E.coli verotoxigénico, medios de cultivo para su detección

Detección de E.coli verotoxigénico O157

E.coli verotoxigénico, medios de cultivo para su detección

La ingestión de alimentos contaminados con E.coli verotoxigénico O157 provoca serios episodios que a menudo acaban en la muerte de las personas afectadas.

Esta cepa letal de E.coli se detecta tras enriquecer el alimento o el agua en el medio:

 

1-E. coli O157 Broth mTSB (BASE)

Enriquecimiento selectivo de E. coli O157:H7 en alimentos (carne de vacuno y
otros animales), aguas y otras muestras. (ISO 16654:2002)

Tras enriquecer en caldo O157 m-TSB (BCD165), no más de 18-24 h a 41,5°C aproximadamente:

https://www.microkit.es/fichas/E-coli-O157-BROTH.pdf

Estriar este caldo enriquecido en agar Sorbitol MacConkey o en Cromokit O157 Agar.

Inocular en superficie del agar elegido la muestra y sus diluciones para obtener muchas colonias bien aisladas:

 

2-Mac CONKEY SORBITOL AGAR

Detección presuntiva de E.coli serovar. O157 (UNE-EN ISO 16654:2002) a partir de alimentos (carne de vacuno,…), aguas y otras muestras, previamente enriquecidas en E. coli O157 Broth.

Incubar a 37 ºC aproximadamente durante no más de18-24 horas.

E. coli enterohemorrágico, serovariedad O157 H7 crece con colonias casi incoloras, rosa pálido-amarillentas, al no fermentar el sorbitol, de 1 mm de diámetro (estría derecha de la foto).

Las otras cepas de E. coli crecen con colonias púrpuras (estría izquierda de la foto).

Resembrar colonias sospechosas, bien aisladas, en Agar Nutritivo para E.coli
O157 (DMT126):

https://www.microkit.es/fichas/NUTRIENT-AGAR-SALMONELLA-E-COLI-O157-YERSINIA-VIBRIO.pdf

Incubar 18 h a 37°C aproximadamente.

Si se prolonga la incubación, la distinción de colonias será más difícil.

Confirmar con los tests adecuados:

Indol en Agua de triptona con triptófano (BCD129), 24 h a 37°C aproximadamente y adición de Kovacs (SBH056).

Según un método bastante difundido, si se añaden 0’1 g/l de MUG (SKL061) en el medio antes
de autoclavar, las colonias de E. coli O157 H7 son las NO fluorescentes bajo luz de 366 nm (VMT050).

https://www.microkit.es/fichas/Mac-CONKEY-SORBITOL-O157-AGAR.pdf

 

Más recientemente, se emplea la estría en el medio cromogénico Cromokit-O157 Agar:

 

3-CROMOKIT O157:H7 AGAR

Detección diferencial de E.coli enterohemorrágico (VTEC) en alimentos y muestras ambientales. Medio cromogénico con base del medio de Rappaport y Henigh

Sembrar en superficie en estría por agotamiento para aislar colonias tras el
enriquecimiento en el medio E.coli O157 Broth BCD165. Incubar 18-24 h a
35-37°C, para mayor selectividad a 44,5ºC.

Se condidera E.coli O157:H7 toda colonia pequeña de color rosa, púrpura o
magenta, ya que este es el color que desarrolla enzimáticamente la mezcla
cromogénica en esta cepa. Las demás E.coli crecen con colonias verdes o
azules, a causa de su actividad X-Glu+, sorbitol + y Lysina-.

https://www.microkit.es/fichas/CROMOKIT-O157-AGAR.pdf

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Cronobacter sakazakii, cómo detectar este Enterobacter

Cronobacter sakazakii, medios de cultivo para su detección

Cronobacter sakazakii, cómo detectar este Enterobacter: medios de cultivo cromogénicos para su detección en comidas para neonatos

Introducción

El patógeno emergente Enterobacter sakazakii (nueva nomenclatura tras encontrarse, por
identificación molecular, 5 especies diferentes dentro del mismo grupo: Cronobacter
sakazakii)…

…es responsable de gravísimas complicaciones en neonatos de menos de 4 semanas
que toman leche contaminada por él, causando hasta un 40-80% de muertes.

Pero también crea enfermedades en personas de todas las edades.

Todo ello exige la ausencia de este patógeno en preparados infantiles que estén destinados a este colectivo, así como en productos lácteos, aunque se trate de un microorganismo ubicuo en el medio ambiente y que por tanto, puede contaminar el biberón en el hospital aunque en la fábrica del alimento se haya constatado su ausencia.

De todas formas es en la industria donde hay mayor riesgo de contaminación,
sobre todo si no hay un riguroso control de la disminución del recuento de enterobacterias
(mejor que coliformes) ambientales.

El comité del Microbiological Risk Assessment (MRA) de la Food and Agriculture Organization (FAO) y la World Health Organization (WHO) proponen clasificar C.sakazakii

…junto a Salmonella, como un riesgo de categoría “A” y recomiendan que los análisis de las plantas alimentarias incluyan su detección.

Lo primero que se necesita hacer, igual que en Salmonella, es enriquecer para poder detectarlo después en cualquiera de los dos agares cromogénicos disponibles:

1-E. sakazakii (C.sakazakii) CSEB Broth 

Caldo selectivo modificado para enriquecimiento selectivo de Enterobacter
sakazakii (Cronobacter sakazakii) en alimentos infantiles y lácteos, según
Norma ISO/TS 22964.

Se trata de un caldo lauryl sulfato modificado con cloruro sódico y
vancomicina que eliminan la flora competitiva (incluido Staphylococcus
aureus y, parcialmente, E.coli).

Incubar 24 h a 44ºC aprox.

Enterobacter sakazakii WDCM00214, Excelente, turbio, crece con colonias verde-azules al
estriar en Cromokit Agar Sakazakii.

Escherichia coli WDCM00013, Excelente, turbio, crece con colonias amarillas (o incoloras
con centro azulado) al estriar en Cromokit Agar Sakazakii

Enterobacter aerogenes WDCM00175, Excelente, turbio, crece con colonias verdes (o
incoloras con centro azulado) al estriar en Cromokit Agar Sakazakii

Klebsiella pneumoniae WDCM00097 Excelente, turbio, crece con colonias amarillas,
grandes al estriar en Cromokit Agar Sakazakii.

Enterococcus faecalis WDCM00087, Inhibido, no turbio

Sembrar los tubos turbios en superficie, en estría, sobre placas de
Sakazakii Cromokit Improved Cristal Violet Agar (MICROKIT DMT315), según ISO/TS 22964:2006.

O bien sobre el Agar selectivo y cromogénico para el aislamiento presuntivo de Enterobacter sakazakii (Cronobacter sakazakii) en alimentos infantiles y lácteos (MICROKIT DMT314), según Normas CSA y DFI.

https://www.microkit.es/fichas/SAKAZAKII-ENRICHMENT-CSEB-BROTH-DMT313.pdf

 

2-E. sakazakii CROMOKIT IMPROVED CRISTAL VIOLET AGAR
Agar selectivo y cromogénico para el aislamiento presuntivo de Enterobacter
sakazakii (Cronobacter sakazakii) en alimentos infantiles y lácteos, según
Norma ISO/TS 22964:2006, optimizada en 7/2013.

El desoxicolato, el cristal violeta y la temperatura de incubación inhiben el crecimiento de otros microorganismos.

Sembrar en superficie, en estría, a partir del caldo enriquecido CSEB Broth
(DMT313) según ISO/TS 22964:2006

Incubar 18-24 h a 37-41°C aproximadamente.

