Archivo de la categoría: microbiologia de aguas

Optimización en los análisis microbiológicos de
AGUAS Y BEBIDAS.
Nuevos métodos de análisis microbiológicos utilizados exitosamente en los laboratorios líderes

CANAL DE YOUTUBE DE MICROKIT

Deja un comentario

Videos de MICROKIT sobre nuestros productos más sorprendentes, en nuestro canal de youtube ¡No te los pierdas! 

Videos MICROKIT

¿Sabías que tenemos nuestro propio canal de youtube?

Así es: https://www.youtube.com/user/Microkit1/videos

Se trata de vídeos de entre 5 y 20 minutos que combinan divulgación y aplicación práctica.

En ellos descubrirá curiosidades y conceptos de microbiología que probablemente le sorprenderán.

Además de aprender a utilizar mejor estos productos tan especiales, adquirirá una visión mucho más amplia de la microbiología aplicada.

A la fecha de redacción de esta revisión de la entrada en el blog, tenemos ya disponibles los siguientes 30 vídeos:

 

Quanti P/A Clostricult para el recuento más eficaz de Clostridium perfringens en aguas. Hay 3 vídeos:

https://www.youtube.com/watch?v=A8WifR8mZ1k&t=10s

del entrañable primer cliente de este kit, que nos ayudó en su validación en aguas de consumo humano

https://www.youtube.com/watch?v=keVSi9E2uDg

un resumen rápido, y

https://www.youtube.com/watch?v=9ACxFVKJhrM

de otro gran cliente que nos ayudó a su validación en aguas envasadas

 

AIRESANO para desinfección del aire y Etanol 70º en spray para desinfectar superficies, ropa, manos… También hay 3 videos diferentes:

https://www.youtube.com/watch?v=FFxYkSf60cI

del fabricante de Airesano, Caramba

https://www.youtube.com/watch?v=7cJ5dxUF5LE

del fabricante del etanol de 790º en spray, Caramba

https://www.youtube.com/watch?v=rruGElrCBqk&t=7s

nuestra aportación en ambos temas

 

CRIOTECA, ANAEROTECA Y MPT-Vibrio cholerae PARA CONSERVAR CEPAS SALVAJES

para la conservación de cepas salvajes durante años

https://www.youtube.com/watch?v=Rau4mqTf3WE&t=59s

 

CEPAS CUANTITATIVAS ESTABLES

para control de calidad, validaciones, Challenge Test…

https://www.youtube.com/watch?v=4WJ8FQl6GIE&t=42s

 

VIALES P/A CON CALDOS PREPESADOS

Para detectar microorganismos del agua de la forma más sencilla y, a la vez, más certera 

https://www.youtube.com/watch?v=6OfsD7zU_8U&t=63s

 

LOS DIVERTIDOS FRIKIQUECOS

que puedes conseguir gratis con tus pedidos a MICROKIT ¡colecciónalos!

https://www.youtube.com/watch?v=T5wdFirBySE&t=111s

 

DRYPLATES: MÉTODO DEL PELLIZCO

Las placas deshidratadas que te ahorran 1 hora de trabajo en las  siembras en masa

https://www.youtube.com/watch?v=x_YkmBAxVEE

En este vídeo más completo de 9 minutos puedes entender mejor la hazaña de las DryPlates® y cómo usarlas:

https://www.youtube.com/watch?v=vkdRD5ulpSY&t=29s

 

ESPONJAS ABRASIVAS

para toma de muestras de superficies con la máxima eficacia

https://www.youtube.com/watch?v=TFT1VBA6IKY&t=44s

 

PREIDENTIFICACIÓN INSTANTÁNEA DE COLONIAS

para saber qué galerías debemos emplear cuando tenemos una colonia desconocida

https://www.youtube.com/watch?v=knxE5wH-kCI&t=29s

 

GALERÍAS DE IDENTIFICACIÓN

Las mejores galerías de identificación de colonias que puedes encontrar en el mercado          ¿por qué?

https://www.youtube.com/watch?v=9j4tbyghvZA

 

LAMINOCULTIVOS «DIPSLIDES» DESINFECTEST: DOS MÉTODOS EN UNO

para control de superficies y para screening semicuantitativo de líquidos sucios

https://www.youtube.com/watch?v=qJB0elPYvVU&t=6s

 

LISTERISWABBS GREEN Y OTROS ESCOBILLONES PARA SALMONELLA, E.COLI, HONGOS, ESTAFILOCOCOS, BACILLUS CEREUS…

para buscar microorganismos concretos en superficies

https://www.youtube.com/watch?v=gfGHksTSXCs&t=355s

 

DETECCIÓN DE MICROALGAS Y CIANOBACTERIAS

en aguas, para evitar envenenarse sin saberlo

https://www.youtube.com/watch?v=TZYC3ZKcSQM&t=257s

 

CONFIRMACIÓN ISO DE LISTERIA MONOCYTOGENES R/X

mediante el test de Rhamnosa/Xylosa

https://www.youtube.com/watch?v=ZHpWuUUWQFg&t=118s

 

PLAQUIS HERMÉTICAS: DE LA FILTRACIÓN DE MEMBRANA A LA ESTRÍA TRAS ENRIQUECIMIENTO

Las placas que ahorran espacio y recursos más valiosos que el mismo oro

https://www.youtube.com/watch?v=fS1ycmLpJ4Q&t=467s

 

MEDIOS CROMOGÉNICOS CROMOKIT ¿A QUE NO LO SABÍA?

las fama a veces se la llevan otros:

https://www.youtube.com/watch?v=-JVPVWxY8ZE&t=271s

 

DRYPLATES, DE LA MUESTRA A LA ESTUFA EN 10 SEGUNDOS

la revolución de la siembra en masa, también para siembra en estría

https://www.youtube.com/watch?v=vkdRD5ulpSY&t=331s

 

EL PROBLEMA DE LA CERTEZA EN LA DETECCIÓN DEL MAS ESQUIVO DE TODOS LOS MICROORGANISMOS: Staphylococcus aureus

Cómo un simple azúcar añadido al Baird Parker lo cambió todo en microbiología de alimentos y de cosméticos

https://www.youtube.com/watch?v=2661zhu_IzQ&t=637s

 

RECUENTO DE AEROBIOS Y DE HONGOS EN LA MITAD DE TIEMPO

¡en sólo 36 horas! Las fábricas de alimentos, bebidas y cosméticos pueden ahorrar ingentes cantidades de espacio y stock de producto en cuarentena

https://www.youtube.com/watch?v=qE2gNZH9KWQ&t=31s

 

MICROBIOLOGÍA DEL AIRE

cómo hacerla bien (remake del seminario/Jornada con más número de asistentes de la historia de MICROKIT, en México)

https://www.youtube.com/watch?v=JYcRtKbfvQI&t=91s

 

MINI-DRINKING-WATER

Laboratorio de bolsillo (KIT) para el más certero análisis de potabilidad del agua en tus viajes, cafetera, grifos privados, pozos y en el campo

https://www.youtube.com/watch?v=Y3dy5M0iJCQ&t=173s

 

DETECCIÓN MÁS CERTERA DE PSEUDOMONAS Y BURKHOLDERIA EN AGUAS FARMA-COSMÉTICAS: PSEUDOCULT P/A Y BURKHOCULT P/A

mediante los kits P/A ahorrará los falsos negativos propios de la filtración de membrana en estos microorganismos

https://www.youtube.com/watch?v=oLHcldiRG_s&t=299s

 

PLACAS RODAC ENVIROCOUNT

para control de superficies (y de aires por impacto)

https://www.youtube.com/watch?v=IpjOxjigyms&t=2s

 

EL FIN DE LA CONFUSIÓN EN MICROBIOLOGÍA COSMÉTICA: CUP12A

Un nuevo medio de cultivo resuelve la diversidad del ecosistema de los patógenos cosméticos

https://www.youtube.com/watch?v=vJdcR8hQrz8&

 

COLÍFAGOS SOMÁTICOS

el nuevo indicador en la nueva microbiología del agua

https://www.youtube.com/watch?v=cQNij-WXAYA

 

LA BACTERIA CARNÍVORA

de las costas y de la comida del mar, Vibrio vulnificus, ya se puede detectar mucho mejor

https://www.youtube.com/watch?v=nkpZSuHPXqA&

 

HONGOS DERMATOFITOS

un problema bien conocido pero con escasa prevención oficial

https://www.youtube.com/watch?v=CAm4BOehVQY&

 

KITPROPLUS

para detectar de inmediato la suciedad orgánica en superficies sin necesidad de aparatos

https://www.youtube.com/watch?v=gAh4isyUlRM&

 

