COSMETIKIT ® CLASSIC

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MICROKIT COSMETIKIT ® CLASSIC

cosmetikit-classic, kit completo para el análisis microbiológico estándar de productos cosméticos y sus materias primas

INTRODUCCION          

Con este kit y la simple ayuda de un Baño María y una estufa de cultivos, toda industria cosmética puede realizar el análisis microbiológico completo en 20 muestras diferentes, de la forma más eficiente que un laboratorio pueda realizar.

Si desea controlar también el agua, utilice nuestro COSMETIKIT-WATER (ref: KMT450). Si desea controlar también las superficies de trabajo, recipientes, etc, utilice nuestros laminocultivos DESINFECTEST® (Ej.ref: MBN407) y para las manos de operarios nuestros KITS PARA MANIPULADORES (ref: kmt020).

CONTENIDO (CADUCIDAD APROX. 1 AÑO DESDE FABRICACION)

  • 20 Jeringas 20ml estériles (sin aguja)COSMETIKIT CLASSIC
  • 20 Pipetas Pasteur estériles.
  • 2 x 10 Frascos 90ml c/perlas para tratamiento de la muestra (LPT100 Broth Incoloro  RPL054P).
  • 20 Tubos para recuento total (LPT100.Neutralizing Agar Purple TPL200).
  • 20 Tubos para levaduras y mohos (Rosa Bengala CAF agar TPL072).
  • 20 Tubos para Pseudomonas aeruginosa (Cetrimide Agar TPL100).
  • 20 Tubos para E.coli y demás Coliformes (MUGPLUS Cfs.Agar TPL400).
  • 20 Tubos para Staphylococcus aureus (Mannitol Salt Agar TPL066).
  • 20 Tubos inclinados para Candida albicans (Biggy Agar TPL062).
  • 20 Tubos para Burkholderia cepacia (BCPT Agar TPL005)
  • 120 Placas Petri  estériles de 90 mm.

MATERIAL NECESARIO NO INCLUIDO

1. Estufa a 35-37ºC (VRP001), Baño María, hervidor o microondas.

2. Zona aséptica: lámpara de alcohol (VLM068), portabunsen o envirostéril (VJM002).

3. Test confirmativos de colonias sospechosas

4. Cepas de referencia, de trabajo o cuantitativas para validar los reactivos una vez llegados a fábrica o tras almacenamiento prolongado o inadecuado

5. Participar en servicios intercomparativos como SEILAPARFUM para validar procedimientos y analistas.

 

MODO DE EMPLEO

(Seguir al pie de la letra para obtener resultados correctos y validados)

  1.  Añadir con una jeringa estéril, asépticamente, 10 gramos o 10 ml de muestra a un Frasco 90ml LPT Neutralizing  Broth con perlas. Cerrar el tapón. Mezclar agitando y dejar actuar no menos de 20 ni más de 30 minutos a 21-25°C aproximados. Así se obtiene la solución madre (muestra tratada).
  2. Con la ayuda de una Pipeta Pasteur estéril añadir de inmediato 1 ml de la muestra tratada recién agitada a una placa Petri estéril, en condiciones asépticas. Repetir la operación en otra placa, con la misma pipeta y para la misma muestra. Es conveniente realizar duplicados (Pida TPL200 y TPL072).
  3. Fundir al Baño María un tubo de LPT Neutralizing Agar y otro de Rosa Bengala CAF, hasta que estén  totalmente licuados (si duplica las placas, funda dos tubos de cada medio por muestra).
  4. Cuando se hayan enfriado lo suficiente para no quemar la mano, pero sigan líquidos, añadir cada uno a una placa con el mililitro de muestra tratada. Los mohos tambien se pueden sembrar en superficie, 0,1-0,33 ml mediante asa de Digralsky. Mejor sembrar en masa 1ml y en superficie 0,1ml.
  5. Hacer girar las placas sobre la mesa 10 veces en cada sentido para asegurar la mezcla del medio con la muestra, con cuidado para que no rebose el líquido ni llegue a la tapa de la placa. Dejar solidificar sin tocar (si la temperatura ambiente no es elevada, 10-15 minutos serán suficientes).

  6. Si prefiere usar un método más moderno y ahorrarse todas estas fusiones-enfriamientos de medios: UTILICE COSMETIKIT EASY-PLUS

  1. Incubar las placas en posición invertida y en total oscuridad, 3-5 días a 30-35 ºC (LPT Neutralizing Agar) y (3)-5 días a 20-25 ºC (Rosa Bengala Caf.Agar).
  2. A la vez que esas placas, incubar el resto de muestra tratada en LPT Broth durante 48 h a 30-35°C para obtener la muestra tratada y enriquecida,  necesaria para la búsqueda de patógenos.
  3. Añadir unas gotas (tras enriquecer no hace falta más precisión) de la muestra enriquecida, recién agitada, a un tubo inclinado Biggy Agar Candida, con una misma pipeta estéril y repartir, volteando.
  4. Añadir unas gotas de muestra tratada enriquecida, recien agitada, a una placa Petri estéril, en condiciones asépticas. Repetir en otra placa, con la misma pipeta y para la misma muestra.
  5. Fundir al Baño María un tubo de MUGPLUS Cfs.Agar, otro de Mannitol Salt Agar, otro de Cetrimide Agar y otro de BCPT Agar hasta que estén totalmente licuados.
  6. Cuando se hayan enfriado lo suficiente para no quemar la mano, pero sigan líquidos, añadir el contenido del MUGPLUS y del Mannitol a sendas placas con las gotas de muestra enriquecida.

  1. Puede usar un método más moderno y ahorrarse todas estas fusiones-enfriamientos de medios: UTILICE COSMETIKIT EASY-PLUS

  1. Hacer girar las placas sobre la mesa 10 veces en cada sentido para asegurar la mezcla del medio con la muestra, con cuidado para que no rebose el líquido ni llegue a la tapa de la placa. Dejar solidificar sin tocar. Esta siembra en masa es imprescindible en Coliformes-E.coli y en estafilococos.
  2. Verter el contenido del Cetrimida y del BCPT en sendas placas Petri estériles y dejar solidificar. Sembrar en zigzag sobre su superficie una gota de la muestra enriquecida recién agitada.
  3. Es una buena práctica sembrar además en otra placa de LPT Agar, en zigzag, una gota del enriquecimiento recién agitado para aislar colonias e identificarlas (¡no para contarlas!), a fin de aumentar la sensibilidad para cepas  estresadas, que podrían no crecer en los medios selectivos.
  4. Incubar las placas en posición invertida, y los tubos de Candida albicans en posición vertical, durante 24-72 horas a 30-35 ºC. No apilar más de 5 placas y dejar espacio entre las pilas, y entre éstas y las paredes de la estufa.

INTERPRETACION DE RESULTADOS

El recuento total (placas de Neutralizing Agar) no conviene que sea superior a 100-1000 ufc/ml ó gramo de muestra inicial, según las exigencias (cosmética infantil-general). De modo que no deben aparecer más de 10-100 colonias por placa, dada la dilución efectuada en la solución madre. Lo mismo para recuento de levaduras (colonias convexas) y mohos (colonias filamentosas) (Placas Rosa Bengala CAF Agar).  De lo contrario, y siempre que no haya patógenos, se puede reprocesar el lote.

No debe aparecer ninguna colonia de Escherichia coli (colonias azules en placas de MUGPLUS Cfs.Agar; las colonias rosas en este medio son indicadoras de coliformes, que sin ser patógenos, ni indicadores exclusivos de contaminación fecal, suelen provocar alteraciones en la muestra), de Pseudomonas aeruginosa (colonias amarillas-verdosas o pardo-rojizas en placas de Agar Cetrimida), de Burkholderia cepacia (colonias blancas o salmón, con medio virado a fucsia, en BCPT), ni de Staphylococcus aureus (colonias amarillas en placa de Agar Mannitol), patógenos procedentes de contaminación fecal, del agua, del biofilm del agua y de operarios-aire, respectivamente.

