TETRATHIONATE BROTH MUELLER KAUFFMAN VERDE BRILLANTE (BASE)

TETRATHIONATE BROTH MUELLER KAUFFMAN VERDE BRILLANTE (BASE)

Enriquecimiento de Salmonella (ISO 6579)

COMPOSICIÓN

  • Extracto de carne            4,3
  • Dig.enzimático caseína    8,6
  • Cloruro sódico                2,6
  • Carbonato cálcico           38,7
  • Tiosulfato sódico-5-h      47,8
  • Bilis de buey                   4,78
  • Verde Brillante          0,0096

(Fórmula en gramos por litro)

pH final: 8.0 ± 0,2.

 

De izquierda a derecha: Tetrationate Broth MK con Verde Brillante, y con Salmonella.

PREPARACIÓN
 

Disolver 106,8 g de medio en 1 litro de agua destilada. Calentar hasta ebullición. Esterilizar a 121 ºC, 20 minutos o mejor mantener a 100 ºC durante 2 minutos y no autoclavar. El precipitado o enturbiamento de Carbonato Cálcico es normal. Distribuir en tubos estériles. No volver a calentar. Instantes antes de usar, se puede añadir 19 ml de solución yodo-yodurada (VCC4023).

 

PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO

PRECAUCIÓN: CONTIENE SALES BILIARES.

MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO EN LUGAR

SECO, FRESCO Y OSCURO. AGITE EL BOTE ANTES DE USAR.

DESHIDRATADO CODIGO: DMT177

CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO

Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar laboratorio, tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,…)

DESHIDRATADO: Polvo fino, Crema

PREPARADO: Estéril, Precipitado, blanco.

EVALUACIÓN DEL RENDIMIENTO ISO/TS 11133-2, 24-48 h a 37-41,5 ºC:

(Aplicando el método UNE EN ISO 6579: 2003 mejorada, o el indicado en el Manual MICROKIT actualizado)

  • Salmonella abony MKTN 6017 con acompañantes (E.coli MKTA 25922 y Ps.aeruginosa MKTA 9027). Tras estriar una alícuota en XLD e incubar, aparecen más de 10 colonias típicas.
  • Escherichia coli MKTA 25922, totalmente inhibido: tras incubar, estriar en TSA e incubar, no aparecen colonías
  • Enterococcus faecalis MKTA 29212, parcialmente inhibido: tras incubar, estriar en TSA e incubar, aparecen menos de 10 colonías.
  • Bacillus subtilis MKTA 6633, Parcialmente inhibido.
  • Pseudomonas aeruginosa MKTA 9027, Parcialmente inhibido.
  • Staphylococcus aureus MKTA 6538P, Inhibido.

Las colecciones TIPO prohiben el uso de su referencia por lo que indicamos la nuestra, directamente trazable a la colección TIPO.

Izda: Salmonella (turbidez y pérdida de color), Centro: Shigella (turbidez y turquesa), Dcha: otras Enterobacterias. (sin turbidez)

 

PRESENTACIÓN: MEDIO DESHIDRATADO.

 

NOTA: Medio para enriquecimiento de Salmonella en alimentos y aguas. Se utiliza en paralelo al Caldo Rappaport Vassiliadis (mejor con SS Broth) y, en  la Norma ISO 6579 (en versiones antiguas junto al Selenito Cistina Broth).

 

PRECAUCIÓN

Este medio no es válido para Salmonella typhi. Resulta más selectivo que los otros caldos Tetratrionato (DMT086 y DMT304) para las demás Salmonella. Medio alternativo recomendado por MICROKIT por sus mayores sensuibilidad y especificidad: SS Broth.

MODO DE EMPLEO E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
Inocular 1/10 ml del caldo de pre-enriquecimiento en 10/100 ml de este medio. Incubar a 36-38 (42) ºC durante 21-27 horas. Tras agitar, sembrar en placas de medios selectivos.

El usuario final es el único responsable de la eliminación de los microorganismos de acuerdo con la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.