MICROBIOLOGÍA DE COSMÉTICOS

cómo evitar las limitaciones de los métodos convencionales y realizar un control microbiológico más completo y acorde con el espíritu de la legislación. Incluso si todavía no dispone de su propio laboratorio de autocontrol: COSMETIKIT-EASYPLUS

https://www.youtube.com/watch?v=eQk0FO01hD4

 

EL EFECTO MATRIZ EN ALIMENTOS

conozca como reducir esta tremenda causa de falsos negativos, lo mismo que se hace desde hace décadas en microbiología de aguas y de cosméticos

https://www.youtube.com/watch?v=sSftQbDdG3s&

 

Y todavía nos queda crear más de 100 videos de otros temas de interés para el laboratorio de microbiología de alimentos, aguas, cosméticos, medicamentos, superficies, aire… aqui van unas cuantas ideas que ya tenemos en mente:

-MICROBIOLOGIA PARA QUÍMICOS E INGENIEROS

-AGUAS NATURALES NO TRATADAS Y COMO POTABILIZARLAS

-AGAR-AGAR, MUCHO MÁS QUE UN SOLIDIFICANTE

–¿CUAL ES LA MEJOR PEPTONA PARA CADA MEDIO DE CULTIVO? Del extracto de levadura a la polipeptona micológica

-Lo que un microbiólogo de 30 años no va a APRENDER en otros sitios

-¿0,1 mL o 1 mL? Diez veces más muestra puede cambiar un resultado — límite práctico de detección en recuentos.

-¿PCA, TSA o YEA? No todos los “recuentos totales” cuentan lo mismo

-¿Cuántos microorganismos respiramos en una habitación?

-¿Dónde colocar un muestreador de aire para que el resultado tenga sentido?

-Rosa Bengala vs Sabouraud: dos formas muy distintas de buscar hongos

-Candida albicans: ¿de verdad necesitamos microscopio para confirmarla?

-Las bacterias que no fermentan: el enorme cajón de sastre que esconde Pseudomonas, Burkholderia, Acinetobacter…

-Enterococos, estreptococos, Listeria, Pediococcus: parecidos que no son iguales — RAPID STR

-El cepario del laboratorio: 10 errores que acaban cambiando tus cepas.

-¿Cómo se valida de verdad un método microbiológico?

-¿Puede un laboratorio sacar sobresaliente en un intercomparativo y aun así tener un problema?

-Z-score: ¿dice realmente todo lo que creemos sobre la calidad de un laboratorio?

-27 años enviando microorganismos “a ciegas” a laboratorios: qué hemos aprendido.Los 10 errores que más hemos visto en 27 años de intercomparativos microbiológicos.

-Listeria monocytogenes: cómo encontrar una aguja microbiológica en un pajar alimentario.

-Salmonella: ¿por qué hacen falta enriquecimiento, aislamiento y confirmación?

-Chromosalm vs XLD: por qué usar dos placas para buscar la misma Salmonella

-¿Por qué Clostridium perfringens puede crecer sin una jarra de anaerobiosis?

-Corrosión microbiológica: bacterias capaces de comerse una instalación industrial.

Y también estos otros:

-Campylobacter: por qué una bacteria tan importante es tan incómoda de cultivar.

-Pluralibacter gergoviae, Pantoea agglomerans, Acinetobacter lwoffii: de bacteria casi desconocida a protagonista inesperada en cosméticos.

-Enterococos: por qué nos cuentan una historia diferente de la contaminación fecal.

-Lo que el Challenge Test NO te dice sobre la seguridad microbiológica de un cosmético.

-Antes de salir al mercado vs después de una retirada: dos fotografías microbiológicas muy diferentes.

-¿Qué nos enseñan las retiradas de cosméticos de Europa y Estados Unidos?

–BURKHOLDERIA CEPACIA COMPLEX, por qué está de moda en la industria farma-cosmética y cómo se detecta mejor?

–CLOSTRIDIOS, actualízate con las nuevas Normas ISO y con nuevos métodos más efectivos para su detección y recuento

–LACTOBACILOS, una nueva forma de enumerarlos sin los falsos positivos clásicos de los aerobios

–EL CALDO QUE LO CAMBIA TODO EN MICROBIOLOGÍA DE COSMÉTICOS, el realmente diseñado para los cosméticos actuales

–SALMONELLA, una revisión de los medios ISO para detección y aislamiento y sus mejoras

–SALMONELLA, confirmación más rápida y certera

–MEDIOS PREPARADOS PARA SIEMBRA EN MASA: tubos y frascos para stock de larga caducidad que permite hacerse placas cuando realmente las necesita

–¿IDENTIFICACIÓN O CONFIRMACIÓN DE LEVADURAS? Candida albicans

–UN INTERCOMPARATIVO DE ALIMENTOS DEBE TENER EN CUENTA EL EFECTO MATRIZ

–PRODUCTOS AUXILIARES PARA AUTOCLAVE

–¿ES NECESARIO UN ANTIBURBUJAS INERTE EN LOS AGARES DE CULTIVO?

Danos tus likes en cada video que te interese, para aumentar su visibilidad, es gratis y así triunfaremos juntos! ;o)

Si además añades comentarios (de al menos 5 palabras) a cada video, aún subiremos mucho más entre tantos videos de youtube y más microbiólogos conocerán tantas cosas interesantes como las que decimos

¡Hazte unas palomitas y entra en nuestro canal! Sol@ o acompañad@

Entretenimiento y aprendizaje en un solo gesto ;o)

KF-STREPTOCOCUS-AZIDE-MALTOSE-AGAR

Deja un comentario

KF Streptococcus Azide Maltose Agar es un medio de cultivo para Aislamiento y Recuento de Enterococos por el método de MF (UNE 77-076:1991)

Combina la reducción del TTC a formazán (colonias rojas) con la acidificación del púrpura de bromocresol (viraje del medio a amarillo desde el lila).

Ambas pruebas son propias de los enterococos (fecales si se incuba a 42ºC en vez de a 37ºC)

Otros estreptococos y otros microorganismos no viran a rojo y/o no viran el medio a amarillo.

La confirmación es tan sencilla como el test de la catalasa, ya que los Enterococos son de los pocos microorganismos que, pudiendo crecer tanto en aerobiosis como en anaerobiosis, son catalasa negativos (no burbujean al añadir una gota a la colonia) (Ref: KMT299)

Si burbujea, no es un Enterococo

Si desea identificar la especie de enterococo a la que pertenecen las colonias, use las galerías rápidas enzimáticas Rapid-STR (Ref: R8311003)

 

COMPOSICIÓN

Peptona 10,000 g
Cloruro sódico 5,000 g
Extracto de levadura 10,000 g
Glicerofosfato sódico 10,000 g
Maltosa 20,000 g
Lactosa 1,000 g
Azida sódica 0,400 g
Agar-agar 20,000 g
Púrpura Bromocresol 0,015 g
(Fórmula por litro)
pH final: 7,2 ± 0,2

 

PREPARACIÓN

Disolver 76 gramos en 1 litro de agua bidestilada. Calentar, agitando, hasta ebullición, para la total homogeneización. Autoclavar a 121 ºC durante 10 minutos.

Enfriar a 50 ºC y añadir 10 ml de solución estéril de TTC al 1% (SDA018). El aspecto heterogéneo es normal.

No recalentar ni sobrecalentar y evitar la bajada del pH a 7 ó menos para evitar la acidificación del medio (viraje a verdoso-amarillento) y su menor selectividad. El medio final debe ser púrpura-lila.

PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO

PRECAUCIÓN: TÓXICO
MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO
AGITE EL BOTE ANTES DE USAR.

DESHIDRATADO CODIGO: DMT157

 

CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO

Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio
siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar
laboratorio, tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque
no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,…)

DESHIDRATADO: Polvo fino, Verdoso    PREPARADO: Estéril, Púrpura

CONTROL DE CRECIMIENTO 48 h a 37°C aproximadamente:
Enterococcus faecalis WDCM00087, Crecimiento excelente, Colonia roja. Medio alrededor virado a amarillo. Productividad respecto a TSA: 52,50-57,14 %
Enterococcus faecium WDCM00178, Crecimiento excelente, Colonia roja.
Escherichia coli WDCM00013, Totalmente Inhibido.

 

PRESENTACIÓN:

MEDIO DESHIDRATADO, Plaquis® preparadas MF

 

MODO DE EMPLEO E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

Sembrar la membrana filtrada e incubar 48 horas a 35 ó 37 ºC
aproximadamente.

Las colonias de enterococos crecen rojas, rosas o pardas,
con un halo amarillo en el medio lila.

Otros estreptococos y otros microorganismos no viran a rojo y/o no viran el medio a amarillo.

Ver también KAA Agar (DMT060).

