MICROBIOLOGÍA DE AGUAS ENVASADAS-3 y Pseudomonas aeruginosa:

Detección confirmativa de Pseudomonas aeruginosa en sólo 24 h

La ciencia avanza, mientras la Normativa nos estanca

En nuestro mensaje anterior ya esbozamos que todos los parámetros microbiológicos en aguas envasadas pueden detectarse y cuantificarse en tan sólo 18-24 horas.

Sin embargo, la legislación actual sigue anclada en métodos tradicionales arcaicos que requieren al menos 48 horas para obtener resultados,

debido al desconocimiento o a la lenta adopción de los avances tecnológicos del siglo XXI (sólo implantada en el CCA de E.coli-Coliformes

que nosotros diseñamos en 1995 como el original Agar MUGPLUS).

Un ejemplo muy ilustrativo es el que vimos en nuestra anterior misiva sobre los Enterococos fecales, cuya detección puede resolverse en sólo 18-24h

(y la confirmación en 5 segundos con el test de catalasa ϴ MICROKIT KMT299, algo que olvidamos recalcar allí) en todas las muestras, tanto positivas como negativas.

Algo similar ocurre con Pseudomonas aeruginosa, donde, aunque la confirmación si aparecen presuntos positivos,

requiera otras 4-24 horas más, todas las muestras negativas pueden liberarse también en sólo 18-24 horas.

Para este parámetro contamos con el Rapid Cetrimida CN Agar, un medio idéntico al ISO CN Agar, pero con un cromógeno añadido…

…que permite visualizar colonias rojas de presuntas Pseudomonas aeruginosa en sólo 18-24 horas.

* A las 18-24 horas, todas las muestras negativas (sin crecimiento de colonias rojas) pueden liberarse con total seguridad.

* A las 48 horas, en caso de colonias presuntivas, se confirma cada colonia roja gracias a la fluorescencia azulada bajo luz UVA (366 nm) que desarrolla alrededor.

Pseudomonas aeruginosa en Rapid CN: colonias rojas en 18h y fluorescentes en 36-48 h

Además, dado que a las 18 horas ya contamos con una alerta temprana,

es posible confirmar las colonias sospechosas que obtengamos, en sólo otras 24 horas mediante una prueba definitiva MICROKIT:

Tubos de caldo Acetamida (TPL113) + Reactivo Nessler (SMT007): P.aeruginosa vira el caldo a marrón-ladrillo, las demás cepas no lo hacen.

Así, en la mayoría de muestras, las negativas, se pueden liberar los lotes en 18-24 h;

y sólo cuando aparezcan colonias presuntamente positivas, sólo en esos casos, volvemos a tardar las 48 h del método clásico.

Eliminación de falsos positivos (incluso los “hermanos” de P.aeruginosa) ¡en sólo 2 horas!

Incluso en el medio más selectivo presente o futuro, pueden darse falsos positivos por la presencia de 4 “primos” como P. putida, P.fluorescens,  Ralstonia pickettii o Achromobacter xylosoxidans

e incluso por la presencia de 5 falsos positivos “hermanos”, no diferenciables en ningún medio de cultivo presente o futuro,

pero sí confirmando después: P.stutzeri, P.mendocina P.balearica, P.monteilii y Burkholderia cepacia.

Estos 9 falsos positivos, en algunos manantiales, prolongan los análisis 24 horas adicionales (Acetamida + Nessler) en demasiadas muestras,

por su presencia recurrente en dichas envasadoras concretas.

Una prueba clásica contundente fue olvidada por la Norma ISO 16266:

Reducción Aeróbica de Nitratos (RAN) en sólo 2h, una prueba definitiva de tremenda rapidez (MICROKIT Tubos TPLRAN + Reactivo Nitratos A + B).

Si la colonia inoculada en el tubo, no vira en 2h a fucsia, entonces no es Pseudomonas aeruginosa.

De modo que ya no es necesario sustituir el CN (o el Rapid CN) por otros medios cromogénicos basados en el BAP (β-alanyl aminopeptidasa)

para la detección certera de Pseudomonas aeruginosa, ya que dicho cromógeno no elimina ni uno solo de los 7 falsos positivos antedichos.

Pero lo que es peor, en muchas cepas estresadas de P.aeruginosa propias de aguas oligotróficas,

como son las aguas de manantial ¡da falsos negativos! cepas de Ps.aeruginosa que crecen pero no colorean, colorean tarde o colorean débilmente.

