Archivo de la categoría: microbiologia de aguas

Optimización en los análisis microbiológicos de
AGUAS Y BEBIDAS.
Nuevos métodos de análisis microbiológicos utilizados exitosamente en los laboratorios líderes

KIT P/A ENTEROCULT BOTE 100 g ESTÉRIL

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ENTEROCULT P/A BOTE 100 g ESTÉRIL

detección económica enterococos aguas: Con los botes de 100 g de Enterocult podrá buscar enterococos en aguas por sólo 1 €

El método P/A

(Presencia/Ausencia) fue inventado durante la segunda guerra mundial para evitar que los soldados murieran por beber aguas contaminadas. Desde la década de los 1990, MICROKIT ha ido desarrollando numerosos Kits P/A cromogénicos para control de patógenos en aguas. Estos kits no sólo triunfan en todo el mundo gracias a las ONG que trabajan en la mejora del agua de bebida de los países tropicales, sino que además están reconocidos como el método más fiable, de acuerdo con sus numerosas validaciones y participaciones en servicios intercomparativos. Se pueden emplear en trabajo de campo y en el laboratorio y ahorran tanto el trabajo de filtración de membrana (MF) o de NMP, como su coste. Con ellos se puede decir

 ¡de la muestra a la estufa en 10 segundos!

En el caso de las aguas y muestras líquidas incoloras, simplemente se agrega a los 100 (ó 250 ml) de muestra de agua el medio estéril adecuado para el microorganismo que se busca; se incuba; y al día siguiente, si no ha cambiado de color, se demuestra la ausencia del patógeno (sin falsos negativos) y si ha cambiado al color indicado, se demuestra su presencia. Así de sencillo. Y más efectivo que ningún otro método. Porque el método P/A no estresa los microorganismos como sucede con la MF, que obtiene recuperaciones muy deficientes.

La legislación europea exige el recuento de E.coli (y demás coliformes), Enterococos fecales y Clostridium perfringens y sus esporas en aguas de consumo humano para demostrar que no hay ni una sola célula en 100 mL; y en aguas envasadas, el recuento de E.coli (y demás coliformes), Enterococos fecales, Clostridium sulfito reductores y Pseudomonas aeruginosa para demostrar que no hay ni una sola célula en 250 mL. Dado que más del 99,99% de las muestras que Ud. analiza, están exentas de estos microorganismos,

está gastando enormes cantidades de tiempo y de dinero en “contar ceros”.

Cambie al método P/A y todas las ausencias las debe informar como “cero”, ya que no existen células decimales, por lo que en microbiología, ausencia es exactamente lo mismo que cero. Y cuando tenga alguna presencia, repita el análisis por MF e informe del recuento que obtenga. De este modo tan sencillo de “screening negativo”, va a ahorrar ingentes cantidades de tiempo y de dinero, pero además, va a aumentar la fiabilidad de sus análisis, ya que

el método P/A detecta numerosas presencias que el método MF encuentra como “cero”,

que son los peligrosos falsos negativos. ¡Se acepta en la bibliografía internacional que cerca del 6 % de las aguas que contienen Enterococos fecales, no son detectadas como positivas mediante el método MF!

Hasta ahora la presentación del método P/A MICROKIT era en frascos estériles con medio líquido para agregar dentro 100 ml de muestra de agua (referencias RPL3..). O bien la versión económica en viales de medio en polvo estéril para añadir un vial a 100 ml de muestra de agua (no incluido el bote estéril, referencias FPA9..). Por petición de nuestros mayores usuarios, extendemos desde finales de 2016 su uso en una

nueva presentación extraordinariamente económica: Botes de 100 g de polvo estéril con cucharilla esterilizable

(referencias DMTI9..-).

En esta nueva presentación, que le llega estéril, debe abrir el bote cada vez que lo use, en cabina o junto a un Bunsen, extraer con la cucharilla esterilizada (o sumergida en alcohol y tras dejar que se seque) el volumen indicado de medio, y cerrar el bote inmediatamente para evitar que se contamine. A pesar de que es difícil que esto suceda, ya que ninguno de los microorganismos implicados habitan en el aire. Use guantes estériles al manipularlo, para no contaminar el resto del polvo interior de eventuales células de Enterococos fecales que pudiera portar en sus manos.

MODO DE EMPLEO

1-Añada una cucharadita (1 gramo) de P/A ENTEROCULT para buscar Enterococos fecales en 100 ml de agua (dos cucharaditas para buscarlos en 250 ml de agua). No hace falta enrasar ni ser muy estricto en el volumen de medio añadido, ya que el medio funciona perfectamente incluso a la mitad y al doble de la concentración  indicada. Si el agua es clorada, añadir el tiosulfato sódico correspondiente para neutralizarlo.

2-Agitar, incubar a 37ºC

LECTURA DE RESULTADOS

3-Ver al día siguiente si hay cambio de color ámbar a negro-opaco (presunto positivo de Enterococo fecal) o no (negativo confirmado de Enterococo fecal).

4-En caso positivo hacer pruebas de confirmación adecuadas (cocos en cadenas, catalasa negativos). En caso negativo declarar la muestra como ausente de estos patógenos/indicadores en 100 (ó 250 mL) de muestra de agua.

PRESENTACIÓN

Bote de polvo estéril 100g y cucharilla para Enterococos fecales, Ref: DMTI901- para 50-100 muestras, con ¡3 años de caducidad!

detección económica enterococos aguas: Con los botes de 100 g de Enterocult podrá buscar enterococos en aguas por sólo 1 €

https://www.microkit.es/fichas/P-A-ENTEROCULT-BOTE-100g-esteril.pdf

El usuario final es el único responsable de la destrucción de los organismos que se hayan desarrollado, según la legislación medioambiental vigente.

Si desea más información sobre nuestros KIT P/A ENTEROCULT BOTE 100 g ESTÉRIL rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto . O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16

https://www.microkit.es/monograficos/21-Monograf–a-M–todos-alternativos-en-Control-microbiol–gico-de-aguas.pdf

No se pierda nuestro vídeo de los viales P/A:

https://youtu.be/6OfsD7zU_8U

KIT P/A PSEUDOCULT BOTE 100 g ESTÉRIL

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PSEUDOCULT P/A BOTE 100 g ESTÉRIL

detección económica Pseudomonas aguas:

Con los botes de 100 g de Pseudocult podrá buscar Ps.aeruginosa en aguas por sólo 1 €

El método P/A

(Presencia/Ausencia) fue inventado durante la segunda guerra mundial para evitar que los soldados murieran por beber aguas contaminadas. Desde la década de los 1990, MICROKIT ha ido desarrollando numerosos Kits P/A cromogénicos para control de patógenos en aguas. Estos kits no sólo triunfan en todo el mundo gracias a las ONG que trabajan en la mejora del agua de bebida de los países tropicales, sino que además están reconocidos como el método más fiable, de acuerdo con sus numerosas validaciones y participaciones en servicios intercomparativos. Se pueden emplear en trabajo de campo y en el laboratorio y ahorran tanto el trabajo de filtración de membrana (MF) o de NMP, como su coste. Con ellos se puede decir

¡de la muestra a la estufa en 10 segundos!