Observar la aparición de colonias verde-azuladas, que son presuntivas para
E.sakazakii y deben confirmarse resembrando en TSA (BCD011), donde este
microorganismo crece con colonias amarillas.

Enterobacter sakazakii WDCM00214, Excelente, colonias verde-azuladas. PR >50%

Escherichia coli WDCM00013, Excelente, colonias incoloras.

Enterobacter aerogenes WDCM00175, Excelente, colonias incoloras con el centro azulado.

Enterococcus faecalis WDCM00087, Inhibido.

Staphylococcus aureus WDCM 00034, Inhibido.

Identificar con test bioquímicos (ej. Enterotubos ref.MICROKIT 49578619).

https://www.microkit.es/fichas/CROMOKIT-SAKAZAKII-IMPROVED-CRISTAL-VIOLET-AGAR-DMT315.pdf

 

3-Agar selectivo y cromogénico para el aislamiento presuntivo de Enterobacter sakazakii (Cronobacter sakazakii) en alimentos infantiles y lácteos, según Normas CSA y DFI.

La enzima Beta-D-glucosidasa de este microorganismo reacciona con el sustrato
cromogénico beta-X-glucopiranósido presente en el medio, provocando la aparición de
colonias verde-azuladas en tan sólo 24 horas.

Otras enterobacterias no expresan bien la Beta-D-glucosidasa en este medio, creciendo con colonias crema o púrpura (por el cristal violeta), traslúcidas.

La adición de más agar-agar del tipo cromogénico a la fórmula inicial termoestabiliza el cromógeno, aunque puede llegar a flocular.

El tiosulfato sódico inactiva desinfectantes residuales, como el cloro del agua.

Sembrar en superficie, en estría, a partir del caldo enriquecido CSEB Broth (DMT313)
según ISO/TS 22964:2006.

Incubar 18-24 h a 37-41°C aproximadamente.

Observar la aparición de colonias azules, que son presuntivas para E.sakazakii y deben
confirmarse resembrando en TSA (BCD011), donde este microorganismo crece con colonias
amarillas.

Enterobacter sakazakii WDCM00214, Excelente, colonias azules.

Escherichia coli MWDCM00013, Excelente, colonias amarillas.

Enterobacter aerogenes WDCM00175, Excelente, colonias verdes.

Klebsiella pneumoniae WDCM00097 Excelente, colonias amarillas, grandes.

Enterococcus faecalis WDCM00087, Inhibido.

https://www.microkit.es/fichas/CROMOKIT-SAKAZAKII-AGAR-DMT314.pdf

Identificar con test bioquímicos (ej. Enterotubos ref. MICROKIT 49578619):

https://www.microkit.es/fichas/Enterotubos.pdf

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Cepas de enterococos fecales, cuantitativas

Cepas de Enterococos fecales, cuantitativas, para control de los medios ISO 7899 de aguas: E.faecalis y E.faecium

Cepas de Enterococos fecales

Los enterococos fecales son un subgrupo que se apartó hace unos años de los estreptococos fecales, aunque ambos son indicadores de lo mismo: Infiltración de aguas fecales. Son cocos Gram positivos, que se agrupan en cadenas en forma de rosarios y cuya principal característica distintiva, es que son catalasa negativos (no burbujean al añadirles reactivo para catalasa), a diferencia de los demás microorganismos aerobios y facultativos más habituales que buscamos en los laboratorios de aguas, alimentos…

Son un excelente indicador de lo mismo que indica E.coli: infiltración de aguas residuales en la red de potables.

A menudo procedentes de granjas animales o de animales salvajes (raro es el pozo o fuente natural que no los contenga), su ventaja sobre E.coli como indicador es que perduran en el agua durante muchos días, incluso semanas, por lo que son capaces de advertirnos de la contaminación provocada hace más tiempo que lo que nos permite saber E.coli (que normalmente dura 1 día o poco más en el agua).

Para saber más, incluido el método rápido validado por MICROKIT para conocer la presencia/ausencia y recuento de enterococos fecales en sólo 18 horas, lea nuestra monografía:

https://www.medioscultivo.com/enterococos-fecales-mejoras-en-su-deteccion/

 

Cepas disponibles en stock para entrega inmediata

MICROKIT pone a su disposición 2 cepas cuantitativas de Enterococos fecales en formato lentícula estabilizada, con el doble de vida útil que la mayoría de cepas cuantitativas (en nuestro caso, 2 años de caducidad desde fabricación):

WDCM 00087 (E.faecalis),

WDCM 00178 (E.faecium)

Todas ellas con excelente capacidad de conservación, dado que las fabricamos con un sistema que no las maltrata, como lo hace la liofilización.

 

Medios de cultivo para detectar/enumerar Enterococos fecales

Los medios más usados para su aislamiento en placa, por su mención en las Normas ISO, son el SB (Slanetz-Bartley) y el BEA (Bilis Esculina Azida):

https://www.microkit.es/fichas/SLANETZ-BARTLEY-M-ENTEROCOCCUS-TTC-AGAR.pdf

 

 

 

 

 

 

 

https://www.microkit.es/fichas/BILE-ESCULIN-AZIDE-AGAR-BEA-RAPID.pdf

 

Tambien merece mención el KAA en alimentos:

https://www.microkit.es/fichas/KAA-AGAR.pdf

así como los cromogénicos validados por la EPA, con colonias azules (que en nuestra experiencia no son tan selectivos como el Rapid BEA de MICROKIT):

https://www.microkit.es/fichas/CROMOKIT-ENTEROCOCCUS-EPA-AGAR.pdf

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Su confirmación directa en los agares selectivos es muy sencilla:

 

 

 

 

 

 

 

 

Catalasa positivo de la mayoría de microorganismos aerobios y facultativos. En cambio los enterococos fecales no provocan esta efervescencia cuando se añade sobre sus colonias el reactivo para la catalasa.

 

Para identificar la especie, dispone de las galerías enzimáticas rápidas (le dicen la especie en sólo 4 horas) RAPID-STR:

https://www.microkit.es/fichas/Galerias-RAPID.pdf

Así, además, podrá distinguir los enterococos fecales de los estreptococos fecales y de otras cepas

 

Contacto

Todas estas cepas mencionadas (y otras muchas), así como todos los medios de cultivo, reactivos y galerías mencionados, los tenemos en nuestras instalaciones en stock para entrega inmediata. Solicite la lista actualizada de stock de cepas cuantitativas para consultar las concentraciones y caducidades, antes de realizar sus pedidos, en microkit@microkit.es.

Consulte el folleto:

https://www.microkit.es/pdf/CEPAS-CUANTITATIVAS-2022.pdf

y el video:

https://youtu.be/4WJ8FQl6GIE

Solicite asesoría técnica sobre qué cepas de Enterococos fecales funcionarán mejor en sus muestras y cómo debe y no debe buscarlas, (según los resultados de 2 décadas de servicios intercomparativos) y en sus validaciones en: consultastecnicas@microkit.es

Haga sus pedidos de cepas en: pedidos@microkit.es

Cepas cuantitativas de MICROKIT, la únicas lentículas cuantitativas fabricadas en España, desde hace más de 15 años, bajo Norma ISO 9001 y siguiendo las directrices sobre la competencia de los fabricantes de material de referencia (ISO 17034).

 

Mejora tus resultados analíticos gracias a nuestra innovación

Aquí tienes los datos que, tras más de 200 rondas intercomparativas, demuestran los mejores resultados analíticos de quienes aplican nuestra metodología 

Mejora tus resultados analíticos gracias a nuestra innovación

 

¿Sabías que 3 de cada 10 análisis microbiológicos son falsos positivos, falsos negativos o recuentos inexactos, por seguir protocolos oficiales obsoletos, o con puntos críticos que nadie ha salvado por tí?

