Archivo de la categoría: Microbiologia de Cosmeticos

Optimización en los análisis microbiológicos de
COSMÉTICOS. Nuevos métodos de análisis microbiológicos utilizados exitosamente en los laboratorios líderes

DryPlates X-Staph

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DryPlates para la detección de Staphylococcus aureus tras enriquecimiento en aguas, alimentos y cosméticos.

DryPlates X-Staph

Placas preparadas de medio deshidratado en disco nutriente, estériles y listas para su uso inmediato, que se hidratan precisamente mediante la muestra en el momento de inocularla en frío, lo que ahorra el hervido-fusión-enfriado-a-45ºC y las 2 horas de todo este trabajo propio del medio clásico para siembra por inclusión en masa. Extraordinariamente alta caducidad: 1 año desde fabricación.

CROMOKIT® X-STAPH Agar

es el medio cromogénico diseñado por MICROKIT®, donde Staphylococcus aureus crece con colonias violetas o azul oscuro, índigo, mientras otros Gram positivos (S.epidermidis, Bacillus spp.) lo hacen con colonias azul claro, turquesa. Medio válido para muestras de aguas, alimentos, cosméticos…
¡Enhorabuena por utilizar el sustituto del Siglo XXI de los medios deshidratados y de los medios preparados hidratados!

MODO DE EMPLEO para detección de patógenos tras enriquecimiento y para ambientes interiores (superficies y aires)

  1. Puede estriar con un asa con caldo enriquecido (o bien un escobillón con el que haya barrido una muestra de superficies), sobre cualquier DryPlates®, previamente hidratada con 1 ml de agua estéril (recuerde, el disco sobre el ml de agua centrado y no al revés). El viraje de la estría y las colonias aisladas al final de la misma contrastarán mejor con el color de base del medio.
    Las DryPlates son las únicas placas deshidratadas que permiten la siembra en ESTRÍA y por tanto, detectar patógenos de la forma más fiable: tras el enriquecimiento de la muestra. En cambio sembrar 1 ml de caldo enriquecido, como indican los otros fabricantes, casi siempre da falsos negativos (millones de ufcs generadas tras el enriquecimiento, compiten por el sustrato en placa y crean millones de microcolonias diminutas, invisibles, con un cambio de color de todo el medio, que a menudo resulta demasiado tenue, indetectable).
  2. También puede dejar la DryPlates® de cualquier medio, previamente hidratada con 1 ml de agua estéril (recuerde, el disco sobre el agua centrada y no al revés), abierta durante 10-15 minutos en los puntos críticos de la sala, para realizar una estimación “de campo” de la flora ambiental (aunque es mejor usar un muestreador tipo Microflow o MBS para obtener recuentos por m3 de aire)

NOTA DESDE 11-2017:

No resulta recomendable este medio en DryPlates para recuentos, dado que la molécula cromogénica es enorme y un alto porcentaje de la misma escapa de la red textil, pudiendo dar lugar a resultados falsamente negativos por empobrecimiento del color de los microorganismos allí crecidos. En cambio la DryPlates-XStaph es muy útil para detección tras enriquecimiento, porque tras enriquecer, los microorganismos están muy concentrados y las colonias originadas se evidencian muy bien en la estría, que queda muy nítida con su color azul sobre el disco blanco. Para recuentos es mejor utilizar este medio cromogénico, pero en cualquiera de sus demás versiones: polvo deshidratado para autoclavar, placas preparadas, plaquitas herméticas, tubos o frascos, ya que en ellos al hidratarse el cromógeno, se reparte homogéneamente en el 100% de la superficie del medio.

CONSERVACIÓN Y PRECAUCIONES DE USO

Almacenar a temperatura ambiente (ideal 15-25ºC) ¡no en nevera!, ya que en ésta la humedad es más fácil que prehidrate y estropee los discos nutrientes. Eso sí, es imprescindible almacenar en lugar muy seco y oscuro, ya que la humedad y la luz dañan irreversiblemente los medios de cultivo deshidratados. Si trabaja en zonas de alta humedad atmosférica, almacene las DryPlates®, bien cerradas en su bolsa, dentro de una caja hermética “tupper” con sacos antihumedad (ej: MICROKIT VRB747).

DryPlates para la detección de Staphylococcus aureus tras enriquecimiento en aguas, alimentos y cosméticos. Mantenga un stock de medios de cultivo de larguísima caducidad, para emergencias, o para uso rutinario.

https://www.microkit.es/fichas/Dry-Plates-X-STAPH-Prospecto.pdf

GAMA COMPLETA

Otros muchos medios en DryPlates®:

Aerobios totales (en alimentos y cosméticos, en aguas y en aguas oligotróficas),

Hongos (levaduras y mohos),

E.coli y demás coliformes,

Enterobacterias,

Bacillus cereus,

Pseudomonas aeruginosa,

Burkholderia cepacia,

Candida albicans,

Enterococos fecales,

Salmonella spp.,

Vibrio parahaemolyticus-Vibrio cholerae,

Otros medios en formato DryPlates®: consúltenos.

El usuario final es el único responsable de la eliminación de los microorganismos según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.

Diseño y fabricación 100% españoles. Derechos de explotación de la PATENTE concedidos en exclusiva a Laboratorios MICROKIT, S.L. tras más de 23 años de ensayos y mejoras para poder ofrecerle el mejor y más versátil producto de estas características.
Medio validado en base a la Norma UNE-EN-ISO 16140, con recuperaciones muy superiores (hasta el 280%) a la de Baird Parker, rpf y Mannitol Salt Agar, evitando los falsos positivos y falsos negativos de los dos primeros, y los falsos positivos del tercero.
DryPlates® es marca registrada por Laboratorios MICROKIT, S.L.

https://www.microkit.es/monograficos/1-Estafilococo-dorado-monograf–a.pdf

https://www.microkit.es/monograficos/19-Monograf–a-Recuento-en-masa-sin-tener-que-perder-el-tiempo-fundiendo-agares.pdf

Haga sus consultas de este medio en: microkit@microkit.es

Haga sus pedidos de este medio en: pedidos@microkit.es

En este vídeo puedes entender mejor la hazaña de las DryPlates® y cómo usarlas:

https://www.youtube.com/watch?v=vkdRD5ulpSY&t=29s

KOSMLAB

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KOSMLAB
KosmLab nace de MICROKIT, con la idea de ofrecer otros servicios al laboratorio tras la experiencia acumulada de 33 años:

Análisis microbiológicos de cosméticos: seguridad lote tras lote. Y en aguas y ambientes interiores. Cursos, validaciones y auditorías.

 

  • Auditorías/Consultorías para la optimización de métodos y protocolos microbiológicos 
  • Cursos de iniciación al autocontrol microbiológico en fábricas de cosméticos
  • Cursos que incluyen las Validaciones de sus métodos de análisis microbiológico
  • Análisis microbiológicos de cosméticos, aguas y ambientes. Los análisis más completos: encontramos patógenos que nadie más busca pero le crearían retiradas de mercado si estuvieran en sus productos
  • Test de eficiencia antimicrobiana
  • Creación de medios de cultivo MICROKIT más adecuados para microbiología de cosméticos, donde los microorganismos se encuentran subletales a causa de los conservantes y a pesar de la neutralización de los mismos: LPT Neutralizing Broth, PCA+TSA cromogénico, Rapid YM Agar, MugPlus Agar, Rapid Cetrimide Agar, Baird Parker cromogénico (BPX19 Agar), CUP12A para el resto de patógenos cosméticos que han provocado retiradas de mercado.
  • Primer laboratorio de España con 100% de aciertos en las 3 rondas intercomparativas en las que ha participado en 2022 (GSC e ielab).

¿Necesita externalizar sus análisis microbiológicos de cosméticos y sus materias primas? 

https://cosmlab.wixsite.com/cosmlab

Recuerde: Las Normas ISO de microbiología cosmética NO SON de obligado cumplimiento. Lo único obligado es la legislación: el Reglamento  CE 1223/2009  y el RD 85/2018 de 23/Febrero, que exigen la seguridad e inocuidad del cosmético.

Esas palabras tan laxas, traducidas a la microbiología, significan sólo una cosa: ausencia de patógenos.

Por eso hay tantas retiradas de mercado en este sector cosmético por problemas microbiológicos, porque la mayoría de fábricas con autocontrol y la mayoría de labs externos, siguen convencidísimos en su «matrix ISO» (incluidos algunos inspectores), y casi nadie busca otros patógenos, que son los que provocan dichas retiradas.

Porque los responsables de Salud Pública que realizan campañas de análisis de cosméticos tomados al azar en el mercado, sí que los buscan, y por eso los encuentran, ya que nadie los ha buscado antes y los cosméticos han sido liberados al mercado no siendo seguros / inocuos.

SERVICIOS DE KOSMLAB

 

LA GRAN DIFERENCIA

Haga una prueba: envíenos unas cuantas muestras de sus cosméticos al servicio de análisis microbiológico completo (lo que realmente le está pidiendo la legislación) y podrá comprobar en los informes, de qué estamos hablando. Es la diferencia entre:

a) cumplir con la legislación, o

b) dejarse llevar por la moda impuesta por las Normas ISO de control microbiológico de cosméticos, que se quedan muy cortas (sólo 4 patógenos frente a los 14 que están provocando reiteradas retiradas de mercado de cosméticos por imposición de las autoridades sanitarias), que de este modo, le están diciendo claramente si la opción correcta es la a) o la b).

COSMETIKIT® WATER

4 respuestas

KIT COMPLETO PARA MICROBIOLOGÍA DE AGUAS DE USO COSMÉTICO

Kit Microbiología Aguas Cosméticas para control completo de las aguas empleadas en la fabricación de productos cosméticos

COSMETIKIT® WATER es un KIT COMPLETO  para análisis directo de recuento de aerobios y de Presencia/Ausencia de patógenos en frascos toma-muestras, sin necesidad de aparato de filtración. Contiene inactivadores del cloro. Para control completo de las aguas empleadas en la fabricación de productos cosméticos

COSMETIKIT WATER

INTRODUCCIÓN

El control microbiológico del agua  es de la máxima importancia en la elaboración de productos cosméticos porque se trata de una de las materias primas usadas en mayor cantidad y también por usarse para tareas de limpieza, enjuague de envases, equipos, etc.

Una calidad deficiente en el agua de uso cosmético puede causar contaminaciones en el producto final con serias repercusiones en la salud del usuario final y en la estabilidad del producto.

La actual legislación garantiza la calidad del agua a la salida de la potabilizadora y a la salida de los grifos públicos, pero NO a la salida de los grifos privados que utilizan el consumidor y las industrias. Las continuas obras públicas, así como las internas de los edificios, ponen en grave peligro la seguridad final del agua, a menudo por infiltración de aguas fecales en la red potable; por ello es imprescindible su re-control privado.

SON KITS VALIDADOS

Los kits P/A de MICROKIT han sido validados en España, comparando durante años los datos de decenas de laboratorios mediante análisis clásico por Filtración de membrana y los resultados obtenidos mediante esta cómoda técnica. En nuestra página Web (www.laboratoriosmicrokit.com) encontrará las 4 publicaciones que respaldan esta validación y demuestran que el método no sólo es tan bueno como el de Filtración de membrana, sino incluso mejor.

Además, es mucho más sencillo y rápido de manejar, ahorrando el uso de aparatos de filtración y dejando el análisis microbiológico del agua al alcance de todo usuario, sin necesidad de un laboratorio especial.

Realice un análisis semanal (para mayor seguridad, uno diario) para verificar que el agua que sale de la potabilizadora municipal llega pura a sus instalaciones y se mantiene limpia en ellas, sin infiltración de aguas residuales ni otros serios problemas microbiológicos.

Según la reglamentación actual (R.D.140 de 2003) un agua sólo es apta para consumo humano o para uso en fábricas de alimentos, si no contiene patógenos o sus indicadores (Coliformes- E. coli, Enterococos fecales, Clostridium perfringens y sus esporas) en 100 ml y si el recuento total de aerobios asociados al hombre es inferior a 20 ufc/1 mililitro (incubando 24 h a 37 ºC) y el recuento total de aerobios saprófitos es inferior a 100 ufc/1 mililitro (incubado 72 h a 22 ºC), en ambos casos en medio nutritivo YEA. Sin embargo, no existen criterios específicos para aguas de uso cosmético.

AGUAS DE USO COSMÉTICO

Dada la especial idiosincrasia de la industria cosmética, la prudencia exige el control de los microorganismos que más frecuentemente dan problemas en el sector. Hemos elegido para este kit como único indicador fecal la detección de Enterococos fecales, ya que es el parámetro que demuestra ser mejor detectado en los laboratorios que participan en los intercomparativos SEILAGUA®.

La detección de Coliformes y E.coli puede considerarse redundante, ya que si están presentes, también lo van a estar los Enterococos fecales, que además nos indican una contaminación más amplia en el tiempo (E.coli en aguas sólo es viable 24 h mientras los Enterococos fecales resisten 1 semana). No obstante si desea añadir este parámetro a su control, utilice además el kit P/A RPL303.

Los clostridios son indicadores de posible presencia de enterovirus y protozoos en aguas naturales tratadas, lo cual no resulta muy probable de encontrar en el sector cosmético. No obstante si emplea aguas de pozo, utilice además el kit P/A RPL308.

Hemos elegido como parámetros adicionales en el kit, la detección de Pseudomonas aeruginosa y la detección de Burkholderia cepacia, los dos patógenos que dan problemas habituales tanto en aguas tratadas como en aguas purificadas.

Por fin, añadimos los dos recuentos de aerobios totales en las cómoda DryPlates®, medios preparados pero deshidratados, que absorben directamente 1 ml del agua de muestra sin necesidad de fundir medios sólidos. 

MODO DE EMPLEO DEL COSMETIKIT® WATER

1. Presencia o Ausencia de Enterococos fecales, de Pseudomonas aeruginosa y/o
de Burkholderia cepacia:

Añadir 100 ± 1 ml del agua de muestra a cada uno de los
tres frascos (RPL301, RPL302 y RPL323), sin llenar para dejar una cámara de aire,
agitando suavemente para diluir su contenido concentrado. Cerrar el tapón e incubar
18-72 horas a 35-37ºC.

Si el frasco de Enterococos (ámbar con menisco azul) se
vuelve negro y pierde su iridiscencia (Fig.1, izquierda), hay contaminación fecal por
infiltración de aguas residuales.

Si el frasco de Pseudomonas aeruginosa (incoloro)
se vuelve rosa o rojizo (Fig.2, izquierda), y/o el de Burkholderia cepacia
(anaranjado) se vuelve rojo vino tinto (Fig.3, izquierda), estos patógenos se han
infiltrado en nuestras aguas.

La presencia de cualquiera de estos microorganismos
impide el uso del agua para fabricación de productos cosméticos.

Añada cloro o lejía

hasta el borde de los botes usados, o bien autoclávelos, antes de desecharlos.

+ Fig.1 –                                                                   +Fig.2-                                                + Fig.3 –

2.Recuento de aerobios a dos temperaturas:

Añadir con una pipeta estéril 1 ml del
agua de muestra en el centro de una placa vacía y depositar encima el disco Dry-
Plate®-TC-R2. Dejar embeber el medio deshidratado y cerrar.

Repetir la operación
con otra Dry-Plate®-TC-R2. Incubar una placa 24 h a 35 ºC aprox. y otra 48-72 h a
22 ºC aprox.

Si se emplean incubadores, no voltear las placas, no dejar que toquen el
metal de la estufa (suelo, paredes y techo) y poner a incubar junto a un vaso lleno de
agua.

Contar todas las colonias, que gracias al cromógeno, crecen con colores de la
gama del rojo (rosa, naranja, rojo, Fig.4).

Para que el agua pueda considerarse apta
para consumo, debe haber menos de 20 colonias en la placa incubada 1 día a 35°C y
menos de 100 colonias en la placa incubada 2-3 días a 22°C.

Fig.4 (>100 colonias)

 CONTENIDO DEL KIT

CODIGO: KMT450                              

 PARA 10 TEST COMPLETOS de los 5 parámetros:

  • 10 Jeringas 50 ml estériles (sin aguja).

  • 10 Pipetas Pasteur estériles.

  • 10 Frascos P/A para deteccción de Pseudomonas aeruginosa, patógeno procedente de aguas mal purificadas.

  • 10 Frascos P/A para deteccción de Burkholderia cepacia, patógeno procedente del biofilm de aguas estancadas.

  • 10 Frascos P/A para deteccción de Enterococos, los mejores indicadores a largo plazo (1-7 días) de infiltración de aguas fecales.

  • 20 Compact Dry Plates ® TC para recuento total de aerobios a 22°C  y a 35 °C.

MANTENER LOS KITS A TEMPERATURA AMBIENTE (4-25ºC). ES MUY IMPORTANTE MANTENERLOS AL RESGUARDO DE LA LUZ.

MATERIAL CONVENIENTE NO INCLUÍDO:

  • Estufas a 22 y a 35ºC (VRP001) (imprescindibles).
  • Zona aséptica: Lámpara de alcohol (VLM068) o Portabunsen (ME2195) y Envirostéril (VJM002), si no se  dispone de cabina de flujo laminar.
  • Test confirmativos de frascos sospechosos (todos disponibles consultando en MICROKIT).
  • Cepas certificadas (ver lentículas cuantitativas MICROKIT).
  • Servicios  intercomparativos (SEILAGUA®).
  • Frascos  P/A STAPH para Staphylococcus aureus si se utilizan aguas de muy dudosa calidad (RPL320).
  • Frascos P/A MCC para Coliformes y E.coli si se desea saber si la contaminación por infiltración de aguas fecales es muy reciente (de hace sólo unas horas): RPL303
  • Frascos P/A Clostricult si el agua procede de pozos profundos y desea controlar la contaminación por clostridios, indicadores de enterovirus y patógenos (RPL308).
  • Si utiliza este kit a diario (o una o dos veces por semana), no es necesario realizar más análisis microbiológicos de las aguas, pero si lo utiliza sólo una vez al mes, añada al menos un control semanal (o mejor diario) de recuento de aerobios a ambas temperaturas mediante las Compact Dry Plates ® TC  (Ref: 1000166).

Kit Microbiología Aguas Cosméticas para control completo de las aguas empleadas en la fabricación de productos cosméticos

https://www.microkit.es/pdf/COSMETIKIT-Water.pdf

NOTA: Si realiza muchos análisis de aguas cosméticas puede crear su propio kit para que el coste sea de sólo 4 €/muestra. Pidiendo las DryPlates-R2A y los 3 kits P/A en su formato económico (botes de 100 g de polvo estéril con cucharilla para dosificar): Enterocult (o Colicult), Pseudocult y Burkholderia Cromogenic Broth.

El usuario es el único responsable de la eliminación de los microorganismos según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.

Si desea más información sobre nuestro COSMETIKIT® WATER no dude en contactar con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es, o por teléfono en nuestro telefono 91-897 46 16.

COSMETIKIT ® CLASSIC

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MICROKIT COSMETIKIT ® CLASSIC

cosmetikit-classic, kit completo para el análisis microbiológico estándar de productos cosméticos y sus materias primas

INTRODUCCION          

Con este kit y la simple ayuda de un Baño María y una estufa de cultivos, toda industria cosmética puede realizar el análisis microbiológico completo en 20 muestras diferentes, de la forma más eficiente que un laboratorio pueda realizar.

Si desea controlar también el agua, utilice nuestro COSMETIKIT-WATER (ref: KMT450). Si desea controlar también las superficies de trabajo, recipientes, etc, utilice nuestros laminocultivos DESINFECTEST® (Ej.ref: MBN407) y para las manos de operarios nuestros KITS PARA MANIPULADORES (ref: kmt020).

CONTENIDO (CADUCIDAD APROX. 1 AÑO DESDE FABRICACION)

  • 20 Jeringas 20ml estériles (sin aguja)COSMETIKIT CLASSIC
  • 20 Pipetas Pasteur estériles.
  • 2 x 10 Frascos 90ml c/perlas para tratamiento de la muestra (LPT100 Broth Incoloro  RPL054P).
  • 20 Tubos para recuento total (LPT100.Neutralizing Agar Purple TPL200).
  • 20 Tubos para levaduras y mohos (Rosa Bengala CAF agar TPL072).
  • 20 Tubos para Pseudomonas aeruginosa (Cetrimide Agar TPL100).
  • 20 Tubos para E.coli y demás Coliformes (MUGPLUS Cfs.Agar TPL400).
  • 20 Tubos para Staphylococcus aureus (Mannitol Salt Agar TPL066).
  • 20 Tubos inclinados para Candida albicans (Biggy Agar TPL062).
  • 20 Tubos para Burkholderia cepacia (BCPT Agar TPL005)
  • 120 Placas Petri  estériles de 90 mm.

MATERIAL NECESARIO NO INCLUIDO

1. Estufa a 35-37ºC (VRP001), Baño María, hervidor o microondas.

2. Zona aséptica: lámpara de alcohol (VLM068), portabunsen o envirostéril (VJM002).

3. Test confirmativos de colonias sospechosas

4. Cepas de referencia, de trabajo o cuantitativas para validar los reactivos una vez llegados a fábrica o tras almacenamiento prolongado o inadecuado

5. Participar en servicios intercomparativos como SEILAPARFUM para validar procedimientos y analistas.

 

MODO DE EMPLEO

(Seguir al pie de la letra para obtener resultados correctos y validados)

  1.  Añadir con una jeringa estéril, asépticamente, 10 gramos o 10 ml de muestra a un Frasco 90ml LPT Neutralizing  Broth con perlas. Cerrar el tapón. Mezclar agitando y dejar actuar no menos de 20 ni más de 30 minutos a 21-25°C aproximados. Así se obtiene la solución madre (muestra tratada).
  2. Con la ayuda de una Pipeta Pasteur estéril añadir de inmediato 1 ml de la muestra tratada recién agitada a una placa Petri estéril, en condiciones asépticas. Repetir la operación en otra placa, con la misma pipeta y para la misma muestra. Es conveniente realizar duplicados (Pida TPL200 y TPL072).
  3. Fundir al Baño María un tubo de LPT Neutralizing Agar y otro de Rosa Bengala CAF, hasta que estén  totalmente licuados (si duplica las placas, funda dos tubos de cada medio por muestra).
  4. Cuando se hayan enfriado lo suficiente para no quemar la mano, pero sigan líquidos, añadir cada uno a una placa con el mililitro de muestra tratada. Los mohos tambien se pueden sembrar en superficie, 0,1-0,33 ml mediante asa de Digralsky. Mejor sembrar en masa 1ml y en superficie 0,1ml.
  5. Hacer girar las placas sobre la mesa 10 veces en cada sentido para asegurar la mezcla del medio con la muestra, con cuidado para que no rebose el líquido ni llegue a la tapa de la placa. Dejar solidificar sin tocar (si la temperatura ambiente no es elevada, 10-15 minutos serán suficientes).

  6. Si prefiere usar un método más moderno y ahorrarse todas estas fusiones-enfriamientos de medios: UTILICE COSMETIKIT EASY-PLUS

  1. Incubar las placas en posición invertida y en total oscuridad, 3-5 días a 30-35 ºC (LPT Neutralizing Agar) y (3)-5 días a 20-25 ºC (Rosa Bengala Caf.Agar).
  2. A la vez que esas placas, incubar el resto de muestra tratada en LPT Broth durante 48 h a 30-35°C para obtener la muestra tratada y enriquecida,  necesaria para la búsqueda de patógenos.
  3. Añadir unas gotas (tras enriquecer no hace falta más precisión) de la muestra enriquecida, recién agitada, a un tubo inclinado Biggy Agar Candida, con una misma pipeta estéril y repartir, volteando.
  4. Añadir unas gotas de muestra tratada enriquecida, recien agitada, a una placa Petri estéril, en condiciones asépticas. Repetir en otra placa, con la misma pipeta y para la misma muestra.
  5. Fundir al Baño María un tubo de MUGPLUS Cfs.Agar, otro de Mannitol Salt Agar, otro de Cetrimide Agar y otro de BCPT Agar hasta que estén totalmente licuados.
  6. Cuando se hayan enfriado lo suficiente para no quemar la mano, pero sigan líquidos, añadir el contenido del MUGPLUS y del Mannitol a sendas placas con las gotas de muestra enriquecida.

  1. Puede usar un método más moderno y ahorrarse todas estas fusiones-enfriamientos de medios: UTILICE COSMETIKIT EASY-PLUS

  1. Hacer girar las placas sobre la mesa 10 veces en cada sentido para asegurar la mezcla del medio con la muestra, con cuidado para que no rebose el líquido ni llegue a la tapa de la placa. Dejar solidificar sin tocar. Esta siembra en masa es imprescindible en Coliformes-E.coli y en estafilococos.
  2. Verter el contenido del Cetrimida y del BCPT en sendas placas Petri estériles y dejar solidificar. Sembrar en zigzag sobre su superficie una gota de la muestra enriquecida recién agitada.
  3. Es una buena práctica sembrar además en otra placa de LPT Agar, en zigzag, una gota del enriquecimiento recién agitado para aislar colonias e identificarlas (¡no para contarlas!), a fin de aumentar la sensibilidad para cepas  estresadas, que podrían no crecer en los medios selectivos.
  4. Incubar las placas en posición invertida, y los tubos de Candida albicans en posición vertical, durante 24-72 horas a 30-35 ºC. No apilar más de 5 placas y dejar espacio entre las pilas, y entre éstas y las paredes de la estufa.

INTERPRETACION DE RESULTADOS

El recuento total (placas de Neutralizing Agar) no conviene que sea superior a 100-1000 ufc/ml ó gramo de muestra inicial, según las exigencias (cosmética infantil-general). De modo que no deben aparecer más de 10-100 colonias por placa, dada la dilución efectuada en la solución madre. Lo mismo para recuento de levaduras (colonias convexas) y mohos (colonias filamentosas) (Placas Rosa Bengala CAF Agar).  De lo contrario, y siempre que no haya patógenos, se puede reprocesar el lote.

No debe aparecer ninguna colonia de Escherichia coli (colonias azules en placas de MUGPLUS Cfs.Agar; las colonias rosas en este medio son indicadoras de coliformes, que sin ser patógenos, ni indicadores exclusivos de contaminación fecal, suelen provocar alteraciones en la muestra), de Pseudomonas aeruginosa (colonias amarillas-verdosas o pardo-rojizas en placas de Agar Cetrimida), de Burkholderia cepacia (colonias blancas o salmón, con medio virado a fucsia, en BCPT), ni de Staphylococcus aureus (colonias amarillas en placa de Agar Mannitol), patógenos procedentes de contaminación fecal, del agua, del biofilm del agua y de operarios-aire, respectivamente.

Si aparece alguna colonia parda (que no provoque viraje de color del medio a pardo-negro) en el tubo de Biggy Agar, será de Candida albicans, lo que demuestra contaminación por mucosas de operarios portadores. Si aparece cualquiera de los 5 patógenos, hay que destruir el lote.

Para confirmar definitivamente, consúltenos sobre nuestros kits de identificación de colonias sospechosas.

Para más información no dude en ponerse en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16

Ver también el kit más moderno «COSMETIKIT EASY-PLUS» cuya ventaja es que no hay que fundir medios, manteniendo la larga caducidad del COSMETIKIT clásico.

https://www.microkit.es/pdf/cosmetikit.pdf

COSMETIKIT ® EASY-PLUS

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COSMETIKIT ® EASY-PLUS

COSMETIKIT ® EASY-PLUS es el Kit análisis microbiológico cosméticos, todos los parámetros para un correcto análisis

 TOTALMENTE ACORDE  AL MANUAL DE MICROBIOLOGÍA COSMÉTICA DEL MINISTERIO DE SANIDAD Y A LAS DE  NORMAS  ISO SOBRE  MICROBIOLOGÍA COSMÉTICA, MEJORADAS

Kit análisis microbiológico de cosméticos. Con este kit y la simple ayuda de una estufa de cultivos, toda industria cosmética puede realizar el análisis microbiológico completo en 60 muestras diferentes, de la forma más eficiente que un laboratorio pueda realizar. CADUCIDAD: APROX. 1 AÑO DESDE FABRICACION 

Si desea controlar el agua, utilice nuestros kits Cosmetikit®-Water, especialmente diseñados para microbiología de aguas de uso cosmético. Si desea controlar también las superficies de trabajo, recipientes, etc., utilice nuestros laminocultivos DESINFECTEST®. Y para el control de operarios le ofrecemos nuestro MANIPULADORES-KIT. 

CONTENIDO (caja de 60 TEST completos) Kit análisis microbiológico cosméticos

–  60 Jeringas 20 ml estériles (sin aguja)

–  60 Pipetas Pasteur estériles

–  6 x 10 Frascos LPT 100 Broth Incoloro 90 ml CON PERLAS para tratamiento de 10 gramos de muestra

–  60 Dry Plates ® TC para recuento total de aerobios.

–  Otras 60 Dry Plates ® YM para recuento total de hongos (levaduras y mohos).

–  60 Dry Plates ® X-SA para detección de Staphylococcus aureus.

–  Otras 60 Dry Plates ®  EC para detección de coliformes y E. coli.

–  60 Dry Plates ®  CANDI para detección de Candida albicans

–  Otras 60 Dry Plates ®  PS para detección de Pseudomonas aeruginosa

–  60 Dry Plates ®  BCPT para detección de Burkholderia cepacia, el emergente de los cosméticos.

– Y 60 Dry Plates ®  CUP12A para detección de los demás patógenos «no especificados», que generan la mayoría de retiradas de mercado de los cosméticos, porque la mayoría de laboratorios aún cree que no necesitan contemplarlos.

MATERIAL NECESARIO NO INCLUÍDO

  • Estufa a 35-37 ºC (PT2499),
  • Ø   Zona aséptica: Portabunsen (ME2195+ME2196) y Envirostéril (VJM002) si no se dispone de cabina de flujo laminar.
  • Test confirmativos de colonias sospechosas (todos disponibles consultando en MICROKIT).
  • Cepas de referencia, de trabajo o cuantitativas para validar los reactivos una vez llegados a fábrica o tras almacenamientos prolongados o inadecuados (Ver lentejas cuantitativas MICROKIT)
  • Participar en servicios intercomparativos de microbiología de cosméticos para validar procedimientos y analistas en sus propias instalaciones.

MODO DE EMPLEO Kit análisis microbiológico cosméticos

1.- Añadir con una jeringa estéril, asépticamente, 10 gramos o 10 ml de muestra a un Frasco 90ml LPT Neutralizing Broth con perlas. Cerrar el tapón. Mezclar agitando y dejar actuar no menos de 20 ni más de 30 minutos a 21-25°C aproximados. Así se obtiene la solución madre (muestra tratada).

2.- Con la ayuda de una Pipeta Pasteur estéril añadir de inmediato 1 ml de la muestra tratada recién agitada al centro de la base de una Dry Plates ® TC, para recuento de aerobios, en condiciones asépticas. En todas las Dry Plates ®, añadir la muestra a la placa y luego dejar caer encima el disco con medio (nunca al revés). La muestra se auto-difundirá inmediatamente sin necesidad de asas o aplicadores. Es conveniente realizar duplicados de placas de recuento de aerobios, para poder incubar una a 35°C y otra a 25°C (pida una caja adicional de la referencia DPP001). Repetir la operación en una Dry Plates ® YM, para recuento de hongos (levaduras y mohos) con la misma pipeta y para la misma muestra.