En el caso de las aguas y muestras líquidas incoloras, simplemente se agrega a los 100 (ó 250 ml) de muestra de agua el medio estéril adecuado para el microorganismo que se busca; se incuba; y al día siguiente, si no ha cambiado de color, se demuestra la ausencia del patógeno (sin falsos negativos) y si ha cambiado al color indicado, se demuestra su presencia. Así de sencillo. Y más efectivo que ningún otro método. Porque el método P/A no estresa los microorganismos como sucede con la MF, que obtiene recuperaciones muy deficientes.

La legislación europea 2015 exige el recuento de E.coli (y demás coliformes), Enterococos fecales, Clostridium perfringens y sus esporas y Pseudomonas aeruginosa en aguas de consumo humano para demostrar que no hay ni una sola célula en 100 mL; y en aguas envasadas, el recuento de E.coli (y demás coliformes), Enterococos fecales, Clostridium sulfito reductores y Pseudomonas aeruginosa para demostrar que no hay ni una sola célula en 250 mL. Dado que más del 99,99% de las muestras que Ud. analiza, están exentas de estos microorganismos,

está gastando enormes cantidades de tiempo y de dinero en “contar ceros”.

Cambie al método P/A y todas las ausencias las debe informar como “cero”, ya que no existen células decimales, por lo que en microbiología, ausencia es exactamente lo mismo que cero. Y cuando tenga alguna presencia, repita el análisis por MF e informe del recuento que obtenga. De este modo tan sencillo de “screening negativo”, va a ahorrar ingentes cantidades de tiempo y de dinero, pero además, va a aumentar la fiabilidad de sus análisis, ya que

el método P/A detecta numerosas presencias que el método MF encuentra como “cero”,

que son los peligrosos falsos negativos. ¡Se acepta en la bibliografía internacional que cerca del 33 % de las aguas que contienen Pseudomonas aeruginosa, no son detectadas como positivas mediante el método MF!

Hasta ahora la presentación del método P/A MICROKIT era en frascos estériles con medio líquido para agregar dentro 100 ml de muestra de agua (referencias RPL3..). O bien la versión económica en viales de medio en polvo estéril para añadir un vial a 100 ml de muestra de agua (no incluido el bote estéril, referencias FPA9..). Por petición de nuestros mayores usuarios, extendemos desde finales de 2016 su uso en una

nueva presentación extraordinariamente económica: Botes de 100 g de polvo estéril con cucharilla esterilizable

(referencias DMTI9..-).

En esta nueva presentación, que le llega estéril, debe abrir el bote cada vez que lo use, en cabina o junto a un Bunsen, extraer con la cucharilla esterilizada (o sumergida en alcohol y tras dejar que se seque) el volumen indicado de medio, y cerrar el bote inmediatamente para evitar que se contamine. A pesar de que es difícil que esto suceda, ya que ninguno de los microorganismos implicados habitan en el aire. Use guantes estériles al manipularlo, para no contaminar el resto del polvo interior de eventuales células todavía viables de Pseudomonas aeruginosa que pudiera portar en sus manos.

MODO DE EMPLEO 

1-Añada dos cucharaditas (2 gramos) de P/A PSEUDOCULT para buscar Pseudomonas aeruginosa  en 100 ml de agua (cuatro cucharaditas para buscarla  en 250 ml de agua). No hace falta enrasar ni ser muy estricto en el volumen de medio añadido, ya que el medio funciona perfectamente incluso a la mitad y al doble de esta concentración. Si el agua es clorada, añadir el Tiosulfato sódico correspondiente para neutralizarlo.

2-Agitar, incubar a 37ºC

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

3-Ver al día siguiente si hay viraje del agua de color paja a rosa y si da fluorescencia verde-amarillenta en la oscuridad bajo luz UVA de 366 nm (linterna MICROKIT VMT050). Si no hay cambios, dejar incubando otro día y volver a verificar si hay viraje a rosa del agua. Por si las Ps.aeruginosa estuviesen muy estresadas, es prudente dejar los negativos incubando hasta 3 días y verificar después si sigue sin haber viraje a rosa y fluorescencia.

4-En caso positivo hacer pruebas de confirmación adecuadas (resiembra en Cetrimide Agar y uso de M-Ident-PS). En caso negativo declarar la muestra como ausente de este patógeno en 100 (ó 250 mL) de muestra de agua.

PRESENTACIÓN

Bote de polvo estéril 100g y cucharilla para Pseudomonas aeruginosa, Ref: DMTI908-  para 25-50 muestras, con ¡3 años de caducidad!

detección económica Pseudomonas aguas: Con los botes de 100 g de Pseudocult podrá buscar Ps.aeruginosa en aguas por sólo 1 €

https://www.microkit.es/fichas/P-A-PSEUDOCULT-BOTE-100g-esteril.pdf

El usuario final es el único responsable de la destrucción de los organismos que se hayan desarrollado, según la legislación medioambiental vigente.

Si desea más información sobre nuestros KIT P/A PSEUDOCULT BOTE 100 g ESTÉRIL rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto . O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16

https://www.microkit.es/monograficos/13-Pseudomonas-aeruginosa-monograf–a.pdf

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KIT P/A COLICULT MCC BOTE 100 g ESTÉRIL

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COLICULT P/A EN FORMATO ECONÓMICO

detección económica E.coli/Coliformes aguas: Con los botes de 100 g de Colicult podrá buscar E.coli/Coliformes en aguas por sólo 1 €

El método P/A

(Presencia/Ausencia) fue inventado durante la segunda guerra mundial para evitar que los soldados murieran por beber aguas contaminadas. Desde la década de los 1990, MICROKIT ha ido desarrollando numerosos Kits P/A cromogénicos para control de patógenos en aguas. Estos kits no sólo triunfan en todo el mundo gracias a las ONG que trabajan en la mejora del agua de bebida de los países tropicales, sino que además están reconocidos como el método más fiable, de acuerdo con sus numerosas validaciones y participaciones en servicios intercomparativos. Se pueden emplear en trabajo de campo y en el laboratorio y ahorran tanto el trabajo de filtración de membrana (MF) o de NMP, como su coste. Con ellos se puede decir:

¡de la muestra a la estufa en 10 segundos!

En el caso de las aguas y muestras líquidas incoloras, simplemente se agrega a los 100 (ó 250 ml) de muestra de agua el medio estéril adecuado para el microorganismo que se busca; se incuba; y al día siguiente, si no ha cambiado de color, se demuestra la ausencia del patógeno (sin falsos negativos) y si ha cambiado al color indicado, se demuestra su presencia. Así de sencillo. Y más efectivo que ningún otro método. Porque el método P/A no estresa los microorganismos como sucede con la MF, que obtiene recuperaciones muy deficientes.

La legislación europea exige el recuento de E.coli (y demás coliformes), Enterococos fecales y Clostridium perfringens y sus esporas en aguas de consumo humano para demostrar que no hay ni una sola célula en 100 mL; y en aguas envasadas, el recuento de E.coli (y demás coliformes), Enterococos fecales, Clostridium sulfito reductores y Pseudomonas aeruginosa para demostrar que no hay ni una sola célula en 250 mL. Dado que más del 99,99% de las muestras que Ud. analiza, están exentas de estos microorganismos,

está gastando enormes cantidades de tiempo y de dinero en “contar ceros”.