En definitiva, empleando Rapid CN Agar (18 h) y confirmando sus colonias rojas con el test de RAN (2h), reducimos el tiempo de detección confirmativa de Pseudomonas aeruginosa de 3 días a sólo uno.

PLAQUIS®: innovación en formato y diseño

Otro tema del máximo interés: Nuestros medios están disponibles en un formato exclusivo:

las PLAQUIS®, placas herméticas de 55 mm de diámetro, especialmente diseñadas para membranas de 47 mm.

Este formato aporta tres ventajas fundamentales:

–Hermeticidad: implica durabilidad real de hasta 6 meses; además, la tapa no se separa de la base incluso en caídas accidentales en cabina, estufa o durante el transporte de una a otra.

–Apilado seguro y eficiente: su encaje permite apilar las placas de forma muy estable, lo que evita accidentes durante su manipulación y permite optimizar el espacio en la estufa y en la cabina.

– Ahorro de espacio: su menor altura y diámetro permiten duplicar la capacidad de almacenamiento en almacén y estufas, además de reducir drásticamente el volumen de residuos.

De hecho, en una caja donde apenas caben 30 plaquitas convencionales de las demás marcas, caben el doble, 60, de nuestras PLAQUIS®.

Ventajas adicionales de las Plaquis®

Otro aspecto diferencial es que ninguno de nuestros medios destinados al análisis de aguas envasadas requiere refrigeración.

A diferencia de otros fabricantes que trasladan erróneamente al sector del agua, condiciones de conservación propias de medios clínicos (con antibióticos termolábiles, sangre o suero),

nuestras PLAQUIS® se almacenan fácilmente en un armario común, entre 15-25 °C;

la única precaución, como siempre en todo medio preparado: protegidas de la luz y de variaciones bruscas de temperatura.

¡Ahorre espacio en sus neveras!

No te pierdas nuestro vídeo sobre las Plaquis®:  https://www.youtube.com/watch?v=fS1ycmLpJ4Q&t=459s

Mirando hacia adelante

El éxito de las PLAQUIS® ha sido tan grande que próximamente lanzaremos un nuevo molde de fabricación propia,

sin la marca “Pall” en la base, lo que permitirá una visualización aún más clara del medio.

Además, dejaremos de depender de proveedores de Canadá,

ya que las nuevas placas se fabricarán directamente en España, promoviendo la economía nacional.

Da el salto a un nuevo universo microbiológico con nuestros medios avanzados, en PLAQUIS®, y optimiza tus análisis de aguas envasadas con mayor rapidez, fiabilidad y certeza.

En nuestra próxima entrada de aguas envasadas, la 4, hablaremos sobre el parámetro

que actualmente genera los falsos negativos más frecuentes en intercomparación en las envasadoras de agua:

los clostridios, y cómo abordar de raíz este desafío en su detección (que encima, sólo tardará 24 horas).

¡Hasta la próxima entrega de microbiología de aguas envasadas, hacia el 21 de Mayo de 2026!

MAIL 2 AGUAS ENVASADAS: CERTEZA EN TUS RESULTADOS y los Enterococos fecales ¿de verdad hacen falta 48 +4 horas de incubación?

El problema en la detección y recuento de Enterococos fecales

La detección de Enterococos fecales, junto con la de Pseudomonas aeruginosa y de Clostridios, y los recuentos de aerobios y de hongos, están generando un retraso innecesario en los resultados de las envasadoras de agua y refrescos:  2 o más días en lugar de 1 para liberar sus lotes.

Esto supone una auténtica catástrofe, no solo económica, sino también logística.

El doble de tiempo de espera implica el doble de espacio de almacenamiento, un recurso especialmente crítico considerando que la mayoría de envasadoras se encuentran ubicadas en parajes naturales, donde la expansión física suele estar muy limitada.

En algunos casos, esta situación incluso frena de manera irreversible el crecimiento de las empresas.

¿Por qué sucede esto?

Quienes redactaron las Normas ISO de referencia para estos patógenos/indicadores, así como quienes las incorporaron a la legislación,

desconocían que desde hace muchos años existen medios de cultivo capaces de ofrecer los mismos resultados (o incluso mejores) en 18-24 horas, en lugar de las 48 horas que exigen los métodos tradicionales.

Si se hubiera consultado previamente a especialistas en medios de cultivo y a la vez en intercomparación de métodos, como MICROKIT, estas normas y esta legislación no habrían nacido obsoletas.

