Sabouraud RAPID-YM AGAR (RYM) HONGOS 18-48h PARA DETECCIÓN Y RECUENTO RÁPIDO DE LEVADURAS Y MOHOS EN ALIMENTOS, COSMÉTICOS, AGUAS Y AMBIENTES
Si Monsieur Sabouraud levantara la cabeza… usaría sin dudarlo Rapid YM Agar.
Primero por sus cualidades inauditas en cuanto a velocidad de liberación de lotes de producto terminado.
Y segundo, porque tiene base Sabouraud Dextrose Agar (entre otras muchas mejoras).
No está diseñado, como el Rosa Bengala Caf Agar (ISO 100.012) o el DRBC Agar (ISO 21527) para obtener un máximo recuento y diversidad.
Pero sí para solucionar otro hándicap de los laboratorios de microbiología, que ven retrasados todos sus resultados por causa de la lentitud de los hongos ¿Por qué su laboratorio no lo usa todavía?
Lo diseñamos y lo dimos a conocer en plena pandemia, cuando todo el mundo teletrabajaba ¿quizá por eso aun no lo conoce? ¿O no le prestó atención porque creyó que era un bulo? Lo entendería: Cuando estuve en Iberoamérica todo el año 2015, encontrando un montón de nuevas especies de microbios ambientales para la ciencia con mi muestreador de aire MBS (y con un muestreador de aguas que me tocó inventar para acceder a aguas naturales tropicales sin correr peligro), vi que existía un medio USA que se suponía que detectaba y enumeraba hongos (levaduras y mohos) en sólo 24 horas.
Pero no me pareció fiable, por muy diseño USA que tuviera, porque su control de calidad, lo hacía y recomendaba el fabricante, exclusivamente con Candida albicans, una levadura que ya crece en sólo 24 h en cualquier otro medio de cultivo para hongos.
Pero con esa raspa, me dieron la idea.
Y con los conocimientos adquiridos en 33 años de microbiólogo en MICROKIT, tanto en diseño de medios mejorados, como en coordinación de intercomparación de laboratorios, encontré la solución, que estaba ahí y sólo estaba esperando una época de tranquilidad (la pandemia) para poder ser plasmada: Rapid-YM Agar.
Un agar de color violeta para muestras de pH >4,0, selectivo para hongos, que vira a amarillo (en las zonas donde después aparecerán las colonias) tras incubar entre 18 y 48 horas (según la especie de hongo) a 35ºC ¡Oh pecado! ¿35ºC, hongos?
¿Por qué nos creemos que los hongos no patógenos sólo crecen bien a 25ºC? ¿Acaso mueren con una de esas olas de calor del Sáhara, que nos ponen todo a 45ºC, o en los trópicos? ¿Acaso son patógenos obligadamente, sólo por el hecho de que sean capaces de crecer a 35ºC? Si no crecen a 35ºC, está claro que no pueden ser patógenos humanos, pero si crecen a 35ºC no tienen por qué ser patógenos.
El caso es que este medio sólo funciona bien con muestras de pH > 4,0, para hongos (levaduras y mohos, no para bacterias) y cuando se incuba a 35ºC. Está diseñado así y para ello. Y así funciona. Eso sí, para todo tipo de muestras: alimentos, aguas, cosméticos, ambientes (superficies y aire…)…
Recuento fiable de Clostridium perfringens en aguas de consumo humano sin necesidad de filtración ni de atmósfera de anaerobiosis. Tambien disponible kit para Clostridios sulfito-reductores. Recuento fiable Clostridium aguas.
El recuento fiable de Clostridium perfringens es la asignatura pendiente en microbiología de aguas. La legislación ha cambiado del medio mCP Agar (tan querido por unos pocos y tan aborrecido por la mayoría), a TSC Agar, el medio que funciona muy bien en alimentos. Y todos esperaban un cambio para bien con este cambio de medio. Pero los resultados intercomparativos siguen demostrando que el problema no es el medio, es algo más general. Que provoca innumerables resultados falsamente negativos. Y en los positivos, provoca reducciones en los recuentos de 1-3 log desde el valor real.
En MICROKIT sabemos donde está el problema, y por eso hemos buscado la solución adecuada. Porque diseñamos el medio cromogénico para Clostridium perfringens (colonias naranjas) y va genial en alimentos y cosméticos, pero en aguas sigue dando falsos negativos.
El problema es que estamos oxigenando, mediante la técnica de filtración de membrana, el agua que contiene microorganismos anaerobios estrictos. Pruebe a filtrar medio FTM tioglicolato, que tiene un indicador de oxigenación (resazurina, que vira a rosado en presencia de oxígeno). Verá como la membrana de filtración se vuelve rosa al filtrar a través de ella.
Es justo lo contrario, pero análogo, a que nosotros, aerobios estrictos, cayéramos en un armario cerrado al fondo del mar. ¿Cuántos minutos aguantaríamos sin perecer por falta de oxigeno?
Estamos olvidando desde los primeros instantes del análisis, que trabajamos con anaerobios estrictos: seres que mueren en presencia del oxígeno del aire. Y por eso su hábitat natural son los fangos, las aguas profundas y el tracto digestivo de los animales. Y los estamos colocando en la atmósfera adecuada de anaerobiosis, durante la incubación. Demasiado tarde, cuando muchas (o todas) las células se han hecho ya inviables durante el proceso de la filtración.
Por eso vimos que no era un problema de medios, era un problema de métodos. E inventamos el método que acaba con todos los problemas del recuento, hasta ahora incierto, de Clostridium perfringens en aguas.
En primer lugar, hacía falta un método de inclusión en masa para recuento en 100 mL, no en 1 mL como las DryPlates y otras placas deshidratadas pensadas para muestras de alimentos o cosméticos.
En segundo lugar, hacía falta un método que no expusiera a las células de anaerobios al oxígeno del aire, como hace gravemente la filtración de membrana.