Si desea más información sobre nuestro TETRATHIONATE BROTH MUELLER KAUFFMAN VERDE BRILLANTE rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto . O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16

TCBS VIBRIO AGAR

TCBS VIBRIO AGAR

Selección de Vibrio cholerae (ICMSF, APHA, FDA) y V.parahaemolyticus (ISO 8914:1990 modificada). ISO/TS 21872-1:2007.

COMPOSICIÓN

  • Triptona                    10,00 g
  • Extracto de levadura   5,00 g
  • Tiosulfato sódico      10,00 g
  • Citrato sódico           10,00 g
  • Cloruro sódico          10,00 g
  • Bilis                            8,00 g
  • Sacarosa                   20,00 g
  • Citrato férrico             1,00 g
  • Azul de timol              0,04 g
  • Azul de bromotimol    0,04 g
  • Agar‑agar                  14,00 g

(Fórmula por litro)

pH final: 8,6 ± 0,2

Vibrio cholerae (colonias amarillas)
Vibrio parahaemolyticus (colonias azul-verdosas)

                       

 

 

 

PRECAUCIÓN:CONTIENE SALES BILIARES.

PREPARACIÓN   

Disolver 88 g de medio en 1 litro de agua destilada. Para vibrios hiperhalófitos ( V. parahaemolyticus, …) puede requerir la adición de otros 20-50 g/l de Agua de Mar (DMT149) o de Cl Na (BCB101).

Calentar agitando hasta ebullición para su disolución. Hervir 1 minuto y enfriar o bien autoclavar a 116 ºC durante 5 minutos, aunque resulta más recomendable el primer método. Añadiendo después TTC (SDA018) cuando el medio se ha enfriado a 45°C, el TCBS es más diferencial.

PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO. AGITE EL BOTE ANTES DE USAR. MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO

DESHIDRATADO CODIGO: DMT119

CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO

Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar laboratorio, tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,…)

DESHIDRATADO: Polvo fino, Crema-verdoso  PREPARADO: Estéril, Verde

CONTROL DE CRECIMIENTO 24-48 h a temperatura ambiente (21-28°C aproximadamente):

  • Escherichia coli MKTA 25922, Escaso, colonia translúcida.
  • Enterococcus faecalis MKTA 29212, Escaso, Colonias muy pequeñas y amarillas.
  • Vibrio cholerae MKTA 14035, Bueno, Colonias amarillas.
  • Vibrio parahaemolyticus MKTC 613, Bueno con 30-60 g/l de ClNa, Colonias azules.

PRESENTACIÓN: FRASCOS PREPARADOS, MEDIO DESHIDRATADO, TUBOS INCLINADOS CON Y SIN 30 g/l ClNa.

Medio selectivo indicado para el aislamiento y el recuento de Vibrio. (ICMSF, FDA, APHA). Por su pH alcalino y su contenido en sales, inhibe el crecimiento de la mayor parte de microorganismos, excepto los halófilos.

 NOTAS: -Numerosas especies de Vibrio provocan enfermedades gastrointestinales y sistémicas en el hombre por ingesta de pescados y mariscos crudos o mal cocinados, ya que en el agua raramente alcanzan la dosis infectiva necesaria: V.cholerae, V.parahaemolyticus, V.mimicus, V.fluvialis, V. hollisae, V.furnisii, Otros como V. alginolyticus, V.damsela, V.vulnificus, V.metscnikovii… podrían también estar implicados. Todos ellos son marinos costeros, excepto V.cholerae y V.mimicus que viven en aguas continentales. La mayor frecuencia de sus toxiinfecciones se produce en verano.