Si aparece alguna colonia parda (que no provoque viraje de color del medio a pardo-negro) en el tubo de Biggy Agar, será de Candida albicans, lo que demuestra contaminación por mucosas de operarios portadores. Si aparece cualquiera de los 5 patógenos, hay que destruir el lote.

Para confirmar definitivamente, consúltenos sobre nuestros kits de identificación de colonias sospechosas.

Para más información no dude en ponerse en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16

Ver también el kit más moderno «COSMETIKIT EASY-PLUS» cuya ventaja es que no hay que fundir medios, manteniendo la larga caducidad del COSMETIKIT clásico.

https://www.microkit.es/pdf/cosmetikit.pdf

COSMETIKIT ® EASY-PLUS

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COSMETIKIT ® EASY-PLUS

COSMETIKIT ® EASY-PLUS es el Kit análisis microbiológico cosméticos, todos los parámetros para un correcto análisis

 TOTALMENTE ACORDE  AL MANUAL DE MICROBIOLOGÍA COSMÉTICA DEL MINISTERIO DE SANIDAD Y A LAS DE  NORMAS  ISO SOBRE  MICROBIOLOGÍA COSMÉTICA, MEJORADAS

Kit análisis microbiológico de cosméticos. Con este kit y la simple ayuda de una estufa de cultivos, toda industria cosmética puede realizar el análisis microbiológico completo en 60 muestras diferentes, de la forma más eficiente que un laboratorio pueda realizar. CADUCIDAD: APROX. 1 AÑO DESDE FABRICACION 

Si desea controlar el agua, utilice nuestros kits Cosmetikit®-Water, especialmente diseñados para microbiología de aguas de uso cosmético. Si desea controlar también las superficies de trabajo, recipientes, etc., utilice nuestros laminocultivos DESINFECTEST®. Y para el control de operarios le ofrecemos nuestro MANIPULADORES-KIT. 

CONTENIDO (caja de 60 TEST completos) Kit análisis microbiológico cosméticos

–  60 Jeringas 20 ml estériles (sin aguja)

–  60 Pipetas Pasteur estériles

–  6 x 10 Frascos LPT 100 Broth Incoloro 90 ml CON PERLAS para tratamiento de 10 gramos de muestra

–  60 Dry Plates ® TC para recuento total de aerobios.

–  Otras 60 Dry Plates ® YM para recuento total de hongos (levaduras y mohos).

–  60 Dry Plates ® X-SA para detección de Staphylococcus aureus.

–  Otras 60 Dry Plates ®  EC para detección de coliformes y E. coli.

–  60 Dry Plates ®  CANDI para detección de Candida albicans

–  Otras 60 Dry Plates ®  PS para detección de Pseudomonas aeruginosa

–  60 Dry Plates ®  BCPT para detección de Burkholderia cepacia, el emergente de los cosméticos.

– Y 60 Dry Plates ®  CUP12A para detección de los demás patógenos «no especificados», que generan la mayoría de retiradas de mercado de los cosméticos, porque la mayoría de laboratorios aún cree que no necesitan contemplarlos.

MATERIAL NECESARIO NO INCLUÍDO

  • Estufa a 35-37 ºC (PT2499),
  • Ø   Zona aséptica: Portabunsen (ME2195+ME2196) y Envirostéril (VJM002) si no se dispone de cabina de flujo laminar.
  • Test confirmativos de colonias sospechosas (todos disponibles consultando en MICROKIT).
  • Cepas de referencia, de trabajo o cuantitativas para validar los reactivos una vez llegados a fábrica o tras almacenamientos prolongados o inadecuados (Ver lentejas cuantitativas MICROKIT)
  • Participar en servicios intercomparativos de microbiología de cosméticos para validar procedimientos y analistas en sus propias instalaciones.

MODO DE EMPLEO Kit análisis microbiológico cosméticos

1.- Añadir con una jeringa estéril, asépticamente, 10 gramos o 10 ml de muestra a un Frasco 90ml LPT Neutralizing Broth con perlas. Cerrar el tapón. Mezclar agitando y dejar actuar no menos de 20 ni más de 30 minutos a 21-25°C aproximados. Así se obtiene la solución madre (muestra tratada).

2.- Con la ayuda de una Pipeta Pasteur estéril añadir de inmediato 1 ml de la muestra tratada recién agitada al centro de la base de una Dry Plates ® TC, para recuento de aerobios, en condiciones asépticas. En todas las Dry Plates ®, añadir la muestra a la placa y luego dejar caer encima el disco con medio (nunca al revés). La muestra se auto-difundirá inmediatamente sin necesidad de asas o aplicadores. Es conveniente realizar duplicados de placas de recuento de aerobios, para poder incubar una a 35°C y otra a 25°C (pida una caja adicional de la referencia DPP001). Repetir la operación en una Dry Plates ® YM, para recuento de hongos (levaduras y mohos) con la misma pipeta y para la misma muestra.

3.- Incubar las placas Dry Plates ® en posición invertida y en total oscuridad, 1-3 días a 30-35 ºC (una de las TC) y 2-4 días a 20-25 ºC (la otra TC y la YM).

4.- A la vez que esas placas, incubar el resto de muestra tratada en LPT Broth durante 48 h a 30-35°C para obtener la muestra tratada y enriquecida,  necesaria para la búsqueda de patógenos.

SEGUIMOS CON EL ANÁLISIS

5.- Tras este enriquecimiento para patógenos, añadir 1 ml de la muestra enriquecida, recién agitada, al centro de la base de una Dry Plates ® X-SA para detección de Staphylococcus aureus. Repetir la operación en una Dry Plates ®  EC para detección de E.coli y demás Coliformes, con una misma pipeta estéril. Hacer lo mismo en una Dry Plates ®  CANDI para detección de Candida albicans. Repetir la operación en una Dry Plates ® PS   para detección de Pseudomonas aeruginosa.  hacer lo mismo en una Dry Plates ®  BCPT para detección de Burkholderia cepacia, el patógeno emergente de los cosméticos. En todas las Dry Plates ®, añadir la muestra a la placa y luego dejar caer encima el disco con medio (nunca al revés).

dry plates uso

6.- Es una buena práctica sembrar además en otra placa de Dry Plates ® TC, 1 ml del enriquecimiento recién agitado para aislar colonias e identificarlas (¡no para contarlas!), a fin de aumentar la sensibilidad para cepas  estresadas, que podrían no crecer en los medios selectivos.

7.- Incubar las placas Dry Plates ® en posición no-invertida, separándolas del calor del metal de la base (o gradilla) de la estufa, con una placa vacía, durante 24-72 horas a 30-35 ºC. No apilar más de 5 placas y dejar espacio entre las pilas, y entre éstas y las paredes de la estufa. Dejar en la estufa un vaso lleno de agua para evitar la desecación de los medios DryPlates ®.

 INTERPRETACION DE RESULTADOS 

El recuento total (Dry Plates ® TC, colonias rojas 1) no conviene que sea superior a 100-1000 ufc/ml ó gramo de muestra inicial, según las exigencias (cosmética infantil-general). De modo que no deben aparecer más de 10-100 colonias por placa, dada la dilución efectuada en la solución madre. Lo mismo para recuento de levaduras (Dry Plates ® YM, colonias no filamentosas 2a) y mohos (idem, colonias filamentosas 2b). De lo contrario, y siempre que no haya patógenos, se puede reprocesar el lote. Esta precisión no se puede obtener utilizando placas preparadas clásicas, ya que éstas no absorben 1 ml y en el mejor de los casos (que absorban bien 0,3 ml), su rango inferior de detección sería excesivo para estas necesidades (3 colonias están muy por debajo de la incertidumbre mínima necesaria en un recuento en placa).