Donde se ve más claro es en los resultados de los servicios intercomparativos. Eso sí, saliendo del bosque y a vista de águila.

¿Quieres salir de ese matrix, que da por normal la incertidumbre en tus resultados?

¿Necesitas aumentar la fiabilidad de tus resultados?

¿Quieres estar en ese nivel élite del 7% de laboratorios que alcanzan la excelencia en sus resultados?

Gracias a nuestra situación privilegiada y única como diseñadores y fabricantes de medios y kits, por un lado;

y por otro lado como coordinadores de los ensayos intercomparativos más veteranos (26 años, con 100 rondas en alimentos; 69 rondas de aguas; 51 rondas de cosméticos), donde vemos a vista de águila los fallos de cada método/medio/kit, evitando que el árbol nos impida ver el bosque;

y por último, como analistas en nuestro propio laboratorio de análisis y nuestra visión más global en los análisis contradictorios.

Gracias a todo ello, nosotros ya hace tiempo que encontramos las diversas soluciones a los puntos críticos que llevan a cometer esos errores comunes.

En MICROKIT entendemos tus problemas, porque lo que te sucede, ya lo hemos vivido y solucionado. Te aconsejamos cómo resolver tus dudas con la mayor fiabilidad, dándote una amplia gama de soluciones exclusivas de excelente calidad, comodidad y rapidez. Nuestra consultoría es personalizada: nos ponemos a tu nivel técnico para que nos entiendas al 100%, es más una tutoría o mentoría.

Veamos exactamente cuáles son esos errores detectados en intercomparación, dentro del control microbiológíco de alimentos, aguas y cosméticos; y cuál es la evolución de los laboratorios que aplican las soluciones MICROKIT:

 

1-CONTROL MICROBIOLÓGICO DE ALIMENTOS: Enseñanzas de 100 rondas

 Problema 1:

El fallo más monumental que hemos encontrado en Seilalimentos es que no se tiene en cuenta en microbiología de alimentos (y sí que se tiene en cuenta en microbiología de aguas y de cosméticos) el efecto matriz, lo que provoca falsos negativos en numerosos tipos de alimentos, donde sus conservantes, especias y microbiota acompañante, inhiben en numerosos laboratorios la manifestación de algunos de los microorganismos que buscamos:

El porcentaje de laboratorios que obtiene excelencia de resultados (ni un solo falso negativo) y usa nuestra solución BPNW (Buffered Peptone Neutralizing Water, APTN: Agua de Peptona Tamponada y Neutralizante, patente MICROKIT) es del 81,34%, mientras que el porcentaje de laboratorios que obtiene excelencia de resultados (ni un solo falso negativo) y usa Agua de Peptona o Agua de Peptona Tamponada, sin neutralizantes, es del 52,21%.

No es que no haya laboratorios que alcanzan la excelencia de resultados sin usar BPNW, lo que detectamos es que muchos más de los que la usan, la consiguen.

Una diferencia del 29,13% de más laboratorios que obtienen la excelencia cuando se usa BPNW en vez de las aguas de peptona tradicionales. Casi 1/3 más de laboratorios con excelencia, a favor del BPNW.

Por otra parte, entre todos los participantes en las mismas rondas, que usan BPNW, el número medio de falsos negativos por usuario es de 0,62, mientras que entre todos los usuarios en las mismas rondas de los caldos peptonados sin neutralizantes, el número medio de falsos negativos por usuario sube a 1,39.

El número de falsos negativos entre los usuarios de caldos peptonados no neutralizantes, es más del doble que entre los usuarios de BPNW.

 Podemos concluir que el uso de BPNW reduce a menos del 50% el número de falsos negativos, algo que ninguna otra variable había conseguido jamás a semejante nivel.

Problema 2:

El microorganismo que más % de falsos resultados genera en Seilalimentos es Staphylococcus aureus. En algunas rondas (algunos tipos de alimentos) no sucede, pero en la mayoría de casos, muchos laboratorios no la encuentran cuando está presente (falsos negativos) y en otras rondas muchos laboratorios la encuentran cuando no está presente (falsos positivos). El empleo de medios de cultivo clásicos (Baird Parker, rpf, y no hablemos del Mannitol Salt Agar) e incluso de medios cromogénicos con un solo cromógeno y de métodos rápidos indirectos, es el candidato número uno a estos errores analíticos.

La solución que MICROKIT propone es el uso del Baird Parker Mannitol Yema Agar (BPMY). La dición de mannitol (sin sal) al Baird Parker, lo cambia todo, eliminando esos graves proporciones de falsos negativos). Es una solución que solo lleva desde 12-2022 en el mercado, pero ya despunta en resultados. Ver la entrada:

https://www.medioscultivo.com/mejor-medio-para-staphylococcus-aureus/

 

Otros problemas generales:

Otros microorganismos que suelen dar la mayor % de problemas en Seilalimentos, dependiendo del tipo de alimento y de la microbiota acompañante concreta, en los últimos 5 años de intercomparación son:

Parámetro Resultados erróneos
Clostridium perfringens hasta el 67%
E.coli hasta el 67%
Bacillus cereus hasta el 50%
Listeria monocytogenes hasta el 33%
Salmonella spp hasta el 33%
Levaduras y Mohos hasta un 15%

Hace unos años, los resultados detectados en Seilalimentos eran también dramáticos, lo que demuestra que la mejora continua es más que una filosofía que debe aparecer escrita en nuestra documentación técnica, y hemos de verdad de buscar acercarnos cada vez más a la eficiencia >95%:

Parámetro Eficiencia
Staphylococcus aureus 65 %
Listeria monocytogenes 66 %
Levaduras y Mohos 70%
Clostridium perfringens y sus esporas 72 %
Bacillus cereus 75%
E.coli 77%
Salmonella spp, y Shigella spp 77 %

Para no extender demasiado este documento, consulte cuáles son las soluciones MICROKIT en todos ellos y cómo aumentan tambien la eficacia de los resultados. Nuestra consultoría en consultastecnicas@microkit.es es gratuita. Queremos compartir lo que hemos aprendido en estas décadas de la historia con quien honre estos conocimientos, aplicándolos:

 

2-CONTROL MICROBIOLÓGICO DE AGUAS: Enseñanzas de 69 rondas

En este caso a nadie se le ocurre analizar aguas cloradas sin antes inactivar el cloro, por lo que no podemos hablar del efecto matriz. Sin embargo la proporción de falsos negativos en algunos parámetros es tan dramática como vimos que ocurría en alimentos, en este caso a causa de una técnica destructiva de células como es la filtración de membrana:

Parámetro Resultados erróneos

Método oficial

Resultados erróneos soluciones MICROKIT
Clostridium perfringens 49% 3%
E.coli y demás Coliformes 21% 2%
Enterococos fecales 6% 0%
Pseudomonas aeruginosa 33% 0%

Hace unos años, los resultados detectados en Seilagua eran también dramáticos, por lo que todos debemos acercarnos cada vez más a la eficiencia >95%:

Parámetro Eficiencia
Clostridium perfringens y sus esporas 29%
Staphylococcus aureus 62%
Vibrio cholerae 60%
Pseudomonas aeruginosa 78%
E. coli 79%
Coliformes 80%

Para no extender demasiado este documento, consulte cuáles son las soluciones MICROKIT en todos ellos y cómo aumentan tambien la eficacia de los resultados. Nuestra consultoría en consultastecnicas@microkit.es es gratuita. Queremos compartir lo que hemos aprendido en estas décadas de la historia con quien honre estos conocimientos, aplicándolos:

 

3-CONTROL MICROBIOLÓGICO DE COSMÉTICOS: Enseñanzas de 51 rondas propias y 7 ajenas

En este caso, a pocos se les ocurre analizar cosméticos (repletos de conservantes) sin antes inactivar éstos adecuadamente, por lo que no podemos hablar del efecto matriz. Sin embargo la proporción de falsos negativos en algunos parámetros es tan dramática como vimos que ocurría en alimentos y en aguas:

Parámetro Agar clásico Resultados falsos Solución MICROKIT Resultados falsos
Staphylococcus aureus Baird Parker 55% Cromokit X-Staph Agar 5%
Peudomonas aeruginosa Agar

Cetrimida de marcas clínicas

90% Cromokit Cetrimida Agar 5%
E.coli MacConkey Agar 60% MugPlus Agar 5%
Candida albicans Sabouraud 25% Biggy Candida Agar 5%

En estos años de comparación profesional, la calificación del rendimiento de los participantes sube de una media de 6/10 en noveles a una media de 9/10 en veteranos ¡un 30%!

Gran parte del mérito de esta hazaña lo merece el caldo inactivador validado LPTN Broth de MICROKIT, frente a caldos obsoletos como el Letheen Modif o el Eugon Modif

Para no extender demasiado este documento, consulte cuáles son las soluciones MICROKIT en todos ellos y cómo aumentan tambien la eficacia de los resultados. Nuestra consultoría en consultastecnicas@microkit.es es gratuita. Queremos compartir lo que hemos aprendido en estas décadas de la historia con quien honre estos conocimientos, aplicándolos:

¡La innovación te lleva a un nivel superior!

https://www.microkit.es/publicaciones.htm

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XLD AGAR ISO 6579 PARA AISLAR SALMONELLA

MEDIO DE CULTIVO ISO PARA AISLAMIENTO DIFERENCIAL DE SALMONELLA EN ALIMENTOS, AGUAS Y MEDICAMENTOS

XLD AGAR ISO 6579 PARA AISLAR SALMONELLA

XLD AGAR (XYLOSE LYSINE DESOXYCOLATE)

PHARMACOPEA MEDIO  K

Detección de enterobacterias patógenas

(USP, UNE-EN ISO 6579:2003, ISO 6340)

 

COMPOSICIÓN

Extracto de levadura   3,0 g

Lactosa                       7,5 g

Sacarosa                     7,5 g

Xilosa                         3,5 g

L‑lisina                       5,0 g

Cloruro sódico            5,0 g

Desoxicolato sódico     2,5 g

Tiosulfato sódico        6,8 g

Citrato Fe-amoniacal  0,8 g

Rojo fenol                   80,0 mg

Agar‑agar                   12,5 g

(Fórmula por litro)

pH final: 7,4 ± 0,2

 

PREPARACIÓN

Disolver 55,1 g de medio en 1 litro de agua destilada. Calentar con agitación hasta llegar a 98 ºC. Cesar de calentar cuando el medio esté completamente disuelto, o bien  autoclavar a 116 ºC durante sólo 1 minuto, para evitar la formación de cristales precipitados en la superficie. NO SOBRECALENTAR NI RECALENTAR, aunque en este medio MICROKIT es más difícil que aparezcan precipitados o que el agar se ablande y el asa se hunda.

PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO

MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO EN

LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO

DESHIDRATADO CODIGO: DMT142

 

CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO

Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar laboratorio, tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,…)

DESHIDRATADO: Polvo fino, Calabaza     PREPARADO: Estéril, Calabaza

EVALUACIÓN DEL RENDIMIENTO ISO/TS 11133-2  (Aplicando el método ISO 6579, ISO 12824, o el indicado en el Manual MICROKIT actualizado), 24-48 h a 37 ºC:

Salmonella abony WDCM00029, Excelente, tras inocular <100 ufc, crecen >50%.  Colonias transparentes con centro negro. PR > 0,5, en concreto >50-96% de colonias respecto al número de ufc certificadas e inoculadas en TSA; esta variabilidad de la productividad depende de la composición y carga de la flora acompañante inoculada. Si procede de enriquecimiento, buen crecimiento en estría de colonias transparentes con centro negro, medio amoratado.

Shigella flexneri WDCM00126, Colonias incoloras-rosadas, buen crecimiento.

  1. coli WDCM00013, Inhibición parcial (colonias amarillas) o total.

Enterococcus faecalis WDCM00009, Inhibición completa: Ni una sola colonia.

 

PRESENTACIÓN:  MEDIO DESHIDRATADO, TUBOS.

NOTA

Se utiliza para aislar enterobacterias patógenas especialmente Salmonella y Shigella. El desoxicolato sódico reduce el crecimiento de coliformes. La degradación de azúcares (Xylosa, lactosa y sacarosa) en ácidos se detecta por el viraje a amarillo del rojo fenol. La formación de sulfuro de hidrógeno se detecta por la aparición de óxido de hierro negro en el centro de las colonias. Las bacterias que descarboxilan la lysina en cadaverina se reconocen por la formación de un color púrpura en la periferia de las colonias, resultado de la alcalinización.

 

MEJORAS DE MICROKIT

Hemos observado que en la mayoría de marcas aparecen precipitados/cristalizaciones en la placa varios días tras su preparación. Y en otras muchas marcas el agar es friable (el asa se hunde al sembrar en estría).

Todo esto no sucede en el XLD de MICROKIT:

https://www.microkit.es/fichas/XLD-AGAR.pdf

Si como segundo medio de aislamiento que la ISO 6579 te exige emplear, eliges el Cromosalm (en la ISO lo llaman ABC Agar),

te garantizamos la máxima fiabilidad en tus resultados,

ya que este medio reduce al máximo los falsos positivos típicos de otros medios cromogénicos, al tener 2 cromógenos: uno específico para Salmonella y otros para las demás Enterobacterias que dan falsos positivos en los medios Magenta-Gal:

https://www.microkit.es/fichas/ABC-CROMOSALM-MICROKIT-AGAR.pdf

SIEMBRA

En superficie, por estría, a partir del enriquecimiento. Paralelamente sembrar en placas de otros medios de cultivo selectivos. Incubar 48 horas a 37 ºC aproximadamente.

 

INTERPRETACIÓN

Colonias amarillas, con o sin centro negro: Escherichia, Citrobacter, Enterobacter, Proteus, Serratia, Klebsiella. Las colonias rojas, sin centro negro, son de Shigella, Providencia, Salmonella, Proteus, Pseudomonas. Colonias rojas con centro negro: Salmonella, Arizona, Edwardsiella. Las colonias incoloras con o sin centro negro son de Salmonella,  Pseudomonas.

 

El usuario final es el único responsable de eliminar los microorganismos de acuerdo con la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.

 

Fabricado en la UE por MICROKIT desde 1989, bajo ISO 9001, ISO 11133 y GMPs, revisado en Febrero-2021

Solicite los precios actualizados en microkit@microkit.es

Si tiene dudas técnicas contacte con consultastecnicas@microkit.es

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CROMOKIT PSEUDOMONAS: CETRIMIDA Y CN AGAR CROMOGÉNICOS

CROMOKIT PSEUDOMONAS CETRIMIDA Y CN AGAR CROMOGÉNICOS

CROMOKIT PSEUDOMONAS: DOS MEDIOS RÁPIDOS PARA PSEUDOMONAS AERUGINOSA CON LAS VENTAJAS DEL CETRIMIDA Y CN CLÁSICOS, EN SÓLO 18 HORAS

CROMOKIT PSEUDOMONAS CETRIMIDA y CN AGAR CROMOGÉNICOS son dos medios de cultivo rápidos para la detección y recuento de Pseudomonas aeruginosa en cosméticos y aguas  respectivamente,  con las ventajas de los dos medios clásicos, sumadas a la rapidez en el descarte de muestras negativas en sólo 18h en vez de las 48 h de los mismos medios clásicos.