3.- Incubar las placas Dry Plates ® en posición invertida y en total oscuridad, 1-3 días a 30-35 ºC (una de las TC) y 2-4 días a 20-25 ºC (la otra TC y la YM).

4.- A la vez que esas placas, incubar el resto de muestra tratada en LPT Broth durante 48 h a 30-35°C para obtener la muestra tratada y enriquecida,  necesaria para la búsqueda de patógenos.

SEGUIMOS CON EL ANÁLISIS

5.- Tras este enriquecimiento para patógenos, añadir 1 ml de la muestra enriquecida, recién agitada, al centro de la base de una Dry Plates ® X-SA para detección de Staphylococcus aureus. Repetir la operación en una Dry Plates ®  EC para detección de E.coli y demás Coliformes, con una misma pipeta estéril. Hacer lo mismo en una Dry Plates ®  CANDI para detección de Candida albicans. Repetir la operación en una Dry Plates ® PS   para detección de Pseudomonas aeruginosa.  hacer lo mismo en una Dry Plates ®  BCPT para detección de Burkholderia cepacia, el patógeno emergente de los cosméticos. En todas las Dry Plates ®, añadir la muestra a la placa y luego dejar caer encima el disco con medio (nunca al revés).

dry plates uso

6.- Es una buena práctica sembrar además en otra placa de Dry Plates ® TC, 1 ml del enriquecimiento recién agitado para aislar colonias e identificarlas (¡no para contarlas!), a fin de aumentar la sensibilidad para cepas  estresadas, que podrían no crecer en los medios selectivos.

7.- Incubar las placas Dry Plates ® en posición no-invertida, separándolas del calor del metal de la base (o gradilla) de la estufa, con una placa vacía, durante 24-72 horas a 30-35 ºC. No apilar más de 5 placas y dejar espacio entre las pilas, y entre éstas y las paredes de la estufa. Dejar en la estufa un vaso lleno de agua para evitar la desecación de los medios DryPlates ®.

 INTERPRETACION DE RESULTADOS 

El recuento total (Dry Plates ® TC, colonias rojas 1) no conviene que sea superior a 100-1000 ufc/ml ó gramo de muestra inicial, según las exigencias (cosmética infantil-general). De modo que no deben aparecer más de 10-100 colonias por placa, dada la dilución efectuada en la solución madre. Lo mismo para recuento de levaduras (Dry Plates ® YM, colonias no filamentosas 2a) y mohos (idem, colonias filamentosas 2b). De lo contrario, y siempre que no haya patógenos, se puede reprocesar el lote. Esta precisión no se puede obtener utilizando placas preparadas clásicas, ya que éstas no absorben 1 ml y en el mejor de los casos (que absorban bien 0,3 ml), su rango inferior de detección sería excesivo para estas necesidades (3 colonias están muy por debajo de la incertidumbre mínima necesaria en un recuento en placa).

No debe aparecer ninguna colonia de Escherichia coli (colonias o manchas azules 3a en Dry Plates ®  EC; las colonias o manchas rosas 3b en este medio son indicadoras de coliformes, que sin ser patógenos, ni indicadores exclusivos de contaminación fecal, suelen provocar alteraciones en la muestra),ni deStaphylococcus aureus (colonias o manchas azules 4 en Dry Plates ® X-SA), ni de Pseudomonas aeruginosa (colonias o manchas rojas con fluorescencia 5 en Dry Plates ®-PS),ni de Burkholderia cepacia (colonias o manchas blancas o salmón, con medio virado a fucsia 6, en Dry Plates ®  BCPT),ni de Candida albicans (colonias o manchas pardas que no provoquen viraje de color del medio a pardo-negro 7 en el Dry Plates ®CANDI, patógenos procedentes de contaminación fecal (coliformes yE.coli), del agua (Pseudomonas), del biofilm del agua (Burkholderia), de operarios portadores o del aire-superficies (Staphylococcus, Candida).

cosmetikit easy

Si aparece cualquiera de los 5 patógenos, hay que destruir el lote. Para confirmar definitivamente, consúltenos sobre nuestros kits de identificación de colonias sospechosas.

Si desea más información sobre nuestro COSMETIKIT EASY-PLUS rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto . O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16 

https://www.microkit.es/pdf/COSMETIKIT-EasyPlus.pdf

Solicite además las DryPlates-CUP12A, nuevo medio para la detección de los demás patógenos que crean retiradas de mercado de cosméticos, también en formato de placas preparadas deshidratadas, y que, junto a COSMETIKIT-EASY-PLUS, le permitirá seguir a rajatabla y completamente  la legislación actual en microbiología de cosméticos.

https://www.microkit.es/monograficos/23-Monograf–a-CURSO-DE-MICROBIOLOG–A-COSM–TICA-EN-LA-TERCERA-D–CADA-DEL-SIGLO-XXI.pdf

 

CRIOTECA®

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VIALES CRIOTECA® – CONSERVACIÓN AVANZADA DE CEPAS MICROBIANAS

PRESENTACIÓN

Los viales CRIOTECA® están diseñados para una conservación eficaz, segura y prolongada de cepas microbianas. Estos viales, pioneros en su fabricación en España desde 1991, incorporan criobolas de porcelana porosa especialmente tratadas y un líquido criogénico optimizado, lo que permite:

  • Minimizar resiembras, contaminaciones y mutaciones.

  • Garantizar la preservación de la primera generación inoculada.

  • Mantener las cepas vivas durante años.

Gracias a la colaboración con uno de los centros oficiales que gestiona las cepas causantes de brotes alimentarios, hospitalarios e hídricos, hemos conseguido optimizar nuestros caldos criogénicos, marcando una clara diferencia frente a otras marcas del mercado.

Ventajas destacadas

  • Mayor seguridad: tapón alto que evita el contacto directo con la muestra.

  • Alta eficiencia: mayor cantidad de criobolas (25 por vial) para asegurar la recuperación de la cepa.

  • Máxima optimización: menor volumen por vial y cajas CRIOBOX ultracompactas, ahorrando espacio en almacenamiento.

  • Fórmula mejorada: líquido criogénico especialmente desarrollado para una mayor viabilidad y recuperación de las cepas.

  • Precio más competitivo frente a kits importados similares.

  • Cierre totalmente hermético y caducidad de 5 años desde la fabricación. Si se conservan en nitrógeno líquido, este periodo puede extenderse incluso más allá.

Resultados validados con numerosos microorganismos:

  • Gram positivos: Bacillus cereus, Staphylococcus aureus, Listeria monocytogenes, Lactobacillus plantarum, etc.

  • Gram negativos: Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella abony, Campylobacter jejuni, Legionella pneumophila, entre otros.

  • Levaduras: Saccharomyces cerevisiae, Candida albicans, Rhodotorula glutinis…

  • Mohos: Aspergillus niger, Penicillium digitatum, Mucor racemosus, entre otros.

TIPOS DE CRIOTECA® DISPONIBLES

  • CRIOTECA® CLÁSICA (KPX006)
    Para bacterias en general, levaduras y mohos. Bolitas amarillas.

  • CRIOTECA® YM (KPX007)
    Formulada específicamente para hongos (levaduras y mohos). Bolitas blancas.

  • CRIOTECA® MARINA (KPX008)
    Especial para microorganismos halófilos como Vibrio. Bolitas marrones.

  • CRIOTECA® SKIM MILK (KPX003)
    Ideal para microorganismos exigentes, como micobacterias. También es excelente para bacterias comunes. Líquido blanco y bolitas verdes. (Es nuestra referencia más vendida, con 50 veces más demanda que la clásica).

  • CRIOTECA® CAMPY (KPX009)
    Óptima para Campylobacter y Helicobacter. Bolitas azules.

  • CRIOTECA® ACUÁTICA (KPX010)
    Especializada para bacterias presentes en el agua, incluyendo Legionella, Pseudomonas, Aeromonas, E. coli, Acinetobacter, Plesiomonas, entre otras. Bolitas rojas.

MODO DE EMPLEO – Conservación de cepas en criobolas

  1. Introduzca una suspensión espesa del cultivo (idealmente fresco, 18-24h) o una colonia directamente en el vial.

    • Para bacterias: Agar Sangre, TSA, BHI o TSB.

    • Para hongos: SDA, SDB o YMB.

  2. Si usa caldo en lugar de colonias, centrifugue y utilice el sedimento.

  3. Cierre el vial y agítelo suavemente (invertir 10 veces) para impregnar bien las bolitas.

  4. Espere un minuto, luego retire el exceso de líquido con una jeringa estéril.

  5. Etiquete el vial con rotulador indeleble.

  6. Golpee suavemente el vial contra la mesa para distribuir las bolitas a lo largo del tubo.

  7. Congele entre –20 °C y –60 °C. Se recomienda duplicar las muestras como medida preventiva.

  8. Para recuperar la cepa:

    • Extraiga una bolita con un palillo estéril (ref. VDP099).

    • Si la cepa es exigente: introducir en caldo tipo BHI antes de sembrar.

    • Si es fácil: sembrar directamente en medio sólido o líquido.

    • No espere a que la bolita se atempere.

    • No reutilice ni reintroduzca el palillo ni la bolita.

PRECAUCIONES

  • Evite cambios de temperatura: devuelva el vial al congelador inmediatamente tras su uso.

  • Uso exclusivo en laboratorio.

  • Trabaje siempre con técnicas asépticas.

  • Confirme previamente la compatibilidad de su cepa con este sistema, antes de abandonar métodos tradicionales de resiembra.

  • Deseche el material contaminado siguiendo los protocolos de bioseguridad habituales.

¿NECESITA MÁS INFORMACIÓN?

BURKHOLDERIA CEPACIA-BCPT AGAR (BASE)

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BURKHOLDERIA CEPACIA-BCPT AGAR (BASE)

BURKHOLDERIA CEPACIA-BCPT AGAR (BASE)  es el Agar para aislamiento selectivo y diferencial de Burkholderia cepacia en aguas, cosméticos y otras muestras.

Funciona mucho mejor que BCSA y que OFPBL, sobre todo en su versión cromogénica (Ver Cromokit BCPT Agar)

 

 COMPOSICIÓN

  • Polipeptona bacteriológica      6.00 gbcpt
  • Piruvato sódico                          6.00 g
  • Dihidrógeno fosfato potasio   4.35 g
  • Hidrógeno fosfato sodio         1.42 g
  • Sales biliares                             1.50 g
  • Amonio sulfato                         1.00 g
  • Magnesio sulfato                      0.20 g
  • Sulfato férrico amónico           0.01 g
  • Rojo fenol                                   0.02 g
  • Cristal violeta                             0,01 g
  • Agar-agar                                   12.0 g

(Fórmula por litro) pH final: ajustar a 6.2 ± 0.2

B. cepacia suplemento selectivo

  • Polimixina B               150.000 UI/L
  • Ticarcilina                   500,0 mg/L

Añadir cuando el medio esté a 45-50º C.

 

PREPARACIÓN

  1. Disolver 32,5 g de medio en 1 litro de agua bidestilada. Calentar hasta ebullición, agitando hasta la total homogeneización. No sobrecalentar.
  2. Autoclavar a 121 ºC durante 15 minutos.
  3. Enfriar a 45-50 °C y añadir 14 ml de solución BCPT Suplemento estéril selectivo (SMT301) para análisis de aguas (no es imprescindible para analizar muestras cosméticas de escasa carga microbiana, pero en tal caso toda colonia crecida debe identificarse para evitar falsos positivos). Para máxima selectividad y evitar falsos positivos de Sphingomonas spp. y Moraxella spp., se puede añadir Gentamicina, aunque forman colonias diminutas y diferentes a las típicas de Burkholderia cepacia. En cambio Ochrobactrum anthropi y Delftia acidovorans sólo resultan distinguibles mediante identificación molecular, ya que las galerías comerciales dan, igual que este medio, falso positivo de B.cepacia.

PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO. AGITE EL BOTE ANTES DE USAR. MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO, EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO.

DESHIDRATADO CÓDIGO: DMT004

MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO, EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO. PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO.

NOTA:

Antes Pseudomonas cepacia, Burkholderia cepacia es una especie muy resistente que agrupa numerosas cepas de bacilos Gram negativos, Oxidasa positivos (a menudo oxidasa-lentos), No Fermentadores de Glucosa, Móviles.

Algunas cepas pueden crecer en Agar Cetrimida sin fluorescencia y en Agar CN.

Muchas cepas no crecen a más de 35°C.

En TSA crecen con colonias regulares, redondeadas, blanquecinas, crema o amarillas. Deben identificarse como tal con galerías miniaturizadas específicas para microorganismos no fermentadores (KBH262).

Debe el nombre genérico a su descubridor y el específico, a haber sido descubierta infectando cebollas, aunque se encuentra también en aguas y biofilms.

Es una de las bacterias más versátiles que se conocen, capaz de usar más de 200 compuestos como nutrientes, entre los cuales se encuentran antibióticos, desinfectantes, pesticidas, hidrocarburos aromáticos policíclicos (HPA), tricloroetileno, policlorobifenilos, ftalatos… además de producir sus propios antibióticos para suprimir el crecimiento de otros competidores, así como matrices especiales para generar biofilms, lo que la hace extremadamente difícil de erradicar.

Es frecuente como saprófito en aguas, ambientes húmedos y suelos. Se emplea en biorremediación de contaminaciones y en control de plagas fúngicas agrícolas,  pero tambien algunas cepas son serios patógenos oportunistas en infecciones nosocomiales.

Parece que junto a otros Pseudomonadinos esta bacteria fué, desde el Arcaico, corresponsable del paso de la vida a Tierra, al sintetizar ciertas macromoléculas que actúan como inductores de la lluvia.

CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO

Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar laboratorio, tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,…).

DESHIDRATADO:Polvo, rosado

PREPARADO: Estéril, crema-anaranjado a menudo con precipitados negros del hierro

CONTROL DE CRECIMIENTO 24-48 h a 35°C aproximadamente:

  • Burkholderia cepacia MKTA 25416, Crece abundantemente y deprisa, con colonias blancas, amarillas o asalmonadas, vira el medio a rosa-fucsia. Con respecto a PCA estandarizado*, recuento medio 275-294 %.
  • Pseudomonas aeruginosa MKTA 9027, Inhibido o escaso, lento (1 semana) y sin viraje.
  • Pseudomonas fluorescens MKTA 13525, Inhibido o lento y sin viraje
  • Bacillus subtilis MKTA 6633, Inhibido
  • Staphylococcus aureus MKTA 6538, Inhibido
  • Escherichia coli MKTA 25922, Inhibido

* El que cumple con recuperación superior al 92-125% con respecto a cepas cuantitativas trazables a cepa tipo.

 

 

MODO DE EMPLEO Y LECTURA DE RESULTADOS

Sembrar 1 ml de cosmético (o de su dilución madre enriquecida) equitativamente en la superficie de 3 placas y repartir con asa de Digralsky (en agua, sembrar una membrana por la que se hayan filtrado 100 ml) e incubar a 30-35°C durante 24-72 horas, ideal 48 h. Contar las colonias de 1,5-2 mm de diámetro, blancas o salmón con halo fucsia en el medio (si se enriqueció, no contar, ya que las ufc iniciales se habrán multiplicado; tampoco en tal caso hace falta el triplicado de placas y basta con sembrar en una por estría de agotamiento). Identificar con galerías para No Fermentadores (KBH262). El recuento/ml será la suma de los recuentos de las tres placas (por filtración, el recuento será el número de colonias/los 100 ml filtrados). De todas formas, no debe aparecer ni una sola colonia confirmativa en 1 g de cosmético enriquecido ni en 100 ml de agua farmacéutica o cosmética.

PRESENTACIÓN

MEDIO DESHIDRATADO 500g (DMT004) y suplemento en frasco pinchable estéril 100 ml (SMT301) c.s.p.7 litros de medio final. Tubo 20 ml Agar Base (TPL005) para preparar una placa tras fundir, enfriar y añadir 0,3 ml de suplemento SMT301. Frascos Agar BASE 100 ml: RPL024 para preparar 5 placas tras fundir, enfriar y añadir 1,5 ml de suplemento SMT301. Plaquita 55 mm hermética (PLAQUIS ®), medio completo, ref: PPL920.

Si desea más información sobre nuestros MEDIO BURKHOLDERIA CEPACIA-BCPT AGAR (BASE), rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto . O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16

 https://www.microkit.es/monograficos/8-Burkholderia-cepacia-complex-monograf–a.pdf

 

MICROKIT® MUG PLUS CCA CROMOGENIC AGAR AGAR CROMOGÉNICO COLIFORMES Y E.COLI

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MICROKIT® MUG PLUS CCA CROMOGENIC AGAR (CROMOGÉNICO COLIFORMES Y E.COLI)  S/BOE 31-MARZO-2009

MICROKIT® MUG PLUS CCA cromogénico E.coli-coliformes. Agar selectivo para la detección simultánea confirmativa de coliformes totales/fecales y E.coli en aguas y alimentos (cromógenos según ISO 16649-1:2001, AFNOR V08053-4)

INTRODUCCION

Inventado por MICROKIT en 1995, es el primer medio cromogénico que ha entrado en una Norma ISO (la ISO 9308-1) de aguas de consumo humano y envasadas. Los substratos cromógenicos  Salmon-Gal y X-Glucurónido, permiten la detección simultánea de coliformes

MICROKIT® MUGPLUS: Agar cromogénico para E. coli (colonias azules -olas-) y demás coliformes (colonias rosas -surf-). Campylobacter y Shigella crecen con colonias verdes (hierba) y otros Gram negativos con colonias crema (Pseudomonas -montañas-).

E.coli (colonias azules -olas-) y demás coliformes (colonias rosas -surf-). Campylobacter y Shigella (colonias verdes-hierba) y otros Gram negativos con colonias crema (Pseudomonas -montañas-).

(colonias rojas) y E.coli (colonias azules) en el mismo medio de cultivo.
La acción simultánea de las peptonas seleccionadas en el medio, del piruvato y de los tampones fosfato, garantiza un rápido crecimiento colonial, incluso para los coliformes en estado subletal. El crecimiento de la flora acompañante Gram positiva, queda inhibido gracias al lauryl sulfato y a la mezcla de antibióticos Cefsulodina + Vancomicina.
El enzima Beta-D-galactosidasa, característica de los coliformes, actúa sobre el Salmon-GAL provocando la pigmentación roja o rosada en las colonias de coliformes.
E.coli, coliforme Beta-D-glucuronidasa positivo, actúa sobre el Salmon-GAL y sobre el X-Glucurónido (5-bromo-4-chloro-3-indoxyl Beta-D-glucurónido) de modo que sus colonias crecen de azul oscuro al añil.

COMPOSICION (g/l)

Inconfundibles colonias añil (no violetas ni esmeralda) de E.coli

Inconfundibles colonias añil (no violetas ni esmeralda) de E.coli

  • Peptonas 3´0
  • Cloruro Sódico 5´0
  • Dihidrógeno Fosfato Sódico 2´2
  • Hidrógeno Fosfato Disódico 2´7
  • Piruvato Sódico 1´0
  • Triptófano 1´0
  • Tergitol 7 0´15
  • Sorbitol 1´0
  • Mezcla cromogénica
  • (Salmon Gal 0,2 y X-Glu 0,2) 0´4
  • Agar-Agar 10´0
  • pH Final: 6´8 ± 0´2

MODO DE EMPLEO CCA cromogénico E.coli coliformes

Agitar el bote. Disolver 26,5 g en 1 litro de agua destilada, calentando hasta ebullición. Mantener durante 1 minuto. Agitar hasta su completa disolución. Añadir asépticamente, cuando el medio se haya enfriado a 55 ºC, 5 mg de Cefsulodina + 5 mg de Vancomicina (total 5 ml de solución estéril MICROKIT SMS400) para aumentar la selectividad del medio y eliminar la flora acompañante Gram positiva. No autoclavar. El medio final es blanquecino. No refundir más de una vez.
En alimentos, la siembra en profundidad elimina los Gram negativos no fermentadores, que en la técnica de Filtración de Membrana para análisis de aguas pueden dar lugar a falsos positivos y además reducir en un 50% la recuperación de los microorganismos diana; para evitarlo, añadir sobre la membrana una segunda capa de medio agarizado, previamente enfriado a 50 ºC. Esto no es tan necesario en aguas potables o poco contaminadas por flora acompañante.

LECTURA DE RESULTADOS

Nueva imagen (5)Tras 18-24 horas de incubación a 35-37 ºC aproximadamente (ó 44,5 ºC aproximadamente para C. fecales), los resultados son: E.coli: Colonias de azul oscuro a añil (Salmon GAL y X-Glucurónido positivo) que resultan indol positivas (puede comprobarse directo en la colonia). Coliformes: Colonias rosas- rojas (Salmon GAL positivo) + las azules (E.coli). Otras enterobacterias: Colonias incoloras, excepto cepas como las Salmonella o Shigella Beta-D glucuronidasa positivas, que aparecen de color azul claro a turquesa. Muchas cepas de Shigella y de Campylobacter crecen con colonias verdes, pero también es del máximo interés que sean detectados, al ser microorganismos patógenos.

Unas pocas cepas de Enterococcus durans crecen con colonias rojas, pero también indican contaminación fecal del agua. Ciertas cepas de Staphylococcus aureus y de Bacillus crecen con colonias naranjas, pero nunca rosas-rojas. Otras cepas crecen con colonias crema que no se han de tener en cuenta. Las colonias con colores intermedios (violáceo-lila) proceden de ufc mixtas: diluir y repetir el análisis, o mirar una placa sembrada con una dilución mayor.
Confirme E.coli pinchando ó cubriendo sus colonias con reactivo de Kovacs. Si éste
vira a rojo-cereza antes de 1 minuto, la reacción es, definitivamente, confirmativa.

Color de la colonia Salmon-GAL X-Glucurónido Indol Rto. PCA estandarizado*

CRECIMIENTOS TÍPICOS

  • E.coli Azul oscuro-añil o turquesa + + + 58-125% **
  • Citrobacter freundii Rojo-rosa + – – 98-106%
  • Klebsiella oxytoca Lila-Granate + – – >99%
  • Enterobacter cloacae Rojo-rosa + – – 58-104%
  • Salmonella enteritidis Incoloro – – – 29-202%
  • Shigella flexneri Incoloro (azul en superficie) – – –
  • Salmonella MUG+ Azul claro – + –
  • E. coli O157 : H7 Rojo-rosa + – + 230%
    * El que cumple con recuperación superior al 92-125% con respecto a cepas cuantitativas trazables a cepa tipo.
    Incertidumbres detectadas entre todos los lotes a lo largo de un año (la mayoría de la incertidumbre se debe a la cepa y a la proporción de cepas acompañantes inoculadas, no al medio).
    ** En superficie, ya que en masa recupera el 200% más que en superficie
    Un estudio comparativo independiente (*) de validación cuantitativa entre este medio, otros cromogénicos, Endo y MFC demuestra que MUG PLUS® es el mejor medio de recuento de E. coli en aguas. La validación interna realizada por MICROKIT con centenares de muestras y la revalidación trimestral en Seilagua ®, Seilalimentos y Seilaparfum, lo confirman para agua y para todo tipo de matrices alimentarias y cosméticas.

CCA cromogénico E.coli coliformes

VENTAJAS SOBRE OTRAS MARCAS

Ser los pioneros en el diseño de este medio nos da dos ventajas claras:

1-Gracias a ciertos secretos de fabricación, las colonias azules de presuntos E.coli se pueden confirmar directamente añadiendo reactivo de indol sobre la colonia, ya que en caso positivo, habrá un claro viraje del reactivo amarillo a rosa alrededor de las colonias del microorganismo diana.