Según ISO es preferible utilizar medios más selectivos, como Slanetz Bartley Agar para Enterococos y KAA Agar para Estreptococos fecales, sobre todo en aguas marinas. Y confirmar, resembrando la membrana crecida, en otra placa de Agar Bilis Esculina Azida (DMT160).

Lo ideal es emplear directamente el RAPID BEA de MICROKIT (DMT160, PPL915), que tarda sólo 18-24h en obtener los resultados:

https://www.microkit.es/fichas/BILE%20ESCULIN%20AZIDE%20AGAR%20(BEA)%20RAPID.pdf

El usuario es el único responsable de la eliminación de los microorganismos
según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la
basura.

Medio fabricado en la UE por MICROKIT desde 1989, bajo ISO 9001, ISO 11133 y GMPs, texto revisado en Marzo-2020

https://www.microkit.es/fichas/KF-STREPTOCOCUS-AZIDE-MALTOSE-AGAR.pdf

Si desea más información y precios actualizados consulte en microkit@microkit.es

Vogel Johnson Agar, el gran olvidado para Staphylococcus aureus

Deja un comentario

Staphylococcus aureus y Vogel Johnson Agar

Vogel Johnson Agar, el gran olvidado para Staphylococcus aureus… ¡y puede ser la solución!

Medios más comúnmente usados para S.aureus

Si preguntamos en cualquier laboratorio qué medio usan para detectar Staphylococcus aureus, la mayoría dirán Baird Parker (industria alimentaria, cosmética y aguas) o Mannitol Salt Agar (industria farmacéutica).

Pocos emplean Vogel Johnson Agar, a pesar de ser un medio diferente a los otros dos, podría decirse que combina algo de ambos y puede ser un gran aliado.

El gran problema de S.aureus

El problema principal de los Staphylococcus aureus es su polimorfismo: que sus colonias son de aspecto muy diferente según la cepa y según crezcan desde diferentes muestras (matrices). Ya la ISO  6888 de alimentos lo reconoce y viene a decir algo así como: «las colonias típicas en Baird Parker son negras con reborde traslúcido y halo en el medio, pero… algunos S.aureus y en algunas muestras crecen sin halo, otros sin el reborde y otros de diferentes tonos de color gris en vez de negro»

De modo que el Baird Parker no sólo genera ingentes cantidades de falsos positivos a partir de cepas puras (no sólo de otros Gram positivos, también de Gram negativos e incluso de levaduras) sino que el efecto matriz tiene una influencia muy superior a la de cualquier otro medio de cultivo de los habituales para cualquier otro microorganismo: colonias diferentes según sea el producto en el que hemos aislado la cepa.

Hasta el punto que en los intercomparativos de alimentos, aguas y cosméticos,  según sea la cepa y la matriz elegidas, será más fácil acertar si está o no presente, jugando a pares y nones, que usando este medio de cultivo.

El rpf es una modificación del Baird Parker que todavía crea mayor confusión.

Selectividad de los diferentes medios de cultivo para S.aureus

El Baird Parker basa su supuesta selectividad en la glicina y el cloruro de Litio, por lo que es muy fácil encontrar falsos positivos:

https://www.microkit.es/fichas/BAIRD-PARKER-AGAR-polvo.pdf

El Mannitol Salt Agar basa su tremenda (excesiva) selectividad  en una gran proporción de cloruro sódico (75 g/L), por lo que en él, lo que es fácil encontrar son falsos negativos, aunque no faltan falsos positivos como Staphylococcus saprophyticus, que forma también colonias amarillas:

https://www.microkit.es/fichas/MANNITOL-SALT%20AGAR.pdf

Y el Vogel Johnson Agar basa su supuesta selectividad en los dos mismos ingredientes que el Baird Parker (la glicina a menor proporción y el cloruro de Litio a la misma proporción), por lo que también crecen en él muchos falsos positivos. Pero su gran ventaja es que combina la prueba del telurito potásico (colonias negras) del Baird Parker con la prueba de la fermentación del Mannitol (halo amarillo en medio rojo) del Mannitol Salt Agar, eliminando el exceso de selectividad de éste:

https://www.microkit.es/fichas/VOGEL-JOHNSON-AGAR.pdf

 

De modo que en este microorganismo, aparte del medio que usemos, hay que confirmar siempre cualquier colonia más o menos típica.

-Test de la Coagulasa

La prueba distintiva más habitual es la coagulasa (ej. látex MICROKIT KWD094), propia de S.aureus pero no de otros estafilococos.

Aunque no todas las colonias forman lo que deberían formar: grumos y fondo acuoso en S.aureus y aspecto lechoso sin grumos en los otros estafilococos.

Efectivamente, muchas veces encontramos grumos con fondo lechoso y la prueba no nos ha servido para nada.

Además hay otros microorganismos no estafilococos, que crecen falsamente positivos en Baird Parker, y que son coagulasa positivos, liando aun más el asunto.

Al menos la ventaja de la coagulasa es que es la única prueba de respuesta inmediata (30 segundos)

-Test de la DNA-asa y de la termonucleasa

Otra prueba supuestamente concluyente es la DNA-asa y la DNA-asa termoestable o termonucleasa, también propias de S.aureus pero no de otros estafilococos:

https://www.microkit.es/fichas/DNA-asa-TEST-AGAR.pdf

Pero lo mismo que sucede con la coagulasa, hay falsos positivos de microorganismos que no son estafilococos y son DNA-asa y/o termonucleasa positivas. Y en este caso, la prueba no es inmediata como el látex de la coagulasa, por lo que encima nos hace perder más tiempo.

-Otra prueba que supuestamente no debería fallar: la fosfatasa

Los medios cromogénicos para S.aureus se basan en esta prueba, y en función del sustrato cromogénico elegido, las colonias de S.aureus serán lilas, magenta, azul… mientras las de otros estafilococos y otros microorganismos serán de otros colores (sobre todo verdes y blancas)

Pero lo mismo que sucede en los medios clásicos, decepciona ver los resultados al emplear diferentes cepas de S.aureus… y sobre todo sin van combinadas con diferentes matrices (distintas muestras de alimentos, cosméticos…): el polimorfismo de S.aureus vuelve a despistarnos por completo, con placas multicolor: colonias lilas rodeadas de un potente verde que enmascara el lila, lilas sobre fondo verde, blanco-liláceas con halo verde y hasta hermosas «placas arco-iris» con toda la transición entre el lila y el verde…

-La solución: las galerías enzimáticas

La única solución que hemos encontrado hasta ahora es disponer de las galerías enzimáticas RAPID-STAPH (MICROKIT Ref: R8311009) y usarlas ante  cualquier colonia crecida en BPX19Y Agar (lo malo es si nos despistamos y se nos acaban, ya que al traerlas desde USA bajo pedido para dar su máxima caducidad, tardan varios días en llegar):

https://www.microkit.es/fichas/BAIRD%20PARKER%20BPX19%20CROMOGENIC%20AGAR%20polvo.pdf

https://www.microkit.es/fichas/Galer%C3%ADas%20RAPID.pdf

Cómo se usan estas galerías:

Lo bueno de estas galerías ante cualquier otra, es que sólo tardan 4 horas en darnos los resultados desde la colonia (esa misma tarde), y encima la mayoría de veces sale un código que sí que corresponde con una especie de estafilococo (no llega a resultados aberrantes o indeterminados). Lo cual no se puede decir de otras galerías.

 

Veamos este tercer medio tan olvidado y prometedor, más a fondo:

VOGEL-JOHNSON-AGAR

Agar para el aislamiento rápido de Staphylococcus aureus en medicamentos,
alimentos, muestras ambientales, manipuladores y muestras clínicas.
Pharmacopea USP XXI

COMPOSICIÓN

Glicina 10,0 g
Mannitol 10,0 g
Triptona 10,0 g
Fosfato dipotásico 5,0 g
Cloruro de Litio 5,0 g
Extracto de levadura 5,0 g
Rojo fenol 0,025 g
Agar-Agar 15,0 g
(Fórmula por litro)
pH final: 7,2 ± 0,2

PREPARACIÓN

Disolver 60 gramos en 1 litro de agua bidestilada. Agitar calentando hasta
ebullición, para la completa disolución. Autoclavar a 121°C durante 15
minutos. Enfriar a 45-50°C y añadir 6 ml de Telurito Potásico al 3,5%
(SPL016). Mezclar bien y verter en placas.

PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO. AGITE EL BOTE ANTES DE USAR,
PARA ASEGURAR LA HOMOGENEIZACIÓN DE LOS EVENTUALES
GRADIENTES DE DENSIDAD DE LOS COMPONENTES. MANTENGA EL BOTE
BIEN CERRADO EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO.

CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO:

Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio
siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar
laboratorio, tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque
no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,…).