Una alternativa rápida y validada

Afortunadamente, la validación de métodos microbiológicos permite a los laboratorios emplear medios alternativos siempre que se demuestre que son equivalentes o superiores a los oficiales.

En MICROKIT ya hemos realizado este trabajo: demostramos que al sustituir la combinación tradicional Agar Slanetz-Bartley (SB) + Agar Bilis Esculina Azida (BEA) por el uso directo y rápido de Agar Bilis Esculina Azida BEA de MICROKIT, los resultados no sólo son comparables, ¡sino incluso mejores!

Izda: Agar Rapid BEA, colonias muy evidentes incluso por debajo

Dcha: Agar Slanetz-Bartley, colonias rojas diminutas tras 48 h

¿Cómo llegamos a esta solución?

El Agar BEA (y su equivalente en microbiología de alimentos, el KAA Agar) se ha utilizado históricamente para la confirmación de colonias sospechosas crecidas previamente en Agar Slanetz-Bartley (SB).

El inconveniente es que el SB requiere 48 horas para reflejar de forma fiable las colonias de Enterococos fecales. Que luego encima hay que confirmar con BEA.

Hace ya tres décadas nos planteamos una pregunta: ¿Qué sucedería si, en lugar de usar primero SB y después confirmar con BEA, se emplease directamente BEA?

En aquel momento, nuestros maestros —hoy ya jubilados— nos calificaron de temerarios:

“¡No podéis cambiar una tradición de décadas: no hay datos que lo avalen!”.

Nuestra respuesta fue clara: tampoco existían datos que lo contradijeran.

Con la colaboración de varias envasadoras de agua, iniciamos un proceso comparativo riguroso.

Los resultados fueron concluyentes:

quedó validado el uso directo de Agar BEA de MICROKIT.

Es importante destacar que desconocemos el comportamiento de este medio de otras marcas, ya que la bilis, como componente natural inhibitorio de muy difícil ajuste en cada lote, puede provocar falsos negativos en los propios enterococos fecales que se pretende detectar.

Sólo hay que leer los comentarios sobre la Bilis en otras marcas de máximo prestigio.

Precisamente por ello hemos denominado a nuestro medio Agar Rapid-BEA, para diferenciarlo claramente de aquellos que no han pasado por un proceso de validación exhaustivo comparado con el método clásico.

https://www.microkit.es/fichas/BILE%20ESCULIN%20AZIDE%20AGAR%20(BEA)%20RAPID.pdf

No nos olvidamos del Agar cromogénico de la EPA (colonias azules) y también lo comparamos, pero sus resultados no nos gustaron nada: demasiados falsos positivos (en cualquier marca de este medio) para todo un medio cromogénico:

Ahora la decisión es tuya

Existen tres caminos posibles:

1. Continuar como hasta ahora, liberando lotes en un mínimo de 48 horas y limitando el crecimiento de tu empresa. Y dejando que el laboratorio siga pasando inadvertido para los dueños de tu empresa como posible fuente de riqueza para la misma.

2. Validar el BEA de tu proveedor habitual, comparando decenas de muestras positivas y negativas ¿tan fiel vas a ser a alguien que no ha hecho nada para que mejores tus resultados?

3. Aprovechar el trabajo ya realizado por MICROKIT y emplear directamente nuestro Agar Rapid-BEA con la proporción de bilis exacta en cada lote para que inhiba los acompañantes sin inhibir los enterococos fecales.

Los beneficios de liberar en sólo 24 horas:

Imagina dar esta noticia a tus superiores: junto con la información de las entradas 3 y 4 de esta campaña, que subiremos en las próximas semanas (misma aceleración de resultados a la mitad de tiempo para Pseudomonas aeruginosa y para Clostridios),

podrás reducir el tiempo de liberación de lotes a la mitad, evitando inversiones millonarias en nuevos almacenes.

Tu almacén actual quedará con el doble de capacidad operativa, y podrás duplicar la producción sin gastar un solo céntimo en ampliación de instalaciones.

¿No crees que una noticia así le va encantar a los jefes?

Nuestra recomendación es que lo presentes por escrito como una Acción Preventiva (o de Mejora) en tu Sistema de Calidad.

Así te asegurarás de que el reconocimiento sea tuyo y que no sean otros quienes se echen las flores de esta hazaña:

tú te lo habrás ganado por confiar en MICROKIT y comprobar en tu propio laboratorio que todo esto es cierto.

Solicita la información que necesites en microkit@microkit.es

¡Hasta la próxima entrega a finales de Abril-2026!