Análisis microbiológicos aguas siguiendo métodos ISO o, si lo prefieres, siguiendo las recomendaciones de la experiencia intercomparativa

En MICROKIT hemos estado 2 décadas siendo coordinadores de intercomparación en microbiología de aguas.

Ha sido una de las mejores experiencias en las que nos hemos embarcado:

nada te hace conocer mejor los puntos críticos de los métodos oficiales y de los medios clásicos

ya que actúas como árbitro ante laboratorios de todo tipo, observando lo que hacen, cómo lo hacen y cómo mejoran al cometer fallos (a menudo con un empujoncito por nuestra parte)

En nuestro caso, nos hemos atrevido a algo más que coordinar y comparar laboratorios:

nos hemos atrevido a aconsejar mejores métodos y mejores medios de cultivo, al observar como se repetían los errores en los distintos participantes cuando empleaban métodos estándar

Es más, nos hemos atrevido a diseñar nuevos medios de cultivo cuando los errores con los clásicos eran repetitivos ronda tras ronda, e independientes de quien fuese el laboratorio que los aplicara.

De ahi han surgido:

 

1-El MugPlus (que ahora llaman CCA) para detectar y enumerar E.coli y resto de coliformes

para evitar la incertidumbre clásica de medios como el Chapman Tergitol TTC, Endo, mFC, MacConkey, EMB Levine, VRBL en la detección y recuento de E.coli y demás coliformes

https://www.microkit.es/fichas/MUGPLUS%20COLIFORM-E.COLI%20AGAR%20CCA.pdf

 

2-El YEA Nutritivo (PCA water) cromogénico para los aerobios oligotrofos del agua

para distinguir las auténticas colonias (rojas) de los artefactos (partículas de la muestra, burbujas…) y del fondo del medio o de la membrana de filtración

con el efecto colateral de permitir una visión mucho más rápida de las colonias, gracias al contraste colonia roja/medio de cultivo crema o membrana blanca; de modo que podemos contar con confianza los aerobios desde las primeras 18-36 horas, en vez de las 72 horas clásicas

https://www.microkit.es/fichas/YEA-NUTRIENT-AGAR-CROMOGENICO.pdf

 

3-El Rapid BEA para Enterococos fecales

para detectar y enumerar los enterococos fecales en sólo 18-24 horas, en vez de las 48-52 horas de los medios de cultivo clásicos (Slanetz-Bartley Agar seguido del Bilis esculina Azida Agar).

Algo fundamental sobre todo en aguas envasadas, donde el espacio de almacenamiento en manantiales de montaña es el principal problema.

https://www.microkit.es/fichas/BILE%20ESCULIN%20AZIDE%20AGAR%20(BEA)%20RAPID.pdf

 

4-El Rapid CN Agar para Pseudomonas aeruginosa junto con los tubos RAN

para acelerar la detección y recuento de P.aeruginosa en sólo 18-24 h (+ 2 h de confirmación RAN de las colonias típicas)

https://www.microkit.es/fichas/CROMOKIT%20RAPID%20CN%20PSEUDOMONAS%20AGAR.pdf

https://microkit.org/wp-content/uploads/2026/06/RAN-confirmacion-de-Pseudomonas-aeruginosa.pdf

 

5-El QPA-TSC y el MUP en goteros

para detectar, enumerar y confirmar Clostridium perfringens sin la oxigenación letal propia de la filtración de membrana y sin el despilfarro del MUP en las placas negativas de Agar TSC

https://www.microkit.es/pdf/Quanti-PA-Clostricult-2022.pdf

https://microkit.org/producto/mup-metil-umbeliferil-phosfate-reactivo-para-la-confirmacion-de-clostridium-perfringens-iso-141892017/

 

6-Los medios para colífagos

aunque no los inventamos nosotros, si que fuimos los primeros en formularlos según la Norma ISO 10705-2001, 22 años antes de que fuese Ley (RD 3-2023), lo que nos hace ser los pioneros que mejor conocen los puntos críticos en su fabricación:
MSA https://www.microkit.es/fichas/BACTERI%C3%93FAGOS-COL%C3%8DFAGOS%20SCHOLTEN%20AGAR.pdf?v=2025

MSB https://www.microkit.es/fichas/BACTERI%C3%93FAGOS-COL%C3%8DFAGOS%20SCHOLTEN%20BROTH.pdf?v=2025

ssMSA https://www.microkit.es/fichas/BACTERI%C3%93FAGOS-COL%C3%8DFAGOS%20SCHOLTEN%20SEMISOLID.pdf?v=2025

 

Así como todas las cepas para su control de calidad y empleo, en el formato más estable y preciso del mercado

https://www.microkit.es/pdf/CEPAS-CUANTITATIVAS-2022.pdf

 

Y un largo etc.

