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Optimización en los análisis microbiológicos de
AGUAS Y BEBIDAS.
Nuevos métodos de análisis microbiológicos utilizados exitosamente en los laboratorios líderes

Microcistinas y otras Cianotoxinas en el agua: Nodularinas, Cilindrospermopsinas, Anatoxinas, Saxitoxinas… detección de quienes las generan

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LAS MONOGRAFÍAS DE MICROKIT. Tema 12: Cianobacterias y Microalgas de interés en aguas y alimentos

Microcistinas y otras Cianotoxinas en el agua: Nodularinas, Cilindrospermopsinas, Anatoxinas, Saxitoxinas… detección de quienes las generan

1-El microorganismo y su interrelación con el ser humano

Las cianobacterias o “algas cianofíceas” son los procariotas que realizan la fotosínteis oxigénica (agua à oxígeno, como los vegetales eucariotas),

a diferencia de los procariotas fotosintéticos anaeróbicos, a menudo rojos y visibles en capas menos superficiales del sedimento.

Teoría simbionte

Fueron los primeros seres vivos en desarrollar esta fotosíntesis, la que hoy predomina en la Tierra gracias a los vegetales (en realidad, gracias a las cianobacterias, como endosimbiontes de los vegetales).

La teoría simbionte de Lynn Margulis sitúa las cianobacterias como los precursores de los cloroplastos de las células eucariotas vegetales (lo mismo que sitúa las eubacterias como precursores de las mitocondrias de todo tipo de células eucariotas, las espiroquetas como precursores de los flagelos eucariotas, etc).

Etimología

Su nombre deriva de “algas azules” a causa del color azul de uno de sus pigmentos fotosintéticos, la ficocianina, aunque algunas son rojas a causa de la ficoeritrina y los carotenoides, otras verdes por predominio de la clorofila, otras marrones o negras por mezcla de varios pigmentos.

Las cianobacterias y Gaia

Su importancia fue tan vital en la era Proterozoica (cuando aun no existían los eucariotas, desde hace 3.700 millones de años) que provocaron hace unos 2.500 millones de años la primera de las 6 extinciones masivas de especies de La Tierra, al convertir la atmósfera original, reductora y roja, en oxidante, azul (el actual cielo azul),

con la cantidad estable de oxígeno que tiene desde entonces (21%) gracias a la homeóstasis global denominada Gaia por Lovelock.

¿Algas o bacterias?

Son bacterias Gram negativas y a menudo pluricelulares, por eso se estudian en botánica, ya que forman colonias que en muchos casos llegan a ser macroscópicas (las bacterias más largas que existen), con formas características según cada especie (algo homólogo a los líquenes, simbiosis de hongo y alga o cianobacteria).

Sus mayores colonias son los estromatolitos costeros (enormes piedras) y las segundas las costras negras de Nostoc (enormes «mocos» color oliva cuando hay humedad) en algunos suelos naturales y las semiesferas costeras verde-botella de Rivularia.

Su complejidad se constata mediante diversos tipos de células especializadas:

acinetos de reserva,

heterocistos para la fijación de Nitrógeno,

necridios desde donde los tricomas se dividen,

hormogonios o cortos filamentos móviles fruto de la reproducción asexual,

nanocitos o exósporas…

Algunas aún son capaces de realizar fotosíntesis anoxigénica (ya que sus antecesores evolutivos realizaban este metabolismo), convirtiendo el ácido sulfhídrico en azufre molecular.

Utilidad

La importancia de las cianobacterias para el ser humano, aparte de que sin ellas no habríamos llegado aquí, ni seguiríamos aquí, radica en las adicionalmente beneficiosas (productoras sobre todo de proteina para pienso,

como la famosa Spirulina,

de bioetanol, de colorantes alimentarios, de suplementos dietéticos…).

También son las elegidas (algunas endolíticas) para la colonización y generación de atmósfera respirable en otros planetas habitables antes de que el Sol extinga todo vestigio de vida en La Tierra dentro de unos pocos millones de años.

Y tambien destaca la importancia de las perjudiciales, generadas por aportes humanos de abonos al agua, que provocan blooms de cianobacterias

(sobre todo de Anabaena, Microcystis, Aphanizomenon…)

y éstos generan cianotoxinas y malos olores en el agua de recreo, baño e incluso de consumo humano.

España es uno de los 9 primeros países del mundo cuya legislación controló (desde 2003) en el agua potable, la ausencia de cianotoxinas (microcistinas, nodularinas, cilindrospermopsinas, anatoxinas, saxitoxinas…).

Cultivo para su detección

El éxito del Cianokit y del Cianagar desarrollados por Microkit desde hace 30 años, muestran la importancia de este grupo bacteriano para muchos laboratorios de salud pública, Confederaciones Hidrográficas y para muchas potabilizadoras de agua.

Algas eucariotas

Al final de Proterozoico aparecieron los primeros eucariotas:

junto con los protozoos, las algas eucariotas, entre ellas diversas algas verdes, dinoflagelados, haptófitos cocolitofóridos y diatomeas, sobre todo,

que más adelante darían lugar a las macroalgas verdes, rojas y pardas que hoy dominan la biomasa de la zona fótica de las costas.

Es un grupo sumamente polifilético, hasta algunos autores hablan de reinos diferentes entre diferentes algas.

Utilidad de las algas

Pero aquí nos interesan solo las microalgas, que son capaces de crecer en medios de cultivo (aunque es precisamente una macroalga, Gelidium sesquipedale, la principal productora de agar-agar microbiológico para fabricar medios de cultivo).

Las microalgas se buscan en las aguas envasadas (como alterativos de los caracteres organolépticos –olor, sabor y aspecto-).