Cambie al método P/A y todas las ausencias las debe informar como “cero”, ya que no existen células decimales, por lo que en microbiología, ausencia es exactamente lo mismo que cero. Y cuando tenga alguna presencia, repita el análisis por MF e informe del recuento que obtenga. De este modo tan sencillo de “screening negativo”, va a ahorrar ingentes cantidades de tiempo y de dinero, pero además, va a aumentar la fiabilidad de sus análisis, ya que

el método P/A detecta numerosas presencias que el método MF encuentra como “cero”,

que son los peligrosos falsos negativos. ¡Se acepta en la bibliografía internacional que cerca del 21% de las aguas que contienen coliformes-E.coli, no son detectadas como positivas mediante el método MF!

Hasta ahora la presentación del método P/A MICROKIT era en frascos estériles con medio líquido para agregar dentro 100 ml de muestra de agua (referencias RPL3..). O bien la versión económica en viales de medio en polvo estéril para añadir un vial a 100 ml de muestra de agua (no incluido el bote estéril, referencias FPA9..). Por petición de nuestros mayores usuarios, extendemos desde finales de 2016 su uso en una

nueva presentación extraordinariamente económica: Botes de 100 g de polvo estéril con cucharilla esterilizable

(referencias DMTI9..-).

En esta nueva presentación, que le llega estéril, debe abrir el bote cada vez que lo use, en cabina o junto a un Bunsen, extraer con la cucharilla esterilizada (o sumergida en alcohol y tras dejar que se seque) el volumen indicado de medio, y cerrar el bote inmediatamente para evitar que se contamine. A pesar de que es difícil que esto suceda, ya que ninguno de los microorganismos implicados habitan en el aire. Use guantes estériles al manipularlo, para no contaminar el resto del polvo interior de eventuales células todavía viables de coliformes-E.coli que pudiera portar en sus manos.

MODO DE EMPLEO

1-Añada una cucharadita (1 gramo) de P/A Colicult MCC para buscar E.coli y demás coliformes en 100 ml de agua (dos cucharaditas para buscarlos en 250 ml de agua). No hace falta enrasar ni ser muy estricto en el volumen de medio añadido, ya que el medio funciona perfectamente incluso a la mitad y al doble de la concentración  indicada. Si el agua es clorada, añadir el tiosulfato sódico correspondiente para neutralizarlo.

2-Agitar, incubar a 37ºC y ver al día siguiente si hay cambio de color paja a azul-verdoso (presunto positivo de coliforme) o no (negativo confirmado de coliforme).  Y si hay fluorescencia azul celeste (presunto positivo de E.coli) o no (negativo confirmado de E.coli) al mirar en la oscuridad bajo luz UVA de 366 nm (linterna MICROKIT VMT050).

3-En caso positivo hacer pruebas de confirmación adecuadas (oxidasa para coliformes, indol para E.coli). En caso negativo declarar la muestra como ausente de estos patógenos/indicadores en 100 (ó 250 mL) de muestra de agua.

REFERENCIA

Bote de polvo estéril 100g y cucharilla para E.coli y demás Coliformes, Ref: DMTI900- para 50-100 muestras, con ¡3 años de caducidad!

detección económica E.coli/Coliformes aguas: Con los botes de 100 g de Colicult podrá buscar E.coli/Coliformes en aguas por sólo 1 €

El usuario final es el único responsable de la destrucción de los organismos que se hayan desarrollado, según la legislación medioambiental vigente.

Si desea más información sobre nuestros KIT P/A COLICULT MCC BOTE 100 g ESTÉRIL rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto . O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16

https://www.microkit.es/monograficos/11-E.coli-y-dem–s-coliformes-monograf–a.pdf

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KIT P/A CLOSTRICULT BOTE 100 g ESTÉRIL

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CLOSTRICULT P/A

detección económica Clostridium aguas:

Con los botes de 100 g de Clostricult podrá buscar C.perfringens y sus esporas en aguas por sólo 1 €

https://www.microkit.es/fichas/P-A-CLOSTRICULT-BOTE-100g-esteril.pdf

El método P/A

(Presencia/Ausencia) fue inventado durante la segunda guerra mundial para evitar que los soldados murieran por beber aguas contaminadas.

Desde la década de los 1990, MICROKIT ha ido desarrollando numerosos Kits P/A cromogénicos para control de patógenos en aguas.

Estos kits no sólo triunfan en todo el mundo gracias a las ONG que trabajan en la mejora del agua de bebida de los países tropicales,

sino que además están reconocidos como el método más fiable, de acuerdo con sus numerosas validaciones y participaciones en servicios intercomparativos.

Se pueden emplear en trabajo de campo y en el laboratorio y ahorran tanto el trabajo de filtración de membrana (MF) o de NMP, como su coste.

Con ellos se puede decir:

¡de la muestra a la estufa en 10 segundos!

En el caso de las aguas y muestras líquidas incoloras, simplemente se agrega a los 100 (ó 250 ml) de muestra de agua el medio estéril adecuado para el microorganismo que se busca;

se incuba; y al día siguiente, si no ha cambiado de color, se demuestra la ausencia del patógeno (sin falsos negativos)

y si ha cambiado al color indicado, se demuestra su presencia.

Así de sencillo. Y más efectivo que ningún otro método.

Porque el método P/A no estresa los microorganismos como sucede con la MF, que obtiene recuperaciones muy deficientes.

La legislación europea exige el recuento de E.coli (y demás coliformes), Enterococos fecales y Clostridium perfringens y sus esporas en aguas de consumo humano para demostrar que no hay ni una sola célula en 100 mL;

y en aguas envasadas, el recuento de E.coli (y demás coliformes), Enterococos fecales, Clostridium sulfito reductores y Pseudomonas aeruginosa para demostrar que no hay ni una sola célula en 250 mL.

Dado que más del 99,99% de las muestras que Ud. analiza, están exentas de estos microorganismos, está gastando enormes cantidades de tiempo y de dinero en “contar ceros”.

Cambie al método P/A y todas las ausencias las debe informar como “cero”, ya que no existen células decimales, por lo que en microbiología, ausencia es exactamente lo mismo que cero.

No hay nada que demostrar en esta afirmación.

Y cuando tenga alguna presencia, repita el análisis por MF e informe del recuento que obtenga.

De este modo tan sencillo de “screening negativo”, va a ahorrar ingentes cantidades de tiempo y de dinero, pero además, va a aumentar la fiabilidad de sus análisis,

ya que el método P/A detecta numerosas presencias que el método MF encuentra como “cero”, que son los peligrosos falsos negativos.

¡Se acepta en la bibliografía internacional que, al ser anaerobios estrictos, cerca del 49 % de las aguas que contienen Clostridios, no son detectadas como positivas mediante el método MF!

Hasta ahora la presentación del método P/A MICROKIT era en frascos estériles con medio líquido para agregar dentro 100 ml de muestra de agua (referencias RPL3..).

O bien la versión económica en viales de medio en polvo estéril para añadir un vial a 100 ml de muestra de agua (no incluido el bote estéril, referencias FPA9..).

