Recuento fiable de Clostridium perfringens en aguas de consumo humano sin necesidad de filtración ni de atmósfera de anaerobiosis. Tambien disponible kit para Clostridios sulfito-reductores. Recuento fiable Clostridium aguas.
El recuento fiable de Clostridium perfringens es la asignatura pendiente en microbiología de aguas. La legislación ha cambiado del medio mCP Agar (tan querido por unos pocos y tan aborrecido por la mayoría), a TSC Agar, el medio que funciona muy bien en alimentos. Y todos esperaban un cambio para bien con este cambio de medio. Pero los resultados intercomparativos siguen demostrando que el problema no es el medio, es algo más general. Que provoca innumerables resultados falsamente negativos. Y en los positivos, provoca reducciones en los recuentos de 1-3 log desde el valor real.
En MICROKIT sabemos donde está el problema, y por eso hemos buscado la solución adecuada. Porque diseñamos el medio cromogénico para Clostridium perfringens (colonias naranjas) y va genial en alimentos y cosméticos, pero en aguas sigue dando falsos negativos.
El problema es que estamos oxigenando, mediante la técnica de filtración de membrana, el agua que contiene microorganismos anaerobios estrictos. Pruebe a filtrar medio FTM tioglicolato, que tiene un indicador de oxigenación (resazurina, que vira a rosado en presencia de oxígeno). Verá como la membrana de filtración se vuelve rosa al filtrar a través de ella.
Es justo lo contrario, pero análogo, a que nosotros, aerobios estrictos, cayéramos en un armario cerrado al fondo del mar. ¿Cuántos minutos aguantaríamos sin perecer por falta de oxigeno?
Estamos olvidando desde los primeros instantes del análisis, que trabajamos con anaerobios estrictos: seres que mueren en presencia del oxígeno del aire. Y por eso su hábitat natural son los fangos, las aguas profundas y el tracto digestivo de los animales. Y los estamos colocando en la atmósfera adecuada de anaerobiosis, durante la incubación. Demasiado tarde, cuando muchas (o todas) las células se han hecho ya inviables durante el proceso de la filtración.
Por eso vimos que no era un problema de medios, era un problema de métodos. E inventamos el método que acaba con todos los problemas del recuento, hasta ahora incierto, de Clostridium perfringens en aguas.
En primer lugar, hacía falta un método de inclusión en masa para recuento en 100 mL, no en 1 mL como las DryPlates y otras placas deshidratadas pensadas para muestras de alimentos o cosméticos.
En segundo lugar, hacía falta un método que no expusiera a las células de anaerobios al oxígeno del aire, como hace gravemente la filtración de membrana.
Tras emular nuestras DryPlates (que recuentan en masa sin tener que fundir medios), combinadas con 100 mL de la muestra de agua, y la atmósfera de anaerobiosis, surgió la patente Quanti-P/A Clostricult. Útil tanto para C.perfringens con TSC Agar, como para Clostridios sulfito-reductores con SPS Agar.
Ambos medios necesitaban la adición de nuestro famoso hidragar para mezclar el medio con los anaerobios presentes, y solidificar el agua de muestra sin tener que estar fundiendo medios.
Y tambien ambos medios necesitaban el generador de la atmósfera de anaerobiosis, lo cual fué posible agregar directamente al medio.
Sólo nos faltaba encontrar el recipiente adecuado para la mezcla de la muestra de agua con el medio, que fuese 100% hermético. Que permitiera luego amasarlo, para homogeneizar. Y plancharlo, para que la capa de medio fuese fina y permitiese un buen recuento.
Lo encontramos gracias a las bolsas con tapón a rosca donde hemos introducido el TSC Agar en polvo con hidragar y generador de anaerobiosis, conjunto que llamamos Quanti-P/A Clostricult.
Tambien ofrecemos el mismo kit con SPS Agar en polvo con hidragar y generador de anaerobiosis, para recuento fiable de clostridios sulfito-reductores en 50-100 mL de agua.
El tamaño de la bolsa elegida es muy superior al de la placa de filtración para membranas de 47 mm de diámetro, lo cual permite aumentar drásticamente el límite superior de cuantificación. Porque pasamos de los 1.590 mm2 de la membrana a 18.600 mm2 de la bolsa Quanti-P/A.
Lo cual permite leer 11 veces más colonias por muestra de 100 mL en la bolsa, que en la membrana estándar.
Por fin, el tapón a rosca permite recuperar colonias para su confirmación posterior, ya que el medio es más blando que un agar estándar. Y se pueden «pescar» colonias con asa de siembras, desde el tapón abierto.
Recuento fiable Clostridium aguas. Método diseñado por MICROKIT y protegido por patente. https://www.microkit.es/pdf/Quanti-PA-Clostricult.pdf
Cómo usarlas en video:
