SPS AGAR (Sulfite Polimixin Sulfadiacin Agar)

Medio selectivo para la detección y recuento de Clostridium sulfito-reductores en alimentos y aguas
Métodos AOAC – ICMSF – UNE 13401 – UNE-EN 26461

Clostridios sulfito-reductores en SPS Agar

DESCRIPCIÓN GENERAL

El SPS Agar (Sulfite Polimixin Sulfadiacin Agar) es un medio selectivo diferencial utilizado para la detección, aislamiento y recuento de Clostridium sulfito-reductores, incluyendo Clostridium perfringens y Clostridium sporogenes, en alimentos, aguas y muestras ambientales.

Basado en las recomendaciones de la AOAC y del ICMSF, este medio permite la identificación visual de los clostridios por la reducción de sulfito a sulfuro, que reacciona con el citrato férrico produciendo colonias gris-negras características.

Es un medio de alta selectividad y sensibilidad, gracias a la acción combinada de Polimixina B y Sulfadiacina, que inhiben flora acompañante no clostridial.

COMPOSICIÓN (por litro)

pH final: 7,0 ± 0,1

PREPARACIÓN DEL MEDIO

1. Disolver 40 g de medio en 1 litro de agua destilada.

2. Calentar agitando hasta ebullición para su completa disolución.

3. Repartir en tubos o frascos.

4. Autoclavar a 121 ºC durante 15 minutos, o preferiblemente a 116 ºC durante 15–30 minutos.

5. Enfriar rápidamente en baño de agua fría.

Recomendación: El autoclavado a 116 ºC es preferible, ya que preserva la sensibilidad del medio.
Utilizar inmediatamente tras la preparación para evitar su oxigenación, que resulta letal para los clostridios.

Suplemento opcional: Para potenciar la formación de colonias negras, añadir 1 vial del suplemento estéril VMT136 por cada 100–1000 ml de medio estéril, hervido y enfriado a 45–50 ºC.

Nota: Las partículas negras que pueden aparecer al enfriar son normales y aumentan la sensibilidad del medio, conforme a las normas UNE 13401 y UNE-EN 26461.

CONDICIONES DE ALMACENAMIENTO

• Uso exclusivo en laboratorio.

• Mantener el bote bien cerrado, en lugar seco, fresco y oscuro.

Código: BCD901
Aspecto del producto:

• Deshidratado: Polvo beige.

• Preparado: Medio estéril, color crema-blanquecino.

CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO

El control de calidad se realiza en nuestro laboratorio. Se recomienda repetirlo en el suyo si han cambiado las condiciones ambientales (tiempo prolongado sin uso, altas temperaturas, desinfección reciente, etc.).

Ensayo de rendimiento (24 h a 37 ºC en anaerobiosis)

* PCA estandarizado con recuperación ≥92–125 % respecto a cepas trazables a la colección tipo.
Las variaciones detectadas entre lotes se deben principalmente a las cepas inoculadas, no al medio.

PRESENTACIÓN DISPONIBLE

• Tubos preparados (parafinados de 9 ml o sin parafina de 18 ml)

• Frascos parafinados de 50 ml (doble concentración)

• Frascos de 100 ml y 250 ml

• Medio deshidratado

• Tubo y frasco de SPS Agar parafinado

SIEMBRA Y CONDICIONES DE INCUBACIÓN

Método recomendado: Siembra en profundidad (placas, tubos o frascos).

1. Para detectar esporas, calentar la muestra a 98 ºC, enfriar a 75 ºC y añadir 1 ml al tubo o frasco con el medio fundido.

2. Mezclar suavemente (sin agitar) para evitar oxigenación.

3. Enfriar en posición vertical (en tubos parafinados, la parafina solidifica en la superficie, creando anaerobiosis).

4. Para detección en aguas, usar frascos parafinados a doble concentración e inocular 20–50 ml de muestra.

5. Incubar a 35–37 ºC durante 24 horas en anaerobiosis.

Alternativa práctica: Inocular 1 ml sobre un tubo hervido y enfriado a:

• 75 ºC → detección de esporas

• 45 ºC → detección de formas vegetativas

Cerrar, voltear sin agitar, incubar en vertical y contar directamente las colonias negras que crecen en anaerobiosis (excepto los 3–5 mm superiores, oxigenados).

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

• Colonias negras: Clostridium sulfito-reductores confirmados.

• Colonias blancas: Presuntivas (anaerobiosis insuficiente).