Pero la importancia principal de las microalgas en nuestro terreno se debe a las intoxicaciones de productos del mar (almejas, mejillones, crustáceos, peces…) que pasan al ser humano y son provocadas por las mareas rojas de dinoflagelados

(Alexandrium, Gymnodinium, Gonyaulax, Pyrodinium, Prorocentrum, Dinophysys…), ya que son productores de diferentes tipos de toxinas: saxitoxina y gonyatoxinas -PSP Paralytic Shellfish Poisoning-, ácido okadaico -DSP Diarreica-, brevitoxinas –NSP Neurotóxica-, ciguatoxina –CFP Ciguatera-.

Por otra parte, hay diatomeas que producen ácido domoico -ASP Amnésico-.

Tambien son importantes diversas microalgas (ej: Chlorella) como beneficiosos en su cultivo para la producción de diferentes moléculas o incluso como simple forraje en cápsulas, ensaladas y otros platos.

El éxito del Ficokit y del Algae Agar desarrollados por Microkit desde hace 30 años, muestran la importancia de este grupo microbiano en muchos laboratorios medioambientales y en las envasadoras de agua.

2-Los tipos de productos donde la legislación exige su búsqueda o recuento, así como otros tipos de productos donde a nuestro criterio, sería recomendable analizarlos

-La legislación Española (Real Decreto 902/2018 de 20/7) siguen exigiendo, desde la versión del Real Decreto 140 de 2003, el control de algunas Cianotoxinas (sobre todo las más famosas: las Microcistinas) en aguas de consumo humano.

-Tambien deberían mirarse los blooms de cianobacterias en aguas de recreo y baño, ya que se han reportado numerosas intoxicaciones de personas sólo por nadar o incluso navegar o hacer piragüismo sobre blooms de cianobacterias y sus Microcistinas (y demás Cianotoxinas).

-Tambien existe legislación en cuanto a las toxinas del fitoplancton marino (mareas rojas de Dinoflagelados, sobre todo), por ejemplo el Real Decreto 571/1999 de 9 de Abril en bivalvos.

-Las envasadoras de agua deberían controlar, por su propia imagen, como ya hacen varias de ellas, la ausencia de microalgas en su aguas, pero tambien deberían controlar las cianobacterias a causa de las tóxicas Microcistinas y demás Cianotoxinas.

3-Los métodos oficiales para su detección/recuento

Son métodos químicos o ELISA para las Microcistinas; o de recuento de células de cianobacterias al microscopio

4-Los métodos alternativos que mejoran la rapidez de los resultados y la robustez del análisis

Cianagar y Agar Algas

MICROKIT diseñó desde sus comienzos el Cianagar para cianobacterias y el Algae Agar para microalgas.

Dado que son medios inorgánicos que se exponen a la luz en vez de en estufa convencional, no es posible la confusión de las colonias (de cianobacterias en el primer caso o de microalgas en el segundo), con otros microorganismos.

Hay mohos capaces de crecer en ellos a expensas de la materia orgánica generada por el crecimiento de cianobacterias o de las algas, pero es un crecimiento posterior.

La colonias de las microalgas tienen los colores de la fotosíntesis (cianobacterias verde botella, clorofíceas verde-amarillentas, diatomeas beige-marrón…).

Cianokit y Ficokit

Para ahorrarse la filtración, se puede buscar la presencia o ausencia de cianobacterias en 100 mL de agua con los frascos Cianokit P/A y la de microalgas con los frascos Ficokit P/A.

Ambos derivados de Cianagar y Agar Algas, en versión caldo

También se puede añadir dentro del frasco la membrana filtrada para buscar la ausencia de cianobacterias o de microalgas en volúmenes mayores de agua

¿Cómo distinguir cianobacterias de microalgas?

Al microscopio es muy fácil distinguir las cianobacterias de las microalgas, sean unicelulares, sean filamentosas,

ya que (independientemente de que las segundas tengan núcleo), ni siquiera hace falta teñir: las células de cianobacterias tienen un contenido homogéneo, grumoso, mientras las de microalgas siempre tienen corpúsculos (cloroplastos) sean de la forma que sean, claramente distinguibles del resto de la célula.

Todos ellos son métodos indirectos para la búsqueda de las Microcistinas y demás Cianotoxinas, ya que con ellos lo que se busca es a su productor.

Documentación

MICROKIT pone a su disposición 3 herramientas que no encontrará en ningún otro lugar, ya que las elaboró su Director Técnico (Jorge Sanchis Solera) cuando hizo la carrera de biología y se especializó en algas:

-Claves de identificación de los géneros de Cianobacterias de España con láminas de dibujos de todos ellos (8 páginas)

-Claves de identificación de los géneros de Microalgas no marinas de España con láminas de dibujos de todos ellos (29 páginas)

-Protocolo para el recuento de Cianobacterias toxigénicas a niveles peligrosos (53 páginas)

Aprovechamos para ofrecer el libro de plantas silvestres comestibles del autor, para quien guste de pasear por el campo, hacer excursiones, senderismo o supervivencias, ya que es autoedición y no está disponible en librerías o internet. Una guía de bolsillo con fotografías a todo color, como las de las setas, pero para plantas, que están todo el año presentes en las excursiones: incluso en pleno invierno nevado se encuentra comida en la naturaleza.

5-Cómo vemos el futuro en la detección de este grupo

Seguirán apareciendo casos de intoxicaciones en aguas de baño y recreo por Microcistinas y otras Cianotoxinas; y seguirán apareciendo botellas de agua envasada con aguas verdes y marrones, mientras no se regule oficialmente la búsqueda de cianobacterias y microalgas en dichas aguas.