 

El doble papel de creadores de medios de cultivo, kits y hasta procedimientos analíticos nuevos, por un lado

y de coordinadores de ensayos intercomparativos, por otro lado,

nos da la visión del águila, lo que nos permite evitar el hándicap común de «los árboles no te dejan ver el bosque»

típico de los analistas que no coordinan inters o de los coordinadores de inters que no analizan muestras ni diseñan medios.

Consulte directamente con el evaluador de nuestros servicios intercomparativos y creador de estos múltiples medios de cultivo, sobre los puntos críticos y sus soluciones del microorganismo que más se le resiste, en: consultastecnicas@microkit.es

Haga sus pedidos de las soluciones arriba indicadas en: pedidos@microkit.es

MUP en goteros para Agar TSC: del derroche habitual del reactivo en el medio, a la solución del gotero para aplicar sólo en caso positivo

MUP en goteros para Agar TSC para confirmar Clostridium perfringens por fluorescencia bajo luz UVA de 366 nm

La aceptación oficial del MUP como método equivalente, publicado en enero de 2023 en el BOE-Aguas de consumo humano 10-1-2023 (Real Decreto 3-2023),

fué un enorme avance para la confirmación de colonias típicas de Clostridium perfringens sin necesidad de arriesgarse con los reactivos clásicos cancerígenos.

El problema de este reactivo es que caduca en 1-2 semanas una vez se hidrata,

por lo que las placas preparadas no son buena idea si se desea detectar las auténticas colonias sin obtener falsos negativos.

Conscientes del problema, hemos comprobado si el reactivo MUP, añadido después a la placa, cuando ya han crecido colonias sospechosas,  funciona lo suficientemente rápido,

y las noticias son excelentes:

añadida una gota del reactivo a la concentración adecuada, tras hidratarlo en agua,

las colonias de Clostridium perfringens emiten la fluorescencia azulada en una simple cuestión de segundos, máximo 1 minuto.

Y no es una fluorescencia sutil de fondo, es una fluorescencia tremendamente intensa en las colonias, mucho más intensa que la propia fluorescencia de base del reactivo MUP: inconfundible

De modo que podemos comercializar el reactivo en gotero, que empieza a contar sus 1-2 semanas de caducidad sólo una vez lo hidratamos con 1 mL de agua estéril:

MUP en goteros para Agar TSC

Mientras mantengamos los goteros sin hidratar y en el congelador, seguirán ofreciendo esos 2 años de caducidad de origen.

Esto supone un inmenso ahorro, ya que no estamos tirando MUP en todas esas placas de TSC-MUP Agar que darán negativo, sin crecimiento colonial típico.

MICROKIT es el primer laboratorio que presenta el reactivo MUP en gotero para hidratar cuando se necesite, y acto seguido añadir una gota a cada colonia sospechosa.

El gotero de 1 mL permite la confirmación inmediata de 25 colonias sospechosas en TSC Agar… a lo largo de 1-2 semanas.

Si no ha acabado el contenido del gotero en una semana, controle que sigue funcionando una vez ha transcurrido esa semana desde que lo hidrató, con una cepa de C.perfringens,

por ejemplo con las robustas lentículas de MICROKIT: use la WDCM 00007 hemolítica

o bien la WDCM 00174

Puede prolongar la caducidad del gotero hidratado, mientras este control positivo de cepa, proporcione un resultado claramente positivo:

fluorescencia rápida y potente bajo luz UVA de 366 nm (la misma que se emplea en Pseudomonas aeruginosa, en E.coli o en Legionella spp)

 

Presentación del MUP en goteros

El kit contiene 5 ó 24 goteros, para elegir uno u otro en función de las veces que a cada laboratorio le salen colonias sospechosas en un año en TSC Agar. Ref: KMTMUP5 y KMTMUP24.