Tras emular nuestras DryPlates (que recuentan en masa sin tener que fundir medios), combinadas con 100 mL de la muestra de agua, y la atmósfera de anaerobiosis, surgió la patente Quanti-P/A Clostricult. Útil tanto para C.perfringens con TSC Agar, como para Clostridios sulfito-reductores con SPS Agar.
Ambos medios necesitaban la adición de nuestro famoso hidragar para mezclar el medio con los anaerobios presentes, y solidificar el agua de muestra sin tener que estar fundiendo medios.
Y tambien ambos medios necesitaban el generador de la atmósfera de anaerobiosis, lo cual fué posible agregar directamente al medio.
Sólo nos faltaba encontrar el recipiente adecuado para la mezcla de la muestra de agua con el medio, que fuese 100% hermético. Que permitiera luego amasarlo, para homogeneizar. Y plancharlo, para que la capa de medio fuese fina y permitiese un buen recuento.
Lo encontramos gracias a las bolsas con tapón a rosca donde hemos introducido el TSC Agar en polvo con hidragar y generador de anaerobiosis, conjunto que llamamos Quanti-P/A Clostricult.
Tambien ofrecemos el mismo kit con SPS Agar en polvo con hidragar y generador de anaerobiosis, para recuento fiable de clostridios sulfito-reductores en 50-100 mL de agua.
El tamaño de la bolsa elegida es muy superior al de la placa de filtración para membranas de 47 mm de diámetro, lo cual permite aumentar drásticamente el límite superior de cuantificación. Porque pasamos de los 1.590 mm2 de la membrana a 18.600 mm2 de la bolsa Quanti-P/A.
Lo cual permite leer 11 veces más colonias por muestra de 100 mL en la bolsa, que en la membrana estándar.
Por fin, el tapón a rosca permite recuperar colonias para su confirmación posterior, ya que el medio es más blando que un agar estándar. Y se pueden «pescar» colonias con asa de siembras, desde el tapón abierto.
Baird Parker cromogénico BPX19A: certeza St.aureus cosméticos y alimentos (colonias lilas-violetas, los otros estafilococos crecen verdes)
El microorganismo menos robusto
Los servicios intercomparativos demuestran que St.aureus es el microorganismo con mayores problemas de detección en microbiología de cosméticos y de alimentos:
numerosos falsos positivos cuando no está presente y numerosos falsos negativos cuando está presente.
¿Por qué?
Esto se debe al uso de medios de cultivo creados hace demasiado tiempo para microbiología de alimentos (Baird Parker),
de medicamentos (Mannitol Salt Agar),
o clínica (XStaph Agar cromogénico hipersalino),
cuya idiosincrasia es 100% diferente a la microbiología de cosméticos.
En cosméticos, a causa de los conservantes, todos los microorganismos están en letargia y a pesar de la inactivación de los conservantes con un buen caldo neutralizante, siguen en estado latente, subletal.
Si no se enriquece 48h (sino sólo 24h) y si no se estría incubando otras 48 h (en vez de 24 h), la probabilidad de encontrar los St.aureus presentes en el cosmético cae en picado.
Y si encima se emplean los medios inadecuados (Baird Parker, Mannitol Salt Agar, Agar cromogénico hipersalino)…
…la probabilidad de encontrarlos cuando están presentes pasa a ser prácticamente nula.
Soluciones a medias
Conscientes del problema, numerosas marcas han añadido el test de la coagulasa al Baird Parker clásico (BP+rpf),
sin que ello haya solucionado el problema en absoluto, como se demuestra en los más variados servicios intercomparativos.
Otras marcas han intentado encontrar la solución con cromógenos,
pero los medios cromogénicos para St.aureus no lo distinguen bien de otros estafiloccos, como se vuelve a observar claramente en los inters.
La solución más avanzada
Por eso MICROKIT ha creado el nuevo Baird Parker cromogénico, con dos cromógenos, que hemos llamado BPX19 Agar.
Baird Parker cromogénico: detecte con certeza St.aureus en cosméticos y alimentos.
Sin los problemas de falsos positivos del Baird Parker clásico…
…donde aparecen numerosas colonias negras con halo que a menudo ni siquiera son otras cepas de estafilococo…
…a veces ni siquiera son Gram positivos
e incluso a veces ni siquiera son bacterias, sino levaduras.
Y sin los problemas de los numerosos falsos negativos del Mannitol hipersalino y de los medios cromogénicos hipersalinos, que tienen un solo cromógeno para Staphylococcus spp
En este nuevo BPX19 Agar, los St.aureus crecen con pequeñas colonias de color violeta/púrpura/azul oscuro,
otras cepas de estafilococos crecen con colonias verdes o azul turquesa
y otras cepas no crecen, o lo hacen con colonias de color crema que nunca se podrían interpretar como falsos positivos.
Las colonias grandes y verdes suelen ser Bacillus spp. que, no siendo lilas/violetas, no pueden considerarse falsos positivos, porque no pueden confundirse con St.aureus
¡Hacía falta este nuevo medio de cultivo, y MICROKIT lo ha logrado!
Baird Parker cromogénico: detecte con certeza St.aureus en cosméticos y alimentos.
Staphylococcus aureus, único microorganismo que crece con colonias pequeñas y moradas/lila en BPX19 Agar. Las colonias azul celeste o verdes son de otros estafilococos y nunca se confundirán con un falso positivo. Las colonias crema son de otros microorganismos, que tampoco pueden confundirse con la diana de Staphylococcus aureus. BPX19A: certeza St.aureus cosméticos.