Si desea esta monografía completa en pdf, con las fotos que aqui no aparecen, solicítela en consultastecnicas@microkit.es

https://www.microkit.es/fichas/CIANAGAR.pdf?v=2023

AGUAS DE USO COSMÉTICO: CONTROL MICROBIOLOGICO ADECUADO

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AGUAS COSMÉTICAS MICROBIOLOGÍA, EMPLEE LOS KITS Y PARÁMETROS ADECUADOS PARA EVITAR RETIRADAS DE MERCADO DE SUS COSMÉTICOS

AGUAS COSMÉTICAS MICROBIOLOGÍA: CONTROL MICROBIOLOGICO ADECUADO

La industria cosmética ha sido, como es habitual, la gran olvidada en la legislación. En el nuevo Real Decreto de aguas de consumo humano de Enero de 2023, se reitera lo que ya se venía haciendo en cuanto a los 4 parámetros típicos:

la ausencia de E.coli/coliformes, Enterococos fecales y Clostridium perfringens en 100 mL de muestra y los recuentos de heterótrofas a 22 ° C en 1 mL de muestra, que han de ser inferiores a 100 ufc/mL.

hay muy interesantes novedades en cuanto a colífagos, Pseudomonas aeruginosa en hospitales, frecuencia del control microbiológico en fábricas de alimentos…

pero nada de mencionar la industria cosmética.

La industria farmacéutica está amparada por Farmacopea, al emplear aguas ultrapurificadas que sólo requieren un control de aerobios en R2A y a lo sumo, una búsqueda de Pseudomonas aeruginosa y de Burkholderia cepacia,

tras cumplir con los 4 parámetros microbiológicos mencionados del Real Decreto de aguas de consumo humano en los grifos de entrada.

Pero… ¿qué sucede con la industria cosmética? Naturalmente las fábricas de medicamentos que también fabrican cosméticos, lo tienen resuelto, al emplear el mismo tipo de agua para ambos procesos.

Pero los demás, raramente se pueden permitir unas instalaciones de esa categoría y coste, y han de purificar con menos recursos el agua de entrada a su fábrica, sea de red de aguas de consumo humano, sea de pozos, sea comprada a proveedores.

Y precisamente la materia prima más crítica y más conflictiva en las fábricas de cosméticos es el agua, principal vector de entrada de dos de los microorganismos que más retiradas de mercado provocan en producto cosmético final y que nadie ha buscado por ellos en las aguas de consumo humano original: Pseudomonas aeruginosa y Burklholderia cepacia.

De modo que empleando R2A para el recuento de aerobios como si se tratase de agua farmacéutica, y analizando el agua de red de origen en los 4 parámetros obligados, nadie les garantiza que puedan emplear esa agua por ausencia de los otros dos patógenos antes mencionados.

LEYENDAS URBANAS SOBRE EL RECUENTO DE AEROBIOS

Porque tener un recuento de aerobios bajo o incluso nulo no es garantía de que no se trate precisamente de estos dos patógenos.

Ya que son propios del biofilm y lo que se encuentra en las muestras de agua (incluso de 100 mL) son formas de dispersión planctónicas que escapan del biofilm de forma discontinua.

De modo que la distribución «contagiosa» (de Poisson o Binomial Negativa, no la Normal de Gauss) de los microorganismos en una muestra, tiene su máximo exponente en las instalaciones de aguas supuestamente limpias.

Por lo que el concepto de ufc y de muestra mínima se disparan aquí con su máxima incertidumbre.

En definitiva, para que un agua de uso cosmético podamos garantizar que cumpla las GMPs (trasladadas a la Norma ISO 22716), y no contamine el producto final, debemos analizarle no sólo los 4 parámetros de potabilidad

(ausencia de E.coli/coliformes, Enterococos fecales y Clostridium perfringens en 100 mL de muestra y los recuentos de aerobios en 1 mL de muestra),

sino ademas la ausencia de Pseudomonas aeruginosa y de Burklholderia cepacia en muestras de 100 mL en diferentes puntos de las instalaciones.

AGUAS COSMÉTICAS MICROBIOLOGÍA: FRECUENCIA DE MUESTREO

La frecuencia del muestreo queda a criterio profesional de cada instalación, en función del volumen de agua que emplee cada fábrica.

Pero parece un chiste que sea 1 vez al año o 1 vez al mes, como indicaba el anterior Real Decreto de aguas potables para las fábricas de alimentos.

Deberían ser varias muestras al día, ya que el agua es el mayor contaminante del cosmético, mucho más que los operarios, los envases, la maquinaria o el aire.

METODOLOGÍA AGUAS COSMÉTICAS MICROBIOLOGÍA

En cuanto al método de análisis, como siempre queda a criterio de cada profesional.

MICROKIT ha demostrado ya en numerosas ocasiones (mediante intercomparación y en múltiples validaciones)

que el método más habitual (la filtración de membrana MF) estresa a los microorganismos y obtiene una proporción absolutamente inaceptable de resultados falsamente negativos:

21% para E.coli/Coliformes,

6% para Enterocos fecales,

49% para Clostridium perfringens y

33% para Pseudomonas aeruginosa

(todavía no hay suficientes datos comparativos en el caso de Burkholderia cepacia, pero tampoco es que sean tan necesarios, a la vista de los anteriores).

EL MÉTODO QUE MEJOR FUNCIONA, NO ES SOLO QUE SEA MÁS CÓMODO DE EMPLEAR

Y por ello, promovimos el método y creamos medios adecuados para todos los parámetros, del otro procedimiento que demuestra la máxima sensibilidad (escasez de falsos negativos): el método Presencia/Ausencia (P/A).

En vez de filtrar los 100 mL de agua por una membrana contra la que chocan los microorganismos, y depositarla sobre una placa preparada de cada medio selectivo sólido, como se hace en el método estresante MF;

el método P/A consiste en dar alimento selectivo (caldo de cultivo específico) a las ufcs presentes en los 100 mL de agua y esperar a ver el cambio de color que provoca su crecimiento, evitando el estrés y la letargia de las células que quedan dañadas en MF.