DESHIDRATADO: Polvo grueso, Rosado PREPARADO: Estéril, Rojizo
CONTROL DE CRECIMIENTO 24-48 horas a 35°C aproximadamente:
Staphylococcus aureus WDCM00034, Excelente, colonias negras con halo
amarillo (su gran ventaja: combina las propiedades del Mannitol Salt Agar con las del Baird Parker).  PR > 0,5, en concreto >50-150% de colonias respecto al número de ufc certificadas e inoculadas en TSA; esta variabilidad de la productividad depende de la composición y carga de la flora acompañante inoculada.
Staphylococcus epidermidis WDCM00036, Correcto, colonias traslúcidas o
negras, sin halo amarillo.
Salmonella typhimurium WDCM00031, Inhibido.
Escherichia coli WDCM00013, Inhibido.

PRESENTACIÓN: MEDIO DESHIDRATADO CODIGO: DMT343.

NOTA:

Este medio permite el rápido crecimiento de Staphylococcus aureus, de forma
diferencial, por lo que es ideal para control de manipuladores y para estudios
de microbiología farmacéutica, alimentaria y clínica donde se necesitan
resultados rápidos. Staphylococcus aureus reduce el telurito potásico a negro.
La fermentación del manitol queda indicada por un halo amarillo alrededor de
sus colonias negras. El telurito potásico, el cloruro de litio y la glicina inhiben
buena parte de la flora acompañante.

SIEMBRA E INTERPRETACIÓN

Sembrar en estría e incubar a 35°C aproximadamente, durante 24 y 48 horas.
En las primeras 24 horas, sólo los estafilococos coagulasa positivos son
capaces de crecer, con diminutas colonias negras rodeadas de un halo amarillo
que contrasta con el color rojo del medio. A las 48 aparecen los demás
estafilococos coagulasa negativos, sean manitol positivos o manitol negativos:
S.epidermidis, S.saprophiticus y S.intermedius crecen con colonias diminutas,
grises o negras, sin halo amarillo; otros estafilococos coagulasa positivos
forman colonias negras, con o sin halo amarillo según fermenten o no el
manitol. Existe una correlación entre fermentadores de manitol y patógenos.
Los S.aureus coagulasa positivos tienen a las 48 h grandes colonias negras
rodeadas de halo amarillo, que a menudo han virado todo el medio a amarillo.

Confirmar las colonias con el test de la coagulasa (KWD094) y con las galerías RAPID-STAPH (MICROKIT Ref: R8311009)

De modo que este medio puede ser la solución definitiva, dado que S.aureus crece con colonias negras (telurito potásico) con halo amarillo (fermentación del Mannitol) y sin las desventajas de la alta concentración de cloruro sódico (demasiado selectivo) propias del Mannitol Salt Agar; ni de la escasa selectividad + especificidad del Baird Parker.

Una vez estudiado su comportamiento, como siempre con los medios para Staphylococcus aureus, la teoría y la práctica distan demasiado. Ver la entrada de este newsletter:

https://www.medioscultivo.com/wp-admin/post.php?post=6639&action=edit&classic-editor

Para más información y precios actualizados consulte en microkit@microkit.es

Tras esta entrada y a la vista de los resultados, diseñamos otro medio de cultivo inspirado en el Vogel Johnson, que elimina de un plumazo los falsos negativos y biuenas parte de los falsos positivos del BP, del Mannitol y del VJ:

https://www.youtube.com/watch?v=2661zhu_IzQ&

 

KAA AGAR PARA DETECTAR Y ENUMERAR ENTEROCOCOS FECALES-ESTREPTOCOCOS GRUPO D EN ALIMENTOS, AGUAS Y OTRAS MUESTRAS

Deja un comentario

KAA AGAR PARA DETECTAR Y ENUMERAR ENTEROCOCOS FECALES-ESTREPTOCOCOS GRUPO D EN ALIMENTOS, AGUAS Y OTRAS MUESTRAS

Los estreptococos fecales (y los enterococos fecales) son indicadores de contaminación con aguas residuales a más largo plazo que E.coli/Coliformes.

De modo que conservan mejor el chivato de contaminación, al perdurar más tiempo en el agua, los alimentos y demás matrices.

En aguas se buscan con Slanetz-Bartley Agar y KF Agar, aunque cada vez más laboratorios ahorran tiempo en su detección usando el agar Rapid BEA de MICROKIT (un Bilis Esculina Azida Agar con la Bilis muy bien equilibrada y estandarizada), que ha sido validado para uso directo en su detección en sólo 18 h, en vez de las 48 h típicas que necesitan los otros medios: https://www.microkit.es/fichas/BILE%20ESCULIN%20AZIDE%20AGAR%20(BEA)%20RAPID.pdf

El KAA es otro medio clásico rápido, de composición muy similar al Bilis Esculina Azida Agar (cambiando la Bilis por Kanamicina) y de uso más típico en alimentos.

 

KAA AGAR

Confirmación de estreptococos fecales grupo D Lancefield (CENAN) en
patatas, verduras, otros alimentos, aguas…

 

COMPOSICIÓN

Triptona 20,00 g
Extracto levadura 5,00 g
Cloruro sódico 5,00 g
Citrato disódico 1,00 g
Esculina 1,00 g
Citrato férrico-amónico 0,50 g
Azida sódica 0,15 g
Kanamicina 0,02 g
Agar-agar 15,00 g
(Fórmula por litro)
pH final: 7,0 ± 0,2

 

PREPARACIÓN

Disolver 48 g de medio en 1 litro de agua destilada.
Calentar agitando hasta ebullición.
Autoclavar a 121 ºC durante 15 minutos.

 

PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO. MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO. AGITE EL BOTE ANTES DE USAR PARA HOMOGENEIZAR LOS EVENTUALES GRADIENTES DE COMPOSICIÓN A LO LARGO DE LA ALTURA DEL BOTE.

PRECAUCIÓN:

La Azida Sódica es tóxica (y explosiva en contacto con plomo). Evitar el contacto con la piel y las mucosas (y no desechar por las cañerías).

 

PRESENTACIÓN: 

DESHIDRATADO CODIGO: DMT060; TUBOS 20 ml, FRASCOS 100 ml, PLAQUITAS HERMETICAS MF.

 

CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO

Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio
siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar
laboratorio, tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque
no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,…)

DESHIDRATADO: Polvo grueso, Amarillo.

PREPARADO: Estéril, Ambar, iridiscente, fluorescente bajo luz UVA de 366 nm.

CONTROL DE CRECIMIENTO CUANTITATIVO 24-48 h a 37°C aproximadamente:
Enterococcus faecalis WDCM00087, Correcto, colonias diminutas, blancoamarillentas, con halo negro, en sólo 24 h. Con respecto a TSA, recuento 77-
133 %, pero de forma selectiva. Incertidumbre debida a la cepa y a las
diferentes proporciones de flora acompañante.
Enterococcus faecium WDCM00178, Correcto, colonias diminutas, blancoamarillentas, con halo negro, en sólo 24 h. Con respecto a TSA, recuento 79-
260%, pero de forma selectiva. Incertidumbre debida a la cepa y a las
diferentes proporciones de flora acompañante.
E. coli WDCM00013 Inhibido.
Bacillus subtilis WDCM00003, Inhibido.
Staphylococcus aureus WDCM00033, Inhibido.

 

NOTA:

Kanamicina Aesculina Azida Agar es un medio para la detección y
aislamiento de estreptococos grupo D de Lancefield en muestras de alimentos y
aguas (CENAN). La inclusión de la Kanamicina en el medio deshidratado hace
de este medio el más cómodo del Mercado Internacional, ya que nos ahorramos
respirar la desagradable Bilis de otros medios de uso similar. Ver tambien el
nuevo cromogénico Enterococcus Cromokit Agar para aguas marinas.

 

SIEMBRA

Partiendo de tubos positivos de KAA Broth, inocular 0,1 ml en la superficie de
placas preparadas a partir de tubos o de frascos refundidos, o del medio
deshidratado. Extender con triángulo de vidrio (VRR154) o asas de Digralsky
desechables (VCL155). Aplicar la placa de contacto a la superficie problema
un instante y sin mover o bien colocarla en un aparato para control de aire.
Incubar a 37 ºC aproximadamente, durante 24 h.

 

INTERPRETACIÓN

Las colonias rodeadas de un halo negro son presuntos estreptococos del grupo
D de Lancefield. El ennegrecimiento global del medio indica presencia de gran
número de diminutas colonias.
Confirmar con Catalasa (KMT299), ya que sus colonias son catalasa negativas (no burbujean). Para efectuar recuentos, sembrar directamente 1 ml de la solución madre y sus diluciones decimales en profundidad en placas.

https://www.microkit.es/fichas/KAA-AGAR.pdf

El usuario es el único responsable de la eliminación de los microorganismos según la
legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.

