referencia desde que estudiaron hace medio siglo:

1-se abren los tapones

2-se toca la colonia con el asa incluida en la galería

3-se estira hasta ver que el inóculo ha llegado al ultimo pocillo de glucosa, que sirve de control, ya que, si tras la incubación, sale glucosa negativo, hay que repetir, porque todas las enterobacterias son glucosa positivas, señal de que el inóculo colonial no se ha repartido hasta el final.

4-se parte el asa por la muesca y se cierran los tapones

5-con el trozo de asa que ha quedado en nuestras manos, se perforan las ventanas de aireación de las pruebas oxidativas y se guarda ese trozo de asa limpia para el día de la lectura de resultados

6-se incuba a 35ºC aprox durante 24 h, aunque a veces si la cepa estaba muy estresada los virajes no se ven definitivamente hasta las 36-48 h

7-se añaden los reactivos de indol y de voges proskauer en los pocillos donde lo indica, abriéndolos por el film de arriba con el trozo de asa que ya abrió las ventanas

Interpretación de resultados

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8-se apuntan los resultados positivos o negativos comparando los colores finales con los de la tabla adjunta. Se asigna a los positivos el número indicado en las tablillas y a los negativos un cero

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9-se suman los números de cada grupo y se obtiene un código de 5 cifras (en el ejemplo 20063):

10-se busca este número en el pdf del libro de resultados, libro que puede pedir sin coste con la primera compra de enterotubos:

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11-y le saldrá el nombre de la enterobacteria identificada:

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12-a veces le salen varios nombres de diferentes cepas y le indica con qué prueba adicional puede distinguir cuál de ellos es el definitivo

13-y algunas veces le saldrá un código que le indicará que no se puede asignar el resultado a ninguna cepa. Eso suele ser:

1. porque no es una enterobacteria y no se cercioró antes de utilizar la galería, de que la colonia lo era (Neogram negativa formando filamento; y oxidasa negativa sin viraje a azul),
2. o porque la colonia era de un cultivo demasiado viejo,
3. o porque tomó inóculo de una colonia multiespecífica, procedente de ufcs de diferentes cepas,
4. o porque arrastró medio de cultivo junto con la colonia, que ha interferido en los medios de cultivo de la galería.

En tal caso repita con otra galería y con más cuidado

La base de datos Bacdive es la misma para todas las galerías bioquímicas, por lo que los resultados deberían ser los mismos que los de otras marcas.

Sin embargo la gran diferencia de Enterotube con las demás galerías es que tiene los medios preparados hidratados, no liofilizados, por lo que los virajes de color que diferencian cada prueba positiva de la negativa, son mucho más evidentes.

https://www.microkit.es/fichas/Enterotubos.pdf

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