Por petición de nuestros mayores usuarios, extendemos desde finales de 2016 su uso en una nueva presentación extraordinariamente económica:

Botes de 100 g de polvo estéril con cucharilla esterilizable (referencias DMTI9..-).

En esta nueva presentación, que le llega estéril, debe abrir el bote cada vez que lo use, en cabina o junto a un Bunsen,

extraer con la cucharilla esterilizada (o sumergida en alcohol y tras dejar que se seque) el volumen indicado de medio,

y cerrar el bote inmediatamente para evitar que se contamine.

A pesar de que es difícil que esto suceda, ya que ninguno de los microorganismos implicados habitan en el aire.

Use guantes estériles al manipularlo, para no contaminar el resto del polvo interior de eventuales esporas de Clostridium que pudiera portar en sus manos.

1-Añada tres cucharaditas (3 gramos) de P/A CLOSTRICULT para buscar Clostridium en 100 ml de agua (seis cucharaditas para buscarlos en 250 ml de agua).

El mismo medio sirve para C.perfringens si se incuba a 44-46ºC y para Clostridios Sulfito-Reductores si se incuba a 37ºC.

No hace falta enrasar ni ser muy estricto en el volumen de medio añadido, ya que el medio funciona perfectamente incluso a la mitad y al doble de la concentración  indicada.

Si el agua es clorada, añadir el tiosulfato sódico correspondiente para neutralizarlo.

2-Agitar, incubar y ver al día siguiente si hay turbidez y/o cambio de color crema a negro-opaco, sea en el fondo o sea en la totalidad del agua (presunto positivo de Clostridium) o no (negativo confirmado de Clostridium).

Si no hay cambios, dejar incubando otras 18-24 h y volver a verificar el ennegrecimiento parcial o total del agua.

Recuerde que de la temperatura de incubación depende que sean C.perfringens o C.Sulfito-Reductores.

3-En caso positivo hacer pruebas de confirmación adecuadas (resiembra en TSC-MUP Agar o en SPS).

En caso negativo declarar la muestra como ausente de estos patógenos/indicadores en 100 (ó 250 mL) de muestra de agua.

Bote de polvo estéril 100g y cucharilla para Clostridios, Ref: DMTI902-  para 16-32 muestras, con ¡3 años de caducidad!

detección económica Clostridium aguas: Con los botes de 100 g de Clostricult podrá buscar C.perfringens y sus esporas en aguas por sólo 1 €

El usuario final es el único responsable de la destrucción de los organismos que se hayan desarrollado, según la legislación medioambiental vigente.

Si desea más información sobre nuestros KIT P/A CLOSTRICULT   BOTE 100 g ESTÉRIL rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto .

O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16

https://www.microkit.es/monograficos/21-Monograf–a-M–todos-alternativos-en-Control-microbiol–gico-de-aguas.pdf

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SEILA-PLUS VALIDACIÓN

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intercomparativo microbiología alimentos efecto matriz: Seilaplus-validación, mucho más que un inter, el primero que evalúa el efecto matriz

https://www.microkit.es/fichas/SEILA-PLUS-VALIDACION.pdf

Ayuda en la validación de sus métodos

Las autoridades sanitarias, a través de sus inspecciones, y la Normativa vigente en alimentos (reglamento CE 2073/2005) y en cosméticos (GMPs-BPFs ISO 22716) exigen que los métodos analíticos que emplea su laboratorio estén adecuadamente contrastados externamente.

Esto se traduce en la obligatoriedad de participar en un mínimo de 3 rondas intercomparativas de muestras ciegas al año.

El tema quedó resuelto con Seilalimentos (SMT003) y Seilaparfum (SMT005) que muchos clientes de MICROKIT llevan ya muchos años empleando.

Pero hay inspectores que exigen, ADEMÁS, la VALIDACIÓN de los métodos (que solemos proporcionar los proveedores a petición de los clientes interesados) y algunos,

ADEMÁS, exigen  la validación de los métodos en SUS PROPIAS MUESTRAS, con buen criterio profesional, ya que hay métodos poco robustos que no sirven aplicados tal cual en ciertas muestras.

CURSOS PRÁCTICOS DE VALIDACIÓN DE MÉTODOS MICROBIOLÓGICOS

De aquí surgió el servicio MICROKIT de validación (SIM005), en las instalaciones y con las muestras de cada laboratorio, que muchos clientes de MICROKIT ya han utilizado.

La revalidación es obligatoria en cada parámetro microbiológico cada vez que su fábrica diseñe un nuevo producto que salga al mercado y además cada 5 años.

Eso supone un importante trabajo extra añadido.

Por eso MICROKIT, siempre fiel a sus clientes, diseña en Octubre de 2017, un nuevo servicio que les permitirá validar y revalidar periódicamente cuantas muestras desee y de la forma más fácil imaginable:

Seila-Plus Validación

Mediante el presente servicio, su laboratorio será capaz de validar o revalidar periódicamente sus métodos microbiológicos en su propias muestras de alimentos o de cosméticos,

gracias a nuestra ayuda, al proporcionarle inóculos idénticos de cepas (cualitativa y cuantitativamente ciegas para Ud hasta que reciba el informe final de resultados)

para que añada al inter y, en  paralelo, a sus propias muestras; y al incluir sus resultados en los informes SEILA.

Tambien podría pedir los inóculos sin participar en SEILA, pero entonces sus resultados no estarán garantizados y certificados por un tercero (MICROKIT).

Lo ideal es que cada vez que participe en una ronda SEILA, añada el pedido que desee de Seila-Plus Validación (el número de inóculos extra que desee para añadir a sus propias muestras).

Cuando nos remita los resultados, las tablas 1 y 2 están reservadas para el SEILA clásico, de modo que deberá rellenar una nueva tabla por cada muestra (matriz) que analice,

indicar de qué matriz se trata para respetar la trazabilidad e indicar tras su número secreto el número de muestra.

Por ej, si su número secreto cuando participa en Seila es 4572 y además participa en Seila-Plus Validación para 5 muestras propias,

la primera tabla Seila será la 4572-1, la segunda será la 4572-2, la primera tabla Seila-Plus Validación con su primera muestra será la 4572-V1,

la segunda tabla Seila-Plus Validación con su segunda muestra será la 4572-V2, y así hasta la 4572-V5.

Le recomendamos adquiera, si no lo tiene ya, el informe-tipo de validación de MICROKIT (SIM009 para parámetros microbiológicos cualitativos de presencia/ausencia

y SIM010 para parámetros microbiológicos cuantitativos de recuento), los va a necesitar utilice o no este nuevo servicio Seila-Plus-Validación.

En resumen ¿qué es Seila-Plus Validación?

Cada vez que participa en una ronda Seila, Ud. contrata el número extra de inóculos de cepas, ciegos e idénticos, que necesite (uno para cada una de sus propias muestras que desea validar en dicha ronda),

nos envía los resultados Seila en las dos tablas habituales y nos envía además los resultados Seila-Plus Validación que haya obtenido en cada una de sus muestras (una tabla extra por cada muestra).

Recibirá el informe Seila con todos sus resultados incluidos (los Seila y los Seila-Plus Validación).

No deje de consultarnos por email cualquier duda sobre este nuevo servicio.