El ennegrecimiento del medio se debe a la reducción del sulfito sódico a sulfuro, que precipita con el citrato férrico, generando un color gris o negro característico.

GESTIÓN DE RESIDUOS

El usuario final es responsable de eliminar los microorganismos conforme a la legislación medioambiental vigente.
Autoclavar los materiales antes de su eliminación.

INFORMACIÓN ADICIONAL

Monográfico sobre Clostridium perfringens y clostridios sulfito-reductores (PDF)
Correo: microkit@microkit.es
Teléfono: 91 897 46 16

Esquema sobre el uso de los tubos de SPS Agar parafinados, realizado en 1989

SPS (SULFITE POLIMIXIN SULFADIACIN) AGAR GRANULADO es el medio más empleado para recuento de clostridios sulfito-reductores en alimentos

Detección de clostridios sulfito‑reductores (AOAC,ICMSF)

SPS Agar granulado

COMPOSICIÓN

• Peptona de caseina    15,00 g
• Extracto de levadura 10,00 g
• Citrato de Hierro       0,50 g
• Sulfito sódico            0,50 g
• Polimixina‑B sulfato 0,01 g
• Sulfadiacina sódica    0,12 g
• Agar‑agar                  13,90 g

(Fórmula por litro)

pH final: 7,0 ± 0,1

Clostridium perfringens

PREPARACIÓN

Disolver 40 g de medio en 1 litro de agua destilada. Calentar agitando hasta ebullición para su completa disolución.

Repartir en tubos o frascos. Autoclavar a 121 ºC durante 15 minutos, o mejor a 116 ºC durante 15-30 minutos. Enfriar rápidamente el medio en un baño de agua fría. El uso a [2] es más recomendable. Utilizar de inmediato a su preparación para evitar su oxigenación letal.

NOTA: Para mejorar el desarrollo de colonias negras de Clostridios, añada 1 vial del suplemento estéril VMT136 a cada 100-1000 ml de medio estéril,  hervido para eliminar la oxigenación y una vez enfriado a unos 45-50 ºC.

PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO

MANTENER EL BOTE BIEN CERRADO EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO.

DESHIDRATADO CODIGO: DMT116

CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO

Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar laboratorio, tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,…)

DESHIDRATADO: Granulado, Beige

PREPARADO: Estéril, Crema-blanquecino

CONTROL DE CRECIMIENTO CUANTITATIVO 24 h a 37°C aproximadamente, en anaerobiosis:

• Clostridium sporogenes MKTA 11437,  colonias gris-negras. Con respecto a PCA estandarizado*, recuento 240-347%, pero de forma más selectiva y diferencial.
• Clostridium perfringens MKTA 13124,  colonias gris-negras. Con respecto a PCA estandarizado*, recuento 110-420%, pero de forma más selectiva y diferencial.
• Staphylococcus aureus MKTA 6538P, Inhibido.
• Escherichia coli MKTA 25922, Inhibido

* El que cumple con recuperación superior al 92-125% con respecto a cepas cuantitativas trazables a la cepa tipo. Incertidumbres detectadas entre todos los lotes a lo largo de un año (la mayoría de la incertidumbre se debe a la cepa y a la proporción de cepas acompañantes inoculadas, no al medio).

PRESENTACIÓN: TUBOS PREPARADOS (PARAFINADOS-9 ml O NO-18 ml), FRASCOS 50 ml A DOBLE CONCENTRACION PARAFINADOS, FRASCOS 100 y 250 ml, MEDIO DESHIDRATADO.

Selectivo para aislamiento/recuento de clostridios sulfito reductores. La reducción del sulfito ennegrece las colonias

SIEMBRA

En profundidad en placa con tubos y frascos fundidos, o en el propio tubo/frasco; incluso las membranas de MF, que se depositan entre 2 capas. Para esporas inocular tubos parafinados, calentando a unos 98 ºC, dejando enfriar a unos 75 ºC y añadiendo entonces 1 ml de muestra. Voltear sin agitar para mezclar con el medio y enfriar en posición vertical (para que la parafina solidifique en superficie en los tubos parafinados). Para buscar esporas en aguas, actuar igual pero con frascos parafinados a doble concentración y añadiendo 20‑50 ml de muestra. Incubar en anaerobiosis (los tubos, tubos parafinados y frascos parafinados no lo necesitan) a 35‑37 ºC aproximadamente, durante 24 horas.

INTERPRETACIÓN

Contar los puntos negros que aparezcan como clostridios sulfito‑reductores. Las colonias blancas son presuntivas si la anaerobiosis no es correcta.