Patógenos cosméticos: CUP12A en formato DryPlates para detectar 12 de los 14 patógenos que han provocado retiradas de mercado de cosméticos
DryPlates-CUP12A
Izda: positivos desde [-1] y desde [-2] enriquecidas, colonias-estrías rojas y a menudo medio virado a rosa. Dcha: negativos tras estriar desde ambas concentraciones enriquecidas, sin colonias rojas, medio crema o suavemente anaranjado
Por fin el novedoso medio de cultivo CUP12A para todos los patógenos cosméticos, desarrollado por MICROKIT en Febrero de 2022, en formato de placas deshidratadas (DryPlates).
En menos de un año desde que nació el medio CUP12A, hemos conseguido diseñarlo también en DryPlates (Noviembre de 2022),
para máxima comodidad en los laboratorios de autocontrol de las fábricas de cosméticos. ¡CUP12A en formato DryPlates!
La mayor ventaja de las DryPlates sobre otros formatos es su extraordinariamente larga caducidad (2 años desde fabricación),
lo que permite a cualquier laboratorio, grande o pequeño, tener stock de medio preparado para emergencias, vacaciones o rutina.
Y la mayor ventaja de las DryPlates sobre las demás placas en formato deshidratado es que en ellas sí que se puede realizar la siembra por estría tras enriquecimiento,
la única forma fiable de detectar patógenos.
Porque si simplemente añade a una placa deshidratada 1 ml de caldo enriquecido, es muy probable que haya tal concentración de microorganismos que no aparezcan colonias de color en contraste con el medio,
sino sólo microcolonias imperceptibles que lo máximo que harán es un ligero viraje a toda la placa, que seguramente también pasará inadvertido.
No en vano el I+D de estas plaquitas, las únicas placas deshidratadas españolas, costó 23 años de ensayos y errores,
hasta que conseguimos lo que nos propusimos en la década de 1990:
unas placas preparadas de larguísima caducidad que sirvieran tanto para recuentos como para detección fiable de patógenos.
Simplemente añadiendo 1 mL de agua estéril, se activa la placa deshidratada (que en estado deshidratado puede mantener hasta 2 años de caducidad).
Luego se estría el caldo enriquecido de la muestra tratada (ideal en el caldo validado en intercomparación LPT Neutralizing Broth de MICROKIT)
Dedicando a esta operación de hidratación y estriado, un total de sólo 10-20 segundos.
Y ya está lista la placa para incubar a 35ºC aprox durante 12-48 h.
Si sale alguna colonia roja en las primeras 12 h, ya sabemos de esta forma tan precoz que el lote contiene patógenos (debemos identificar de qué especie se trata).
O bien resembrando en los medios de cultivo selectivos de cada grupo…
…o bien identificando las colonias rojas crecidas.
Para la pre-identificación del grupo microbiano,
MICROKIT pone a su disposición 4 reactivos de respuesta inmediata:
1-Neogram para saber si es Gram positivo (la colonia no filamenta, como los estafilococos, los enterococos, los Bacillus…)
o Gram negativo (la colonia se convierte en un filamento a simple vista, como E.coli, las Enterobacterias, Pseudomonas aeruginosa o Burkholderia cepacia).
2-Tiras estables de la citocromo-oxidasa para saber si la colonia es de no fermentadores (oxidasa positivos, como Pseudomonas aeruginosa o Burkholderia cepacia)
o de fermentadores (oxidasa negativos, como E.coli, los estafilococos…).
3-Reactivo de la catalasa para saber si es catalasa positivo (casi todos los microorganismos)
o catalasa negativo (como los enterococos, estreptococos, Lactobacillus, Clostridium…).
4-Y Reactivo de la coagulasa, para distinguir los estafilococos patógenos como St.aureus (coagulasa positivos)
de los no patógenos (coagulasa negativos).
Así sabrá en sólo un par de minutos si la colonia es de los patógenos más conocidos, y podrá desde ahí emplear el método que más le convenza, por ej: galerías bioquímicas/enzimáticas
o bien enviarnos la muestra para su secuenciación genética y conocer con la máxima certeza, mayor del 99,5%, de qué especie concreta se trata
y además si es o no es oficialmente un patógeno, como consta en nuestros informes de ID molecular.
Si no salen colonias rojas ni viraje del medio a fucsia, hay que seguir incubando hasta un máximo de 48 h para que, si no aparecen colonias rojas, podamos liberar el lotecomo libre de 12 de los 14 patógenos cosméticos.
Combine este medio con el de Candida (la mejor opción es el Biggy Nickerson Agar, mucho mejor que el Sabouraud o los medios cromogénicos clínicos para Candida, que son diferenciales pero no tienen buena recuperación en muestras cosméticas).
Otra buena opción es el RYM Sabouraud, donde Candida albicans crece con colonias azul celeste inconfundibles.
Y con el de estafilococos: el Baird Parker es el medio que más falsos positivos, más trabajo extra de confirmación genera, de entre todos los medios empleados en microbiología cosmética.
Por otra parte, el Mannitol es uno de los medios con más falsos negativos en muestras cosméticas.
Y por otra parte, los medios cromogénicos hipersalinos, diseñados para microbiología clínica, dan tambien falso negativo con varias cepas típicas de St.aureus.
Así que la mejor opción es emplear el novedoso BPX19 Agar de MICROKIT (Baird Parker cromogénico): ahórrese problemas, tanto de falsos positivos como de falsos negativos.
De este modo, con sólo 3 medios, conseguirá detectar los 14 patógenos que provocan retiradas de mercado de cosméticos. Y cumplir por fin con la legislación, en vez de seguir sólo en la incompleta matrix ISO, con 1 medio extra. Así de fácil.
No mire al pasado: los 4 medios para los 4 patógenos clásicos (con Norma ISO asociada) pasarán de moda.
Este es el futuro, convertido ya en presente gracias a MICROKIT:
ahora sólo necesita 3 medios (1 menos) para los 14 patógenos cosméticos (10 más que en el método ISO), que desde ahora sólo podrán crearle retiradas de mercado si todavía sigue sin vigilarlos.
