El nuevo medio CROMOKIT Lactobacillus Agar permite obtener resultados mucho más fiables con respecto a los innumerables falsos positivos propios del MRS Agar, como se desprende de los magníficos resultados obtenidos por los participantes en el inter Seilalimentos plus desde su lanzamiento en 2022.
Ya todos habíamos tirado la toalla en cuanto a los aerobios que son capaces de crecer en MRS y dan lugar a falsos positivos, aumentando a menudo 2 y 3 log el recuento real de los lactobacilos.
Desde que algunos participantes han cambiado al nuevo medio cromogénico CROMOKIT Lactobacillus Agar, se ha podido poner de manifiesto que el valor obtenido por ellos es clavado al valor inóculo de Lactobacilos, no como sucede con el de los usuarios de MRS Agar, que siguen teniendo que descontar del recuento obtenido en el mismo, el recuento de aerobios mesófilos en PCA (aunque esta regla funciona sólo algunas veces).
CROMOKIT Lactobacillus Agar permite la detección diferencial de Lactobacilos, porque crecen cion colonias verdes, mientras otros Lactobacillos crecen blancos y la inmensa mayoría de los aerobios mesófilos crecen con colonias incoloras o crema, o no crecen en este medio.
COMPOSICIÓN
Triptona 10,0
Extracto de levadura 5,0
Dihidrogenofosfato de Potasio 6,0
Citrato diamónico 2,0
Acetato de Sodio 15,0
Sulfato de Magnesio anhidro 0,281
Sulfato de Hierro 0,034
Sulfato de Manganeso anhidro 0,011
Glucosa 20,0
Polisorbato Tween 80 1,0
Agar-Agar 12,0
Mezcla cromogénica c.s.
(Fórmula en g/L)
Puede añadir suplementos para ajustar la fórmula a sus requerimientos específicos
pH final: ajustar a 5,8 ± 0.2
PREPARACIÓN
Disolver 71,3 g de medio en 1 L de agua bidestilada. Remover para homogeneizar, calentando hasta ebullición sin parar de remover. AUTOCLAVAR a 121ºC durante 15 minutos. Enfriar rápidamente en un baño a 45-50ºC, agitando suavemente. No volver a fundir, dispensar en placas Petri estériles que contengan 1 mL de muestra y su serie de diluciones decimales y dejar solidificar. El color del medio es crema.
PRESENTACIÓN: MEDIO DESHIDRATADO 500g (DMT506)
¡SIN LOS FALSOS POSITIVOS TAN FRECUENTES EN MRS AGAR, QUE A MENUDO SUPONEN MÁS DEL 90% DEL RECUENTO FALSEADO!
CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO
Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar laboratorio, tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,…).
DESHIDRATADO: Polvo crema
PREPARADO: Estéril, crema
CONTROL DE CRECIMIENTO 72 h a 35°C aproximadamente, en anaerobiosis:
Lactobacillus acidophilus MKTA 314, Correcto, colonias verdes o verde-azuladas
Lactobacillus casei MKTA 3932, Correcto, colonias blancas
Lactobacillus bulgaricus MKTD 20081, Correcto, colonias blancas
MODO DE EMPLEO Y LECTURA DE RESULTADOS
Preparar la muestra y su serie de diluciones decimales en Buffered Peptone Water, Buffered Peptone Neutralizing Water, MRS Broth u otro medio adecuado.
Sembrar en superficie sobre la placa preparada 0,1 mL de cada dilución, repartiendo con asa Digralsky. Tambien puede sembrar 1 mL de cada dilución en masa, cuidando que el medio esté a 45-47ºC para no destruir las células diana; pero las colonias se verán mejor en siembra en superficie.
Tras dejar que el medio absorba la muestra, invertir las placas e incubarlas a 35ºC en jarra o en bolsa de anaerobiosis (KKT001) durante 72h. Realizar el recuento de las colonias verdes (L.acidophilus) y blancas (otros lactobacilos). También pueden crecer enterococos, pediococos y especies de Leuconostoc.
NOTA
Aunque el medio es ideal para recuento de Lactobacillus acidophilus en yogurt, otros productos lácteos fermentados y en probióticos, también resulta de mayor ayuda que el MRS Agar u otros agares clásicos para recuento selectivo de Lactobacilos y acidolácticas en general, en cualquier tipo de muestra ácida.
https://www.microkit.es/fichas-tecnicas-medios-de-cultivo.htm