GAMA COMPLETA

MICROKIT ha diseñado y validado hace ya más de 3 décadas todos los medios cromogénicos y selectivos adecuados para cada microorganismo:

Pseudomonas aeruginosa: Pseudocult P/A, que vira a rosa en 24-48h cuando está presente

Burkholderia cepacia: BCPT P/A, que vira a color vino tinto y opaco en 24 h cuando está presente

E.coli/Coliformes: MCC Colicult P/A, que vira a azul en 18 h en presencia de coliformes y da fluorescencia bajo luz de 366 nm y anillo rosa de indol positivo en caso de E.coli

Enterococos fecales : Enterocult P/A, que vira a negro y opaco en 18h cuando están presentes

Clostridium perfringens: Clostricult P/A, que vira a negro y opaco en 24-48h cuando está presente

Si se quiere conocer el número de ufcs de cada positivo, resulta tan fácil como emplear estos mismos caldos cromogénicos, en vez de en botes de 100 mL, con las cubetas reutilizables ¡cuidemos el medio ambiente! NMP Racks de MICROKIT;

y leer los pocillos positivos (los que viran al color indicado) en las tablas oficiales del método Número Más Probable (NMP, MPN), que era el oficial antes de la MF y vuelve a serlo ahora en el nuevo Real Decreto de este año 2023 gracias a los métodos alternativos que en él se mencionan.

MICROKIT ha desarrollado estos caldos en tres formatos.

-El más cómodo, en frascos tomamuestras, para añadir los 100 mL de muestra de agua en cada medio

-La versión más empleada, en viales prepesados para añadir a un bote con 100 mL de agua de muestra cada medio

-El más económico (1 €/u), en botes de 100 g de medio en polvo estéril con cucharilla dosificadora

Así, el mejor método de detección de patógenos e indicadores en agua, queda al alcance de todos los gustos.

AGUAS COSMÉTICAS MICROBIOLOGÍA: RECUENTO DE AEROBIOS

Por fin, para el recuento de aerobios en 1 mL de agua, MICROKIT ha creado y validado hace ya más de una década el único método alternativo que permite pasar de la muestra a la estufa de incubación en 10 segundos:

DryPlates-TC-Water, con el medio normativo indicado en el Real Decreto: el YEA Nutritivo.

Simplemente se añade 1 mL de muestra de agua a una placa con su DryPlate, se deja embeber unos segundos para la siembra en masa, sin tener que calentar ni enfriar agares, y se incuba.

Las colonias de aerobios heterotrofos crecen rojas y mucho más evidentes que con el método clásico;

y sin el punto crítico más destructivo de la microbiología clásica: la adición de agar caliente sobra la muestra.

Las DryPlates son las únicas placas deshidratadas que también están disponibles con Agar R2A-Farmacopea.

https://www.microkit.es/pdf/KITS-PA-AGUAS-EN-FRASCOS-TOMAMUESTRAS.pdf

https://www.microkit.es/pdf/KITS-PA-VIALES-POLVO-CALDOS-CROMOGENICOS-2021.pdf

https://www.microkit.es/pdf/KITS-PA-BOTES-100g-ESTERILES-CON-CUCHARITA.pdf

https://www.microkit.es/fichas/Dry-Plates-TC-Water-Prospecto.pdf

https://www.microkit.es/fichas/Dry-Plates-TC-R2-Prospecto.pdf

Si prefiere seguir con el método MF, MICROKIT también dispone de todos los medios de cultivo adecuados en plaquitas herméticas de filtración «PLAQUIS»:

https://www.microkit.es/pdf/plaquis.pdf

En Abril de 2024 MICROKIT lanza al mercado SEILAGUAS-COSMÉTICAS, único servicio intercomparativo para controlar la calidad de sus análisis de aguas de uso cosmético, en todos los parámetros que resultan necesarios. Solicite información para poder inscribirse (una ronda al año) en consultastecnicas@microkit.es

No se pierda nuestro vídeo de los viales P/A:

https://youtu.be/6OfsD7zU_8U

CROMOKIT CLOSTRIDIUM PERFRINGENS AGAR

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MEDIO CROMOGÉNICO PARA CLOSTRIDIUM PERFRINGENS

Clostridium perfringens Cromogenic Agar permite la detección y recuento más eficaces que el TSC Agar en aguas, alimentos y otras muestras

En MICROKIT seguimos innovando a pesar de que las normas ISO se estén convirtiendo en un freno a la innovación, son armas de doble filo, ya que:

-por un lado permiten a todos usar el mismo medio, pero

-por otro lado estancan a todos los que se someten ciegamente a ellas, al no poder usar medios más modernos que funcionan mejor, por el simple hecho de que la Norma es más antigua que el medio

Así es, por ejemplo este nuevo medio de cultivo que funciona mil veces mejor que el Agar TSC, no va a poder ser empleado por los laboratorios acreditados ISO 17025,

al menos hasta que alguien pague una fortuna para validarlo internacionalmente, algo que MICROKIT no se puede permitir.

La gran diferencia entre este medio y el TSC es que las colonias no revierten de negro a gris o blanco al sacarlas de la atmósfera de anaerobiosis

Eso en el TSC provoca numerosos falsos negativos que, al no tener colonias negras cuando se observan fuera de la jarra/bolsa, no se confirman, y se dan como negativas

En cambio en CROMOKIT-CP Agar, las colonias de Clostridium perfringens son naranjas, y siguen naranjas tras sacar las placas de la anaerobiosis

Además la extraordinaria fertilidad del medio provoca hasta un 500% más de colonias de C.perfringens en la placa de Cromokit-CP Agar con respecto a la placa de TSC Agar, como ya nos tienen habituados los medios enzimáticos respecto a los clásicos medios bioquímicos:

https://www.microkit.es/fichas/CROMOKIT-C-perfringens-Agar.pdf?v=2023

Prepárese para más de una sorpresa informativa cuando vea nuestro video sobre los medios Cromogénicos: https://www.youtube.com/watch?v=-JVPVWxY8ZE&t=271s

MEDIOS DE CULTIVO DESHIDRATADOS PARA MICROBIOLOGÍA EN ECOGRÁNULOS

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MEDIOS GRANULADOS, SON MEDIOS DE CULTIVO GRANULADOS PARA TRABAJAR MEJOR

MEDIOS GRANULADOS

DESHIDRATADOS PARA MICROBIOLOGÍA EN ECOGRÁNULOS

MEDIOS EN ECOGRÁNULOS

MICROKIT apuesta por la salud de los analistas con esta presentación de medios deshidratados tan original: Ecogránulos en vez de polvo

A diferencia de los demás medios de cultivo, que son en polvo, con los medios en Ecogránulos de MICROKIT, se va a ahorrar respirar polvo irritante (a menudo incluso tóxico) a la hora de abrir el bote, pesar el medio y añadirlo al agua.

Y además se va a ahorrar la formación de grumos a la hora de disolverlo en el agua.

Como podrá observar en la fotografía, no se trata de gránulos alargados como los de los piensos, porque eso requeriría la adición de un compactante (ej: huevo) que alteraría la composición original del medio de cultivo.

Nuestros ecogránulos se parecen más a los granos naturales de polen y se consiguen mediante un grajeado en seco (por compactación) seguido de una trituración en trocitos . Ya que si fuese en grajeas, tardaría mucho tiempo en disolverse en el agua.

Ventajas de los ecogránulos

-Su primera ventaja es que no levantan polvo a la hora de trabajar con ellos al abrir el bote, ni en la balanza, ni al añadirlos al agua para hidratarlos y esterilizarlos.

Deje de respirar medios en polvo, ya que es nocivo para su nariz, garganta, ojos y pulmones.

-Y su segunda ventaja es que se disuelven mucho más fácil en el agua que los medios en polvo.

Pesada y disolución mucho más cómodas y rápidas.

-Una ventaja adicional del Ecogránulo frente al polvo es que pierde el 99,9% de su capacidad higroscópica, o atracción de la humedad ambiental, al dismimuir drásticamente la relación superficie/volumen

Evite que los medios se conviertan en pedruscos como sucede con los medios en polvo en zonas húmedas

Sin los gradientes de densidad del polvo, que tras su almacenamiento, distribuyen sus diferentes componentes de forma heterogénea dentro del bote, al fondo los más densos. No imagina la diferencia que hay en las diferentes alturas de un bote de medio en polvo.

Ya no tendrá que agitar los botes de polvo antes de usar sus medios de cultivo deshidratados.

¡Emplee medios idénticos todos los días del año!

Gama de ecogránulos

Sólo ofrecemos en ecogránulos los medios de máximo consumo, dejando los demás en su formato polvo habitual.

Los 26 medios más vendidos, a su disposición. La gama actual de nuestros MEDIOS GRANULADOS es:

BUFFERED PEPTONE WATER ISO 6579 SALMONELLA, DILUCIONES GRANULADA
BUFFERED PEPTONE ClNa SOLUTION pH 7,0 PHARMACOPEA GRANULADA FTM FLUID THIOGLICOLLATE MEDIUM Pharmacopea-Esterilidad GRANULADO
TSB-TRIPTONA SOJA BROTH PHARMACOPEA-A GRANULADO TSB-media fill PHARMACOPEA-A GRANULADO
TSA-TRIPTONA SOJA AGAR PHARMACOPEA-B GRANULADO
PLATE COUNT AGAR-PCA AOAC RECUENTO DE AEROBIOS GRANULADO
SABOURAUD DEXTROSE AGAR PHARMACOPEA-C HONGOS GRANULADO SABOURAUD DEXTROSE BROTH PHARMACOPEA HONGOS GRANULADO
MALT EXTRACT AGAR APHA HONGOS GRANULADO
VRBL AGAR APHA, FIL COLIFORMES GRANULADO
VRBG AGAR ENTEROBACTERIAS PHARMACOPEA F, ISO 21528 GRANULADO
CCA MUGPLUS AGAR ISO 9308-1:2014 E.COLI / COLIFORMES GRANULADO
MAC CONKEY AGAR Pharmacopea-H, ISO 21150 COLIFORMES. GRANULADO
MAC CONKEY BROTH PURPLE Pharmacopea-G COLIFORMES. GRANULADO LACTOSE BROTH Pharmacopea-D GRANULADO MCC LAURYL COLICULT CROMO-FLUOROGENIC BROTH E.COLI / COLIFORMES GRANULADO
BRILLIANT GREEN BILE BROTH BGBL 2% APHA, FIL COLIFORMES-E.COLI GRANULADO EE BROTH MOSSEL Pharmacopea-E Enterobacterias GRANULADO XLD AGAR Salmonella GRANULADO
CETRIMIDE AGAR PSEUDOMONAS PHARMACOPEA-N GRANULADO GIOLITTI-CANTONI BROTH Staphylococcus aureus GRANULADO
BAIRD PARKER AGAR STAPH ISO 6888 PHARMACOPEA-O GRANULADO MANNITOL SALT AGAR Pharmacopea GRANULADO SPS AGAR CLOSTRIDIUM AGAR GRANULADO
BACILLUS CEREUS AGAR MOSSEL MYP ISO 7932 GRANULADO

https://www.microkit.es/fichas-tecnicas-medios-de-cultivo.htm

IDENTIFICACIÓN CERTERA DE COLONIAS

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SERVICIO DE IDENTIFICACIÓN MOLECULAR DE COLONIAS

IDENTIFICACIÓN CERTERA DE COLONIAS

MICROKIT pone a su disposición desde hace ya una década su servicio de Identificación molecular de colonias, con informe ISO 9001

Las galerías y equipos bioquímicos y enzimáticos que emplean la mayoría de laboratorios a menudo provocan identificaciones erróneas de colonias,

o en el mejor de los casos, identificaciones truncadas en las que no se llega a ningún nombre.

Esto es debido a que sus bases de datos (Bacdive) se crearon hace décadas para los microorganismos clínicos.

No para los ambientales que afectan a la industria, y que suelen ser cepas muy diferentes a los patógenos clínicos.

Para aumentar la dificultad, las galerías actuales (excepto los Enterotubos Ref. Microkit 49578619) usan medios liofilizados,

en vez de los medios agarizados e hidratados con los que las diferentes cepas fueron caracterizadas bioquímica/enzimáticamente por los autores que las describieron.

De modo que los cambios de color a veces son muy subjetivos.

Nuestro servicio de ID molecular es una identificación genética por secuenciación parcial de genes concretos del ADN, no es una identificación por espectrometría de masas (Maldi-Tof).

La diferencia entre ambas técnicas modernas es la base de datos, hasta 10 veces superior en la identificación genética…

…al llevar ésta muchos más años siendo completada por todos los microbiólogos de las universidades y centros de investigación que caracterizan y describen la secuencia de cepas, tanto clásicas como nuevas.

Por ello, la probabilidad de nombrar correctamente la colonia identificada por secuenciación es muy superior a la de cualquier otra técnica; >99%

De modo similar a lo que ocurre en la conocida prueba de ADN para el test de paternidad humana.

Secuenciamos en bacterias el gen ribosómico 16s, el que mejor define la especie;

y en hongos (levaduras y mohos), el espacio intergénico 5.8S-ITS entre el 18S y el 28S

Además en nuestro informe encontrará no sólo el nombre, la secuenciación y la comparativa GenBank,

sino además las características de la especie identificada

y lo más importante: su caracterización oficial TRBA como inocuo o patógeno (Grupos de riesgo biológico 1 ó 2).

Por dificultades en el envío de las placas con colonias a nuestro laboratorio, este servicio queda limitado a la España peninsular y Portugal.

https://www.microkit.es/pdf/identificacion-molecular.pdf

BEA BILIS ESCULINA AZIDA AGAR

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Bilis Esculina Azida Agar (BEA) para la confirmación de colonias de enterococos fecales crecidas en Slanetz-Bartley Agar (según ISO 7899).

Y método rápido para siembra directa de la membrana filtrada y detección y recuento de Enterococos fecales en aguas de consumo y envasadas en las primeras 24 horas.

Confirmación de estreptococos fecales UNE-EN ISO 7899-2:2001, UNE 77076:1991, BOE 45 de 21/2/2003 de aguas de consumo humano, BOE 259 de 29/X/2003 de aguas de bebida envasadas

COMPOSICIÓN

Bilis de buey 10,00 g

Peptona 3,00 g

Triptona 17,00 g

Extracto levadura 5,00 g

Cloruro sódico 5,00 g

Esculina 1,00 g

Citrato férrico-amónico 0,50 g

Azida sódica 0,15 g

Agar-agar 15,00 g

(Fórmula por litro)

pH final: 7,1 ± 0,2

PRECAUCIÓN:

CONTIENE AZIDA SÓDICA, TÓXICA Y EXPLOSIVA EN CONTACTO CON PLOMO.

EVITAR CONTACTO CON PIEL Y MUCOSAS. NO DESECHAR POR LAS CAÑERÍAS.

PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO

MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO.

AGITE EL BOTE ANTES DE USAR.

DESHIDRATADO CODIGO: DMT160

PRESENTACION:

MEDIO DESHIDRATADO, PLAQUITAS HERMÉTICAS, TUBOS PREPARADOS PARA FUNDIR Y ELABORAR PLACAS

PREPARACIÓN

Disolver 57 gramos en 1 litro de agua bidestilada.

Calentar, agitando, hasta ebullición, para la total homogeneización.

Colonias de Estreptococos fecales: blancas con viraje del medio a negro

El color final del medio es ámbar iridiscente.

SIEMBRA E INTERPRETACIÓN

Sembrar las colonias típicas crecidas en el medio Slanetz Bartley Agar (SB) en superficie, extendiendo con asa de Digralsky.

Sembrando la membrana procedente de SB, se consigue confirmar el 100% de las colonias.

También se puede sembrar estría tras enriquecimiento.

Incubar 2-18 h (membranas desde SB) ó 18-44 horas (resto) a aproximadamente 44 ºC.

Considerar como enterococos intestinales todas aquellas colonias en las que el medio circundante aparece entre tostado y negro.

Altos recuentos pueden interferir en la diferenciación de las colonias positivas debido a la difusión del color pardo-negro en la placa.

NOTA PARA ACELERAR LOS RESULTADOS

En MICROKIT hemos validado el uso directo de nuestro BEA sin el paso previo por Slanetz-Bartley, con resultados no sólo más rápidos (24h en lugar de 48h);

sino además sorprendentemente mejores: 117-237 % de exactitud respecto al SB.

Una excelente noticia para las envasadoras de agua, que podrán ahorrar la mitad de sus stocks de producto terminado si usan tambien nuestro Rapid Pseudomonas Cromokit Agar.

https://www.microkit.es/fichas/BILE-ESCULIN-AZIDE-AGAR-BEA-RAPID.pdf

Los enterococos fecales son catalasa negativos, no burbujean al añadir el reactivo a sus colonias:

https://www.microkit.es/fichas/CATALASA-M-IDENT.pdf?v=2023

https://www.microkit.es/monograficos/16-Enterococos-fecales-monograf–a.pdf

KING A AGAR (Piocianina)

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Agar KING A (piocianina) para la confirmación de colonias crecidas en Agar Cetrimida y que resultan sospechosas de ser Pseudomonas aeruginosa

Confirmación de Pseudomonas aeruginosa por su producción de piocianina. (ISO 22717 de cosméticos)

COMPOSICIÓN

Peptona 20,0 g

Sulfato potásico 10,0 g

Cloruro magnésico 1,4 g

Agar-agar 15,0 g

(Fórmula por litro)

pH final: 7,2 ± 0,2

PREPARACIÓN

Disolver 46,5 g de medio en 1 litro de agua destilada que contenga 10 ml de glicerol y dejar embeber durante 10 minutos.

Calentar agitando hasta ebullición para su disolución.

Autoclavar a 121 ºC durante 15 minutos.

PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO

AGITE EL BOTE ANTES DE USAR.

MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO

DESHIDRATADO CODIGO: DMT176

PRESENTACIÓN: MEDIO DESHIDRATADO, TUBOS PREPARADOS

NOTA: Medio que exalta la producción de piocianina en Pseudomonas aeruginosa.

Este pigmento azulado difunde en el medio de cultivo.

A veces la pioverdina (verde) y las piomelaninas (pardo) enmascaran el color azul de la piocianina.

La fluorescencia y la pioverdina se exaltan en el Agar B de King (F).

SIEMBRA

Preparar tubos inclinados con pico corto y sembrar en estria.

Incubar a 30-32 ºC aproximadamente, durante 4-5 días, en estufa húmeda para prevenir la desecación y con el tapón sin apretar.

INTERPRETACIÓN

Pigmentación azul: Pseudomonas aeruginosa productor de piocianina.

Otras pigmentaciones: Mezcla de varios pigmentos: Añadir 1 ml de cloroformo y agitar unos minutos.

La piocianina se disolverá, coloreando de azul el disolvente.

Añadir unas gotas de HCl y si aparece un viraje a rojo, se confirma la presencia de piocianina.

https://www.microkit.es/fichas/KING-A-PSEUDOMONAS-P-AGAR.pdf

https://www.microkit.es/monograficos/13-Pseudomonas-aeruginosa-monograf–a.pdf

KING B AGAR (Fluoresceína)

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Agar King B (Fluoresceína): medio selectivo para la confirmación de Pseudomonas aeruginosa

El Agar King B (Fluoresceína) es un medio de cultivo diseñado para la confirmación e identificación de colonias sospechosas de Pseudomonas aeruginosa, especialmente aquellas previamente aisladas en Agar Cetrimide.

Cumple con las normas UNE-EN 12780:2003 (BOE nº 259 de 29 de octubre de 2003, relativa al análisis microbiológico de aguas de bebida envasadas) y ISO 16266:2006, ambas destinadas a la detección y confirmación de Pseudomonas aeruginosa mediante su capacidad de producir fluoresceína (pioverdina).

Ficha técnica oficial del Agar King B (Fluoresceína)

Principio del medio

El Agar King B permite evidenciar la producción del pigmento pioverdina, responsable de la fluorescencia verdosa o amarillenta bajo luz ultravioleta (366 nm).
Este pigmento es característico de las especies de Pseudomonas del grupo fluorescens (P. putida, P. fluorescens, P. aeruginosa), y su detección constituye una prueba clave para confirmar la identidad de Pseudomonas aeruginosa en muestras ambientales, clínicas o alimentarias.

Este medio resalta la producción de pioverdina (fluoresceína) y reduce la síntesis de piocianina, pigmento azul verdoso que se confirma mediante el Agar King A (P) complementario.

Composición (por litro de medio)

Peptona …………………………….. 20,0 g
Sulfato de magnesio (heptahidratado) …. 1,5 g
Fosfato dipotásico (hidrogenado) …….. 1,5 g
Agar-Agar ……………………………. 15,0 g
pH final: 7,2

Antes de la esterilización, se añade 10 ml de glicerol por litro.

Preparación del medio

Disolver 38 g de medio deshidratado en 1 litro de agua bidestilada.
Añadir 10 ml de glicerol.
Calentar con agitación hasta ebullición para asegurar la completa disolución.
Esterilizar en autoclave a 121 °C durante 15 minutos.
Preparar tubos inclinados con pico largo para facilitar la observación del pigmento fluorescente.

⚠️ Uso exclusivo en laboratorio.
Mantener el envase bien cerrado, en lugar seco, fresco y oscuro.
Agitar antes de usar para homogeneizar los componentes.

Presentaciones y código

Medio deshidratado
Tubos preparados listos para uso
Código: DMT182

Procedimiento de siembra

Seleccionar una colonia sospechosa obtenida en Agar Cetrimide u otro medio selectivo.
Sembrar en estría sobre la superficie del Agar King B (Fluoresceína).
Incubar a 34–38 °C durante 2–5 días.
Si no se observa pigmentación, prolongar la incubación a temperatura ambiente hasta 20 días, ya que la producción de pioverdina puede ser lenta en algunas cepas.

Interpretación de resultados

Observar las placas o tubos en la oscuridad bajo luz ultravioleta de 366 nm
(por ejemplo, con la linterna UV MICROKIT VMT050).

Resultado positivo: aparición de fluorescencia verdosa o amarillenta → confirma la presencia de pioverdina, característica de Pseudomonas aeruginosa y especies del grupo fluorescente.
Resultado negativo: ausencia de fluorescencia → puede indicar cepas no fluorescentes o especies no pertenecientes al grupo fluorescens.

Según la Norma PrEN 12780, debe considerarse positiva para Pseudomonas aeruginosa toda colonia que:

Presente cualquier tipo de fluorescencia en este medio, y además sea:
- Acetamida positiva
- Citocromo oxidasa positiva

Ficha técnica Acetamide Broth (MICROKIT)
Monográfico sobre Pseudomonas aeruginosa (MICROKIT)

Ventajas del Agar King B (Fluoresceína)

Cumple con normas UNE e ISO internacionales.
Excelente diferenciación visual de Pseudomonas aeruginosa mediante fluorescencia.
Complementario del Agar King A (Piocianina) para una identificación más completa.
Ideal para laboratorios de microbiología de aguas, alimentos, medicamentos y cosméticos.
Fabricado por MICROKIT con altos estándares de calidad y control.

Seguridad y almacenamiento

Producto exclusivo para uso en laboratorio.
No ingerir ni inhalar.
Mantener el envase cerrado, en lugar fresco, seco y protegido de la luz.
Esterilizar y desechar los residuos conforme a la legislación medioambiental vigente.

Información y contacto

Para más información técnica, precios actualizados o pedidos de Agar King B (Fluoresceína), contacte con nosotros:

microkit@microkit.es
91 897 46 16

ACETAMIDA BROTH

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Caldo Acetamida para la confirmación de Pseudomonas aeruginosa a partir de colonias sospechosas crecidas en Agar Cetrimida

Caldo para enriquecimiento y confirmación de Pseudomonas aeruginosa en aguas envasadas (prEN 12780:1999, UNE-EN 12780:2002, BOE 259 de 29/X/2003 de aguas de bebida envasadas, ISO 16266)

COMPOSICIÓN

Acetamida 2.00 g

Cloruro Sódico 0.20 g

Sulfato Magnésico 0.20 g

Sulfato Férrico 0.05 g

DiH-Fosfato Potásico 1.00 g

Molibdato Sódico 0.50 g

(Fórmula por litro)

pH final: 7,0 ± 0,2

MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO, EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO.

PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO.

PRECAUCIÓN: CONTIENE ACETAMIDA, CARCINOGÉNICA E IRRITANTE

Caldo Acetamida para la confirmación de Pseudomonas aeruginosa a partir de colonias sospechosas crecidas en Agar Cetrimida

PREPARACIÓN

Disolver 3.95 g de medio en 1 litro de agua bidestilada.

Calentar hasta ebullición, agitando hasta la total homogeneización.

No sobrecalentar.

Autoclavar a 121 ºC durante 15 minutos.

Preparar tubos.

PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO.

AGITE EL BOTE ANTES DE USAR

MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO, EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO.

DESHIDRATADO CÓDIGO: DMT003

PRESENTACIÓN:

MEDIO DESHIDRATADO, TUBOS PREPARADOS

MODO DE EMPLEO E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

A partir de cultivos en Nutrient Agar-Pseudomonas y tras comprobar que es un microorganismo oxidasa positivo (KOT050), este medio permite la confirmación por la producción de amonio a partir de acetamida.

Inocular un tubo con el cultivo obtenido en Nutrient Agar, incubar a 34-38 ºC aproximadamente durante 16-24 horas.

Añadir 1-2 gotas de Reactivo Nessler (SDA002).

Observar la producción de amonio por la presencia de pigmento de color amarillo o anaranjado.

NOTA: El apelmazamiento del medio es normal , dada la elevadísima concentración de sales. Puede ser necesario homogeneizarlo (cacillo extralargo, espátulas…) antes de usarlo, siempre que no desprenda mal olor ni sea un bloque.

https://www.microkit.es/fichas/ACETAMIDE-BROTH.pdf

https://www.microkit.es/fichas/PS-AERUGINOSA-M-IDENT-KIT-ISO-12780–ISO-16266.PDF

https://www.microkit.es/monograficos/13-Pseudomonas-aeruginosa-monograf–a.pdf

BCSA Burkholderia cepacia complex

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BCSA Burkholderia cepacia complex Selective Agar es el medio de cultivo recomendado por USP para la detección de este patógeno emergente

BCSA Burkholderia cepacia complex

En 2019 la Farmacopea USP dictó al fin la necesidad de buscar este grupo patógeno en medicamentos inhalados o que tengan que ver con el aparato respiratorio.

Acabó así un periodo de vacío legal como ocurría también 2 décadas atrás con Legionella pneumophila.

USP habla de un medio concreto, el BCSA, aunque existen otros dos medios más típicos: El BCPT Selective Agar, basado en el piruvato, con polimixina y ticarcilina; y el OFPBL Agar, basado en la fermentación de la lactosa.

BCSA Burkholderia cepacia complex Selective Agar

https://www.microkit.es/fichas/BCSA-BURKHOLDERIA-COMPLEX-SELECTIVE-AGAR-Base.pdf

En nuestra experiencia, el BCPT cromogénico selectivo es el que menos falsos positivos y menos falsos negativos provoca de los 3 medios:

https://www.microkit.es/fichas/CROMOKIT-BURKHOLDERIA-Agar.pdf

Antes denominada Pseudomonas cepacia, Burkholderia cepacia es una especie muy resistente que agrupa numerosas cepas de bacilos Gram negativos, Oxidasa positivos (a menudo oxidasa-lentos), No Fermentadores de Glucosa, Móviles.

Algunas cepas pueden crecer en Agar Cetrimida sin fluorescencia y en Agar CN.

Muchas cepas no crecen a más de 35°C.

En TSA algunas cepas consiguen crecer, con colonias regulares, redondeadas, blanquecinas, crema o amarillas.

Deben identificarse molecularmente (MICROKIT SFI004), ya que las galerías bioquímicas no son nada fiables en este tándem de cepas denominado B.cepacia complex.

Debe el nombre genérico a su descubridor y el específico, a haber sido descubierta infectando cebollas (Allium cepa), aunque se encuentra también en aguas y biofilms.

Es una de las bacterias más versátiles que se conocen, capaz de usar más de 200 compuestos como nutrientes, entre los cuales se encuentran antibióticos, desinfectantes, pesticidas, hidrocarburos aromáticos policíclicos (HPA), tricloroetileno, policlorobifenilos, ftalatos… además de producir sus propios antibióticos para suprimir el crecimiento de otros competidores, así como matrices especiales para generar biofilms, lo que la hace extremadamente difícil de erradicar.

Es frecuente como saprófito en aguas, ambientes húmedos y suelos. Su colonización en forma de biofilms puede acabar con los mas sofisticados sistemas de ultrapurificación de agua para uso en industrias farmacosméticas.

Se emplea en biorremediación de contaminaciones y en control de plagas fúngicas agrícolas, pero tambien algunas cepas son serios patógenos oportunistas en infecciones nosocomiales.

Parece que junto a otros Pseudomonadinos esta bacteria fué, desde el Arcaico, corresponsable del paso de la vida a Tierra, al sintetizar ciertas macromoléculas que actúan como inductores de la lluvia.

https://www.microkit.es/monograficos/8-Burkholderia-cepacia-complex-monograf–a.pdf