No debe aparecer ninguna colonia de Escherichia coli (colonias o manchas azules 3a en Dry Plates ®  EC; las colonias o manchas rosas 3b en este medio son indicadoras de coliformes, que sin ser patógenos, ni indicadores exclusivos de contaminación fecal, suelen provocar alteraciones en la muestra),ni deStaphylococcus aureus (colonias o manchas azules 4 en Dry Plates ® X-SA), ni de Pseudomonas aeruginosa (colonias o manchas rojas con fluorescencia 5 en Dry Plates ®-PS),ni de Burkholderia cepacia (colonias o manchas blancas o salmón, con medio virado a fucsia 6, en Dry Plates ®  BCPT),ni de Candida albicans (colonias o manchas pardas que no provoquen viraje de color del medio a pardo-negro 7 en el Dry Plates ®CANDI, patógenos procedentes de contaminación fecal (coliformes yE.coli), del agua (Pseudomonas), del biofilm del agua (Burkholderia), de operarios portadores o del aire-superficies (Staphylococcus, Candida).

cosmetikit easy

Si aparece cualquiera de los 5 patógenos, hay que destruir el lote. Para confirmar definitivamente, consúltenos sobre nuestros kits de identificación de colonias sospechosas.

Si desea más información sobre nuestro COSMETIKIT EASY-PLUS rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto . O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16 

https://www.microkit.es/pdf/COSMETIKIT-EasyPlus.pdf

Solicite además las DryPlates-CUP12A, nuevo medio para la detección de los demás patógenos que crean retiradas de mercado de cosméticos, también en formato de placas preparadas deshidratadas, y que, junto a COSMETIKIT-EASY-PLUS, le permitirá seguir a rajatabla y completamente  la legislación actual en microbiología de cosméticos.

https://www.microkit.es/monograficos/23-Monograf–a-CURSO-DE-MICROBIOLOG–A-COSM–TICA-EN-LA-TERCERA-D–CADA-DEL-SIGLO-XXI.pdf

 

BUFFERED PEPTONE NEUTRALIZING WATER

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Agua peptonada efecto matriz: Buffered Peptone Water Neutralizing para evitar el «efecto matriz» provocado por los conservantes alimentarios, que provocan falsos negativos y recuentos muy por debajo de la realidad. Sustituto del Agua Peptonada Tamponada Buffered Peptone Water clásica en alimentos que contienen conservantes, sean declarados, sean especias saborizantes (ajo, pimentón, pimienta, mostaza, aromáticas…), grasas u otros conservantes/inhibidores naturales o artificiales, que pueden enmascarar la presencia de patógenos. Es decir, en casi todos los alimentos. Incluso inactiva los metabolitos de la flora acompañante que podrían enmascarar el crecimiento del microorganismo diana en el Agua Peptonada Tamponada clásica. Primer caldo, patentado, que neutraliza estos aspectos tan olvidados por la Normativa, acerca del efecto matriz. Diseñado por MICROKIT a raíz de los resultados tan mediocres que obtenían muchos laboratorios usuarios de Agua de Peptona Tamponada, fuese cual fuese el parámetro microbiológico comparado, en muchos alimentos, en los servicios intercomparativos Seilalimentos.

COMPOSICIÓNbuffered neutalizing

  • Polipeptona bacteriológica     15,0 g
  • Extracto de Levadura                 5,0 g
  • Cloruro sódico                             7,5 g
  • Fosfato disódico                          4,5 g
  • Fosfato monopotásico              0,75 g
  • Polisorbato Tween 80                 5,0 g
  • Mix de inactivadores                  6,3 g

(Fórmula en g/l)   Ajustar a pH: 7,3 ± 0,2

 Este medio, según sea el agua destilada empleada, puede requerir hasta 7 ml de NaOH 1 N por  cada litro de medio final (* Mezcla sinérgica de Lecitina, Tioglicolato sódico,Tiosulfato sódico, Bi‑sulfito sódico, Histidina…) PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO. AGITE EL BOTE ANTES DE USAR. MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO, EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO.

COD: DMT011

Agua peptonada efecto matriz: Buffered Peptone Water Neutralizing para evitar el «efecto matriz» provocado por los conservantes alimentarios

https://www.microkit.es/fichas/BUFFERED-PEPTONE-NEUTRALIZING-WATER.pdf

 PREPARACIÓN

Disolver 44 g de medio en 1 l de agua bidestilada. Dispensar en tubos o en frascos. Autoclavar a 121 ºC durante 15 minutos. El color final del medio es paja-ámbar. El polvo es untuoso porque incluye 5 ml/l de polisorbato Tween 80, que permite obtener mejores efectos inactivadores de los inhibidores incluso en productos grasos. Imprescindible ajustar el pH para conseguir la efectividad necesaria.

Agua peptonada efecto matriz: Buffered Peptone Water Neutralizing para evitar el «efecto matriz» provocado por los conservantes alimentarios

CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO

Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar laboratorio, tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,…)

DESHIDRATADO: Polvo fino, crema   PREPARADO: Estéril, paja-ámbar

EVALUACIÓN DEL RENDIMIENTO ISO/TS 11133-2  (Aplicando el método ISO 6579:2003, o el del Manual MICROKIT actualizado), 18 h a 37 ºC: Salmonella abony MKTN 6017, Excelente, Tras 45 minutos a 25°C, resiembra en TSA estandarizado* y obtención de >50-150% de colonias respecto al número de ufc inoculadas. Tras 18 h a 37°C, turbidez de ligera a elevada

  • E.coli MKTA 25922, Excelente, Tras 18 h a 37°C, turbidez de ligera a elevada.
  • Staphylococcus aureus MKTA 6538P, Excelente, Tras 18 h a 37°C, turbidez de ligera a elevada.
  • Pseudomonas aeruginosa MKTA 9027, Excelente. Bacillus subtilis MKTA 6633, Excelente. Candida albicans MKTA 10231, Excelente.

*El que cumple con recuperación superior al 70 % (92-125 %) con respecto a cepas cuantitativas trazables a la cepa tipo. Incertidumbres debidas a las cepas y a las diferentes proporciones de flora acompañante.

Las colecciones TIPO prohiben el uso de su referencia por lo que indicamos la nuestra, directamente trazable a la colección TIPO.

PRESENTACIÓN: MEDIO DESHIDRATADO (DMT011), frascos preparados 50 ml (RPL112), frascos preparados 50 ml con perlas de vidrio para dispersar productos grasos o grumosos (RPL114), frascotes preparados 225 ml con perlas de vidrio para dispersar productos grasos o grumosos (RPL235).

SIEMBRA E INTERPRETACIÓN

Añadir 1-25 gramos de muestra en 10-225 ml de medio (5 g en los frascos con 50 ml). Agitar (las perlas de vidrio de los frascos ahorran el uso de un homogeneizador en muestras blandas, salsas…) y dejar reposar para que actúe la inactivación de agentes inhibidores presentes en la muestra, durante 20-30 minutos a temperatura ambiente. Si es necesario, realizar las ulteriores diluciones decimales en este mismo medio.

PRECAUCIÓN: En matrices cuyo agente conservante sea la salazón, salmuera o almíbar, o en aquellas con alta proporción de sales o de azúcares, puede requerirse que la solución madre sea 1:100 en lugar del clásico 1:10 empleado en los demás alimentos. Otro aspecto muy interesante del «efecto matriz».

Para realizar recuentos, sembrar 1 ml de cada dilución en masa en los agares adecuados, sin previo enriquecimiento. Recomendamos el PCA cromogénico de MICROKIT (BCD510) ya que por el mismo precio que e PCA clásico, se distinguen las colonias (rojas) de las partículas de muestra.

Para enriquecimiento revitalizador, incubar 18 h a 35-37°C antes de pasar a enriquecimientos selectivos secundarios o antes de estriar en placas selectivas.

Para control de esterilidad comercial, incubar 18-72 h a 35-37°C y sembrar en estría en la superficie de una placa de un agar de recuento general, por ejemplo, PCA-cromogénico (BCD510), aunque la turbidez del caldo es una alerta rápida de la contaminación microbiana.