Los clásicos en 48h:

 

 

 

 

 

 

Los rápidos en 18h:

 

Tiempos clásicos, tiempos modernos

Tanto en cosméticos como en aguas envasadas y de baño, la búsqueda de Pseudomonas aeruginosa suele tardar:

-4 días en el primer caso (2 son enriqueciendo en caldo neutralizante y 2 de estría en placa del caldo enriquecido) y

-2 días en aguas por filtración de membrana.

Gracias a la simple adición de un cromógeno en ambos medios, las colonias de Pseudomonas aeruginosa crecen rojas en sólo 18 h, contrastando de forma excelente con la membrana, mientras en los medios clásicos todavía no se alcanzan a  ver.

La ventaja es que en las primeras 18 h desde la siembra en placa, ya sabemos qué muestras no contienen este patógeno: no hay colonias rojas.

 

¿Y en caso de presuntos positivos?

Si aparecen colonias rojas, podrían ser falsos positivos, y sólo en este caso hay que esperar otras 18 h para poder observar si alrededor de las colonias hay un halo fluorescente verde, amarillo o azul, propios de Pseudomonas aeruginosa.

Hacer la prueba de la oxidasa no es redundante, porque si bien el Cetrimida y el CN son dos medios bastante selectivos, hemos visto a veces crecimiento de coliformes e incluso de Gram positivos como Bacillus spp:

 

 

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Si aparecen en las primeras 18h colonias rojas, oxidasa positivas, la simple prueba de Acetamida con reactivo Nessler nos sacará definitivamente de dudas:

Si precipita a marrón-naranja nada más añadir el reactivo al tubo de Acetamida (previamente incubado con la colonia sospechosa), se trata sin duda de Pseudomonas aeruginosa.

 

Además, mientras incubamos el tubo de Acetamida, seguiremos incubando la placa de Cromokit Rapid Cetrimida o de Cromokit Rapid CN con colonias rojas…

,,,y al mismo tiempo de ver la prueba de la Acetamida, podremos observar si aparece halo fluorescente alrededor de las colonias rojas, señal de que se trata de Pseudomonas aeruginosa.

Izda: Agar Cetrimida clásico

Dcha: Agar Rapid Cetrimida cromogénico

 

¿En caso de presuntos positivos no habremos ganado tiempo?

En estos 4 medios (tanto los 2 clásicos como los 2 cromogénicos) pueden haber falsos positivos de Ps.fluorescens y de Ps.putida, que también generan colonias características, si bien su fluorescencia es bastante más tenue que en el caso de Ps.aeruginosa.

Y tambien falsos positivos de otros Gram negativos no fermentadores.

Para acelerar también en el caso de que aparezcan presuntos positivos, contamos con las galerías enzimáticas Rapid NF, que en sólo 4 horas nos van a decir de qué especie de No fermentador se trata, sea o no sea una Pseudomonas.

De modo que en el peor de los casos, vamos a saber si tenemos o no Pseudomonas aeruginosa en nuestras muestras de cosméticos o de aguas en sólo 18+4 horas tras la siembra en placa, es decir, en menos de 24 horas.

 

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Estas son las fichas técnicas de los avances comentados:

Para cosméticos:

https://www.microkit.es/fichas/CROMOKIT-RAPID-PSEUDOMONAS-AGAR.pdf

Para aguas:

https://www.microkit.es/fichas/CROMOKIT-RAPID-CN-PSEUDOMONAS-AGAR.pdf

Para confirmar presuntos positivos de 18h:

https://www.microkit.es/fichas/CITOCROMO-OXIDASA-M-IDENT-ISO-16266–ISO-16649.pdf

o bien:

https://www.microkit.es/fichas/Citocromo-oxidasa–reactivo-en-goteros-para-banar-placas.pdf

Y además, para potenciar la visión de la fluorescencia:

https://www.microkit.es/fichas/LINTERNA-ULTRAVIOLETA-DE-366%20nm.pdf

Y después:

https://www.microkit.es/fichas/ACETAMIDE-BROTH.pdf

O más rápido, desde las colonias rojas de 18 horas, usar directamente Rapid-NF 4 horas:

https://www.microkit.es/fichas/Galerias-RAPID.pdf

total: 18 horas si no aparecen colonias rojas y 22 horas si aparecen colonias rojas

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Prepárese para más de una sorpresa informativa cuando vea nuestro video sobre los medios Cromogénicos: https://www.youtube.com/watch?v=-JVPVWxY8ZE&t=271s

Vibrio vulnificus: Detección e identificación más certeras

Vibrio vulnificus: Métodos para detectarlos con mayor fiabilidad

Vibrio vulnificus: Detección e identificación más certeras mediante mejores medios de enriquecimiento, aislamiento e identificación

Ver tambien la entrada más completa: https://www.medioscultivo.com/wp-admin/post.php?post=7369&action=edit&classic-editor

INTRODUCCIÓN (para poner los pelos de punta)

Vibrio vulnificus  es un grave patógeno propio del mar y de las aguas salobres que se acumulan tras las playas con aportación de agua dulce y en las desembocaduras de los ríos.

Infecta por ingestión de productos del mar contaminados por él. Nada menos que el 50% de estas infecciones, en el caso de la mala costumbre de ingerir bivalvos crudos recolectados en la playa (aunque les echemos limón), acaban en la muerte del afectado.

Y también es un grave patógeno por infección de heridas al bañarse en agua salobres estancadas.

Se encuentra en playas, rocas y maderas en contacto con agua semisalina semi estancada, y resulta patógeno al introducirse en una herida. El agua de mar contien 37-42 g/L y el óptimo de esta especie son 20-25 g/L.

Muchos de estos casos terminan con septicemias y muertes; basta una apertura en la piel para que causen cuadros de gravedad en uno de cada cuatro infectados.

Nada menos que 1 de cada 5 personas que sufren estas infecciones a través de heridas acaban muriendo por ello.

 

Detección tras enriquecimiento

Como buen Vibrio, es Oxidasa + y Lactosa +. Pero además, esta especie es halófila (crece hasta con 60 g/l de ClNa o aún mejor: sales marinas DMT149, y no crece sin al menos 20-37 g/L).

Por ello los medios de enriquecimiento más efectivos (a menudo el paso previo necesario para detectarlo cuando está a bajas concentraciones), son hipersalinos:

El clásico:

https://www.microkit.es/fichas/ALKALINE-SALINE-VIBRIO-ENRICHMENT-BROTH.pdf

No confundir con este otro, más indicado para V.cholerae:

https://www.microkit.es/fichas/ALKALINE-VIBRIO-ENRICHMENT-BROTH.pdf

La aportación de MICROKIT que mejora al Alkaline-Saline:

https://www.microkit.es/fichas/VIBRIO-HIPERSALINE-MICROKIT-BROTH.pdf

Un truco importante en Vibrio es preenriquecer-revitalizar en TSB para eliminar el stress.