El usuario final es el único responsable de la eliminación de los microorganismos según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.        

Si desea más información sobre nuestros SPS (SULFITE POLIMIXIN SULFADIACIN) AGAR GRANULADO rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto . O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16

https://www.microkit.es/monograficos/7-Clostridium-perfringens-y-Clostridios-sulfito-reductores-monograf–a.pdf

detección Shigella alimentos aguas según Norma ISO 21567, caldo de enriquecimiento previo al aislamiento en placa

Caldo para enriquecimiento selectivo de Shigella spp. según ISO 21567:2004

 COMPOSICIÓN

• Digerido enzimático de caseína                 20,00 g
• Potasio hidrógeno fosfato (anhidro)          2,00 g
• Potasio dihidrógeno fosfato (anhidro        2,00 g
• Cloruro Sódico                                5,00 g
• Dextrosa                                          1,00 g
• Suplemento: Tween 80                     1,5 ml

(Fórmula por litro)

pH final: 7,0 ± 0,2

PREPARACIÓN

Disolver 30 g en 1 l de agua bidestilada, agitando hasta su disolución completa. Se añade el Tween 80, atemperado para evitar la formación de grumos precipitados. Ajustar el pH. Autoclavar 15 minutos  a 121°C. Una vez enfriado, se añaden asépticamente  0,5 ml de solución de Novobiocina estéril BCX150 (100 mg de novobiocina en 100 ml de agua) a cada litro de caldo Shigella.

PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO.

MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO. AGITE EL BOTE ANTES DE USAR.

DESHIDRATADO CODIGO: DMT173

CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO

Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar laboratorio, tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,…)

DESHIDRATADO: Polvo grueso, rosado.   PREPARADO: Estéril, rojo intenso con precipitado filamentoso que NO ES contaminación.

CONTROL DE CRECIMIENTO 16-20 h a 41,5 °C aproximadamente:

• Shigella flexneri MKTA 12022, Correcto.
• Salmonella abony MKTN 6017: Correcto.
• Escherichia coli MKTA 25922: Correcto.
• Pseudomonas aeruginosa MKTA 9027, Inhibido.
• Enterococcus faecalis MKTA 29212, Inhibido.

PRESENTACIÓN: MEDIO DESHIDRATADO.

NOTA: Medio para el enriquecimiento selectivo de Shigella según Norma ISO 21567:2004; presenta la ventaja, sobre el Caldo Selenito-Cystina, de no ser tóxico; y sobre el Caldo Rappaport Vassiliadis, de permitir el crecimiento de las Shigella. Casi toda la flora Gram positiva queda inhibida y gran parte de la flora Gram negativa también es inhibida (excepto Salmonella, algunas cepas de E. coli, y algunas del grupo KES -Klebsiella, Enterobacter y Serratia-). Estas cepas quedarán luego descartadas en los agares selectivos XLD, SS, Hektoen y Mac Conkey y con las pruebas inmunológicas (KWD000) y bioquímicas. En los servicios intercompartivos SEILALIMENTOS de los ultimos 7 años, otro medio demuestra ser el que mejor recupera las diferentes cepas de Salmonella y de Shigella en todo tipo de matrices (lácteos, cárnicos, pescados, vegetales…), el Salmonella-Shigella MICROKIT Broth.

 SIEMBRA

Inocular x gramos o ml de medio en 9x ml de caldo Shigella con Novobiocina.  Homogeneizar en digestor. Ajustar asépticamente el pH a 7,0 ±0,2 si es necesario. Incubar 16-20 horas a 41,5 ºC aproximadamente, en ANAEROBIOSIS, con los tapones sin apretar para que entre la atmósfera anaeróbica.

 INTERPRETACIÓN

Llevar a los medios sólidos selectivos XLD Agar y Hektoen (tambien son válidos SS-Agar y Mac Conkey), sembrando en superficie por agotamiento.  Identificar las colonias sospechosas mediante pruebas bioquímicas (KBH260) e inmunológicas (KWD000).

https://www.microkit.es/fichas/SHIGELLA-BROTH.pdf

detección Shigella alimentos aguas

Si prefiere enriquecer el tandem Salmonella-Shigella, su medio de elección es el Salmonella-Shigella Broth https://www.microkit.es/fichas/SALMONELLA-SHIGELLA-MICROKIT-BROTH.pdf, diseñado por MICROKIT para evitar los falsos negativos propios del Rappaport, del Selenito Cystina o del Tetrationato

El usuario final es el único responsable de la destrucción de los organismos que se hayan desarrollado, según la legislación medioambiental vigente.