NOTA: Dados los resultados de los intercomparativos Seilalimentos de microbiología alimentaria de la ultima década, diseñamos este caldo peptonado neutralizante, que tan inmejorables resultados proporciona, como el sustituto habitual de la clásica agua peptonada tamponada, para inactivar los conservantes que la mayoría de alimentos resultan incluir. Además ha sido validado internamente por el método de pares y con cepas cuantitativas de referencia en los 5 parámetros microbiológicos de máxima importancia en microbiología alimentaria: Salmonella enteritidis, Staphylococcus aureus, E.coli, Clostridium perfringens y Listeria monocytogenes.

Agua peptonada efecto matriz: Buffered Peptone Water Neutralizing para evitar el «efecto matriz» provocado por los conservantes alimentarios

 https://www.microkit.es/monograficos/22-Monograf–a-Neutralizaci–n-de-conservantes-y-aditivos-en-producto-final–para-minimizar-falsos-negativos-en-alimentos.-Otras-soluciones.pdf 

ANAEROTECA (Conservación de anaerobios)

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ANAEROTECA (KPX004)

Algunas cepas de microorganismos se resisten a mantenerse en los sistemas de congelación clásicos y comerciales de las tres marcas mundiales (En España, CRIOTECA® de MICROKIT); no es un problema del producto sino de la cepa. MICROKIT diseñó hace ya tiempo una CRIOTECA® especial para hongos como las levaduras (CRIOTECA®-YM), otra para halófilos como Vibrio (CRIOTECA®-MAR) y otra para microorganismos de crecimiento difícil como las micobacterias (CRIOTECA®-SKIM MILK). Sin embargo, seguía existiendo un grupo problemático: Los anaerobios.
Tras un año de intensos estudios presentamos la solución: ANAEROTECA, basada en el mantenimiento durante meses SIN CONGELACION, que era precisamente la que impedía su viabilidad en los sistemas criogénicos.
Los anaerobios se mantienen muy mal en medios normales refrigerados o congelados. Presentamos los tubos de ANAEROTECA, rellenos con 18 ml (máxima profundidad) de un medio especialmente diseñado por MICROKIT para la conservación de la mayoría de anaerobios (sobre todo Clostridios) y que ha resultado el mejor en un estudio interno entre 8 variantes.
El medio contiene agentes reductores para que la penetración del oxígeno del aire sea mínima.
Además, la resazurina avisa de cuándo la oxidación del medio alcanza niveles peligrosos para la viabilidad de los microorganismos almacenados: Si más de la tercera parte del tubo está de color rosa, se debe regenerar hirviéndolo 10 minutos. En el caso de que la cepa esté ya inoculada, hervir otro tubo vacío e inocularlo con una gota del fondo del tubo inoculado que se ha oxidado, no agitado.

Las partículas sólidas de Cooked Meat Granules resultan un hábitat ideal para el mantenimiento de la mayor parte de los anaerobios más usuales en microbiología de alimentos y de aguas.
La infusión de cerebro y corazón permite el mantenimiento de la mayor parte de anaerobios patógenos humanos.

 

MODO DE EMPLEO

  1. Inocular la cepa pura (colonia, suspensión espesa o liófilo frescos) en el fondo. Si se trata de esporulados (Clostridium) realizar un duplicado sometido a un shock térmico adecuado (10 minutos a 75 ºC…) para permitir la germinación.
  2. Cerrar y no agitar ni voltear, para mezclar, evitando la agitación brusca que oxigenaría el medio. Registrar los datos.
  3. Mantener a temperatura ambiente (ideal 21-25 ºC).¡NO CONGELAR! ¡Ni siquiera refrigerar! El frío permitiría la rápida oxigenación del medio, comprometiendo la viabilidad de los anaerobios.¡NO AGITAR!.

Cuando necesite cepa pura, tome con una pipeta Pasteur una gota del fondo (mejor si lleva trozos particulados) e inocúlela en el medio adecuado. Incube de la forma más adecuada para la cepa en cuestión.
Algunas cepas pueden mantenerse en ANAEROTECA durante años, otras sólo algunos meses: Resiembre duplicados en ANAEROTECA hasta conocer el tiempo límite normal de viabilidad de sus cepas.
CRIOTECA®-MIX-ENANA-50 es una referencia que incluye 10 Crioviales clásicos (para todo), 10 Skim Milk (para todo y micobacterias), 10 YM (para hongos y levaduras), 10 Aquática (mejor para Legionella, Pseudomonas, Staphylococcus, E.coli…), 5 Halófilos (Vibrio parahaemolyticus…) y 5 Campy, Ref.: KPX200. Palillos estériles para tomar mejor las bolitas: VDP099.
CAJA VACIA CRIOBOX PARA 100 CRIOVIALES, y para poder tener una parte de la CRIOTECA® congelada y los viales no inoculados, sin congelar. Ref.: VPX453. Idem porexpán , Ref.VPX500.

El usuario es el único responsable de la eliminación de los microorganismos según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.
Diseñado y fabricado por MICROKIT desde1995. CRIOTECA® es marca registrada de MICROKIT.
Revisado en Diciembre de 2019.

CRIOTECA®

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VIALES CRIOTECA® – CONSERVACIÓN AVANZADA DE CEPAS MICROBIANAS

PRESENTACIÓN

Los viales CRIOTECA® están diseñados para una conservación eficaz, segura y prolongada de cepas microbianas. Estos viales, pioneros en su fabricación en España desde 1991, incorporan criobolas de porcelana porosa especialmente tratadas y un líquido criogénico optimizado, lo que permite:

  • Minimizar resiembras, contaminaciones y mutaciones.

  • Garantizar la preservación de la primera generación inoculada.

  • Mantener las cepas vivas durante años.

Gracias a la colaboración con uno de los centros oficiales que gestiona las cepas causantes de brotes alimentarios, hospitalarios e hídricos, hemos conseguido optimizar nuestros caldos criogénicos, marcando una clara diferencia frente a otras marcas del mercado.

Ventajas destacadas

  • Mayor seguridad: tapón alto que evita el contacto directo con la muestra.

  • Alta eficiencia: mayor cantidad de criobolas (25 por vial) para asegurar la recuperación de la cepa.

  • Máxima optimización: menor volumen por vial y cajas CRIOBOX ultracompactas, ahorrando espacio en almacenamiento.

  • Fórmula mejorada: líquido criogénico especialmente desarrollado para una mayor viabilidad y recuperación de las cepas.

  • Precio más competitivo frente a kits importados similares.

  • Cierre totalmente hermético y caducidad de 5 años desde la fabricación. Si se conservan en nitrógeno líquido, este periodo puede extenderse incluso más allá.

Resultados validados con numerosos microorganismos:

  • Gram positivos: Bacillus cereus, Staphylococcus aureus, Listeria monocytogenes, Lactobacillus plantarum, etc.

  • Gram negativos: Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella abony, Campylobacter jejuni, Legionella pneumophila, entre otros.

  • Levaduras: Saccharomyces cerevisiae, Candida albicans, Rhodotorula glutinis…

  • Mohos: Aspergillus niger, Penicillium digitatum, Mucor racemosus, entre otros.

TIPOS DE CRIOTECA® DISPONIBLES

  • CRIOTECA® CLÁSICA (KPX006)
    Para bacterias en general, levaduras y mohos. Bolitas amarillas.

  • CRIOTECA® YM (KPX007)
    Formulada específicamente para hongos (levaduras y mohos). Bolitas blancas.

  • CRIOTECA® MARINA (KPX008)
    Especial para microorganismos halófilos como Vibrio. Bolitas marrones.

  • CRIOTECA® SKIM MILK (KPX003)
    Ideal para microorganismos exigentes, como micobacterias. También es excelente para bacterias comunes. Líquido blanco y bolitas verdes. (Es nuestra referencia más vendida, con 50 veces más demanda que la clásica).

  • CRIOTECA® CAMPY (KPX009)
    Óptima para Campylobacter y Helicobacter. Bolitas azules.

  • CRIOTECA® ACUÁTICA (KPX010)
    Especializada para bacterias presentes en el agua, incluyendo Legionella, Pseudomonas, Aeromonas, E. coli, Acinetobacter, Plesiomonas, entre otras. Bolitas rojas.