Medio fabricado en la UE por MICROKIT desde 1989, bajo ISO 9001, ISO 11133 y GMPs, revisado en Marzo-2020

Para más información y precios actualizados contacte con microkit@microkit.es

HPC-Heterotrophic Plate Count Agar

Deja un comentario

HPC-Heterotrophic Plate Count Agar, medio para recuento total de heterotrofos

HPC Agar para recuento total de heterotrofos en aguas potables, de baño y farmacéuticas, mediante siembra en masa o por la técnica de filtración de membrana, con máxima recuperación.

https://www.microkit.es/fichas/HPC-AGAR.pdf

COMPOSICIÓN

Gelatina 25,0 g
Pancreatic Digest of casein 20,0 g
Agar-Agar 15,00 g
(Fórmula por litro)
pH final: 7,1 ± 0,2

 

PREPARACIÓN

Disolver 60 gramos de medio en 1 litro de agua bidestilada .
Agitar, calentando hasta ebullición, hasta la total homogeneización.
Añadir 10 ml de glicerol y mezclar bien.
Autoclavar a 121 ºC durante 15 minutos.

MANTENER EL BOTE BIEN CERRADO EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO.
AGITE EL BOTE ANTES DE USAR.
PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO.

 

PRESENTACIÓN

DESHIDRATADO CODIGO: DMT198

 

CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO

Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio
siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar
laboratorio, tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque
no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,…)
DESHIDRATADO: Polvo grueso, Beige.
PREPARADO: Estéril, Blanquecino.
CONTROL DE CRECIMIENTO CUANTITATIVO 72 h a 37°C
aproximadamente (o bien 5 días a Tª ambiente 21-28°C aproximadamente):
Escherichia coli WDCM00013, Correcto. Con respecto a TSA, recuento 121-
135%
Enterococcus faecalis WDCM00087, Correcto. Con respecto a TSA, recuento
151-166 %.
Pseudomonas aeruginosa WDCM00026, Correcto. Con respecto a TSA,
recuento 98-136%.
Staphylococcus aureus WDCM00033, Correcto. Con respecto a TSA, recuento
109-131 %.
Aeromonas hydrophila MKTA49141**, Correcto. Con respecto a TSA,
recuento >100 %.
**Las colecciones TIPO prohíben el uso de su referencia por lo que indicamos
la nuestra, directamente trazable a la colección TIPO.

 

MODO DE EMPLEO E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

Inocular 1 ml en profundidad o incluso 0,1 ml en superficie, o aún mejor una
membrana en superficie por la que se hayan filtrado 1-100 ml de muestra.
Duplicar la muestra. Incubar una placa 5-7 días a 22 ºC aproximadamente y la
otra 3 días a 30-37 ºC aproximadamente. Contar todas las colonias. La flora
termófila se asocia a procedencia humana. La mesófila al proceso de
depuración.

El usuario es el único responsable de la eliminación de los microorganismos
según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la
basura.

Medio fabricado en la UE por MICROKIT desde 2010, bajo ISO 9001, ISO 11133 y GMPs, revisado en Marzo-2020

Para más información y precios actualizados contacte con microkit@microkit.es

Suplementos medios cultivo

Deja un comentario

Suplementos Medios Cultivo: Medios de cultivo microbiológicos que necesitan Suplementos

Numerosos medios de cultivo necesitan que, en el momento de preparación, se les añadan Suplementos Medios Cultivo.

En general por ser suplementos termolábiles se añaden tras autoclavar y enfriar los agares a 45-47ºC (los caldos se pueden enfriar a temperatura ambiente para añadir el Suplemento Medio Cultivo necesario)

En MICROKIT, resaltamos los medios que necesitan Suplemento Medio Cultivo añadiendo tras su nombre la locución «(BASE)», para evitar sorpresas de ultima hora a los laboratorios.

Presentación de los Suplementos para Medios de Cultivo Microbiológicos

Los Suplemento Medio Cultivo que son estériles, pueden presentarse de varias formas:

-En frascos líquidos con tapón pinchable, para extraer los mL necesarios según el volumen de medio que preparemos

-En viales de polvo estéril, generalmente pre-pesado para medio litro de medio final

Si no son estériles, porque se necesitan autoclavar junto al medio, suelen ir en goteros o en cuentagotas

Veamos los suplementos más frecuentes de MICROKIT necesarios para los medios de cultivo acabados en «(BASE)»:

Ordenados alfabéticamente por el medio para el que se emplean:

Medios que empiezan por A:

Reactivo Nessler para Caldo Acetamida Pseudomonas

Oligoelementos clorofíceas para Agar Algas

Púrpura de Bromocresol para Azide Rothe Streptococcus Broth y otros muchos medios

Medios que empiezan por B:

Emulsión yema de huevo para Bacillus cereus Agar, Baird Parker Cromogénico (BPX19Y Agar)  y otros diversos medios

Emulsión de yema de huevo con polimixina para Bacillus cereus Agar

Polimixina B 10E6 U.I. para Bacillus cereus Agar

Suplemento nutritivo de sales para Bacillus coagulans Agar

Suplemento para Virus Bacteriófagos ARN-F específicos

Emulsión de yema de huevo con telurito potásico para Baird Parker Staphylococcus Agar

STAA para Brochotrix Agar

Glicerina para Buffered Nitrato-Movilidad Clostridium Medium

Nitratos A y B para medios de Bacillus

Zinc en polvo para medios de Bacillus

BCPT para Burkholderia cepacia Agar BCPT

BCSA para Agar Burkholderia BCSA

Suplementos para Medios que empiezan por C:

Suplementos  Skirrow, Cefoperazona, Preston-Bolton para Agar y Caldo Campylobacter

Glicerina para Cetrimida Pseudomonas Agar y derivados (CN, Rapid Cetrimida, Rapid CN…)

Acido Nalidíxico para Cetrimida Pseudomonas CN Agar y Rapid CN Agar

Chromocytogenes 2 suplementos para Listeria (O&A) Agar

Oligoelementos Cianobacterias para Cianobacterias Agar (CianAgar)

Cicloheximida para Cianobacterias Agar (CianAgar)

Suplemento para Clostridium botulinum Agar

Yema de huevo para Clostridium botulinum Agar y para Clostridium perfringens Agar LENA

Neomicina para Clostridium perfringens Agar LENA

Neomicina + Polimixina para para Clostridium perfringens Caldo RPM

Leche entera (Whole Milk) para Clostridium perfringens Caldo RPM

Vancomicina para Cronobacter sakazakii Agar

Medios que empiezan por D-K:

Polimixina B para Dextrosa Triptona Bacillus Agar (DTA)

Novobiocina para E.coli O157 Broth

Telurito potásico para Giolitti Cantoni Staphylococcus Broth

Penicilina para GSP Aeromonas -Pseudomonas Agar

Verde bromocresol para Homo/Heterofermentative Acidolactic Agar

Polisorbato Tween 80 para Homo/Heterofermentative Acidolactic Agar

TTC para KF Streptococcus Agar

Suplementos para Medios que empiezan por L:

Disulfito + Citrato Férrico Amónico para Lactose Sulfite Broth y otros medios para Clostridium perfringens

Kovacs para test de Indol (E.coli) en caldo  Lauryl Sulfato con triptófano

Legionella suplementos para los medios BCYE, BCYE-Cys y GVPC

Citrato Férrico Amónico para Listeria SemiFraser Broth

Citrato Férrico Amónico con Ac.Nalidíxico y Acriflavina para Listeria Fraser Broth (el caldo LEB ya los incorpora)

Oxford para Listeria Oxford Agar

Palcam para Listeria Palcam Agar

Polisorbato Tween 80 para LPT Neutralizing Agar y Broth

MIX de inactivadores de conservantes para aumentar la potencia neutralizante de medios cosméticos como  LPTN Broth, Eugon, D/E y otros

Suplementos para Medios que empiezan por M:

Telurito-Cefixime para  MacConkey Sorbitol O157

Voges-Proskauer y Rojo de Metilo para MRVP Medium

Solución Iodo-Iodurada y Solución Verde Brillante para MK Tetrationato Salmonella Broth

Cefsulodina-Vancomicina para que el Agar MugPlus CCA de E.coli y demás Coliformes sea más selectivo (ideal para aguas naturales y envasadas)

Mix 5 suplementos m-CP Agar Clostridium perfringens

Suplementos para Medios que empiezan por N-R:

TTC para Nutrient Broth y otros muchos medios de recuento total de aerobios

Vaselina estéril para O/F Medium y para  O/F Glucose Broth

Oxitetraciclina para OGYE Agar (Levaduras y Mohos)

Cicloheximida para hacer selectivos para bacterias (contra hongos) medios como Orange Serum Agar, Osmophylic Agar, Osmotolerant Agar, PCA, PCA-Milk…