AHORRO DE TRABAJO

Atención, le ahorramos trabajo, pero no todo:

Si un parámetro (ej: E.coli) de una ronda concreta (ej: Nov-2017) se considera negativo en el informe final Seila,

pero a Ud. en su muestra le sale positivo,

debe controlar si se trata de un falso positivo de su análisis o si, por el contrario, es que su muestra lo contenía en origen.

Igualmente, un recuento en Seila-Plus validación mucho más alto que el valor consensuado o que el valor inóculo,

puede deberse a una mala práctica en su análisis o, por el contrario, a que su muestra ya tenía un recuento de ese microorganismo, que se ha sumado al inóculo.

Este problema no puede suceder en Seila, ya que las muestras que enviamos son estériles y solo se contaminan momentos antes del análisis exclusivamente con el inóculo que le enviamos.

Pero si puede suceder aquí, y Ud. debe preverlo con un análisis paralelo de su muestra sin nuestro inóculo.

Por ello, en los informes SEILA, los resultados de Seila-Plus Validación no pueden ser calificados por nosotros, sino que actuamos como meros “Notarios” de sus resultados, al incluirlos.

Y por eso, cuando reúna suficientes tablas de resultados de sus propios productos (todos los que quiera/deba validar a lo largo de un año, 30 es el número mínimo estadísticamente significativo),

deberá elaborar su propio informe de validación (ayúdese de nuestros informes-tipo antes indicados al final de la página anterior).

De este modo, zanjamos un problema que, por falta de tiempo, la mayoría de laboratorios de nuestro país está incumpliendo,

y que puede llevar a retiradas de mercado, desprestigio mediático y sanciones por parte de las autoridades sanitarias.

Desde ahora, todos los laboratorios pueden validar de forma periódica sus métodos en sus propios productos de forma muy sencilla y económica.

Hay un antes y un después de  Seila-Plus Validación. Precios 2017:

intercomparativo microbiología alimentos efecto matriz: Seilaplus-validación, mucho más que un inter, el primero que evalúa el efecto matriz

MUP Metil-Umbeliferil Phosfate: Reactivo para la confirmación de Clostridium perfringens (ISO/CD 6461-2, RD 3/2023 en aguas de consumo humano)

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Clostridium perfringens en TSC.

Clostridium perfringens en TSC.

Idem en TSC con MUP bajo luz UVA de 366 nm

Idem en TSC con MUP bajo luz UVA de 366 nm

MUP fosfatasa Clostridium perfringens para la confirmación de colonias sospechosas de Agar TSC en aguas de consumo humano

El MUP (Metil-Umbeliferil Phosfate, Ref: MICROKIT reacciona con las colonias de Cl.perfringens emitiendo fluorescencia azul bajo luz UVA de 366 nm (linterna MICROKIT VMT050).

PRESENTACIÓN

Puede adquirirse el reactivo en polvo (SMT009), para añadir a TSC Agar, o bien ya preparado en PLAQUIS® herméticas de MICROKIT (Ref. PPL929) a las que debería añadirse una segunda capa de TSC Agar fundido y atemperado a 45°C tras depositar la membrana.

PREPARACIÓN DEL REACTIVO EN POLVO:

Disolver 45 g de TSC Agar en 1 l de agua bidestilada. Calentar, agitando, hasta ebullición, para su total homogeneización. Autoclavar a 121 ºC durante 15 minutos o mejor a 116 ºC, 15 minutos.

El color final del medio es crema.

Enfriar a 50 ºC y añadir asépticamente 400 mg de D- Cicloserina estéril (4 viales de 100 mg de SMS252).

Añadir también, por cada 500 ml de medio enfriado a 50°C, 55-100 mg de suplemento MUP (Metil-Umbeliferil Phosfate, que reaccionará con las colonias.

A mayor concentración de MUP, más nitidez se obtendrá en la fluorescencia.

Verter de inmediato en placas y no recalentar. Utilizar de inmediato a su preparación para evitar la letal oxigenación.

PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO. MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO. AGITE EL BOTE ANTES DE USAR.

MODO DE EMPLEO:

Según UNE-EN 26461-2, calentar la muestra 15 minutos a 70-80 ºC.

Filtrar 100 ml de agua a través de 0,22 µm (VAC022).

Añadir en la placa Petri y verter 18 ml del medio enfriado a 50 ºC (y si se desea, preparado a doble concentración), sin que se formen burbujas.

Es preferible sembrar la membrana filtrada entre dos capas de medio, añadiendo la segunda capa a 45-47°C justo antes de solidificar.

Incubar 18-24 (-48) horas a 43-46 ºC aproximadamente, en anaerobiosis.

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS:

Clostridium perfringens MKTA 13124 crece con colonias negras, pardas o grises, blancas si la anaerobiosis no es correcta, fluorescentes bajo luz UVA de 366 nm gracias al MUP.

PR > 0,7 respecto al número de ufc certificadas e inoculadas en otro lote validado de TSC Agar sin MUP.

Con respecto a TSA recuento 75-252%, variabilidad que depende de la composición y carga de la flora acompañante inoculada.

Precaución:

Una vez añadido el MUP al medio TSC al elaborar las placas, la caducidad es rigurosamente de una semana, si no, pueden obtenerse falsos negativos

MUP fosfatasa Clostridium perfringens para la confirmación de colonias sospechosas de Agar TSC en aguas de consumo humano

https://www.microkit.es/fichas/MUP.pdf

El usuario final es el único responsable de eliminar los microorganismos de acuerdo con la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.

Si desea más información sobre nuestros MUP Metil-Umbeliferil Phosfate rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto . O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16

https://www.microkit.es/monograficos/7-Clostridium-perfringens-y-Clostridios-sulfito-reductores-monograf–a.pdf

 

M-CP AGAR (BASE)

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M-CP AGAR (BASE) con fosfatasa ácida para detección y recuento de Clostridium perfringens en aguas de consumo humano

Medio base para el aislamiento y recuento selectivo de Clostridium perfringens y sus esporas, según Directiva 98/83 CE 3/XI/1998 sobre aguas destinadas al consumo humano, según Real Decreto 1074 18/X/2002 sobre aguas de bebida envasadas y según Real Decreto 140 7/II/2003 sobre calidad de las aguas de consumo humano.

COMPOSICIÓN m-CP Agar

  • Triptosa 30,0 g
  • Extracto de levadura 20,0 g
  • Sacarosa 5,00 g
  • Hidrocloruro de L-Cysteina 1,00 g
  • Sulfato Magnésico.7 hidrato 0,10 g
  • Púrpura de bromocresol 0,04 g
  • Agar-Agar 15,0 g
    (Fórmula por litro) pH final: 7,6 ± 0,2

En vial pinchable aparte 100 ml (cócktel de suplememtos MICROKIT SMT001):

  • D-Cicloserina 400 mg
  • Sulfato de Polimixina B 25 mg
  • D-Glucosuro de indoxilo (previamente disuelto en 8 ml de agua estéril) 60 mg
  • Solución Difosfato de fenolftaleína al 0,5 %, esterilizada por filtración 20 ml
  • Cloruro Férrico.6 hidrato al 4,5%, esterilizada por filtración 2 ml

(Fórmula por litro final de medio)

PREPARACIÓN

Disolver 7,1 g de medio en 100 ml de agua destilada. Calentar agitando hasta ebullición. Autoclavar a 121 ºC durante 15 minutos.
Enfriar a 45°C aproximadamente y añadir, pinchando asépticamente, 10 ml del cócktel de suplementos (MICROKIT SMT001).