MODO DE EMPLEO – Conservación de cepas en criobolas

  1. Introduzca una suspensión espesa del cultivo (idealmente fresco, 18-24h) o una colonia directamente en el vial.

    • Para bacterias: Agar Sangre, TSA, BHI o TSB.

    • Para hongos: SDA, SDB o YMB.

  2. Si usa caldo en lugar de colonias, centrifugue y utilice el sedimento.

  3. Cierre el vial y agítelo suavemente (invertir 10 veces) para impregnar bien las bolitas.

  4. Espere un minuto, luego retire el exceso de líquido con una jeringa estéril.

  5. Etiquete el vial con rotulador indeleble.

  6. Golpee suavemente el vial contra la mesa para distribuir las bolitas a lo largo del tubo.

  7. Congele entre –20 °C y –60 °C. Se recomienda duplicar las muestras como medida preventiva.

  8. Para recuperar la cepa:

    • Extraiga una bolita con un palillo estéril (ref. VDP099).

    • Si la cepa es exigente: introducir en caldo tipo BHI antes de sembrar.

    • Si es fácil: sembrar directamente en medio sólido o líquido.

    • No espere a que la bolita se atempere.

    • No reutilice ni reintroduzca el palillo ni la bolita.

PRECAUCIONES

  • Evite cambios de temperatura: devuelva el vial al congelador inmediatamente tras su uso.

  • Uso exclusivo en laboratorio.

  • Trabaje siempre con técnicas asépticas.

  • Confirme previamente la compatibilidad de su cepa con este sistema, antes de abandonar métodos tradicionales de resiembra.

  • Deseche el material contaminado siguiendo los protocolos de bioseguridad habituales.

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BURKHOLDERIA CEPACIA-BCPT AGAR (BASE)

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BURKHOLDERIA CEPACIA-BCPT AGAR (BASE)

BURKHOLDERIA CEPACIA-BCPT AGAR (BASE)  es el Agar para aislamiento selectivo y diferencial de Burkholderia cepacia en aguas, cosméticos y otras muestras.

Funciona mucho mejor que BCSA y que OFPBL, sobre todo en su versión cromogénica (Ver Cromokit BCPT Agar)

 

 COMPOSICIÓN

  • Polipeptona bacteriológica      6.00 gbcpt
  • Piruvato sódico                          6.00 g
  • Dihidrógeno fosfato potasio   4.35 g
  • Hidrógeno fosfato sodio         1.42 g
  • Sales biliares                             1.50 g
  • Amonio sulfato                         1.00 g
  • Magnesio sulfato                      0.20 g
  • Sulfato férrico amónico           0.01 g
  • Rojo fenol                                   0.02 g
  • Cristal violeta                             0,01 g
  • Agar-agar                                   12.0 g

(Fórmula por litro) pH final: ajustar a 6.2 ± 0.2

B. cepacia suplemento selectivo

  • Polimixina B               150.000 UI/L
  • Ticarcilina                   500,0 mg/L

Añadir cuando el medio esté a 45-50º C.

 

PREPARACIÓN

  1. Disolver 32,5 g de medio en 1 litro de agua bidestilada. Calentar hasta ebullición, agitando hasta la total homogeneización. No sobrecalentar.
  2. Autoclavar a 121 ºC durante 15 minutos.
  3. Enfriar a 45-50 °C y añadir 14 ml de solución BCPT Suplemento estéril selectivo (SMT301) para análisis de aguas (no es imprescindible para analizar muestras cosméticas de escasa carga microbiana, pero en tal caso toda colonia crecida debe identificarse para evitar falsos positivos). Para máxima selectividad y evitar falsos positivos de Sphingomonas spp. y Moraxella spp., se puede añadir Gentamicina, aunque forman colonias diminutas y diferentes a las típicas de Burkholderia cepacia. En cambio Ochrobactrum anthropi y Delftia acidovorans sólo resultan distinguibles mediante identificación molecular, ya que las galerías comerciales dan, igual que este medio, falso positivo de B.cepacia.

PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO. AGITE EL BOTE ANTES DE USAR. MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO, EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO.

DESHIDRATADO CÓDIGO: DMT004

MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO, EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO. PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO.

NOTA:

Antes Pseudomonas cepacia, Burkholderia cepacia es una especie muy resistente que agrupa numerosas cepas de bacilos Gram negativos, Oxidasa positivos (a menudo oxidasa-lentos), No Fermentadores de Glucosa, Móviles.

Algunas cepas pueden crecer en Agar Cetrimida sin fluorescencia y en Agar CN.

Muchas cepas no crecen a más de 35°C.

En TSA crecen con colonias regulares, redondeadas, blanquecinas, crema o amarillas. Deben identificarse como tal con galerías miniaturizadas específicas para microorganismos no fermentadores (KBH262).

Debe el nombre genérico a su descubridor y el específico, a haber sido descubierta infectando cebollas, aunque se encuentra también en aguas y biofilms.

Es una de las bacterias más versátiles que se conocen, capaz de usar más de 200 compuestos como nutrientes, entre los cuales se encuentran antibióticos, desinfectantes, pesticidas, hidrocarburos aromáticos policíclicos (HPA), tricloroetileno, policlorobifenilos, ftalatos… además de producir sus propios antibióticos para suprimir el crecimiento de otros competidores, así como matrices especiales para generar biofilms, lo que la hace extremadamente difícil de erradicar.

Es frecuente como saprófito en aguas, ambientes húmedos y suelos. Se emplea en biorremediación de contaminaciones y en control de plagas fúngicas agrícolas,  pero tambien algunas cepas son serios patógenos oportunistas en infecciones nosocomiales.

Parece que junto a otros Pseudomonadinos esta bacteria fué, desde el Arcaico, corresponsable del paso de la vida a Tierra, al sintetizar ciertas macromoléculas que actúan como inductores de la lluvia.

CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO

Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar laboratorio, tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,…).

DESHIDRATADO:Polvo, rosado

PREPARADO: Estéril, crema-anaranjado a menudo con precipitados negros del hierro

CONTROL DE CRECIMIENTO 24-48 h a 35°C aproximadamente:

  • Burkholderia cepacia MKTA 25416, Crece abundantemente y deprisa, con colonias blancas, amarillas o asalmonadas, vira el medio a rosa-fucsia. Con respecto a PCA estandarizado*, recuento medio 275-294 %.
  • Pseudomonas aeruginosa MKTA 9027, Inhibido o escaso, lento (1 semana) y sin viraje.
  • Pseudomonas fluorescens MKTA 13525, Inhibido o lento y sin viraje
  • Bacillus subtilis MKTA 6633, Inhibido
  • Staphylococcus aureus MKTA 6538, Inhibido
  • Escherichia coli MKTA 25922, Inhibido

* El que cumple con recuperación superior al 92-125% con respecto a cepas cuantitativas trazables a cepa tipo.

 

 

MODO DE EMPLEO Y LECTURA DE RESULTADOS

Sembrar 1 ml de cosmético (o de su dilución madre enriquecida) equitativamente en la superficie de 3 placas y repartir con asa de Digralsky (en agua, sembrar una membrana por la que se hayan filtrado 100 ml) e incubar a 30-35°C durante 24-72 horas, ideal 48 h. Contar las colonias de 1,5-2 mm de diámetro, blancas o salmón con halo fucsia en el medio (si se enriqueció, no contar, ya que las ufc iniciales se habrán multiplicado; tampoco en tal caso hace falta el triplicado de placas y basta con sembrar en una por estría de agotamiento). Identificar con galerías para No Fermentadores (KBH262). El recuento/ml será la suma de los recuentos de las tres placas (por filtración, el recuento será el número de colonias/los 100 ml filtrados). De todas formas, no debe aparecer ni una sola colonia confirmativa en 1 g de cosmético enriquecido ni en 100 ml de agua farmacéutica o cosmética.

PRESENTACIÓN

MEDIO DESHIDRATADO 500g (DMT004) y suplemento en frasco pinchable estéril 100 ml (SMT301) c.s.p.7 litros de medio final. Tubo 20 ml Agar Base (TPL005) para preparar una placa tras fundir, enfriar y añadir 0,3 ml de suplemento SMT301. Frascos Agar BASE 100 ml: RPL024 para preparar 5 placas tras fundir, enfriar y añadir 1,5 ml de suplemento SMT301. Plaquita 55 mm hermética (PLAQUIS ®), medio completo, ref: PPL920.

Si desea más información sobre nuestros MEDIO BURKHOLDERIA CEPACIA-BCPT AGAR (BASE), rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto . O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16

 https://www.microkit.es/monograficos/8-Burkholderia-cepacia-complex-monograf–a.pdf

 

KIT PISCINAS-MICROKIT

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MICROKIT P/A-PISCINAS (CONTIENE INACTIVADORES DEL CLORO): Test para el análisis microbiológico de aguas de baño. Kit para uso en piscinas y en todo tipo de aguas de baño

kit piscinasKit piscinas-MICROKIT para análisis microbiológico de piscinas.

El cloro no es suficiente, por eso sigue habiendo otitis y conjuntivitis tras los baños en piscinas. El cloro en el agua tiene un efecto bactericida (no es algicida, fungicida ni virucida) sólo a altas dosis y por un periodo de tiempo muy limitado, a causa de su evaporación y de su ineficacia a pHs bajos.

Además su efectividad es menor cuanto mayor sea el número de bañistas diarios. Si lo añadimos en exceso es irritante para los bañistas pero si lo añadimos en defecto pueden proliferar, no sólo sobrevivir, microorganismos patógenos para los bañistas.

Para controlar que el nivel de microorganismos en el agua es el adecuado  MICROKIT ha diseñado este kit de fácil uso para la detección de los patógenos más típicamente transmitidos por vía acuática. Realice un análisis poco antes de la hora punta de bañistas y otro cuando se van, poco antes de añadir el cloro.

MODO DE EMPLEO E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS (>4 veces/año)

1. Bacterias patógenas e indicadoras:

Con la jeringa (una por muestra para todos los parámetros), añadir 100 ml de agua (2 jeringazos de 50 ml) en cada uno de los 5 frascos, suavemente para evitar la formación de espuma: Coliformes-E.Coli, Enterococos fecales, Clostridium perfringens, Pseudomona aeruginosa, Staphylococcus aureus. Cerrar y voltar sin agitar. Incubar 1-2 días en una habitación cálida (ideal 35ºC aprox., pero válido 25 y 40ºC).

Si el frasco de Coliformes-E.Coli (paja) kit picinas2se vuelve azul hay contaminación fecal por infiltración de aguas residuales o bañistas poco escrupulosos. La ausencia de coliformes garantiza la ausencia de Salmonella.

Si el frasco de Enterococos (ámbar con superficie azulada) se vuelve negro-opaco hay contaminación fecal por infiltración de aguas residuales, lejana en el espacio o en el tiempo (días).

O si el frasco de Clositridios (ámbar con sobrenadante incoloro) se vuelve negro, hay contaminación fecal por infiltración de aguas residuales muy lejana en el espacio o en el tiempo (semanas o meses) y puede haber presencia de enterovirus y protozoos. 

Si el frasco de Pseudomonas (paja) se pone rosa, hay contaminación por heridas, oídos, etc. infectados de bañistas, que podrían infectar a los bañista sanos, provocando otitis y otras infecciones. Si se pone rojo se trata de otros microorganismos.

O si el frasco de Estafilococos (rojo) se vuelve amarillo o naranja, hay contaminación por heridas, gargantas, etc., infectadas de bañistas, que podrían infectar a bañistas sanos provocando otitis, faringitis y otras infecciones.

2. Cianobacterias:

Añadir 50 ml de agua en el frasco de algas dejando una gran cámara de aire. Cerrar y agitar. Incubar 7-14 días a temperatura ambiente (ideal 25 ºC), en un lugar con mucha luz diurna pero evitando que el sol directo suba la temperatura del contenido hasta que éste queme las manos. Por la noche, no iluminar. Si aparecen coloraciones verdes en el caldo o en las paredes del recipiente, es que hay algas clorofíceas. Si son pardas, es que hay algas diatomeas. El problema es que sean verde-azuladas, rojizas o azules, ya que entonces probablemente se trata de algas cianoficeas, muchas de ellas tremendamente tóxicas o alergénicas por simple contacto con la piel e incluso por inhalación.

3. Hongos:

Las levaduras como Candida albicans, provocan molestas infecciones en las mucosas a menudo por mantener la ropa húmeda. Los hongkit piscinas3os dermatofitos como el pie de atleta (Trichophyton mentagrophytes), la tiña del pie (Epidermophyton flocosum) y otras micosis se transmiten de bañistas infectados a otros sanos en las duchas, arenas de playas y vestuarios. El kit para su detección es diferente a los otros porque es difícil aislarlos del agua y es más  fácil  en  las  superficies.  No  necesita  la jeringa.  Abrir  el  tapón,  doblarlo y tocar con las dos láminas el suelo de duchas, arenas, hamacas… durante unos segundos, apretando suavemente y sin barrer. Repetir con el otro tubo en otro lugar. Cerrar e incubar 1-3 días a aprox. 35 ºC (entre 25 ºC y 40 ºC). Si la cara naranja se ha vuelto roja, hay  hongos dermatofitos. O si en cualquiera de las dos caras aparecen colonias blancas y redondas con olor a levadura, es probable que se trate de Candida albicans. Si aparecen mohos algodonosos no hay problema mientras no enrojezcan.

kit piscinas44. Recuento total de aerobios:

Añadir 1 ml de agua (cuidado, la pipeta marca hasta 3) en el centro de la Compact Dry Plate ® TC. Incubar 1-2 días en una habitación cálida (ideal 35 ºC aprox., pero válido entre 25 y 40° C). Si aparecen más de 200 puntos rojos (200 ufc/ml) hay un exceso de microorganismos aerobios totales. 

Kit análisis microbiológico piscinas

OJO:

Ante cualquier resultado positivo, desinfectar el agua de baño y el suelo con un nivel adecuado de cloro, alguicidas y/o fungicidas o bien consultar con un especialista biólogo, farmacéutico… y repetir el análisis hasta la obtención de aguas no contaminadas.

DESTRUCCIÓN:

El usuario final es el único responsable de la destrucción de los microorganismos que se hayan multiplicado en el interior de cada tubo o frasco, de acuerdo con la legislación medioambiental vigente. Añada cloro o lejía hasta el borde, con cuidado de no tocar ni derramar  el cultivo, antes de desechar a la basura. Si al abrir los botes sale gas a presión o líquido y se salpica, lavar las manos con agua corriente y jabón.

CONTENIDO:

6 frascos P/A, 1 jeringa estéril 50 ml, 2 laminocultivos, 1 pipeta estéril 1-3 ml, 1 Compact Dry Plate ® TC. CÓDIGO: RPL399

Kit análisis microbiológico piscinas. El cloro no es suficiente, por eso sigue habiendo otitis y conjuntivitis tras los baños en piscinas.

https://www.microkit.es/pdf/kit-piscinas.pdf

MICROKIT® MUG PLUS CCA CROMOGENIC AGAR AGAR CROMOGÉNICO COLIFORMES Y E.COLI

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MICROKIT® MUG PLUS CCA CROMOGENIC AGAR (CROMOGÉNICO COLIFORMES Y E.COLI)  S/BOE 31-MARZO-2009

MICROKIT® MUG PLUS CCA cromogénico E.coli-coliformes. Agar selectivo para la detección simultánea confirmativa de coliformes totales/fecales y E.coli en aguas y alimentos (cromógenos según ISO 16649-1:2001, AFNOR V08053-4)

INTRODUCCION

Inventado por MICROKIT en 1995, es el primer medio cromogénico que ha entrado en una Norma ISO (la ISO 9308-1) de aguas de consumo humano y envasadas. Los substratos cromógenicos  Salmon-Gal y X-Glucurónido, permiten la detección simultánea de coliformes

MICROKIT® MUGPLUS: Agar cromogénico para E. coli (colonias azules -olas-) y demás coliformes (colonias rosas -surf-). Campylobacter y Shigella crecen con colonias verdes (hierba) y otros Gram negativos con colonias crema (Pseudomonas -montañas-).

E.coli (colonias azules -olas-) y demás coliformes (colonias rosas -surf-). Campylobacter y Shigella (colonias verdes-hierba) y otros Gram negativos con colonias crema (Pseudomonas -montañas-).

(colonias rojas) y E.coli (colonias azules) en el mismo medio de cultivo.
La acción simultánea de las peptonas seleccionadas en el medio, del piruvato y de los tampones fosfato, garantiza un rápido crecimiento colonial, incluso para los coliformes en estado subletal. El crecimiento de la flora acompañante Gram positiva, queda inhibido gracias al lauryl sulfato y a la mezcla de antibióticos Cefsulodina + Vancomicina.
El enzima Beta-D-galactosidasa, característica de los coliformes, actúa sobre el Salmon-GAL provocando la pigmentación roja o rosada en las colonias de coliformes.
E.coli, coliforme Beta-D-glucuronidasa positivo, actúa sobre el Salmon-GAL y sobre el X-Glucurónido (5-bromo-4-chloro-3-indoxyl Beta-D-glucurónido) de modo que sus colonias crecen de azul oscuro al añil.

COMPOSICION (g/l)

Inconfundibles colonias añil (no violetas ni esmeralda) de E.coli

Inconfundibles colonias añil (no violetas ni esmeralda) de E.coli

  • Peptonas 3´0
  • Cloruro Sódico 5´0
  • Dihidrógeno Fosfato Sódico 2´2
  • Hidrógeno Fosfato Disódico 2´7
  • Piruvato Sódico 1´0
  • Triptófano 1´0
  • Tergitol 7 0´15
  • Sorbitol 1´0
  • Mezcla cromogénica
  • (Salmon Gal 0,2 y X-Glu 0,2) 0´4
  • Agar-Agar 10´0
  • pH Final: 6´8 ± 0´2

MODO DE EMPLEO CCA cromogénico E.coli coliformes

Agitar el bote. Disolver 26,5 g en 1 litro de agua destilada, calentando hasta ebullición. Mantener durante 1 minuto. Agitar hasta su completa disolución. Añadir asépticamente, cuando el medio se haya enfriado a 55 ºC, 5 mg de Cefsulodina + 5 mg de Vancomicina (total 5 ml de solución estéril MICROKIT SMS400) para aumentar la selectividad del medio y eliminar la flora acompañante Gram positiva. No autoclavar. El medio final es blanquecino. No refundir más de una vez.
En alimentos, la siembra en profundidad elimina los Gram negativos no fermentadores, que en la técnica de Filtración de Membrana para análisis de aguas pueden dar lugar a falsos positivos y además reducir en un 50% la recuperación de los microorganismos diana; para evitarlo, añadir sobre la membrana una segunda capa de medio agarizado, previamente enfriado a 50 ºC. Esto no es tan necesario en aguas potables o poco contaminadas por flora acompañante.

LECTURA DE RESULTADOS

Nueva imagen (5)Tras 18-24 horas de incubación a 35-37 ºC aproximadamente (ó 44,5 ºC aproximadamente para C. fecales), los resultados son: E.coli: Colonias de azul oscuro a añil (Salmon GAL y X-Glucurónido positivo) que resultan indol positivas (puede comprobarse directo en la colonia). Coliformes: Colonias rosas- rojas (Salmon GAL positivo) + las azules (E.coli). Otras enterobacterias: Colonias incoloras, excepto cepas como las Salmonella o Shigella Beta-D glucuronidasa positivas, que aparecen de color azul claro a turquesa. Muchas cepas de Shigella y de Campylobacter crecen con colonias verdes, pero también es del máximo interés que sean detectados, al ser microorganismos patógenos.

Unas pocas cepas de Enterococcus durans crecen con colonias rojas, pero también indican contaminación fecal del agua. Ciertas cepas de Staphylococcus aureus y de Bacillus crecen con colonias naranjas, pero nunca rosas-rojas. Otras cepas crecen con colonias crema que no se han de tener en cuenta. Las colonias con colores intermedios (violáceo-lila) proceden de ufc mixtas: diluir y repetir el análisis, o mirar una placa sembrada con una dilución mayor.
Confirme E.coli pinchando ó cubriendo sus colonias con reactivo de Kovacs. Si éste
vira a rojo-cereza antes de 1 minuto, la reacción es, definitivamente, confirmativa.

Color de la colonia Salmon-GAL X-Glucurónido Indol Rto. PCA estandarizado*

CRECIMIENTOS TÍPICOS

  • E.coli Azul oscuro-añil o turquesa + + + 58-125% **
  • Citrobacter freundii Rojo-rosa + – – 98-106%
  • Klebsiella oxytoca Lila-Granate + – – >99%
  • Enterobacter cloacae Rojo-rosa + – – 58-104%
  • Salmonella enteritidis Incoloro – – – 29-202%
  • Shigella flexneri Incoloro (azul en superficie) – – –
  • Salmonella MUG+ Azul claro – + –
  • E. coli O157 : H7 Rojo-rosa + – + 230%
    * El que cumple con recuperación superior al 92-125% con respecto a cepas cuantitativas trazables a cepa tipo.
    Incertidumbres detectadas entre todos los lotes a lo largo de un año (la mayoría de la incertidumbre se debe a la cepa y a la proporción de cepas acompañantes inoculadas, no al medio).
    ** En superficie, ya que en masa recupera el 200% más que en superficie
    Un estudio comparativo independiente (*) de validación cuantitativa entre este medio, otros cromogénicos, Endo y MFC demuestra que MUG PLUS® es el mejor medio de recuento de E. coli en aguas. La validación interna realizada por MICROKIT con centenares de muestras y la revalidación trimestral en Seilagua ®, Seilalimentos y Seilaparfum, lo confirman para agua y para todo tipo de matrices alimentarias y cosméticas.

CCA cromogénico E.coli coliformes

VENTAJAS SOBRE OTRAS MARCAS

Ser los pioneros en el diseño de este medio nos da dos ventajas claras:

1-Gracias a ciertos secretos de fabricación, las colonias azules de presuntos E.coli se pueden confirmar directamente añadiendo reactivo de indol sobre la colonia, ya que en caso positivo, habrá un claro viraje del reactivo amarillo a rosa alrededor de las colonias del microorganismo diana.

2-Las colonias rosas de presuntos coliformes se pueden confirmar directamente añadiendo reactivo de la citocromo-oxidasa en goteros monodosis sobre las colonias, incluso bañando toda la placa, ya que en caso positivo (oxidasa positivo, no coliforme), habrá un claro viraje del reactivo incoloro a azul oscuro alrededor de las colonias del microorganismo diana.

PRESENTACIÓN

* Botes de 100 g de medio de cultivo deshidratado en polvo agarizado. Referencia DMT400-
* Suplemento en frasco de 100 ml, con 100 mg de solución estéril de Cefsulodina + Vancomicina, para 20 litros de medio (5 ml/l). Ref. SMS400.
* Frascos de 100 ml de agar MUG PLUS® preparado con Cefsulodina+Vancomicina. Referencia RPL444.
* Frascos de 200 ml de agar MUG PLUS® preparado con Cefsulodina+Vancomicina. Ref. RPL244.
* Tubos de 20 ml de agar MUG PLUS® preparado con Cefsulodina+Vancomicina. Referencia TPL400.
* Viales 2 ml de caldo MUG PLUS® de MF con Cefsulodina+Vancomicina. Ref. FPL400.
* Viales pinchables de 100 ml de caldo MUG PLUS® de MF con Cefsulodina+Vancomicina. Ref. RPL400.
* Plaquitas herméticas de Agar MUGLUS® preparado con Cefsulodina+Vancomicina . Referencia PPL902

El usuario es el único responsable de la eliminación de los microorganismos según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.

https://www.microkit.es/pdf/mugplus-agar.pdf

https://www.microkit.es/monograficos/11-E.coli-y-dem–s-coliformes-monograf–a.pdf

Prepárese para más de una sorpresa informativa cuando vea nuestro video sobre los medios Cromogénicos: https://www.youtube.com/watch?v=-JVPVWxY8ZE&t=271s

RINGER SOLUCIÓN ISOTÓNICA 1/4 (TABLETAS)

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RINGER SOLUCIÓN ISOTÓNICA 1/4 (TABLETAS)

Ringer, Solución isotónica 1/4 en tabletas para diluir en 500 mL de agua destilada

Diluyente isotónico [1/4] s/Normas UNE 34-818:1985, UNE 34 810:1984, UNE 34 814:1985, UNE 34 805-1983, UNE 34 821-1986, UNE 34 812:1985, UNE 34 815:1985

COMPOSICIÓNnueva-imagen-20

  • Cloruro sódico                   2,250 g
  • Cloruro potásico               0,105 g
  • Cloruro cálcico 6- H2O     0,120 g
  • Bicarbonato sódico          0,050 g

(Fórmula por litro)

pH final: 7,0 ± 0.2

 

PREPARACIÓN

  1. Disolver una tableta en 500 ml de agua bidestilada para obtener una solución isotónica según Ringer 1/4.
  2. Autoclavar a 121 ºC, 15 minutos.

PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO

MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO, EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO.

Referencia:  DMT300

CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO

Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar laboratorio, tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,…)

DESHIDRATADO: Tabletas, Blanco.

PREPARADO: Estéril, Incoloro.

CONTROL DE CRECIMIENTO tras sembrarlo en PCA 72 h a 37°C aproximadamente (o bien 5 días a temperatura ambiente 21-28°C aproximadamente):

  • Pseudomonas aeruginosa MKTA 9027, Correcto
  • Bacillus subtillis MKTA 6633, Correcto
  • Staphylococcus aureus MKTA 6538P, Correcto
  • Micrococcus luteus MKTA 10240, Correcto
  • E.coli MKTA 25922, Correcto

MODO DE EMPLEO E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

Añadir 1 ml de muestra a un tubo con 9ml de solución Ringer 1/4. Así se obtiene la primera dilución decimal. Agitar y añadir 1 ml de esta solución madre a otro tubo con 9 ml de Ringer. Así se obtiene la segunda dilución decimal. Repetir el proceso cuantas veces sea necesario.

El usuario final es el único responsable de la eliminación de los microorganismos según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.

KITS DIDÁCTICOS ENSEÑANZA: MICROCOSMOS CROMOGÉNICO

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KITS ENSEÑANZA MICROCOSMOS CROMOGÉNICO 

KITS DIDÁCTICOS ENSEÑANZA: MICROCOSMOS CROMOGÉNICO

CIENCIA PARA NIÑOS Y ADOLESCENTES:

ENSEÑE A SUS ALUMNOS LOS AVANCES DE LA ULTIMA DÉCADA

¿Sabes qué es un medio cromogénico?

Es un medio enzimático.

Son los medios del Siglo XXI, que son los que vas a emplear en tu futuro trabajo en los laboratorios de la industria.

A diferencia de los medios clásicos de los Siglos XIX y XX, que se basaban en la
asimilación/fermentación bioquímica de fuentes de carbono o nitrógeno, con un indicador del cambio de pH producido si hay fermentación (cambio de color
del medio alrededor de las colonias);

en cambio los medios cromogénicos son enzimáticos, de modo que sólo el enzima del microorganismo buscado reacciona con el sustrato específico del medio y crece con colonias de un color determinado, mientras que el medio no vira de color ni enmascara así otras colonias.

Al ser enzimática, la reacción es más específica, es decir, se obtienen muy pocos falsos positivos a diferencia de lo que ocurre en los medios clásicos, que nos obligaban a perder mucho tiempo después de crecer las colonias, con confirmaciones y galerías.

Gracias al medio cromogénico MugPlus CCA, inventado por MICROKIT en 1995 y que ya es el medio oficial para buscar E.coli y demás coliformes en aguas desde la Directiva UE de 2003, cambió la definición bioquímica de coliformes “bacterias entéricas que fermentan la
lactosa con producción de gas” por esta nueva definición enzimática “bacterias
beta-galactosidasa positivas”.

Prueba tu primer medio cromogénico

Por ejemplo dibujando en la placa un paisaje. Para ello debes saber que en este medio, E.coli crece con colonias azules (hay cepas turquesa, otras añil), los demás coliformes (ej: Klebsiella oxytoca) con colonias rojas (las hay rosa tenue, otras fucsia), otras bacterias pueden crecer, pero lo hacen con colonias color crema, como Pseudomonas aeruginosa, o con colonias verdes, como Shigella flexneri, con lo cual no perdemos el
tiempo con colonias no sospechosas, como nos sucedía con los medios clásicos.
Los microbios incluidos en este kit son de riesgo 2, es decir, no son inocuos, pero existe cura para ellos si accidentalmente los tragamos o los inoculamos en una herida, los ojos…
El kit para 20 alumnos consta de 20 tubos MugPlus CCA (si hay más de 20 alumnos, algunos habrán de hacer la práctica en parejas), 20 placas Petri vacías, 4 tubos BHI Broth de 9 mL, 1 lentícula de máxima concentración de cada una de las 4 cepas indicadas y 80 asas calibradas. Guardar todo FUERA DE LA NEVERA pero las 4 cepas EN EL CONGELADOR. Caducidad aprox: 1 año. Referencia KJM002

Modo de empleo:

  1. El profesor, 2 dias antes de realizar la práctica, debe abrir el tubito eppendorf y dejar caer la lentícula de E.coli en un tubo de BHI cuidando que la bolita grande, la de color, no se quede en las paredes del tubo, sino que caiga al fondo y asi se disuelva en un rato (las bolitas incoloras pueden caer sin problema, es sólo silicagel inerte). Identificar este tubo como “E.coli”, o “A” de azul. Meter la lentícula de Klebsiella oxytoca en otro tubo de BHI e identificarlo como “K.ox”, o “R” de rojo, verificando que cae al fondo. Meter la lentícula de Pseudomonas aeruginosa en otro tubo de BHI e identificarlo como “Ps” o “C” de crema. Y meter la lentícula de Shigella flexneri en el otro tubo de BHI e identificarlo como “Sh” o “V” de verde. Incubar los 4 tubos a 37ºC durante esos 2 días. Los tubos deberán estar muy turbios el día del inicio de la práctica; si no, algo ha fallado y debe pedir una nueva cepa de
    los que no hayan crecido. El profesor, 2-24 h antes de la práctica, debe fundir los tubos en agua hirviendo, enfriarlos a unos 50ºC y verter cada uno en una placa, tapándolas hasta que solidifiquen, con cuidado de no quemarse.

  2. SEGUIMOS USÁNDOLO

  3. Los alumnos, el día de la práctica, sumergirán cada una de sus 4 asas en el tubo adecuado para crear su collage de colores sembrando en estría sobre la placa del MugPlus CCA. ¡No mezclar las asas! Poner los tubos bien separados en gradilla para evitar accidentes y salpicones. Crea tu obra de arte bacteriana gracias al MugPlus CCA.
  4. Tapar las placas, darles la vuelta e incubarlas 18-48 h a 37ºC.
  5. Compara los resultados con los de los compañeros. La placa que el profesor decida que ha quedado más espectacular, puede merecer premio. Hacedle una foto, enviadla a microkit@microkit.es y participareis en el sorteo a final del curso, de un regalo sorpresa. Preguntad a este email en Junio qué Instituto ha sido el ganador del año.

https://www.microkit.es/fichas/Microcosmos-2-cromogenico.pdf

KITS ENSEÑANZA MICROCOSMOS CROMOGÉNICO

El usuario es el único responsable de la eliminación de los microorganismos según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.

Kit y práctica diseñados por MICROKIT desde 1989. Rediseñado en nuestro 30 aniversario, en Abril de 2019.