Acido Láctico  para hongos acidófilos en Potato Dextrose Agar

Novobiocina para Rappaport Salmonella Broth

L-Rhamnosa y Xylosa para R/X Listeria Broth

Suplementos para Medios que empiezan por S:

Cloranfenicol para hacer selectivo contra bacterias toda la saga Sabouraud

Cicloheximida para hacer selectivo para Candida los medios Sabouraud

Novobiocina para Shigella Broth

TTC para Slanetz Bartley M-Enterococcus Agar

Telurito-Cefixime para Sorbitol MacConkey Agar

Disulfito + Citrato Férrico Amónico para SPS Agar y otros medios para Clostridium perfringens

Suplementos para Medios que empiezan por T-Z:

Suero de Tomate para TJA Acidolactic Agar

Tributirina para Tributirin Lipolitic Agar

TTC para TSA-Medio B Farmacopea

Kovacs para test de Indol (E.coli) en Agua de Triptona-Triptófano

D-Cicloserina y MUP para TSC Clostridium perfringens Agar

Disulfito + Citrato Férrico Amónico para TSC, TSN Agar y otros medios para Clostridium perfringens

Urea en solución para Urea Agar y Broth

Polimixina B para Vibrio parahaemolyticus Agar y Vibrio hipersaline Broth

TTC para Vibrio TSAT Agar

Cicloheximida para convertir WL Agar (levaduras) en WL Diferencial Agar

CIN Yersinia suplemento para CIN Yersinia Agar

 

Solicite más información y precios actualizados en microkit@microkit.es

 

TSC Agar, el medio clásico para detectar y enumerar Clostridium perfringens en aguas y alimentos

Deja un comentario

TSC Agar, detección de Clostridium perfringens

TSC Agar, el medio clásico para detectar y enumerar Clostridium perfringens en aguas y alimentos: bueno, pero mejorado.

TRIPTONA-SULFITO-CICLOSERINA (TSC) Agar Y MUP

Detección y recuento de Clostridium perfringens (UNE EN 13401:2000, UNE-EN 26461-2:1995, ISO/CD 6461-2:2002, EN ISO 14189)

COMPOSICIÓN

Triptosa 15.00 g
Peptona papaínica de soja 5.0 g
Extracto de levadura 5.0 g
Citrato férrico amoniacal 1.0 g
Metabisulfito sódico 1.0 g
Agar-agar 18.0 g
(Fórmula por litro)
pH final: 7.6 ± 0.2

PREPARACIÓN

Disolver 45 g de medio en 1 l de agua bidestilada.

Calentar, agitando, hasta
ebullición, para su total homogeneización.

Autoclavar a 121 ºC durante 15
minutos o mejor a 116 ºC, 15 minutos.

El color final del medio es crema.

Enfriar a 50 ºC y añadir asépticamente 400 mg de D- Cicloserina estéril (4
viales de 100 mg de SMS252).

Verter de inmediato en placas y no recalentar.

Utilizar de inmediato a su preparación para evitar la letal oxigenación.

NOTA 1: Para mejorar el desarrollo de colonias negras de Clostridios, añada 1
vial del suplemento estéril VMT136 a cada 100-1000 ml de medio estéril,
hervido para desoxigenarlo y una vez enfriado a 45-50 ºC.

NOTA 2: Para seguir la ultima Norma ISO 14189 de aguas, mejorada sin
reactivos cancerígenos, puede añadir también a cada 500 ml de medio
enfriado a 50°C, 65-125 mg (depende de la vista del observador) de MUP (Metil-Umbeliferil Phosfate, Ref: MICROKIT SMT009),

que reacciona con las colonias de Cl.perfringens emitiendo fluorescencia (amarilla o azul) bajo luz UVA de 366 nm (linterna MICROKIT VMT050).

Uso del MUP:

Disolver 100 mg en 20 mL de agua estéril tibia hasta su total homogeneización.

Esterilizar por filtración con jeringa y filtro de carcasa de 0,22 µm, de modo que deben añadirse a cada placa 0,4 ml de esta solución filtrada.

Dosis final en TSC: 100 mg de MUP/Litro de TSC (una placa tiene 15-20 ml de TSC, de modo que sobre cada placa hay que añadir 2 mg de MUP y repartirlo con asa digralsky).

Dejar embeber el MUP en la placa.

Sembrar después la membrana filtrada, mejor boca abajo. Ideal añadir encima una segunda capa de TSC (Ofrecemos tubos preparados para esto, TPL137).

Si sobra solución para otro dia, mantenerla en nevera en vial cerrado y si sobra para la semana siguiente, congelar.

Las placas así preparadas deben usarse dentro de la misma semana, ya que el reactivo una vez hidratado pierde su efectividad en 7 días.

C.perfringens en TSC con MUP: colonias fluorescentes

PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO. MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO.

AGITE EL BOTE ANTES DE USAR. DESHIDRATADO CODIGO: DMT175, placas preparadas PPLM29, tubos preparados TPL137.

Modificación del TSN más selectiva y con menor difusión del ennegrecimiento.

CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO

Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar laboratorio, tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,…)

DESHIDRATADO: Polvo grueso, Amarillo PREPARADO: Estéril, Beige

EVALUACIÓN DEL RENDIMIENTO ISO/TS 11133-2 20-48 h a 37-44 ºC en anaerobiosis, aplicando el método ISO 7937 ó ISO/CD6461-2: 2002 o el indicado en el Manual MICROKIT actualizado:

Clostridium perfringens WDCM00007 y WDCM 00080, Colonias negras, pardas o grises. PR > 0,7 respecto al número de ufc certificadas e inoculadas en otro lote validado de TSC. Con respecto a Schaedler, recuento 75-112%, pero de forma selectiva y diferencial; esta variabilidad de la productividad depende de la composición y carga de la flora acompañante inoculada. Si se
añadió MUP, colonias que emiten fluorescencia azul bajo luz UVA de 366 nm.
E.coli WDCM00013, Inhibición completa: Ni una sola colonia. O a lo sumo inhibido con colonias blancas.
Bacillus subtillis WDCM00003, Inhibido.
Staphylococcus aureus WDCM00033, Inhibido, a lo sumo colonias blancas.

PRESENTACIÓN:

MEDIO DESHIDRATADO (BASE) y SUPLEMENTO. También hay tubos preparados, PLACAS MF 90mm con o sin MUP y frascotes 200 ml parafinados para recuento en 100 ml de muestra).

En versión líquida, viales MF y viales pinchables.

Y suplemento MUP en polvo (vial 1 g ó tubote 10 g).

MODO DE EMPLEO E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

En ALIMENTOS:

sembrar en superficie 0’1 ml de muestra y su serie de diluciones decimales, añadiendo una segunda capa de medio.

O bien sembrar en profundidad 1 ml incluso en tubo o 100 ml en frascote parafinado, fundidos en agua hirviendo y atemperados a 45-47°C justo antes de solidificar.

Incubar 18-20 horas a 44-46 ºC aproximadamente, en anaerobiosis (no hace falta en tubos ni frascos) y contar como Clostridium perfringens toda colonia negra.

La Temperatura selectiva de 46ºC a menudo es excesiva e inhibe también el crecimiento de algunas cepas diana.

Las colonias blancas o grises son presuntivas si la anaerobiosis no es correcta; incluso las colonias negras pueden virar a incoloras después de sacarlas de la atmósfera de anaerobiosis.

Resulta más recomendable sembrar 1 ml sobre un tubo (TPL137) hervido y enfriado a 75ºC (para detectar y enumerar esporas) o a 45ºC (para detectar y enumerar formas vegetativas), cerrar, voltear sin agitar para mezclar sin oxigenar, incubar vertical (ahorrando las jarras y los generadores de anaerobiosis) y contar directamente en el tubo las colonias negras, que crecen en anaerobiosis en toda su altura (por debajo de los 3-5 mm oxigenados de la superficie).

En AGUAS:

Una vez invalidado por numerosos laboratorios el medio oficial 2003-2015 “m-CP Agar”, la mejor elección es el Clostricult P/A si no se requiere recuento o si se ha de recontar “0 en 100 ml”, ya que en microbiología 0 ufc es equivalente a ausencia.

Para recuento de esporas en aguas, según UNE-EN 26461-2, calentar la muestra de 100 ml de agua 15 minutos entre 70-80 ºC.

Lo lógico es hacer un duplicado para formas vegetativas, sin ese shock térmico.

Puede haber 10-100 veces más esporas que vegetativas en una misma muestra.

Filtrar 100 ml de agua a través de una membrana de 0,22 µm (ref: VAC022), evitando al máximo la oxigenación del agua y minimizando el tiempo entre el filtrado y la siembra.

Solución Farmacopea

La industria farmacéutica revitaliza las células de anaerobios filtrando por la misma membrana, cuando se está acabando de filtrar el agua, 100 ml de Tioglicolato alternativo (ref: DMT208) estéril.

Así consiguen mejores recuperaciones en estos microorganismos tan difíciles de hacer crecer tras una filtración.

De igual forma, si añade a sus 100-250 ml de muestra el contenido de un tubo de caldo Tioglicolato alternativo polvo estéril (MICROKIT DPA047), volteando para su homogeneización antes de filtrar, obtendrá resultados mucho más acordes a la realidad, ya que este medio revitaliza los anaerobios.

Una vez filtrada la muestra (y el caldo revitalizante, en su caso) no dejar que la membrana se seque ni un instante en el aparato de filtración, y menos si éste sigue conectado.

Añadir la membrana boca abajo en la placa Petri (vacía, o bien con una capa de 15- 18 ml de TSC o idealmente con una capa de 15-18 ml de TSC-MUP) y verter sobre ella 15-18 ml de TSC Agar (sin MUP) enfriado a 50 ºC (y si se desea, preparado a doble concentración), sin que se formen burbujas.

Siguiendo todas estas instrucciones se consiguen las mejores recuperaciones en microorganismos que, como Clostridium, no están preparados para soportar la oxigenación que proporciona el contacto con el aire.

Para siembra directa (sin filtración) de aguas cloradas, añadir 0,6 g de Tiosulfato sódico para inactivar el cloro.

Incubar 16-24 h y 40-48 horas a 36-38 ºC aproximadamente o, más selectivamente, a 43-45°C aproximadamente (es un medio más rápido que el SPS), en anaerobiosis sobre todo si no se ha dejado la membrana en profundidad).

Si se añadió MUP en la capa inferior, contar sólo las colonias que emitan fluorescencia (azul o amarilla) bajo luz UVA de 366 nm.

Las colonias blancas o grises son presuntivas si la anaerobiosis no es correcta; incluso las colonias negras pueden virar a incoloras después de sacarlas de la atmósfera de anaerobiosis.

De ahí la importancia del MUP para evitar falsos negativos de colonias que no están negras.

NOTA IMPORTANTE:

La placa pequeña, sea sea Deltalab (no hermética), Pall (hermética) o Falcon (hermética), reduce
drásticamente el recuento de C.perfringens WDCM 00007.

Todas ellas y también las cassettes MICROKIT (semiherméticas), reducen drásticamente el recuento de C.perfringens WDCM 00174.

No es sólo un tema de hermeticidad que impida la entrada de la atmósfera de anaerobiosis, ya que Deltalab y Microkit no son herméticas y la primera no funciona con ninguna de las dos cepas y la segunda no funciona con una de ellas.

Por todo ello, para este microorganismo, es necesario usar placa de 90 mm, además de añadir una segunda capa de medio o de TSC (ideal Tubos TPL137) o de agar-agar.

Otra cosa importante es secar muy bien la placa antes de usar, para que no se cree una hermeticidad entre la tapa y la placa, que dificulte la entrada de la atmósfera de anaerobiosis (o añadir un clip entre placa y tapa.

Aunque los mejores resultados se obtienen analizando los 100 ml de muestra de agua sin pasarla por la oxigenante/estresante filtración: siembra en masa de 100 ml de agua en Quanti-P/A-TSC MICROKIT.

En anaerobios estrictos es fundamental minimizar el tiempo de exposición al aire durante el análisis, ya que el oxígeno destruye las células y reduce la carga real hasta 3 log en solo unos minutos.

Actúe con la misma prisa que actuaría si estuviera Ud. en una atmósfera de anaerobiosis.

C.perfringens debe incubarse a 44ºC, ya que muchos facultativos dan falso positivo a 37ºC

https://www.microkit.es/fichas/TSC%20AGAR%20y%20MUP.pdf

¿Y qué pasa con el clásico TSN Agar?

El agar TSC es similar al TSN, pero aunque solo cambia un antibiótico en su fórmula (Cicloserina en vez de Neomicina) hay una gran diferencia en los resultados de ambos medios:

El TSN da muchos falsos negativos, según hemos visto en más de un centenar de rondas intercomparativas Seilalimentos y Seilagua.

En aguas, la Directiva UE actual marca el uso obligado del TSC Agar en la búsqueda de este indicador de contaminación con aguas naturales.

El problema no es el medio

Sin embargo, tambien en los intercomparativos de aguas, se demuestra que no es la mejor solución. Ya que los falsos negativos con respecto al antiguo m-CP Agar no han disminuido significativamente desde que se cambió el Reglamento.

Y el problema no es el medio de cultivo: es la filtración de membrana, que destruye una enorme proporción de células de este anaerobio estricto mientras se está analizando. Porque las células se hiper oxigenan durante el proceso.

Soluciones MICROKIT (sólo apto para innovadores)

Por ello MICROKIT inventó la solución P/A Clostricult, que elimina este problema con un resultado cualitativo de presente (>/= 1 ufc/100 mL) o ausente (0 ufc/100 mL).

https://www.microkit.es/fichas/P-A-CLOSTRICULT-UE2-2019.PDF

Y la solución cuantitativa Quanti-P/A Clostricult, que elimina el mismo problema y proporciona resultados cuantitativos fiables sin tener que filtrar la muestra de agua.

 

https://www.microkit.es/pdf/Quanti-PA-Clostricult-2022.pdf

Otro problema del TSC es que las colonias solo se mantienen negras mientras está presente la atmósfera de anaerobiosis, revertiendo a gris e incluso incoloro al sacar las placas de las  jarras y bolsas donde se han incubado. Lo que genera recuentos muy inferiores a lo que ya es miuy inferior a la realidad.

Por ello MICROKIT inventó la solución del medio cromogénico Cromokit-CP Agar, cuyas colonias de Clostridium perfringens conservan su hermoso color naranja-rojizo también después de sacarlas de la atmósfera de anaerobiosis.

https://www.microkit.es/fichas/CROMOKIT%20C.perfringens%20Agar.pdf

Si desean más información de TSC Agar y MUP…

…o si su laboratorio no está sometido a la Normativa ISO, de las soluciones MICROKIT…

…o están listos para enviarnos sus pedidos, estaremos encantados de ayudarles para que puedan implementar más cómodamente estas técnicas en microkit@microkit.es

 

Antes de usar galerías de identificación…

Deja un comentario

¿Sabe cuantos miles de galerías de Identificación se derrochan cada día en el mundo por no haber elegido la galería correcta?

Antes de usar galerías de identificación…

 

.

…elija adecuadamente el tipo de galería que va a funcionar.

Y claro, no elegir la galería adecuada NO permite caracterizar el nombre de la colonia en cuestión

Colonias de Bacillus crecidas en el selectivo Agar Rapid Cetrimida cromogénico

 

Nunca más malgaste galerías que han sido inadecuadas (y no han llegado a ningún resultado: su colonia sigue sin un nombre fiable) a causa de falsos positivos tremendamente inesperados.

Ni malgaste más tiempo incubando galerías inadecuadas, para al final no llegar a nada.

¿Sabía que existen 4 reactivos de respuesta inmediata, que le permiten elegir con certeza cuál es la galería de identificación más adecuada para cada colonia que desee identificar?

-Ideal para cumplir las NCF en la responsabilidad de caracterizar todos los aislados ambientales de sus instalaciones

-¿Qué ofrecemos?

  • 4 reactivos que le permiten saber en unos segundos de qué grupo microbiano es una colonia (nosotros lo llamamos PRE-IDENTIFICACIÓN):
  • Gram positivo o Gram negativo (Neogram, respuesta en 10 segundos),
  • Oxidasa positivo u oxidasa negativo (Tiras estabilizadas para la citocromo-oxidasa, respuesta en 10 segundos),
  • Catalasa positivo o catalasa negativo (reativo para la catalasa estabilizado, respuesta en 5 segundos)
  • Coagulasa positivo o coagulasa negativo (látex coagulasa para la distinción mucho más evidente, en 60 segundos)

-¿Qué incluye cada pedido de cualquiera de estos reactivos?

  • Certificado de control de calidad del lote
  • Todo acondicionado bajo ISO 9001
  • Funcionamiento excelente garantizado: la mejor calidad que encontrará en cada uno de ellos
  • Packaging adecuado y con explicaciones completas en el interior

-¿Quiere saber más?