Si el medio, violeta, ha virado a verdoso o amarillento durante su almacenamiento o fusión, por acidificación atmosférica, es imprescindible ajustar ahora el pH con NaOH 0,1 N hasta que el medio esté violeta.

Agitar bien y verter sobre placas Petri estériles. Dejar solidificar y una vez frío voltear las placas para que el agua de condensación no barra la superficie del medio. Cerrar con cinta de sellado (Ref. MICROKIT: PARAFIL). Las placas que no se vayan a usar en el día se guardan en nevera (8-15°C) y en total oscuridad hasta su utilización (máximo una semana, aunque la oxigenación puede provocar letalidad). De todas formas se recomienda la siembra de la membrana en profundidad antes de añadir el medio a la placa, por lo que es mejor preparar sólo las cantidades de medio que se vayan a consumir en el momento, de ahí el interés de presentar el cócktel de suplementos en vial pinchable.

MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO. AGITE EL BOTE ANTES DE USAR. PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO. MANTENGA EL MEDIO PREPARADO BASE A 15-21°C; Y EL MEDIO COMPLETO Y EL SUPLEMENTO A 8-15°C, EN TOTAL OSCURIDAD.
PRESENTACIÓN: DESHIDRATADO CODIGO: DMT052 Y SUPLEMENTO CÓCKTEL LÍQUIDO PREPARADO EN FRASCO 100 ml, CÓDIGO SMT001

MEDIO COMPLETO PREPARADO EN PLAQUITAS HERMÉTICAS MF, CÓDIGO PPL910. MEDIO COMPLETO PREPARADO EN VERSIÓN LÍQUIDA PARA MF, AMPOLLAS 2 ml, CODIGO FPL602; VIALES PINCHABLES 100ml, CÓDIGO RPL048.

CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO

Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar el laboratorio, tras conservar a alta Tª por fallos de refrigeración, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya llegado la fecha de caducidad teórica de su etiqueta…)

DESHIDRATADO: Polvo gris-violáceo.
PREPARADO: Agar violeta, homogéneo, traslúcido. Suplemento rojizo, translúcido, puede contener precipitados por su elevada concentración, que se disuelven tras agitar y añadir al medio base.

CONTROL DE CRECIMIENTO 24-48 h a 44°C aproximadamente, en anaerobiosis:

  • Clostridium sporogenes MKTA 11437, Bueno, Colonias amarillo-verdosas. Con respecto a PCA estandarizado*, recuento 80-213%.
  • Clostridium perfringens MKTA 13124, Bueno, Colonias amarillo-verdosas. Con respecto a PCA estandarizado*, recuento 117-255%.
  • Bacillus subtillis MKTA 6633, Inhibido
  • Staphylococcus aureus MKTA 6538P, Inhibido.
  • E.coli MKTA 25922, Inhibido.

* El que cumple con recuperación superior al 92-125% con respecto a cepas cuantitativas trazables a la cepa tipo. Incertidumbres detectadas entre todos los lotes a lo largo de un año (la mayoría de la incertidumbre se debe a la cepa y a la proporción de cepas acompañantes inoculadas, no al medio).

MODO DE EMPLEO E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS m-CP Agar

Sembrar la membrana filtrada evitando la formación de burbujas entre el filtro y el medio. Incubar en estricta ANAerobiosis, 24 horas a 44±1°C. Para detectar las esporas, duplicar la muestra, realizando sobre el duplicado un shock térmico de 5-10 minutos a unos 86 ºC previo a la incubación, a fin de conseguir su germinación.

Medio altamente selectivo para el género Clostridium, y diferencial para Cl.perfringens: sólo Cl.perfringens crece con colonias amarillo-verdosas que, según la bibliografía, viran a rosa tras 30 segundos de exposición a vapores de hidróxido amónico. Hemos comprobado que este viraje a rosa a veces es a azulado o verdoso, en función del nivel de acidificación que provoque la cepa de Cl.perfringens y del ajuste del pH del medio. Sin embargo, una muy superior recuperación se consigue con los medios TSC y TSN (ó TSN+C). Además los vapores de amonio son tóxicos tanto para el usuario como para la cepa, por lo que es mejor confirmar con Lactose Sulfite Broth (DMT140 Medio deshidratado, TPL018 Tubos con campana Durham) s/ UNE EN 13401, o mejor aún con el cómodo M-Ident Clostridium perfringens (KMT008) según ISO/CD 6461-2:2002 de aguas.

El usuario final es el único responsable de eliminar los microorganismos de acuerdo con la legislación medioambiental vigente. Autoclavar o inundar en lejía antes de desechar a la basura.

Si desea más información sobre nuestros M-CP AGAR (BASE) rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto . O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16

https://www.microkit.es/fichas/M-CP-AGAR.pdf

Puntos críticos en la detección de Legionella pneumophila: GVPC y BCYE Broth

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Puntos críticos en la detección de Legionella pneumophila: GVPC y BCYE Broth . Temas que crean dudas en la Norma ISO 11731

Puntos Críticos en la Detección de Legionella pneumophila (ISO 11731)

La detección y enumeración de Legionella según la Norma ISO 11731 es un protocolo notoriamente problemático para los laboratorios cuando intentan implantarla, lo que a menudo resulta en una baja sensibilidad (media del 41,61% según SEILAGUA®) o en límites de cuantificación inaceptablemente altos (a menudo ).

Hemos identificado cinco puntos críticos que comprometen la fiabilidad del análisis y ofrecemos soluciones probadas para superarlos.

1. Problema: La No-Revitalización de Células Subletales

Tras tratamientos de hipercloración, las células de Legionella (cuya prioridad es el biofilm, no el agua) se encuentran en estado subletal y no son detectadas.

  • Solución MICROKIT: Hemos diseñado dos caldos revitalizantes concentrados para añadir directamente a 1 litro de muestra de agua, permitiendo que las células se recuperen antes de la filtración:
    • Caldo GVPC (Selectivo): Para aguas con alta carga microbiana (e.g., aguas de refrigeración). Disponible también en formato con torundas para rascado de biofilm (Ref: RPL330/TPL016).
    • Caldo BCYE (No Selectivo): Para aguas de baja carga microbiana (e.g., potable), donde la flora acompañante es escasa (Ref: TPL017).
  • Protocolo de Revitalización:
    1. Añadir el caldo agitado al litro de agua.
    2. Agitar y dejar reposar 18-24 horas a temperatura ambiente ().
    3. Importante: No incubar a , ya que la multiplicación de Legionella impediría el recuento de la flora original.
  • Resultado Comprobado: El uso de caldo revitalizante aumenta la sensibilidad en la detección hasta un , según demuestran los resultados de los servicios intercomparativos SEILAGUA®.