El kit de 24 goteros está pensado para laboratorios que obtienen al menos alrededor de 300 colonias sospechosas al año, para 2 años (unas 5 ó 6 colonias sospechosas cada semana)

Dentro del kit hemos incluido el agua destilada estéril necesaria para hidratar el MUP contenido en los goteros, asi como las jeringas estériles para facilitar esta labor.

¡No hidrate todos los goteros, sólo el que necesite para esta semana!

Así no acortará su vida útil (de 2 años desde fabricación) a las 1-2 semanas que funciona bien una vez lo hayamos hidratado.

 

Emplee en otros productos MICROKIT la espectacular bajada de precio que representa este cambio de presentación:

-el MUP para añadir al medio TSC al autoclavarlo, cuesta cerca de 175 €/4 litros de medio final, con lo que hasta ahora se podía preparar 160-200 placas ¡cerca de 1 € por Placa!,

incluso en toda esa mayoría de placas donde luego no va a crecer ni una sola colonia sospechosa…

-el MUP en kit de 24 goteros cuesta un precio inferior a esos 175 €, para confirmar nada menos que 600 colonias sospechosas, durante uno o incluso dos años enteros

el cálculo del ahorro es fácil:

¿cuántas placas de TSC Agar con MUP consume al año?

¿200? ¡Son 200 € derrochados!

¿3.000? ¡Son 3.000 € derrochados!

¿y cuántas colonias sospechosas obtiene al año? Con un kit de 5 goteros de MICROKIT va  a tener suficiente para confirmar 125 colonias sospechosas y con un kit de 24 goteros, podrá confirmar 600 colonias

No hace falta pensarlo mucho…

Y nadie puede decirle que el de MICROKIT es un método alternativo, sólo está usando el mismo reactivo MUP que ha sido aprobado, por su equivalencia con los reactivos clásicos de la fosfatasa ácida,

pero sin derrocharlo en esa inmensa mayoría de placas negativas:

añadiéndolo a las colonias, en vez de añadirlo a las placas.

MICROBIOLOGÍA DE AGUAS ENVASADAS-5 y el recuento de aerobios

Recuentos de aerobios por inclusión en masa en Agar Nutriente YEA (ISO 6222) sin tener que perder el tiempo calentando y enfriando agares

Una vez más, te invitamos a dejar atrás los esquemas tradicionales y abrirte a un enfoque diferente:

aquel que realmente puede ayudarte a optimizar tus análisis de recuento de aerobios.

Recuerda la filosofía zen:

“Si no vacías tu taza de conocimientos, no podrás disfrutar de las consecuencias de tomarte otro té.”

Ven con nosotros, de la mano de la innovación. Lo que te contaremos hoy seguramente te hará reflexionar…

 

La catarsis del agar-agar

Como sabrás, el agar-agar proviene de unas algas rojas recolectadas en el Cantábrico español,

utilizadas por la mayoría de fabricantes de medios de cultivo del mundo.

(Aunque algunos productores del extremo oriente emplean un sucedáneo alimentario derivado de otra alga, lo cual genera falsos negativos en las siembras en masa de microbiología,

al sembrar-solidificar a una temperatura más elevada: 55ºC en vez de 47ºC).

Se bien de lo que hablo. Antes que microbiólogo fui biólogo marino, especialista en algas.

Durante años nos han enseñado que el agar-agar microbiológico es un excelente gelificante

porque, siendo inerte para los microorganismos (a diferencia de otros, como la gelatina),

solidifica al enfriarse a 45 °C, lo que aparentemente lo convierte en la base ideal de la microbiología.

Sin embargo, lo que rara vez se percibe es que esto implica una gran desventaja práctica:

cada vez que preparamos medios, debemos hervir y enfriar los agares, perdiendo fácilmente (o retrasándonos) una hora de trabajo diario.

A pesar de nuestra experiencia con el agar-agar, nos costó 23 años desarrollar el gelificante que soñábamos y que aún no existía:

transparente, no comestible para las bacterias, libre de inhibidores que les afectasen y, además, capaz de gelificar a temperatura ambiente.

En 2012, finalmente lo conseguimos. Lo llamamos “hidragar”.