2-Las colonias rosas de presuntos coliformes se pueden confirmar directamente añadiendo reactivo de la citocromo-oxidasa en goteros monodosis sobre las colonias, incluso bañando toda la placa, ya que en caso positivo (oxidasa positivo, no coliforme), habrá un claro viraje del reactivo incoloro a azul oscuro alrededor de las colonias del microorganismo diana.

PRESENTACIÓN

* Botes de 100 g de medio de cultivo deshidratado en polvo agarizado. Referencia DMT400-
* Suplemento en frasco de 100 ml, con 100 mg de solución estéril de Cefsulodina + Vancomicina, para 20 litros de medio (5 ml/l). Ref. SMS400.
* Frascos de 100 ml de agar MUG PLUS® preparado con Cefsulodina+Vancomicina. Referencia RPL444.
* Frascos de 200 ml de agar MUG PLUS® preparado con Cefsulodina+Vancomicina. Ref. RPL244.
* Tubos de 20 ml de agar MUG PLUS® preparado con Cefsulodina+Vancomicina. Referencia TPL400.
* Viales 2 ml de caldo MUG PLUS® de MF con Cefsulodina+Vancomicina. Ref. FPL400.
* Viales pinchables de 100 ml de caldo MUG PLUS® de MF con Cefsulodina+Vancomicina. Ref. RPL400.
* Plaquitas herméticas de Agar MUGLUS® preparado con Cefsulodina+Vancomicina . Referencia PPL902

El usuario es el único responsable de la eliminación de los microorganismos según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.

https://www.microkit.es/pdf/mugplus-agar.pdf

https://www.microkit.es/monograficos/11-E.coli-y-dem–s-coliformes-monograf–a.pdf

Prepárese para más de una sorpresa informativa cuando vea nuestro video sobre los medios Cromogénicos: https://www.youtube.com/watch?v=-JVPVWxY8ZE&t=271s

CEPAS CUANTITATIVAS EN LENTÍCULAS

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CEPAS EN LENTÍCULAS CUANTITATIVAS

CEPAS CUANTITATIVAS EN LENTÍCULAS: siga la Norma ISO 11133-2 de Control de calidad de medios de cultivo, realice sus validaciones y sus Challenge Test, gracias a las diferentes concentraciones de estas cepas cuantitativas.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Las lentículas cuantitativas de MICROKIT contienen cantidades precisas de cepas microbianas (de colección o salvajes-nativas-in house), cantidades que se indican (exactitud y precisión del lote) en su certificado de control de calidad. Y todo ello en 2 (y a veces hasta 3) medios de cultivo diferentes (TSA o SDA como medio general y el medio selectivo o cromogénico más usado para la cepa en cuestión). En el mismo certificado aparece la trazabilidad y el pase desde la cepa TIPO (1, 2 ó 3), el color de las lentículas del lote y otros muchos datos de interés sobre la cepa.

Empleamos la nomenclatura de la ISO 11133-2: WDCM (colección Universal).

La caducidad

de estas cepas desde fabricación es excepcionalmente larga (2 años en casi todas ellas), lo cual hemos conseguido gracias al proceso de fabricación, que no las estresa como sucede con las cepas liofilizadas. Excepto en 2 cepas que solo tienen 1 año de caducidad, si se acerca la caducidad del lote (< 6 meses) y aun no hemos elaborado otro más reciente, le regalamos el 50% del valor en la misma cepa.

Vendemos docenas a precio de decena, para que las dos sobrantes las invierta en controlar con qué concentración han llegado a sus instalaciones, para que si hubiera variado significativamente con respecto a la concentración que certificamos, pueda calcular y aplicar su propio factor de corrección.

El espacio que ocupan

en el congelador de la nevera es ínfimo: cada lentícula está dentro de un tubito Eppendorf con silicagel, los 12 tubitos dentro de un tubo hermético con tapón de silicagel, y éste en sobrecito Faraday de aluminio de sólo 12 x 18 cm. Así, con este minimalismo en su packaging, en un cajón de congelador normal de nevera caben perfectamente hasta 100 cepas diferentes.

Ofrecemos la gama completa

que necesitará para seguir la Norma ISO 11133-2 (si no encuentra la cepa que busca, la podemos fabricar).

Tambien fabricamos lotes especialmente para algunos clientes que necesitan lentículas especiales para sus intercomparativos; así como cuantificadas a partir de sus microorganismos aislados de monitorización ambiental para realizar el test de promoción de crecimiento tal y como se indica en el Anexo 1 de fabricación de medicamentos estériles de las NCF.

Podemos fabricar a tres rangos: BAJO (aprox 1.000 ufc/lentícula, diluyéndola en 10 mL obtendremos 10 inóculos de <100 ufc/mL), MEDIO (>1.000 Y < 100.000 ufc/lentícula) y ALTO (>100.000 y <100.000.000 ufc/lentícula, para Challenge test y validaciones donde se emplean muchos inóculos en un mismo día de trabajo)

CEPAS CUANTITATIVAS EN LENTÍCULAS

https://youtu.be/4WJ8FQl6GIE

 

SEILASESORIA – VALIDACIÓN (Servicio de consultoría práctica con validación in situ)

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SEILASESORIA – VALIDACIÓN (Servicio de consultoría práctica con validación in situ)

SEILASESORIA – VALIDACIÓN, CURSO de Formación que incluye la validación in situ del parámetro microbiológico que desee, por el método de pares

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Hay clientes, auditores e inspectores que le exigirán la validación de cualquier método, kit o medio de cultivo alternativo que emplee, AUNQUE YA ESTÉ VALIDADO por su diseñador y fabricante.

Esto implica realizar un experimento con un número concreto de muestras previamente contaminadas con los microorganismos diana, interferentes y acompañantes. En su propio laboratorio. Realizado por sus propios analistas. Comparando el método, kit o medio nuevo con el clásico universalmente aceptado. Y también implica aplicar estadística para evaluar parámetros muy concretos:

-En métodos cualitativos (detección o presencia/ausencia): sensibilidad, especificidad, eficacia, límite de detección, conformidad, concordancia…

-En métodos cuantitativos (recuentos): Límites de cuantificación o rango, Exactitud, Precisión, Linealidad, Inclusividad, Exclusividad, Robustez del parámetro, Incertidumbre de las medidas…

Nadie nos ha enseñado , ni en la carrera ni en masters o cursos posteriores, a validar correctamente.

Microkit lleva 3 décadas validando sus diseños (kits, medios y procedimientos) y por ello es de las únicas entidades que encontrará, capacitadas para impartir estos cursos prácticos, en los que además de formarse, tendrá validado el parámetro que elija, sea cualitativo, sea cuantitativo.

Es importante no confundir una validación microbiológica con una validación química, ya que no se parecen en nada, de modo que intentar realizar una validación microbiológica desde el punto de vista químico, con herramientas y mentalidad química, como propone la Norma ISO 16140, es perder el tiempo y el dinero.

Nuestros cursos de formación (iniciación, auditorías de optimización y validaciones) están avalados en el alcance de nuestro certificado ISO 9001 desde 1999.

En MICROKIT le ayudamos a demostrar, con pruebas estadísticamente significativas y con limites de aceptabilidad bien claros y argumentados, si el método que desea emplear o seguir empleando es válido porque detecta o enumera adecuadamente:

1-Diseñamos el experimento

2-Nos desplazamos a guiarle durante el mismo en una jornada completa de trabajo

3-Elaboramos el informe completo de hasta 40 páginas con los resultados del experimento, en el que se refleja todo lo indicado y las conclusiones absolutas.

4-Le enviamos un diploma externo que avala su participación en la validación

No lo piense más, contrátenos este servicio: sus análisis no tienen  por qué volver a ser sometidos a técnicas del siglo pasado. Avance con el I+D de sus proveedores de kits, medios y procedimientos.

http://SEILASESORIA-Validaciones-in-situ.pdf