-La mayoría de capturas de pescado (hasta el 96%) y marisco (100% de cocinas) costeros en verano contienen V.parahaemolyticus, lo cual no ocurre el resto del año. El agua del grifo y el vinagre destruyen gran parte de las células presentes en el pescado, por ello es conveniente lavarlos bien bajo el grifo y acidificarlo por debajo de pH 4,5. El cocinado destruye sus células, desde 15 minutos a 60°C. La refrigeración frena su crecimiento y la congelación incluso lo hace decrecer. Se deben prevenir las contaminaciones cruzadas de pescado cocinado con pescado crudo, ya que en sólo 10 minutos duplica su población y en unas horas pueden desarrollarse millones. Se concentra en la piel, agallas e intestino de los pescados. También provoca otitis e infecciones de heridas. Si no se detecta en las matrices indicadas y en verano, a menudo no es por su ausencia sino porque no se pre-enriquece adecuadamente en TSB, de modo que los microorganismos estresados no se manifiestan ni en el caldo de enriquecimiento Alkaline Saline ni en el agar de aislamiento selectivo TCBS.

-Vibrio cholerae incluye el virulento biotipo clásico (que no hemoliza los hematíes de carnero y cabra pero si los de hombre y conejo), y el menos virulento pero pandémico biotipo El Tor (que sí hemoliza los hematíes de carnero y cabra). Aunque en la actualidad la mayoría de casos de esta enfermedad son  leves, puede ser mortal por deshidratación de hasta 20 litros de agua al día en la persona contagiada. También provoca otitis e infecciones de heridas. Se difunde por el agua y alimentos contaminados con ella, sobre todo con las heces de los individuos enfermos. Pero el agua continental es su reservorio natural.

-El TCBS Agar está diseñado para detectar la mayoría de especies de Vibrio, pero no para los otros géneros de la familia Vibrionáceas: Aeromonas spp., Plesiomonas spp. y Photobacterium spp.

 SIEMBRA

Sembrar en superficie las placas, en estria, a partir del enriquecimiento en Alkaline Vibrio Broth (para V.cholerae) o en Vibrio Hipersaline Broth-Alkaline Saline Broth (para V.parahaemolyticus y otras especies halófilas), previamente preenriquecidos en TSB para eliminar el stress (este preenriquecimiento permite la detección un 50% más veces que sin él). Incubar de 18 a 24 horas a 28-35 ºC.

INTERPRETACIÓN

Vibrio cholerae tipo El Tor forma colonias amarillas por fermentación de la sacarosa (naranjas si se añadió TTC) con viraje del medio a amarillo. Toda prueba posterior debe realizarse desde colonias repicadas en Nutrient Agar-Vibrio DMT126 o de lo contrario se obtendrán falsos negativos. Para evitar falsos positivos, recordar que a diferencia de las Enterobacterias, Vibrio cholerae es oxidasa positivo, a diferencia de los Coliformes, es lactosa negativo (aunque indol +) y a diferencia de otros Vibrio, no crece con >6% (60 g/l) de ClNa, pudiendo crecer en absoluta ausencia de ClNa. Ciertas cepas de Vibrio cholerae se detectan mejor incubando a aproximadamente 28°C, temperatura más acorde con su reservorio natural (peces). Vibrio parahaemolyticus no fermenta la sacarosa (excepto cepas especiales, que crecen en TCBS amarillas con centro verde) y crece con colonias verde‑azuladas sin virar el medio, incluso añadiendo TTC. Es oxidasa +, Lactosa-, Indol +  y crece hasta con 80 g/l de ClNa, no creciendo sin su presencia y teniendo su óptimo crecimiento con 30 g/l.  Vibrio alginolyticus fermenta la sacarosa y crece en TCBS con grandes colonias amarillas (naranjas con TTC), virando el medio a amarillo. Es oxidasa +, Lactosa-  y crece hasta con 100 g/l de ClNa, no creciendo sin su presencia y teniendo su óptimo crecimiento con 40 g/l. Se distingue de V.parahaemolyticus porque en TSAT crece con colonias blancas y pequeñas, ocasionalmente con centro rojo, mientras éste crece con grandes colonias totalmente rojas. Vibrio vulnificus no fermenta la sacarosa y crece con colonias verde-azuladas en TCBS. Es oxidasa +, Lactosa +  y crece hasta con 60 g/l de ClNa, no creciendo sin su presencia. También se distingue de V.cholerae por ser a menudo Lactosa +.

Vibrio cholerae

 

 

 

 

 

V.alginolyticus

 

 

 

 

V.cholerae (sin y con TTC)