Este preenriquecimiento-revitalización de unos minutos en TSB permite la detección un 50% más veces que si no se hace.

https://www.microkit.es/fichas/TSB-TRYPTIC-SOY-BROTH-polvo.pdf

 

Tras enriquecer, hay que aislar estriando en placa

También los medios clásicos de aislamiento mejoran su selectividad para este vibrio añadiéndoles 20-50 g/L de ClNa…

…o mejor aun, de sales marinas (agua de mar desecada) DMT149, ya que aumentan no sólo la presión osmótica necesaria como hace el ClNa, sino que además aportan todos los oligoelementos necesarios:

https://www.microkit.es/fichas/AGUA-DE-MAR.pdf

En el clásico TCBS V.vulnificus se distingue porque no fermenta la sacarosa, por lo que crece con colonias verde-azuladas, no amarillas:

Vibrio cholerae (colonias amarillas)
Vibrio vulnificus y V.parahaemolyticus (colonias azul-verdosas)

 

 

 

 

 

 

 

 

 

https://www.microkit.es/fichas/TCBS-VIBRIO-AGAR.pdf

Otro medio de aislamiento en placa, muy recomendable para distinguirlo de V.parahaemolyticus y de V.alginolyticus es el TSAT, basado en TTC:

https://www.microkit.es/fichas/VIBRIO-TSAT-SALINE-AGAR.pdf

ya que en el mismo, V.vulnificus crece con colonias crema o incoloras, mientras V.parahaemolyticus y Vibrio alginolyticus crecen con colonias rojas o blancas.

 

 

 

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Otro medio que aporta MICROKIT es la versión agarizada del caldo antes indicado para halófilos:

https://www.microkit.es/fichas/VIBRIO-HIPERSALINE-MICROKIT-AGAR.pdf

Y el medio cromogénico (al que puede ser conveniente añadir 25 g/L de ClNa o de sales marinas (agua de mar desecada) DMT149:

https://www.microkit.es/fichas/CROMOKIT-VIBRIO-AGAR.pdf

 

 

Confirmación de colonias sospechosas

Como siempre, los medios de aislamiento nos acercan pero no son 100% específicos, de modo que hay que confirmar las colonias sospechosas.

Aparte de la oxidasa:

https://www.microkit.es/fichas/CITOCROMO-OXIDASA-M-IDENT-ISO-16266–ISO-16649.pdf

 

o bien:

https://www.microkit.es/fichas/Citocromo-oxidasa–reactivo-en-goteros-para-banar-placas.pdf

 

 

También ofrecemos las galerías de identificación enzimática a nivel de especie en sólo 4 horas Rapid NF:

https://www.microkit.es/fichas/Galerias-RAPID.pdf

 

 

 

 

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También tenemos una completa gama de medios y kits de confirmación para V.cholerae, V.parahaemolyticus, V.alginolyticus…

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Bendito medio de cultivo

Bendito medio de cultivo: cómo se inventó el CUP12A, el medio de cultivo que acabó con el problemón de la microbiología cosmética

Bendito medio de cultivo

Relato sobre cómo se inventó el CUP12A:

Las cosas en su sitio

Lo primero que debo confesar es que este medio no lo inventé yo: lo inventó Dios.

Sí, y me lo transmitió mientras meditaba en una catedral.

Si no crees en Dios, ya va siendo hora de que conectes con él. Y la mejor forma, si no eres religioso, es un tipo de meditación llamada Hemisync, que sincroniza los dos hemisferios cerebrales (lógico versus intuitivo) para ponerlos al mismo nivel.

Lo mismo que sucede cada noche cuando te duermes, «consultas con la almohada» tus problemas y te levantas al día siguiente con la solución. Gracias a unos segundos en estado Theta de consciencia, en el que sumas la lógica del hemisferio izquierdo con la intuición del hemisferio derecho.

Pero volvamos al CUP12A. Y ahora entenderás por que lo llamo medio mágico.

En las meditaciones  normalmente viajo a la vida espiritual, pero unas pocas veces prolongo deliberadamente (pero sin dormirme) el estado Theta del que todos gozamos al irnos a dormir.

Esa conexión con la divinidad es lo que nos resuelve los problemas del día, en un instante y sin darnos cuenta; y despertamos con la solución del problema que tanto nos preocupaba el día anterior.

El problemón

En esos días había encontrado uno de los problemas profesionales más grandes que he enfrentado:

La controversia entre la legislación en microbiología cosmética y la moda de la normalización.

Moda que está llevando a tantas industrias y laboratorios cosméticos por un camino completamente equivocado.

Ya lo he explicado más a fondo en otros blogs, pero en resumen:

la legislación exige que el cosmético sea seguro en cada lote (es decir, sin patógenos)

pero la normalización se centra en sólo 4 patógenos e indicadores.

Aunque haya una Norma ISO que habla de los demás de refilón «microorganismos no especificados»,

el problema es que ni los menciona por su nombre y apellidos…

y encima no usa un medio de cultivo selectivo para ellos (tampoco es que existiera ninguno cuando se redactó).

Para quien siga convencido de que no existe tal conflicto, tan solo que se pregunte por qué entonces 3 fabricas al año sufren retiradas de mercado por problemas microbiológicos.

No son cosméticos de garaje, son grandes marcas!

¿Qué dice este tío?

Y claro, al comunicar este conflicto legislación versus normalización, me encontré con un rechazo total del argumento:

¿y ahora éste que dice, que usemos 14 medios en vez de los 4 de siempre para los 14 patógenos que ha recopilado como causantes de retiradas?

Se abrumaron. Y la verdad, tenían razón. No podía vender esa idea.

La solución llegó fluyendo

Por eso, ese día, en esa catedral, pregunté a mi superyo (Dios) qué solución podía tener semejante problema.

Las respuestas en meditación siempre son muy intuitivas, no es que me saliera la fórmula y el nombre del medio que lo resuelve todo. No es que otro componga la música por tí.

Pero sí me llegaron claramente las pistas que me llevaron a «crearlo».

Mis compañeras que preparan mis propuestas de nuevos medios, quizá no saben qué fué lo me inspiró,

pero sí que saben que el CUP12 Agar, a diferencia de otros muchos diseños, salió a la primera, sin tener que probar 1.000 opciones, como sucedía casi siempre que trataba de inventar algo nuevo que resolviera un problema microbiológico.

Porque detecta en una sola placa 12 de los 14 patógenos que han provocado y provocan retiradas de mercado de cosméticos (de ahí su nombre CUP12A).

Y prácticamente sin falsos positivos.

Ahora entenderás por qué insisto tanto en que es un medio bendito.

Y por eso sé que acabará usándolo todo el mundo.

De hecho ya lo usan casi todos nuestros clientes y, por primera vez en 36 años, muchos no-clientes de todo lo demás que ofrecemos en MICROKIT.

También me encantó la respuesta de una cliente fiel de cosmética a una encuesta, en una pregunta que decía «¿si desapareciéramos, qué es lo que más echarías en falta de nosotros?»

Y respondió «era reacia a creer en las virtudes que argumentábais del CUP12A, demasiado bueno para ser cierto, pero aun así lo probé y os tengo que dar la razón:

este medio ha acabado con mi incertidumbre, que siempre me rondaba la cabeza, sobre si este lote o este otro acabaría ocasionándome un disgusto una vez puesto en el mercado,

y gracias a él ya me he salvado de 2 posibles retiradas en menos de un año».

Bendito medio mágico. No puedo decir otra cosa.

Aún hay quien nos ha dicho que ya puestos, que cada cepa debería crecer en colonias de un color diferente «una limosnita, y deprisita»;

otros, que no creen en estos medios modernos, así, sin tener nada más que decir, ni probarlo siquiera…  no hay más ciego que el que no quiere ver.

Los hay que ven una varita mágica y ni se enteran, la confunden con un palo.

