CLOSTRIDIUM PERFRINGENS LACTOSE AGAR BASE (LENA) para aislamiento selectivo de Clostridium perfringens en alimentos según ISO 15213-3:2024
Medio idéntico a lo indicado en esta Norma ISO:
COMPOSICION
Enzimatic digest of casein 10,0 g
Meat extract 10,0 g
Sodium chloride NaCl 5,0 g
Lactose C12H24O12 10,0 g
Phenol Red C19H14O5S 0,1 g
Agar-agar 15 g
(Fórmula en g/L)
Ajustar a pH final tras autoclavado: 7,3 ± 0,2
PREPARACION
1-Disolver 50,1 g de medio en 1 litro de agua bidestilada. Calentar hasta ebullición, agitando para su total homogeneización. Dispensar en tubos o frascos herméticos y esterilizar en autoclave a 121ºC durante 15 min. No sobrecalentar. El color final del medio es naranja. Se puede hacer stock de este LENA base esterilizado, manteniendo hasta 4 semanas a 5ºC.
2-Llevar hasta 44-47 ºC, 100 mL de LENA base DMT295 y añadir 1 mL de una solución de Neomycina sulfato (250 mg) SMT015 esterilizada por filtración (por 0,2 µ) en 10 mL de agua destilada estéril (para 1 L de LENA). Esta solución antibiótica se puede mantener a 5ºC hasta 4 semanas en tubos o frascos herméticos.
3-Añadir a los dos anteriores 5 mL de emulsión estéril de yema de huevo SBH010. Agitar hasta que los 3 ingredientes queden homogéneos
4-Dispensar en placas Petri estériles. Las placas así preparadas se pueden mantener en tuppers de cierre hermético (para que no pierdan humedad) hasta 4 semanas a 5ºC.
USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO. MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO, EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO. AGITAR ANTES DE USAR PARA ASEGURAR LA HOMOGENEIZACIÓN DE LOS eventuales gradientes de densidad de los COMPONENTES.
PRESENTACIÓN
-Medio deshidratado LENA BASE, botes 500 g, CÓDIGO: DMT295
-Emulsión de yema de huevo estéril CÓDIGO SBH010
-Neomycina NO estéril en viales de 250 mg, para añadir a 10 mL de agua destilada estéril/vial y elaborar 1 L de medio final/vial, Caja 40 viales CÓDIGO: SMT015. Si se usa SMT015 NO estéril:
-Agua destilada estéril en Tubos de 10 mL CÓDIGO: TPL001+
-Filtros estériles de carcasa para jeringa (lúer), 0,2 µm y 30 mm de diámetro, CÓDIGO: VHU237
-Jeringas estériles 20 mL para los filtros VHU237, CÓDIGO: VPL089
-Neomycina polvo estéril, para añadir a 10 mL de agua destilada estéril/vial y elaborar 1 L de medio final/vial ahorrando VHU237 y VPL090, CÓDIGO SMT015+I
CONTROL DE CALIDAD
Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar laboratorio, tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,…)
DESHIDRATADO: Polvo de color rosado PREPARADO: Estéril, color rojo coral (foto página anterior).
CONTROL DE CRECIMIENTO CUANTITATIVO 24 horas a 46ºC aprox:
Clostridium perfringens WDCM00007 Colonias amarillas con halo amarillo (ver foto)
E.coli WDCM00012 Completamente inhibido
Bacillus subtilis WDCM00003 Colonias amarillas sin halo de precipitación
MODO DE EMPLEO E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
Seguir las directrices de la Norma ISO 15213-3:2024
Emplear también el Rapid perfringens Medium BASE (RPM): Ver DMT293
Tambien hay que emplear otros medios clásicos según ISO 15213-3:2024: TSC Agar DMT175 con su suplemento D-Cicloserina SMS252, Columbia Blood Agar DMT020 con suplemento de sangre, SIM Agar DMT112 y reactivos Indol Kovacs SBH056, fosfatasa ácida -cancerígena- la cual imaginamos permitirán sustituir por MUP SMT009 como en la búsqueda de C.perfringens en aguas, por demostrarse como método equivalente)
https://www.microkit.es/fichas/C-PERFRINGENS-LACTOSE-AGAR-BASE-LENA.pdf
Ver tambien el caldo C.PERFRINGENS RAPID MEDIUM BASE (RPM):
https://www.microkit.es/fichas/C-PERFRINGENS-RAPID-MEDIUM-BASE-RPM.pdf
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