La validación de este medio (tanto en formato DryPlates como en deshidratado, placas clásicas y plaquis herméticas) en 200 muestras naturales, obtiene:
– un 99,5% de sensibilidad (sólo 1 falso negativo de 200 muestras)
– un 99,5% de especificidad (sólo 1 falso positivo de 200 muestras).
No conocemos ningún otro medio en microbiología que se acerque siquiera a estos espectaculares valores de eficacia. ¡Emplee ya CUP12A en formato DryPlates!
Cumpla con lo que realmente le está pidiendo la legislación europea y española (Reglamento CE Nº 1223/2009 y Real Decreto RD 85/2018 de 23 de Febrero):
la inocuidad microbiológica de sus cosméticosen todos sus lotes.
Y eso no se consigue buscando sólo 4 de los 14 patógenos que provocan retiradas de mercado.
CURSOS Y ASESORÍA EN MICROBIOLOGÍA: con sus 33 años de experiencia, MICROKIT (y su filial KOSMLAB) es el primer proveedor de productos para control microbiológico que, además, imparte CURSOS PRÁCTICOS certificados por la Norma ISO 9001 (Seilasesoría) en materia de MICROBIOLOGÍA.
Son cursos de asesoría en microbiología
Aparte de los cursos que convoca para todos los asistentes que lo deseen, en diferentes hoteles de la geografía española, los cursos con más éxito son los impartidos in situ en las instalaciones de cada cliente. Dirigidos a todos los analistas, Director Técnico, etc. de la empresa que quieran participar.
Tras la revisión de lo que necesitan o hacen, y tras la introducción teórica de lo que se va a hacer, se realizan las prácticas previamente acordadas de entre estas materias:
microbiología de cosméticos, microbiología de alimentos, microbiología de aguas, microbiología de ambientes interiores (superficies y aire).
Tipos de cursos
Y todo ello a tres niveles:
1) iniciación (con montaje del laboratorio de autocontrol, técnicas y protocolos analíticos),
2) optimización (auditoría de puntos críticos detectados en su laboratorio y consultoría sobre sus soluciones) y
3) validación de técnicas microbiológicas (según criterio de inspección de Sanidad, no de ISO 17025).
Reconocimiento oficial
MICROKIT es la primera empresa donde el alcance de su certificación ISO 9001 incluye este tipo de asesorías, desde hace ya más de dos décadas.
Motivos por los que debe fiarse del criterio profesional del profesorado
Hemos sido, durante 25 años, los coordinadores y evaluadores de los primeros servicios intercomparativos de España en materia de control microbiológico de alimentos, aguas, cosméticos y ambientes interiores.
Esto nos colocó en una situación privilegiada única con respecto a cualquier otro diseñador o fabricante de medios y kits para control microbiológico:
Sabemos en qué fallan la mayoría de protocolos oficiales y hemos aprendido a solucionar todos esos puntos críticos.
Nuestra experiencia de más de 25 años en validación de técnicas microbiológicas nos hace ser los elegidos por el 99% de industrias.
Porque todos necesitan validar sus técnicas más rápidas y eficientes frente a las inspecciones oficiales.
Y saben que los problemas microbiológicos que se encuentran en el día a día…
…MICROKIT hace ya décadas que los detectó, los desmanteló y los resolvió con métodos / productos novedosos que funcionan mucho mejor que los clásicos
¿Cómo me informo mejor de estos cursos?
Solicite información en consultastecnicas@microkit.es sobre los CURSOS Y ASESORÍA EN MICROBIOLOGÍA. Será el curso adaptado a su empresa, que más le conviene.
De paso, cumpla de la manera más eficiente con los objetivos de calidad en materia de formación especializada, que requiere su certificación ISO.
CUP12 AGAR para detectar los patógenos cosméticos que casi nadie estaba buscando
CUP12 Agar Patógenos cosméticos
La legislación cosmética exige la ausencia de patógenos (no sólo de los 4 especificados en normas ISO).
Y hay muchos más patógenos provocando retiradad de mercado que esos 4 (ó 5 si tambien se analiza en más frecuente: Burkholderia cepacia)
Los fabricantes de cosméticos seguían desamparados en esta confusión entre Legislación oficial y Normativa técnica.
Ya que la primera se refiere hasta a 14 patógenos que están provocando retiradas de mercado por parte de las autoridades sanitarias…
…mientras la segunda sólo habla de 4 de ellos, que encima no son en muchos casos los más frecuentes.
Conscientes del problema, MICROKIT ha conseguido un medio de cultivo que resuelve a la perfección esta controversia:
Agar cromogénico para aislamiento selectivo de los patógenos más típicos que provocan retiradas de mercado de cosméticos. Por fin podrá cumplir con el Reglamento UE 1223/2009 en lo que concierne a la seguridad microbiológica de cada lote.
Diferentes patógenos que han provocado retiradas de mercado de cosméticos, detectados en el medio CUP12A. De izda a dcha y de arriba abajo: E.coli, P.aeruginosa, S.aureus, C.albicans, B.cepacia, Pluralibacter gergoviae, Klebsiella pneumoniae, Enterococcus faecalis, Aspergillus fumigatus, Salmonella enteritidis
Con este nuevo medio de cultivo diseñado por MICROKIT, podrá por fin cumplir con la legislación en materia de seguridad microbiológica de cada uno de sus lotes.
CUP12 Agar detecta, por estría tras enriquecimiento, todos los patógenos emergentes que han ido provocando retiradas de mercado de cosméticos en los ultimos años. Y que no tienen asociada ninguna Norma ISO.
¿12 patógenos en un solo medio, que además es selectivo para ellos?
Tal es el caso de Burkholderia cepacia complex, Pluralibacter gergoviae, Enterococcus faecalis, Aspergillus spp, Klebsiella spp, Enterobacter spp, Proteus spp, Salmonella spp, Serratia spp, Pseudomonas putida… Tambien detecta 2 de los 4 microorganismos con Norma ISO: Pseudomonas aeruginosa y E.coli.