–En cuanto a galerías de Identificación, ¿sabía que puede obtener resultados en sólo 4 horas, gracias a las galerías diseñadas con sustratos enzimáticos, en vez de los clásicos pocillos bioquímicos? https://microkit.es/fichas/Galer%C3%ADas%20RAPID.pdf:

    1. Enterobacterias
    2. No fermentadores
    3. Estafilococos
    4. Estreptococos/Enterococos
    5. Anaerobios
    6. Levaduras

Encima elaboradas con un sistema inteligente de inoculación en canaleta, que le ahorra el molesto pipeteo pocillo por pocillo de otras galerías

Mira en este video qué fácil es usarlas:

 

-Tambien ponemos a su disposición nuestro Servicio de Identificación Molecular bajo ISO 9001

Por secuenciación genética de sus colonias, con base de datos 4 veces  más completa que la que le ofrece la espectrometría de masas, lo cual permite aumentar la probabilidad de una identificación >99,5% correcta:  https://microkit.es/pdf/identificacion-molecular.pdf

 

Si desean más información de los 4 reactivos PREIDENT, de las galerías RAPID o del servicio MICROKIT de Identificación molecular por secuenciación genética, o están listos para enviarnos sus pedidos, estaremos encantados de ayudarles para que puedan implementar más cómodamente esta obligada monitorización de microorganismos aislados en sus ambientes interiores. Escríbanos a microkit@microkit.es

 

Cepas in house (salvajes, nativas), aisladas de sus instalaciones y de sus muestras: las convertimos en lentículas cuantitativas estabilizadas

Deja un comentario

APROVECHE LAS CEPAS QUE AISLA DE SUS PRODUCTOS E INSTALACIONES, NO LAS DESTRUYA: CONVIÉRTALAS EN SU MEJOR MATERIAL DE REFERENCIA

Cepas in house (salvajes, nativas), aisladas de sus instalaciones y de sus muestras: las convertimos en lentículas cuantitativas estabilizadas para que las aproveche en sus validaciones, test de promoción de crecimiento en medios de cultivo y demás controles de calidad

¿Sabían que pueden externalizar con nosotros la fabricación de lentículas cuantitativas a partir de sus propias cepas aisladas durante la monitorización ambiental?

De hecho, el mayor número de lentículas que comercializamos es para este fin, en Europa.

Ideal para poder cumplir completamente el test de promoción de crecimiento, según el Anexo 1 de NCF (fabricación de medicamentos estériles).

 ¿Qué ofrecemos?

  • Producción de cepas nativas (in-house) en formato lentícula.
  • Le fabricamos mini-lotes desde 400 lentículas estabilizadas, con 2 años de caducidad.
  • Concentración personalizada, por ejemplo:
    → ~1.500 ufc/lentícula = ~75 ufc/0,5 mL tras disolver la lentícula en 10 mL (30 min + vórtex).

 ¿Qué incluye cada lote?

  • Certificado de control de calidad
  • Seguimiento de la ISO 17034 (productores de materiales de referencia).
  • Trazabilidad, precisión y estabilidad garantizadas.
  • Packaging adecuado de 10 en 10 unidades, con protección ante la humedad, el calor y las radiaciones electromagnéticas
  • Cada unidad aislada en un tubito Eppendorf de fácil apertura, relleno de bolitas de silicagel que bañan la lentícula

 ¿Concentraciones especiales?

  • Dada la enorme incertidumbre que ello genera, no fabricamos concentraciones más bajas de 102-103 ufc/lentícula
  • Pero sí alcanzamos hasta 10⁷–10⁹ ufc/lentícula (según cuál sea la cepa), ideales para Challenge Tests

 ¿Quiere saber más?

 ¿Cuál es la inversión?

Sólo 6,50 € por lentícula, un suministro completo para 24 meses: Pack profesional de 400 lentículas con una inversión de 2.600 € por cepa cada 2 años (precios 2025).

Si nos encarga 4 ó más cepas juntas, podemos hacerle micro-lotes de sólo 200 u al mismo precio (1.300 €/cepa, precios 2025)

Si desean más información o están listos para enviarnos sus cepas, estaremos encantados de ayudarles para que puedan implementar más cómodamente el test de promoción de crecimiento con cepas in-house.

Haga sus consultas sobre nuestra fabricación de cepas salvajes (sólo admitimos de riesgo biológico 1 -inocuas- ó 2 -patógenos con cura fácil-) y sobre la logística para enviarnos legalmente las colonias a nuestro laboratorio de producción en: consultastecnicas@microkit.es

Solicite precios actualizados y oferta según número de cepas salvajes en: microkit@microkit.es

Haga sus pedidos de cepas salvajes cuantitativas en pedidos@microkit.es

 

PRE-IDENTIFICACIÓN

Deja un comentario

PRE-IDENTIFICACIÓN

IDENTIFICACIÓN DE COLONIAS PREVIA AL USO DE GALERÍAS, CON 4 REACTIVOS DE RESPUESTA INMEDIATA PARA ELEGIR BIEN LA GALERÍA ADECUADA

¿Por qué pre-identificar colonias?

Una vez obtenemos una colonia típica en un medio de cultivo, la probabilidad de que finalmente no sea del microorganismo buscado es del 30% como media en medios clásicos y del 0,5% como media en medios cromogénicos.

Por eso debemos identificar toda colonia sospechosa antes de decidir si hay que destruir el lote afectado.

Pero a menudo no tenemos ni idea de qué grupo de microorganismo es la colonia sospechosa, ya que los falsos positivos a veces nos sorprenden, de modo que incluso aparecen Gram positivos en medios selectivos para Gram negativos (en la foto, ejemplo de Bacillus cereus en Agar Cetrimida cromogénico),

o No-fermentadores como Pseudomonas aeruginosa en medios selectivos para coliformes, por poner un par de ejemplos.

Por ello elegir directamente la galería que creemos adecuada para el microorganismo buscado,  muchas veces supone una pérdida de tiempo (y el coste de la galería mal elegida) que no nos lleva a ningún nombre de cepa.

La solución de MICROKIT

¿Sabía que existen 4 reactivos de respuesta inmediata para orientarle cuál de las galerías de identificación debe elegir y después saber de qué especie es una colonia? En MICROKIT lo llamamos PRE-Identificación:

Neogram, Oxidasa, Catalasa y Coagulasa.

Eso sí, usarlos puede acabar con la viabilidad de la colonia, de modo que aconsejamos usarlos sólo en colonias que tenemos resembradas-multiplicadas y por tanto no requieren pruebas posteriores más que en otras colonias hermanas

Veamos uno por uno:

Neogram 

es un reactivo, que en contacto con la pared celular de los Gram negativos, genera un filamento visible a simple vista. Lo cual no sucede con los Gram negativos. Así de simple, sin tinciones ni microscopio, y 100% correlación con la tinción de Gram. Precaución: es corrosivo, cuidado no toque la piel, ojos, boca…

Oxidasa 

es un reactivo que muestra el metabolismo de las bacterias frente al oxígeno. Ofrecemos dos versiones, la tira impregnada y también lo tenemos en ampollas de uso unitario.

Es un reactivo muy lábil y en otras marcas se estropean todos los test tras abrir el bote, al oxigenarse con el aire. En nuestro caso las tiras no se estropean, abramos las veces que abramos, porque estás estabilizadas.

Con esta prueba distinguiremos la mayoría de microorganismos  oxidativos, como Pseudomonas, Burkholderia, Vibrio, Campylobacter, Legionella… (No fermentadores y algunos otros, que viran el cuadro de la tira a color azul oscuro) de los fermentadores y anaerobios, que no lo viran a azul oscuro.

Catalasa

es otro reactivo, que muestra el metabolismo de defensa de ciertas bacterias contra el oxígeno, en este caso contra el peróxido de hidrógeno.

Al añadirlo a la colonia de un microorganismo catalasa positivo, burbujea con potencia (crea una efervescencia), eliminando oxígeno alrededor de las células de la colonia.

Casi todos los aerobios y fermentadores son catalasa positivos.

De los microrganismos con los que solemos trabajar en micro industrial y ambiental, sólo son catalasa negativos los Enterococos-Estreptococos, los Lactobacilos y los Clostridium, por lo que resulta una prueba muy concluyente para éstos.

 

Coagulasa  

en este caso más que para elegir galería, sirve para ver si la colonia de estafilococos es probablemente Staphylococos aureus o no, ya que la mayoría de sus cepas es coagulasa + y la mayoría de otras especies no lo son.

Y si nos vale con saber eso, nos ahorramos la galería.

En la foto vemos a la izquierda un resultado negativo negativo (aspecto homogéneo) y a la derecha un resultado positivo: la colonia ha generado coágulos en el círculo

 

 

Si aún así quiere conocer de qué cepa concreta de estafilococo se trata, para ver si es o no patógeno, use las galerías Rapid Staph y lo sabrá en sólo 4 horas

.

En este video le explicamos el modo de empleo de los 4 componentes de Pre-identificación:

https://youtu.be/knxE5wH-kCI

Haga sus pedidos de los kits inmediatos Neogram, Oxidasa, Catalasa y Coagulasa, tras solicitarnos los precios actualizados, en pedidos@microkit.es