Las oportunidades sólo aparecen para quienes saben aprovecharlas.

https://www.microkit.es/fichas/cromokit-cup-12-agar–cosmetic-universal-pathochrom-agar-.pdf

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ANÁLISIS DE COSMÉTICOS

ANÁLISIS DE COSMÉTICOS, RETIRADAS DE MERCADO POR PROBLEMAS MICROBIOLÓGICOS EN GRANDES EMPRESAS Y PYMES: MOTIVOS, SOLUCIONES Y PREVENCIÓN

ANÁLISIS DE COSMÉTICOS, RETIRADAS DE MERCADO

El problema es la confusión

Entre 2 y 3 veces al año se oye en los medios de comunicación que una crema de tal marca, un  champú de cual marca o un colutorio bucal de marca menganito, han sufrido una retirada de mercado por parte de las autoridades sanitarias.

Y eso sólo en nuestro país; en los demás igual: una media de 2-3 retiradas al año por problemas microbiológicos.

Con el consecuente revuelo en la fábrica y desprestigio mediático de la marca.

¿Por qué sigue habiendo retiradas de mercado, y NO son precisamente de cosméticos fabricados en un garaje? ¡Si Sanidad dió el visto bueno en la ultima inspección que hizo a nuestra fábrica!

Es que además de inspecciones, los laboratorios de Sanidad (del estado y de las CCAA) realizan campañas de recolección de cosméticos ya puestos en el mercado, los analizan, y si encuentran algún patógeno en ellos, lo publican, por Ley.

¡Pero si yo sigo a rajatabla las Normas ISO de microbiología cosmética! ¿cómo es esto posible?

Que nadie se lleve las manos a la cabeza. ¿Dónde dice que las Normas ISO de microbiología cosmética sean suficientes, ni siquiera obligatorias? En ningún lugar oficial.

Pero la confusión pro-ISO en microbiología cosmética es espectacular. Decenas de veces he tenido que rebatir esa afirmación en mis clientes. Y mis no-clientes siguen creyendo que estoy loco, ya ni me vale la pena discutir con ellos. Pero la afirmación no es mía:

Que busquen en el DOUE o en el BOE dónde dice eso. En ningún lado. Como sí ocurre en la legislación de aguas de consumo y de alimentos. La cosmética es la afortunada que está liberada de cadenas en microbiología.

Y Sanidad se rige por la legislación, no por Normas técnicas ISO.

¿Y que dice la legislación? Que el cosmético ha de ser seguro y se debe analizar con un método validado. Punto y final.

¿Qué es ser seguro desde el punto de vista microbiológico? ¿Que no haya E.coli, Staphylococcus aureus, Candida albicans ni Pseudomonas aeruginosa y que los recuentos de aerobios y de hongos estén a un nivel aceptable?

¡No señor!

 

Entre otras cosas, que un cosmético sea seguro, significa que no haya ningún patógeno. En ningún lote. En ninguna porción del lote. Aunque el recuento de aerobios y de levaduras y mohos sea inferior a un límite.

Por eso ha habido tantas retiradas por culpa de Burkholderia cepacia: si no la buscas, no la encuentras.

¿Entonces basta con buscar estos 5 patógenos/indicadores, los 4 de antes y Burkholderia, aparte de los dos recuentos?

Tampoco.

Hay unos cuantos más patógenos que han provocado retiradas de mercado de cosméticos por problemas microbiológicos, en total 14 si no hemos contado mal.

¿Y tengo que buscarlos todos?

Por supuesto, si no quieres vivir en la incertidumbre: «¿Encontrará Sanidad algo que no he buscado?»

o mejor dicho «¿Provocará mi lote de hoy de mi cosmético algún problema microbiológico en los usuarios, aunque no caiga en las manos de los laboratorios de Sanidad?»

¿Pero cómo voy a pasar de usar 4 medios para patógenos, a 14 medios?

Nadie ha dicho eso. Hay otras 2 soluciones. Y encima ambas son muy asequibles:

 

Solución 1

Añado el medio CUP12A a mi batería de 4 medios selectivos y en él sé que voy a detectar esos otros patógenos, incluso 2 de los 4 que ya busco (total 12 de los 14). Sólo Candida albicans y Staphylococcus aureus necesitan realmente medios adicionales a CUP12A.

La magia existe, y CUP12A es un medio mágico. ¿Por qué lo sé? Por 3 motivos:

-Porque lo diseñó MICROKIT, que ha coordinado durante 3 décadas ensayos intercomparativos de microbiología (más de 100 rondas con 20-40 participantes cada una, algo sabrá del tema y por eso diseñó el CUP12A) y lleva 35 años diseñando medios de cultivo (con este CUP12A ya van 57 nuevos medios para la ciencia) y kits para microbiología  (ya van más de 100) como nadie más hace en nuestro país.

-Si eso no es suficiente… porque es un medio validado intercolaborativamente y que ya usan los laboratorios más punteros y las fábricas de cosméticos más innovadoras.

-Porque un laboratorio que lo emplea de rutina, KosmLab, ha obtenido la máxima calificación en los ensayos intercomparativos independientes (ielab) de muestras cosméticas ciegas ¡en las 6 rondas consecutivas en las que ha participado! Mientras que, de los demás participantes, sólo unos pocos han obtenido semejante calificación en alguna de las rondas, y no en todas.  Solicite el certificado emitido por el coordinador del servicio, en consultastecnicas@microkit.es. Si esto no demuestra la competencia y eficiencia diferencial de KosmLab ¿qué lo hace?

 

Solución 2

Externalizar sus análisis microbiológicos (o parte de ellos) en un laboratorio como el antedicho, que demuestre su competencia REAL como especialista en microbiología cosmética…

…y por supuesto, que además busque esos 14 patógenos.

¿Quién le recomendamos? Naturalmente quien conocemos más a fondo: el laboratorio de control microbiológico de cosméticos de MICROKIT.

Aunque ya no es el único que usa CUP12A entre los demás medios…

Solicite en kosmlab@microkit.es un informe-tipo, donde verá la abismal diferencia de informe con los de sólo 4-5 patógenos que le están certificando la mayoría de laboratorios.

Y solicite en ese mismo email presupuesto para su número de muestras semanal:  le sorprenderá que este laboratorio sea capaz de hacer todo eso al mismo precio de mercado de quienes sólo buscan 4-5 patógenos.

Pero claro, usamos los mismos medios MICROKIT que diseñamos y fabricamos, ahí ya hay un tremendo ahorro.

Y empleamos técnicas mucho más avanzadas que las Normas ISO de microbiología cosmética. Por todo ello, esto es lo que encontramos en cosméticos, porque los buscamos bien y porque sí que  están viables en ellos:

 

 

 

 

Así es: La innovación te lleva a un nivel superior.

 

Para profundizar en todas estas afirmaciones, solicite el ppt del curso que impartimos hace unos años en Barcelona sobre retiradas de mercado de cosméticos, en consultastecnicas@microkit.es 

Y puede ver un artículo previo en este mismo blog: https://www.medioscultivo.com/retiradas-de-mer…-microbiologicos/

Haga sus pedidos del medio mágico CUP12A en pedidos@microkit.es, lo encontrará en todas las presentaciones imaginables (Deshidratado, placas, plaquis herméticas, DryPlates, tubos, frascos…). Ya es un medio veterano, aunque sea la primera vez que lee sobre él.

https://www.microkit.es/fichas/cromokit-cup-12-agar–cosmetic-universal-pathochrom-agar-.pdf

Solicite informe-tipo y presupuesto de análisis microbiológico con 14 patógenos en microkit@microkit.es 

https://cosmlab.wixsite.com/cosmlab

 

Confirmación de Clostridium perfringens desde colonias en TSC, TSN, SPS…

El problema de la confirmación de Clostridium perfringens

Confirmación de Clostridium perfringens desde colonias en TSC, TSN, SPS… fosfatasa ácida, MUP, lactosa-gelatina, nitratos-movilidad, X-CP

Aunque pocos microorganismos que no sean Clostridium perfringens crecen con colonias negras en TSC Agar cuando se ha incubado a 43-46ºC…*

…es necesario confirmar las colonias para asegurarse que se trata del patógeno e indicador, y no de un falso positivo que nos haga perder tiempo y recursos.

https://www.microkit.es/fichas/TSC-AGAR-MUP.pdf

*la temperatura selectiva depende de si seguimos la Norma ISO de alimentos (ISO 13401) o de aguas (ISO 6461, ISO 14189)

Aunque siempre será mejor informar de un falso positivo, que de un falso negativo, que pueda afectar la salud pública al no haberse detectado.

 

Quanti P/A Clostricult

Lo mismo en el recomendable formato QPA, donde las colonias pueden pescarse con asa desde el tapón para identificar, o incluso pinchando a través de su bolsa. Este novedoso formato de inclusión en masa para el TSC, permite unos resultados mucho más veraces que la Filtración de Membrana sin tener que filtrar-oxigenar-comprometer la muestra, ni tener que emplear costosas atmósferas de anaerobiosis:

https://www.microkit.es/pdf/Quanti-PA-Clostricult-2022.pdf

Linealidad en QPA-CP

Alimentos

En alimentos, Clostridium perfringens se confirma con las pruebas Lactosa, Gelatina, Nitratos y Movilidad, sin mayor problema:

https://www.microkit.es/fichas/LACTOSE-GELATIN-CLOSTRIDIUM-MEDIUM.pdf

Ya que Clostridium perfringens es Lactosa + (vira el medio rojo a naranja), licúa la gelatina que estaba sólida, reduce el nitrato a nitrito (viraje a rosa tras añadir los reactivos de nitrato A y B) y crece sin movilidad desde la línea de picadura (ver el medio Nitratos-Movilidad abajo del todo del artículo).

Lactose-Gelatin Medium sin inocular (rojo y sólido), Clostridium perfringens (naranja y licuado).

 

 

 

 

 

 

 

 

Además la nueva ISO 15213-3:2024 habla de otro medio muy selectivo:

https://www.microkit.es/fichas/C-PERFRINGENS-LACTOSE-AGAR-BASE-LENA.pdf

 

 

Aguas

Pero en aguas, a causa de la ultima versión de la ISO, se han desmarcado de estas pruebas (desconocemos el motivo) y se han empeñado en emplear reactivos cancerígenos (fosfatasa ácida) o que caducan pocos días después de hidratarse (MUP):

https://www.microkit.es/fichas/MUP.pdf

Lo que dificulta enormemente su confirmación.

Máxime habiendo otras pruebas definitivas, como las mencionadas para alimentos.

 

Con los avances de la ciencia, debería haber ya algo que fuese definitivo y no tuviese los problemas que hemos mencionado sobre potencial cancerígeno, cortísima caducidad una vez hidratado…

Y lo hay:

Innovaciones que aún no han contemplado las Normas ISO pero ya pueden aprovecharse

Las galerías enzimáticas RAPID-ANA:

https://www.microkit.es/fichas/Galerias-RAPID.pdf

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Que por un lado, son costosas, pero por otro, nos permiten conocer si la colonia se trata o no de Clostridium perfringens ¡en sólo 4 horas!

O el medio cromogénico Cromokit-CP, donde Clostridium perfringens crece con hermosas colonias de color naranja que no revierten en contacto con el aire (como sucede con las negras en TSC, que se vuelven grises o incluso blancas en cuanto sacamos la placa de la anaerobiosis, creando un serio riesgo de reportar falsos negativos):

https://www.microkit.es/fichas/CROMOKIT-C-perfringens-Agar.pdf

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Debería ser el medio que sustituya al TSC en la próxima versión ISO. Mientras tanto, todos los laboratorios que no estén acreditados por la ISO 17025 ya pueden emplearlo sin problemas.

La innovación te lleva a un nivel superior. Aprovéchala de la mano de MICROKIT.

Haga sus consultas sobre la confirmación de colonias de Clostridium perfringens en: consultastecnicas@microkit.es

Haga sus pedidos de medios y kits para la confirmación de colonias de Clostridium perfringens en: pedidos@microkit.es 

 

Ficha técnica del medio que junto al medio Lactosa-Gelatina, permite la confirmación ISO de colonias de Clostridium perfringens (al menos, en alimentos):

BUFFERED NITRATE-MOTILITY MEDIUM (BASE sin glicerol)

Confirmación de Clostridium perfringens en aguas por  Filtración de Membrana s/Norma ISO/CD 6461-2:2002 y en alimentos según FDA.

COMPOSICIÓN

Beef Extract                              3,0 g

Enzimatic Digest of Casein       5,0 g

Potassium Nitrate (KNO3)        1,0 g

D-Galactose                              5,0 g

Disodium hydrogen phosphate

(Na2 HPO4 )                              2,5 g

Agar-Agar                                5,0 g

(Fórmula por litro)

pH final: 7,3 ± 0,1

PREPARACIÓN

Añadir 21,5 g a 1 litro de agua bidestilada que contenga 5 g de glicerol. Llevar a ebullición lentamente, agitando hasta su disolución completa. Autoclavar a 121 ºC durante 15 minutos. El color final del medio es crema y el aspecto, semisólido.

PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO

MANTENGA EL BOTE CERRADO EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO. AGITE EL BOTE ANTES DE USAR

DESHIDRATADO CODIGO: DMT054

CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO

Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar laboratorio, tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,…)

DESHIDRATADO: Polvo fino, crema

PREPARADO: Estéril, crema, semisólido

CONTROL DE CRECIMIENTO a 37°C aproximadamente, durante 24 horas, en anaerobiosis:

Clostridium perfringens  WDCM00007 (=MKTN 8237), crece sin difusión/movilidad y reduce el nitrato a nitrito.

Bacillus subtilis WDCM00003, crece con movilidad y no reduce el nitrato a nitrito.

PRESENTACION: MEDIO DESHIDRATADO, KIT M-IDENT-Cl.perfringens.

MODO DE EMPLEO E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

Inmediatamente antes de su uso, regenerar el tubo preparado, hirviéndolo 15 minutos para eliminar su oxigenación. Enfriar rápidamente a 70-80°C. Inocular la colonia sospechosa, procedente de TSC o del medio elegido, en picadura. Incubar a 36 ± 2 °C durante 21 ± 3 horas, en anaerobiosis. Observar la movilidad, positiva si hay crecimiento difuso desde la línea de picadura. Añadir unas gotas (0,5 ml) de Reactivos de Nitratos A y B (MICROKIT SMN001). Observar la reducción de Nitrato a Nitrito, que se considera positiva cuando hay viraje a rosa-rojo antes de 15 minutos tras añadir los reactivos de Nitratos A y B. Si no hay viraje, añadir un poco de Zinc en polvo (SRO001), esperar 10 minutos y considerar tambien positiva la prueba si TAMPOCO hay viraje a rosa-rojo.

El usuario es el único responsable de la eliminación de los microorganismos según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.

Medio fabricado en la UE por MICROKIT desde 1989, bajo ISO 9001, ISO 11133 y GMPs, revisado en Marzo-2020

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