Si desea más información sobre nuestros SHIGELLA BROTH rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto . O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16

https://www.microkit.es/monograficos/5-Salmonella-y-Shigella-monograf–a.pdf

SELENITO CISTINA CALDO (SELENITE CYSTINE BROTH ) es un caldo clásico para el enriquecimiento selectivo de Salmonella

 Enriquecimiento selectivo de Salmonella‑Shigella (USP,FIL,FDA, AOAC,APHA, UNE-EN 12824, UNE 34-818:1985, UNE-EN ISO 6579: 1997, ISO 6340:1995, ISO 6785:2001)

Selenite Cystine Broth, granulado para evitar ser respirado por el analista.

COMPOSICIÓN

• Peptona pancreática caseina 5,00 g
• Lactosa                                 4,00 g
• Fosfato disódico                   10,00 g
• Selenito sódico                      4,00 g
• Cistina                                  0,01 g

(Fórmula por litro)

pH final: 7,0 ± 0,2

PRECAUCIÓN: TÓXICOALMACENAR A TEMPERATURA INFERIOR A 15 ºC

PREPARACIÓN

Disolver 23 g de medio en 1 litro de agua bidestilada. Esterilizar hirviendo, o mejor por filtración. El color final del medio es paja claro. No sobrecalentar.  Mantener a menos de 15 ºC en oscuridad. En caso contrario aparecerá una coloración  rosada en el medio que no afecta de forma  importante a su calidad. Lo que no es aceptable es un precipitado rojo, debido a un eventual sobrecalentamiento del medio.

PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO.

MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO.

DESHIDRATADO CODIGO: DMT111

CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO

Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar laboratorio, tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,…)

DESHIDRATADO: Granulado, Blanco,

PREPARADO: Estéril, Ambar precipitado

EVALUACIÓN DEL RENDIMIENTO ISO/TS 11133-2, 24-48 h a 37-41,5 ºC (Aplicando el método UNE EN ISO 6579: 2003 mejorada, o el indicado en el Manual MICROKIT actualizado):

• Salmonella abony MKTN 6017 con acompañantes (E.coli MKTA 25922 y Ps.aeruginosa MKTA 9027), Crece bien, a las 24 h el medio se vuelve lechoso. Tras estriar una alícuota en XLD e incubar, aparecen más de 10 colonias típicas.
• Escherichia coli MKTA 25922, parcialmente inhibido: tras estriar en TSA e incubar, aparecen menos de 100 colonías.
• Enterococcus faecalis MKTA 29212, Parcialmente inhibido: tras estriar en TSA e incubar, aparecen menos de 100 colonías..
• Bacillus subtilis MKTA 6633, Parcialmente inhibido.
• Pseudomonas aeruginosa MKTA 9027, Escaso.
• Shigella flexnery MKTA 12022, Escaso.

Las colecciones TIPO prohiben el uso de su referencia por lo que indicamos la nuestra, directamente trazable a la colección TIPO.

PRECAUCIÓN: Producto muy tóxico.

PRESENTACIÓN: MEDIO DESHIDRATADO GRANULADO (minimiza respirar el polvo tóxico).

Medio de enriquecimiento para la detección de Salmonella. El selenito inhibe el desarrollo de los microorganismos que no son Salmonella, en especial los coliformes y enterococos (U.S.P.).

NOTA: Utilizar en paralelo al caldo Rappaport para obtener resultados selectivos óptimos, sin falsos positivos (típicos del Selenito)  ni falsos negativos (posibles en el Rappaport). La nueva versión 2000 de la Norma ISO 6579 descarta el uso de Selenito y lo sustituye por Tetrationato Mueller Kauffman (DMT086).

SIEMBRA

Añadir 1‑10 ml de pre‑enriquecimiento ó de muestra a 9‑90 ml de medio. Incubar a 35 ºC ó 37 ºC aproximadamente, durante 24 h y 24 h suplementarias. Sembrar en agares selectivos (SS Agar DMT107, XLD Agar DMT142). Muchos autores consideran que añadiendo sólo 1 ml se obtienen mejores resultados (menos falsos positivos).

El usuario final es el único responsable de la destrucción de los organismos que se hayan desarrollado, según la legislación medioambiental vigente.

Si desea más información sobre nuestros SELENITE CYSTINE BROTH rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto . O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16