Con la implantación de CUP12A ahorrará 2 de los 4 medios de cultivo que emplea para patógenos (Cetrimida y MacConkey Agar), lo cual reducirá su tiempo de trabajo y su necesidad de espacio de almacén y de residuos. Pero lo importante de este nuevo medio es que, además de sustituir esos dos medios por uno solo (ahorro económico, de trabajo y de espacio), detectará desde ahora también los demás patógenos emergentes que están provocando problemas en numerosas fábricas de todo el mundo. Porque no los estaban buscando y son patógenos, lo cual incumple la exigencia legal de la seguridad microbiológica del cosmético.
Simplemente añada este medio a su rutina, enriquezca como es habitual, estríe también en este medio y si aparece cualquier colonia roja, la probabilidad de que sea un patógeno es del 99,5%: Identifique la colonia para estar 100% seguro de que se trata de un patógeno. En MICROKIT le informamos, como cliente de CUP12A, si la especie que identifica se considera o no oficialmente patógeno: escriba su pregunta a consultastecnicas@microkit.es. También podemos identificarla por Ud. de la forma más fiable que existe: secuenciación genética y comparativa Genbank; en este caso en nuestro informe ya le indicamos directamente si la especie (identificada con más del 99,5% de identidad) es o no considerada oficialmente un patógeno.
CUP12A es el milagro que todos necesitábamos en microbiología cosmética. No sólo ahorrará medios, es que además detectará todos los patógenos que, por interpretación subjetiva del Reglamento CE 1223/2009, hasta ahora no estaba buscando. Patógenos cosméticos CUP12 Agar.
Otras soluciones a los medios clásicos que no fueron diseñados para microbiología cosmética, pero fueros normalizados en ella por imitación de la microbiología alimentaria y clínica
Además, si desea una detección fiable de uno de los patógenos «ISO» que no abarca el CUP12A: Staphylococcus aureus, ya puede hacerlo gracias al nuevo Baird Parker cromogénico (BPX19A) de MICROKIT, con una fiabilidad excepcional, por el ahorro tanto de falsos positivos como de falsos negativos propios de los otros medios que había hasta ahora para este microorganismo.
Y para el cuarto patógeno con Norma ISO asociada, Candida albicans, le recomendamos el Agar Biggy Nickerson, mucho más eficiente que el Sabouraud o que los medios cromogénicos para Candida, ya que son medios diferenciales de uso clínico, no validados para cosméticos (es más, invalidados en intercomparación).
¿Y que hacemos con los recuentos?
Por fin, si desea acelerar el recuento de aerobios y el de hongos, sustituya el TSA por TSA/PCA cromogénico de MICROKIT, y el Sabouraud por Rapid YM Agar de MICROKIT.
Por supuesto, si ha participado en intercomparación, ya sabe que el mejor caldo neutralizante y de enriquecimiento en cosmética no es el Eugon LT100 ni el Letheen Modificado, es el LPT Neutralizing Broth de MICROKIT.
Cepas microbianas de referencia: Aparte de las cepas cuantitativas en lentícula MICROKIT que ya han cumplido 10 años, MICROKIT ha firmado un acuerdo de distribución de cepas ielab de referencia certificadas e incluso acreditadas. Además de una inmensa gama de cepas que no tenemos en nuestro catálogo (incluidas Legionella, Campylobacter, Cronobacter, Rhodococcus, Yersinia… y Lineapharma), producidas bajo acreditación ISO 17034 y controladas bajo certificación ISO 17025. Este acuerdo abarca toda España (Excepto Cataluña y Andalucía donde ya había acuerdos con otros distribuidores):
–BAControl para control de medios de cultivo (cepas cuantitativas elaboradas por un laboratorio acreditado ISO 17034 y certificadas por un laboratorio ISO 17025. En las que así se indica, están certificadas con los recuentos en dos medios de cultivo diferentes)
–BACuanti para controles de calidad cuantitativos y para validación de métodos cuantitativos (cepas cuantitativas como BAControl, pero que además, están certificadas por una red de varios laboratorios acreditados ISO 17025)
–BACredi (cepas cuantitativas como material de referencia acreditado por ENAC: sólo Citrobacter freundii, Clostridium perfringens, Enterococcus faecium, E.coli, Legionella pneumohila ser.1 y L.pneumohila ser.1 en membrana de policarbonato)
–BACuali para controles de calidad cualitativos y para validaciones cualitativas (cepas cualitativas elaboradas por un laboratorio acreditado ISO 17034 y certificadas por un laboratorio ISO 17025)
Si ya usa cepas ielab, ignore esta comunicación, ya que no le afecta; si no, por favor pídalas a través de nosotros con las ventajas MICROKIT, o estaremos trabajando en vano: El material viajará directo de ielab a su laboratorio en hielo seco, exactamente al mismo precio y con el mismo cargo en portes, nosotros sólo interveninos como red comercial para abrir mercado en clientes que ellos no conocen.
FOSFATASA ALCALINA LACTOGNOST LECHE: KIT CUALITATIVO PARA LA DETECCIÓN DE LA CORRECTA PASTEURIZACIÓN DE LA LECHE
FOSFATASA ALCALINA LACTOGNOST LECHE
Método cualitativo para detectar Fosfatasa Alcalina en leche pasteurizada.
Tras ser durante las últimas décadas el único método universalmente conocido para ello, ha desaparecido del mercado mundial en 2024. Afortunadamente, ya hay sustituto: el nuevo kit PhosPhatesmo, preguntar en microkit@microkit.es
INSTRUCCIONES DE USO
1- En dos tubos de ensayo (P problema y C control) se introducen:
10 ml de agua destilada.
1 tableta de Lactognost I.
1 tableta de Lactognost II. Al agitarse deben deshacerse las tabletas; si no, machacarlas con una varilla de vidrio.