 

2. Problema: Filtración de 1 Litro en una Sola Membrana

Filtrar 1 litro en una sola membrana genera estrés celular y el riesgo de que la membrana se fisure, resultando en falsos negativos o recuentos muy bajos.

  • Solución Recomendada: Filtrar el litro de muestra en 4 tandas de 250 ml utilizando membranas separadas.
    • Aunque esto aumenta el material, asegura una recuperación significativamente superior de Legionella, tal como validan los participantes de SEILAGUA®.
  • Consejo para Ahorrar Material: Para reducir el gasto de placas, se pueden colocar dos membranas por placa de (siempre que las zonas filtradas no se superpongan), reduciendo el requerimiento a solo dos placas por litro de agua.

 

3. Problema: El Shock Ácido

El tratamiento ácido para eliminar la flora competitiva puede, de forma simultánea, reducir significativamente la viabilidad de Legionella, especialmente si el tiempo de contacto se prolonga.

  • Solución: En aguas de baja carga microbiana (como las potables), donde el riesgo de flora acompañante es menor, es recomendable omitir el shock ácido para evitar esta pérdida de viabilidad.

 

4. Problema: La Selectividad Excesiva del Agar GVPC

El medio GVPC Agar es tan selectivo que a menudo inhibe incluso el crecimiento de Legionella. Las cepas certificadas muestran que los recuentos en GVPC son típicamente un logaritmo (factor 10) inferiores a los obtenidos en BCYE.

  • Solución (Doble Placa): En aguas de baja carga microbiana, se propone utilizar dos placas por litro:
    • Una placa de GVPC Agar (selectivo).
    • Una placa de BCYE Agar (no selectivo) para alertar sobre una selectividad excesiva en la placa GVPC.
  • Calidad de los Medios: Es crucial usar placas preparadas de máxima recuperación (como nuestras referencias PPLS30 y PPLS31) en lugar de medios deshidratados o placas económicas, ya que la composición de la ISO 11731 es difícil de optimizar.
  • Control de Crecimiento (No-Legionella): Para el control negativo de crecimiento (medio donde Legionella no debe crecer), sugerimos utilizar el Nutrient Agar o PCA-Water (YEA), que es más económico y accesible que el BCYE-Cys o el Agar Sangre.

 

5. Problema: Inmunodetección por Látex (Baja Robustez)

La confirmación serológica de colonias suele realizarse mediante pruebas de látex, que es la técnica inmunológica menos robusta y que ofrece más problemas de sensibilidad. La inmunofluorescencia ya está en desuso.

  • Solución Rápida y Robusta: Sugerimos el uso de inmunocromatogramas (Rapid Sticks), como los M-Ident Virapid Legionella (Ref: MKTVR2). Esta alternativa ofrece un máximo rendimiento, bajo coste y rapidez superior a las pruebas de látex, tanto en género como en especie, como en serogrupo.

https://www.microkit.es/pdf/legionella-virapid.pdf

https://www.microkit.es/monograficos/9-Legionella-monograf–a.pdf

 

LEGIONELLA BCYE AGAR

6 respuestas

LEGIONELLA AGAR (BCYE , BCYE -Cys, GVPC…) son los medios de cultivo estándar para la detección y recuento de Legionella

Aislamiento selectivo de Legionella por  el método MF o por siembra directa  (ISO 11731:1998, ISO 11731-2:2004)

COMPOSICIÓN

Nueva imagen (9)

 

Medio BASE (BCYE-Cys):

  • Carbón activado 2,0 g
  • Extracto de levadura 10,0 g
  • Agar Agar 22,0 g
  • Alfa-ketoglutarato (sal mono-K) * 1,0 g
  • (Fórmula por litro)
  • pH final: 6,9 ± 0,1

GVPC Suplemento Selectivo+Nutritivo estéril en solución 200 ml SBL604
Agite contundentemente y añada en asepsia 40 ml a 500 ml de medio enfriado a 50 ºC (o bien 8 ml a 100 ml de medio).

Puede contener precipitados por su elevada concentración pero desaparecen al diluir en el medio BCYE base. c.s.p. 2’5 l de medio.

Contiene las proporciones precisas, según ISO 11731, de: Tampón ACES, -Cetoglutarato, KOH, Clorhidrato de L-Cisteina, Pirofosfato férrico, Vancomicina, Cicloheximida, Polimixina y Glicina.

Contiene elementos tóxicos, evitar el contacto con la piel.

NOTA 1: La ref. SBL605 es idéntica al suplemento GVPC pero sin la Cisteína.

NOTA 2: EL caldo GVPC para preenriquecimiento revitalizador, es idéntico al Agar GVPC pero sin Agar-Agar y con el carbón granulado (ver kit P/A Legionella en tubos preparados, ref.RPL330). Ideal para usar antes de la ISO 11731 y encontrar de forma mucho más sensible y exacta la Legionella.

PREPARACIÓN (conversión del medio deshidratado en medio preparado)

Disolver 17 gramos de medio en 500 ml de agua bidestilada.

Calentar hasta hervir para la total disolución.

utoclavar a 121 ºC, 15 minutos.

El color final del medio es negro.

Enfriar a 45-50 ºC y, para el medio selectivo GVPC, añadir asépticamente 40 ml de Legionella Supplement-200 ml (SBL604, tampón ACES/KOH; nutritivo con -ketoglutarato, clorhidrato de L-cisteina y pirofosfato férrico; y selectivo, con Vancomicina, Polimixina, Cicloheximida y Glicina) ;

para el medio BCYE-Cys, añadir 40 ml de Legionella-Cys Supplement-200 ml (SBL605, tampón ACES/KOH, -ketoglutarato y pirofosfato férrico);

y para el medio BCYE, no son imprescindibles los antibióticos.

Mezclar muy bien y verter 20 ml/placa cuando el medio esté a punto de solidificar, para que la distribución del carbón activo sea lo más homogénea posible.

No sobrecalentar o el agar se volverá demasiado blando: Es posible que sea necesario añadir aún más Agar-agar (BCB006) para minimizar la friabilidad del agar, si se va a sembrar con asa (aceptado en ISO 11731).

PARA USO EXCLUSIVO
EN LABORATORIO.

MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO
EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO.

DESHIDRATADO CODIGO: DMT007

CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO

Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar laboratorio,
tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,…)

DESHIDRATADO: Polvo, Negro
PREPARADO: Estéril, Negro.

CONTROL DE CRECIMIENTO 2 semanas a 37°C aproximadamente:

  • Legionella pneumophila MKTN 12821 serogrupo1, Correcto, colonias gris-azuladas, cristalinas, mucosas, en 2-15 días, en medio suplementado BCYE+GVPC. No crece en medio BCYE base, sin suplemento nutritivo de hierro y cisteína. En el medio BCYE con suplemento nutritivo pero sin antibióticos, crece aproximadamente el doble de población que en el GVPC. Con respecto a PCA estandarizado y suplementado,* recuento 126 %, pero de forma selectiva.
  • Legionella pneumophila serogrupo 2-15, MKTLeg-2, Idem.
  • Escherichia coli, MKTA 25922 parcialmente inhibido. Con respecto a PCA estandarizado y suplementado,* recuento 27 %.
  • Micrococcus luteus MKTA 9341, inhibido.