Este avance nos permitió crear tanto los Quanti-P/A (de los que hablamos la semana pasada para Clostridios),

como las DryPlates® (de las que hablaremos hoy, para recuento de aerobios), sin necesidad de calentar ni enfriar agares.

 

DryPlates®: ¡de la muestra a la estufa en sólo 10 segundos!

Actualmente existen diversas marcas de placas deshidratadas procedentes de EE. UU, Japón y China.

Desconozco si a ellos también les llevó 23 años encontrar la fórmula adecuada, pero para nosotros ha sido todo un orgullo lograrlo aquí,

con los limitados recursos de una microempresa (PIME).

La gran ventaja del medio de cultivo con hidragar —nuestras DryPlates®—, para una siembra en masa, es su simplicidad operativa:

Sólo necesitas añadir 1 mL de muestra de agua al medio estéril (está incluido en un disco difusor textil), tras colocarlo en la placa Petri especial (cassette) y llevarlo a incubar.

→ Sin calentar, → Sin enfriar, → Sin tener que mezclar, → Sin esperar a que solidifique.

En resumen:

-la filtración no viene a cuento en muestras de sólo 1 mL;

-y una siembra en masa tradicional, que puede tomar casi una hora (si no más, entre calentar, enfriar y dejar solidificar),

con DryPlates® el proceso se reduce a menos de 10 segundos.

Con resultados incluso mejores, dado que los aerobios no sufren el shock térmico de 47ºC del agar-agar.

 

La diferencia clave de nuestras DryPlates® sobre las demás placas deshidratadas

En el caso del recuento de aerobios en aguas, la principal diferencia entre nuestras DryPlates® y las demás placas deshidratadas disponibles en el mercado

es el medio de cultivo empleado:

Nosotros utilizamos el Agar Nutritivo al Extracto de Levadura (YEA),

conforme a la ISO 6222, que es la norma oficial para recuento de aerobios en análisis de aguas.

Las otras marcas, en cambio, usan PCA (Plate Count Agar),

ya que se enfocan exclusivamente en el sector alimentario,

aunque algunos de sus distribuidores pretendan hacer sus pinitos en aguas.

¿Y cuál es la diferencia entre YEA y PCA?

El YEA —también conocido como PCA-Water— es PCA sin azúcares, formulado para detectar los aerobios propios de las aguas,

una matriz oligotrófica,

https://microkit.es/fichas/YEAST%20EXTRACT%20AGAR%20YEA-NUTRIENT%20AGAR%20(PCA%20WATER).pdf?v=2025

https://microkit.es/fichas/YEA-NUTRIENT-AGAR-CROMOGENICO.pdf

a diferencia de los alimentos, que son ricos en nutrientes y por eso sus bacterias no entran en letargia con sus azúcares.

Por eso, nuestras DryPlates® para análisis de aguas se denominan “DryPlates®-TC Water”, para distinguirlas de:

* DryPlates®-TC, para aerobios en alimentos (con PCA).

⇒ Las DryPlates®-R2, para aerobios oligotróficos extremos en aguas farmacéuticas (con R2A).

* DryPlates®-TSA, para aerobios en cosméticos (con TSA Maxim Cromogenic Agar).

 

¿Por qué el YEA en DryPlates® es tan importante?

Las DryPlates®-TC Water no son sólo un nuevo formato:

representan un cambio de paradigma en la forma de trabajar en microbiología del agua con el recuento de aerobios en 1 mL de muestra.

Con ellas eliminamos los pasos innecesarios, reducimos el riesgo de errores, ahorramos energía, tiempo y recursos, y ganamos en certeza, estandarización y comodidad.

Después de más de dos décadas de I+D, podemos decir orgullosos que las DryPlates®-TC Water simbolizan lo mejor de la ciencia aplicada:

la solución más sencilla y única para un problema enquistado,

creada con rigor, pasión y la convicción de que siempre hay una manera mejor de hacer las cosas.

Porque la microbiología no evoluciona cuando repetimos lo de siempre, sino cuando nos atrevemos a reinventar el método.

¡Pruébalas! Experimenta lo que es pasar de 1 h a… ¡10 segundos!            

No te pierdas el video que lo explica:

https://www.youtube.com/watch?v=vkdRD5ulpSY&t=165s

¡Hasta la próxima entrega de micro de aguas envasadas a primeros de julio de 2026!