2- En el tubo de ensayo P se pipetea 1 ml de la muestra de leche y en el tubo de ensayo C 1ml de leche que se ha liberado con seguridad de fosfatasa, calentándola previamente a 85 ºC.
3- Ambos tubos se mantienen en baño de agua o incubadora durante 1 hora a 37 ºC.
4- A cada tubo (PyC) se añade con una cucharilla dosificadora Lactognost III hasta enrasar.
5- Transcurridos 10 minutos comparar, en caso de resultado positivo, el color azul en el tubo P frente a la muestra de control C y determinar la intensidad del color mediante la escala de colores adjunta.
Determinación de la fosfatasa en la nata y cuajo: como en la leche.
Determinación de la fosfatasa en mantequilla: derretir 10 g de mantequilla en el tubo de centrífuga introducido en baño de agua de 40 ºC, centrifugar y seguir como con la leche.
OBSERVACIONES
Debida la gran sensibilidad del reactivo frente a vestigios de fenol es necesario proceder siempre con la máxima limpieza:
1- Emplear para cada muestra de leche una pipeta aparte.
2- Cuidado al agitar (transferencia de leche conteniendo fosfatasa).
3- Al tomar los reactivos ha de evitarse cualquier contaminación entre los mismos.
Además debe tenerse en cuenta qué materias plásticas o gomas pueden contener fenol y también se evitará todo contacto de las muestras con saliva, sudor (fosfatasa) o humo de tabaco (fenoles).
La pureza de los reactivos está garantizada, siempre que sean conservados bien cerrados en lugar fresco y protegidos contra luz y humedad.
El contenido del envase, una vez abiertos los tapones de origen, debe gastarse dentro de un máximo de 2 meses.
Referencia: SLC002. Kit para 100 pruebas. FOSFATASA ALCALINA LACTOGNOST LECHE: KIT CUALITATIVO PARA LA DETECCIÓN DE LA CORRETA PASTEURIZACIÓN DE LA LECHE Fabricado en la UE para LABORATORIOS MICROKIT desde 1990. Revisado en Mayo 2020
b) FPA900 Viales prepesados de polvo estéril con tapón a rosca para añadir a 100 mL de la muestra de agua (no incluido bote 100 mL VML155 o bolsa standup 100 mL B2787B estériles).
c) DMTI900- Botes 100 g de polvo estéril y cucharilla dosificadora para añadir a 100 mL de la muestra de agua (no incluido bote 100 mL VML155 o bolsa standup 100 mL B2787B estériles),
De gran utilidad como screening negativo de muestras rutinarias, al ser un método más fácil de emplear que la filtración de membrana y más fiable
(escasez de falsos positivos y de falsos negativos, que en filtración de membrana es de nada menos que el 21% de las muestras analizadas en el mundo, por el estrés provocado durante la filtración).
También muy útil para que las potabilizadoras no dejen de analizar en festivos y fines de semana, ya que este método puede ser empleado por personal no especialista en microbiología,
el mismo guarda de la depuradora puede hacerlo.
La única precaución es que el operario no toque ni el agua ni el polvo con sus manos, para evitar contaminaciones artificiales.
MODO DE EMPLEO
Detección coliformes/E.coli en aguas
Es necesario tratar previamente el agua clorada, mediante Tiosulfato Sódico, para que las células dañadas subletalmente se recuperen, excepto en los frascos tomamuestras RPL303, que ya lo incluyen.
En agua de mar, hacer una dilución 1:10 en agua destilada estéril y partir de esta dilución 1:10.
Añadir los 100 mL de agua de muestra en el frasco o en el recipiente estéril que se va a utilizar;
en el caso de los viales, añadir todo el contenido sobre el agua;
si usa los botes de 100g, añadir una cucharadita rasa sobre el agua y cerrar el bote con la cucharilla dentro para los posteriores usos.
Y en cualquiera de los 3 casos, agitar para homogeneizar.
Incubar 8-48 horas a 35-37° C (Coliformes totales y E.coli)
ó a 44° C (Coliformes Fecales y E.coli).
La muestra inoculada sirve también de medio de transporte, por lo que no es necesario incubar inmediatamente después de la toma de la muestra, pudiendo transcurrir varias horas entre toma e incubación.
Para aguas envasadas o de baño, se analizan 250 mL, por lo que debe añadir 2 viales ó dos cucharaditas por muestra (no se pueden usar los frascos RPL303 para 250 mL, al haber sido diseñados sólo para 100 mL).
El medio funciona correctamente desde mitad hasta el doble de concentración, por lo que no es necesario afinar 2,5 viales ó 2,5 cucharaditas)
INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
Detección coliformes/E.coli en aguas
El viraje a color azul (XGal) demuestra la Presencia de Coliformes (totales o fecales según la Tª de incubación) en la muestra de agua.
La Fluorescencia azul (luz azul por MUG) que se observa en la oscuridad bajo U.V.A. de 366 nm (linterna VMT050) demuestra la presencia de E.coli en la muestra de agua
(confirmar con 0,5 ml de KOVACS-SBH056): anillo rojo de Indol en superficie es prueba positiva.
E.coli O157 H7 se detecta por ser XGal + (vira a azul), de acuerdo con la definición moderna de coliforme; MUG – (no fluorescente a pesar de ser E.coli) e indol + (anillo rojo).
Es necesaria la ausencia (no viraje), que equivale a 0 ufc/100 mL (ó en 250 mL).
Sólo en caso positivo debería repetirse la muestra por método cuantitativo si se requiere un recuento concreto,
aunque la legislación exige 0 y por tanto no importa si hay 2 ó 950, en ambos casos el agua no es potable.
Material necesario no incluído: Tiosulfato Sódico para eliminar el cloro (SMT976) excepto en los frascos tomamuestras RPL303, que ya lo incluyen. Bote estéril 100ml (VML155), o bolsa estéril autosellable Stand-Up (B2787B). Estufa o incubador 35-37ºC (SIL12AR ó SIL24AR).
En homenaje a nuestro querido amigo, el Dr. Juan José Marcén, que falleció antes de conocer el éxito mundial de la fantástica idea que nos regaló en los años 90, este kit se regala a todas las ONGs que nos los pidan junto con otros parámetros P/A.
PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO O PARA ANÁLISIS DE CAMPO. MANTENER FUERA DEL ALCANCE Y DE LA VISTA DE LOS NIÑOS Y ANIMALES.
EXTREMADAMENTE HIGROSCÓPICO: MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO. AGITE EL BOTE ANTES DE USAR. EN ZONAS DE ELEVADA HUMEDAD AMBIENTAL, GUARDAR EL BOTE BIEN CERRADO EN UN TUPPER HERMÉTICO CON SILICAGEL.
VER TAMBIEN LAS NUEVAS REFERENCIAS FPA575 (COLICULT PLUS) y FPA537 (COLICULT-ISO 9308 ONPG+MUG) Puede convertir este kit en cuantitativo simplemente añadiéndolo antes de incubar a NMP-RACKS o a CLIPCOUNTER + QUANTIBAG
https://www.microkit.es/pdf/KITS-PA-AGUAS-EN-FRASCOS-TOMAMUESTRAS.pdf
CONTROL DE CALIDAD
Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar laboratorio, tras largos fletes, tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,…)
DESHIDRATADO: Polvo crema PREPARADO: Paja
CONTROL DE CRECIMIENTO 8-24 h a 37°C aproximadamente:
E. coli WDCM 000013, vira a azul, da fluorescencia azul en la oscuridad bajo 366 nm y genera anillo rosa de indol, en 8h si el inóculo es alto y no procede de muestras estresadas, en 18-24h en caso contrario.
Enterobacter aerogenes WDCM 00175 (coliforme): Vira a azul-turquesa en 18 h. No da fluorescencia con 366 nm. Indol – (no rojo en superficie)
Pseudomonas aeruginosa WDCM 00026, no vira a azul, no da fluorescencia azul en la oscuridad bajo 366 nm y no genera anillo rosa de indol.
Enterococcus faecalis WDCM 00009: Inhibido.
Si desea seguir el Reglamento UE 2-2019 que entrará en vigor en 2021 mediante el cual los lobbies del laboratorio han conseguido barrer la innovación que aporta el milagro mediterráneo (la PIME),
al exigirnos a los inventores de productos/métodos para industria alimentaria, el inviable pago de cientos de miles de € a AOAC, AFNOR o similar por cada referencia innovadora;
nos puede pedir CCA Agar ISO 9308-1:2014 (Ref: DMT400 en deshidratado, TPL400 en tubo, ECOP23J en Ecoplacas, ECOPQ08J en Ecoplaquis MF…),
ya que de este modo no es un método alternativo y por tanto ningún inspector ni auditor puede impedirle emplearlo.
Aunque perderá el valor añadido del kit: su extraordinario poder de detección sin falsos negativos, el ahorro de filtración de membrana….
La mejor solución sería realizar una proporción residual pero razonable de muestras con el medio ISO en formato clásico, para presentar sus informes a inspección de Sanidad, y asi poder seguir usando internamente en paralelo este kit en esas y en las demás muestras, para la mejora, fiabilidad y rapidez de sus resultados de autocontrol.
A fin de cuentas, este reglamento que corta de cuajo el I+D que no provenga de multinacionales, no es nada nuevo:
los kits de autocontrol nunca han servido para obtener resultados oficiales, pero ayudan a la industria a tomar las mejores decisiones para la rapidez y fiabilidad en la liberación de sus lotes.
El usuario es el único responsable de la eliminación de los microorganismos según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.
Diseñado, Validado y Fabricado en la UE por MICROKIT bajo ISO 9001, ISO 11133 y GMPs desde 1994, revisado en Mayo de 2020
Detección Presencia / Ausencia (P/A) en 100 (250) ml de agua: MICROKIT P/A ENTEROCULT
Enterococos fecales: Detección enterococos en aguas.
INTRODUCCIÓN:
Medio estéril ENTEROCULT diseñado por MICROKIT con base BEA para detección P/A (o recuento en su formato Quanti-P/A Ref: QPA-ETC) de Enterococos fecales (el agua vira de ámbar a negro opaco y pierde su iridiscencia), que puede elegir en tres formatos diferentes:
b) FPA901 Viales prepesados de polvo estéril con tapón a rosca para añadir a 100 mL de la muestra de agua (no incluido bote 100 mL VML155 o bolsa standup 100 mL B2787B estériles). Cajas 40u ó 10x40u. https://www.microkit.es/pdf/kits-pa-polvos.pdf
De gran utilidad como screening negativo de muestras rutinarias,
al ser un método más fácil de emplear que la filtración de membrana
y más fiable (escasez de falsos positivos y de falsos negativos,
que en filtración de membrana es de nada menos que el 6% de las muestras analizadas en el mundo, por el estrés provocado durante la filtración).
También muy útil para que las potabilizadoras no dejen de analizar en festivos y fines de semana, ya que este método puede ser empleado por personal no especialista en microbiología,
el mismo guarda de la depuradora puede hacerlo. La única precaución es que el operario no toque ni el agua ni el polvo con sus manos, para evitar contaminaciones artificiales.
MODO DE EMPLEO
Detección enterococos en aguas:
Es necesario tratar previamente el agua clorada, mediante Tiosulfato Sódico, para que las células dañadas subletalmente se recuperen, excepto en los frascos tomamuestras RPL301, que ya lo incluyen.
Añadir los 100 mL de agua de muestra en el frasco o en el recipiente estéril que se va a utilizar;
en el caso de los viales, añadir todo el contenido sobre el agua;
si usa los botes de 100g, añadir tres cucharaditas rasas sobre el agua y cerrar el bote con la cucharilla dentro para los posteriores usos.
En cualquiera de los 3 casos, agitar para mezclar.
Incubar 18-24 horas a 35-37° C.
La muestra inoculada sirve también de medio de transporte, por lo que no es necesario incubar inmediatamente después de la toma de la muestra, pudiendo transcurrir varias horas entre toma e incubación.
Para aguas envasadas o de baño, se analizan 250 mL, por lo que debe añadir 2 viales ó dos cucharaditas por muestra (no se pueden usar los frascos RPL301 para 250 mL, al haber sido diseñados sólo para 100 mL).
El medio funciona correctamente desde mitad hasta el doble de concentración, por lo que no es necesario afinar 2,5 viales ó 2,5 cucharaditas).
En agua de mar, emplee la dilución 1:10 del agua de muestra en agua destilada estéril (10 mL de agua de mar en 90 mL de agua destilada estéril)
INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
Detección enterococos en aguas:
El viraje del color ámbar inicial, transparente e iridiscente, a color negro-opaco (y pérdida de la iridiscencia que adquiere el agua en este medio) demuestra la Presencia de Enterococos fecales en la muestra de agua.
Puede confirmar de inmediato porque son microorganismos catalasa negativos; o bien observando al microscopio que son cadenas de cocos Gram positivos.
Es necesaria la ausencia (no viraje), que equivale a 0 ufc/100 mL (ó en 50 mL).
Sólo en caso positivo debería repetirse la muestra por método cuantitativo si se requiere un recuento concreto, aunque la legislación exige 0 y por tanto no importa si hay 2 ó 950, en ambos casos el agua no es potable.
Si aún asi debe cuantificar (muestras positivas con Enterocult P/A), utilice Quanti-P/A-ETC (Ref: QPA-ETC), que contienen este mismo medio con gelificantes en frío en una bolsa hermética.
Material necesario no incluído:
Tiosulfato Sódico para eliminar el cloro (SMT976) excepto en los frascos tomamuestras RPL301, que ya lo incluyen.
Bote estéril 100ml (VML155), o bolsa estéril autosellable Stand-Up (B2787B).
Estufa o incubador 35-37ºC (SIL12AR ó SIL24AR).
En homenaje a nuestro querido amigo, el Dr. Juan José Marcén, que falleció antes de conocer el éxito mundial de la fantástica idea que nos regaló en los años 90, el kit de coliformes/E.coli se regala a todas las ONGs que nos los pidan junto con otros parámetros P/A.
PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO O PARA ANÁLISIS DE CAMPO. MANTENER FUERA DEL ALCANCE Y DE LA VISTA DE LOS NIÑOS Y ANIMALES.
EXTREMADAMENTE HIGROSCÓPICO: MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO.
AGITE EL BOTE ANTES DE USAR.
EN ZONAS DE ELEVADA HUMEDAD AMBIENTAL, GUARDAR EL BOTE BIEN CERRADO EN UN TUPPER HERMÉTICO CON SILICAGEL.
CONTROL DE CALIDAD:
Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar laboratorio, tras largos fletes, tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,…)
DESHIDRATADO: Polvo crema PREPARADO: Ámbar, transparenteCONTROL DE CRECIMIENTO 18-24 h a 37°C aproximadamente:
Enterococcus faecalis MKTA 29212, Correcto, medio opaco y negro, sin iridiscencia en el menisco Escherichia coli MKTA 25922, inhibido completamente. Bacillus subtillis MKTA 6633, Inhibido completamente. Staphylococcus aureus MKTA 6538P, Inhibido completamente.
VER TAMBIEN EL NUEVO DISEÑO DE 2019 FPA580, EL X-Plus Enterocult EPA Broth:
.
Puede convertir este kit en cuantitativo simplemente añadiéndolo, antes de incubar, a NMP-RACKS o a CLIPCOUNTER + QUANTIBAG
El usuario es el único responsable de la eliminación de los microorganismos según la legislación medioambiental vigente.
Autoclavar antes de desechar a la basura.
Si desea seguir el Reglamento UE 2-2019 que entrará en vigor en 2021
mediante el cual los lobbies del laboratorio han conseguido barrer la innovación que aporta el milagro mediterráneo (la PIME),
al exigirnos a los inventores de productos/métodos para industria alimentaria, el inviable pago de cientos de miles de € a AOAC, AFNOR o similar por cada referencia innovadora;
nos puede pedir nuestro Rapid Bilis Esculina Azida Agar ISO 7899 (Ref: DMT160 en deshidratado, TPL002 en tubo, ECOPQ01J en Ecoplaquitas MF…),
o bien el lento Slanetz Bartley Agar ISO 7899 (Ref: DMT117 en deshidratado, ECOPQ13C en Ecoplaquita MF…)
ya que de este modo no es un método alternativo y por tanto ningún inspector ni auditor puede impedirle emplearlo.
Aunque perderá el valor añadido del kit: su extraordinario poder de detección rápida y sin falsos negativos, el ahorro de filtración de membrana….
La mejor solución sería realizar una proporción residual pero razonable de muestras con el medio ISO en formato clásico,
para presentar sus informes a inspección de Sanidad, y asi poder seguir usando internamente en paralelo este kit en esas y en las demás muestras,
para la mejora, fiabilidad y rapidez de sus resultados de autocontrol.
A fin de cuentas, este reglamento que corta de cuajo el I+D que no provenga de multinacionales, no es nada nuevo:
los kits de autocontrol nunca han servido para obtener resultados oficiales, pero ayudan a la industria a tomar las mejores decisiones para la rapidez y fiabilidad en la liberación de sus lotes.
Detección enterococos en aguas
Diseñado, Validado y Fabricado en la UE por MICROKIT bajo ISO 9001, ISO 11133 y GMPs, desde 1994, Actualizado en Mayo de 2020