* El que cumple con recuperación superior al 92-125% con respecto a cepas cuantitativas trazables a la cepa tipo. Incertidumbres detectadas entre todos los lotes a lo largo de un año (la mayoría de la incertidumbre se debe a la cepa y a la proporción de cepas acompañantes inoculadas, no al medio).

PRESENTACION: MEDIO DESHIDRATADO (BCYE-BASE) Y SUPL. GVPC, KITS P/A caldo revitalizante, PLAQUIS HERMÉTICAS MF GVPC, FRASCOS PREPARADOS 100 ml (BCYE-BASE) + SUPL. GVPC.

MODO DE EMPLEO E INTERPRETACION DE RESULTADOS

Medio selectivo GVPC:

Inocular una membrana de filtración de 0’22 µm (VAC022, no usar de 0,45 µm), o mejor 0´1 ml de un extracto del fondo del tubo tras la centrifugación a 2500 r.p.m., 20′ de una muestra rascada, o bien 0’1 ml del fondo del caldo de enriquecimiento concentrado (RPL330) sobre una placa.

O aplicar una placa de contacto sobre la superficie, o bien introducirla en un aparato de control de aire.

Preincubar estrictamente 30 minutos a 50 ºC para eliminar la flora competitiva acompañante. Incubar a 35 ºC aproximadamente, en atmósfera húmeda de 2 a 14 días.

Las colonias de Legionella pneumophila son blanco-azuladas, brillantes, mucosas, de 1-2 mm Ø, circulares, lisas, algo elevadas y con los bordes enteros, fluorescentes en la oscuridad bajo luz UVA (linterna MICROKIT).

Subcultivar 3 colonias en BCYE (sin antibióticos) y en BCYE-Cys, al menos 2 días a 36 ± 1°C. Legionella crece en BCYE sin antibióticos (y en GVPC), pero no crece en BCYE-Cys (ni en medios generales tipo agar sangre, PCA, TSA, YEA, Nutrient Agar…).

Las colonias deben confirmarse con oxidasa positivo, a menudo lento (KOT050), catalasa positiva (KMT299) y serotipado (M-IDENT-LEGIONELLA-VIRAPID MKTVR2, QUE PUEDE USARSE DIRECTAMENTE EN EL PRIMER AISLAMEINTO DE GVPC Y AHORRARSE ASÍ EL TIEMPO Y COSTE DE LAS OTRAS PLACAS DE BCYE y BCYE-Cys).

Contar sólo la placa de GVPC con más colonias de Legionella pneumophila. Si no se encuentra, expresar los resultados como “no detectada”, ya que a veces está presente y no crece. Peligro, microorganismos de alto riesgo para inmunodeprimidos, por inhalación de aerosoles (pero no llega a ser de Clase III).

El usuario final es el único responsable de la destrucción de los organismos que se hayan multiplicado, según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura. 

Si desea más información sobre nuestros MEDIOS LEGIONELLA BCYE AGAR,  póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16

https://www.microkit.es/fichas/LEGIONELLA-GVPC-y-BCYE-AGAR-BASE.pdf

https://www.microkit.es/monograficos/9-Legionella-monograf–a.pdf

 

 

ENTEROCOCCUS CROMOKIT AGAR (EPA)

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ENTEROCOCCUS EPA AGAR es el medio de cultivo cromogénico aprobado por la EPA de USA para el recuento de Enterococos fecales en aguas

Agar selectivo y cromogénico para la detección y recuento de enterococos fecales en aguas (MF) y en alimentos, en sólo 24 h  (US-EPA).

enterococos cromokit agar

COMPOSICIÓN

  • Peptona                               10,0 g.
  • Extracto de levadura         30,0 g
  • Aesculina                               1,0 g
  • Cicloheximida                     0,05 g
  • Azida Sódica                       0,15 g
  • Cloruro sódico                   15,0 g
  • X-Glucosido                        0,75 g
  • Agar-Agar                           15,0 g

(Fórmula por litro)    pH final: 7,1 ± 0,2

PREPARACIÓN

Disolver 72 gramos en 1 litro de agua  bidestilada. Agitar  calentando hasta ebullición.  No sobrecalentar! Autoclavar a 121° C durante 15 minutos, acortando los tiempos de enfriamiento. El color final del medio es crema-ámbar.

Si se desea que el medio sea más selectivo, añadir, una vez enfriado a 47°C aproximadamente, justo antes de verter en placas, Ac.Nalidíxico a razón de 0,24 g disueltos en 5 ml de agua estéril que contenga unas gotas de NaOH 0,1 N (para facilitar su disolución).

 

PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO. AGITE EL BOTE ANTES DE USAR, PARA ASEGURAR  LA  HOMOGENEIZACIÓN DE LOS EVENTUALES GRADIENTES DE DENSIDAD DE LOS COMPONENTES. MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO.

DESHIDRATADO CODIGO: DMT322

CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO:

Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar laboratorio, tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,…).

DESHIDRATADO: Polvo grueso, Crema           PREPARADO: Estéril, Crema

CONTROL DE CRECIMIENTO 18-24 h a 37-41°C aproximadamente:

  • Enterococcus faecalis MKTA 19433, Excelente, colonias azules, diminutas.
  • Enterococcus faecium MKTA 9790, Excelente, colonias azules, diminutas.
  • Pseudomonas aeruginosa MKTA 27853, Inhibido.
  • Escherichia coli MKTA 25922, Inhibido.

 

 

PRESENTACIÓN: MEDIO DESHIDRATADO.

 

 

SIEMBRA E INTERPRETACIÓN

 

Filtrar 100 ml de agua (o bien la cantidad deseada) y colocar la membrana filtrada sobre una placa con medio. O bien sembrar en masa 1 ml de la solución madre del alimento. Incubar a 41°C aprox durante 18-24 horas. Las colonias azules, diminutas, son confirmativas para Enterococos fecales.

 

 NOTA

 

Medio desarrollado para detección confirmativa en un solo paso, sin necesidad de transferir membranas en dos medios, con la ventaja adicional de permitir el recuento de enterococos fecales en las primeras 18-24 horas. La incubación a 41°C permite la detección más selectiva. La esculina es hidrolizada por los enterococos con formación de esculetina y dextrosa. La cicloheximida inhibe la aparición de levaduras y mohos y la Azida Sódica impide el crecimiento de Gram negativos. El X-Glucósido es el sustrato cromogénico específico para los enterococos glucosidasa positivos.

 

Medio robusto, diseñado para todo tipo de aguas (potables, envasadas, de baño, incluidas las marinas y las de estuarios, acuarios, cetareas…) e incluso para alimentos y avalado por la US Environmental Protection Agency (EPA).

Si desea más información sobre nuestros MEDIOS ENTEROCOCOS CROMOKIT AGAR, rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto . O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16

https://www.microkit.es/fichas/CROMOKIT-ENTEROCOCCUS-AGAR.pdf

https://www.microkit.es/monograficos/17-Medios-cromog–nicos-monograf–a.pdf

Prepárese para más de una sorpresa informativa cuando vea nuestro video sobre los medios Cromogénicos: https://www.youtube.com/watch?v=-JVPVWxY8ZE&t=271s

Enterococos fecales en Agar EPA de MICROKIT: