Indol Kovac’s, test del Indol mediante reactivo de Kovac’s para distinguir de forma inmediata E.coli de los demás coliformes
Indol Kovac’s: El test del indol es uno de esos pocos clásicos que permiten confirmar de forma inmediata ciertas especies, en concreto diferencia E.coli de la mayoría de los demás coliformes.
Alguno de éstos, también genera color rosado en superficie cuando se emplea este test (ej: algunas cepas de Klebsiella spp)…
…pero a diferencia de E.coli, no son capaces de crecer a 44ºC,
Por tanto, es esencial realizar este test incubando a esa temperatura.
Modo de empleo clásico
En general, el test de Kovac’s se realiza añadiendo unas gotas de este reactivo en Agua de Triptona con triptófano (BCD129) sobre la que antes se ha hecho crecer al microorganismo (a 44ºC si se desea que la prueba sea definitiva).
Si aparece en unos segundos un anillo rosa-fucsia en superficie, el test es positivo: E.coli confirmado.
Tambien se puede disolver una colonia sospechosa en un tubo con 9 ml del caldo Triptona-Triptophan water, añadir el reactivo de Kovacs y esperar unos segundos para ver la reacción.
Pero en este caso, hay que recordar que puede haber falsos positivos de algunas cepas de Klebsiella spp.
Modo de empleo optimizado
El medio CCA de MICROKIT (MugPlus, DMT400) se elabora con una peptona tan rica en triptófano, que se puede realizar la prueba del indol directamente sobre sus colonias:
Añadiéndoles el reactivo de kovacs a las colonias azules o violetas en CCA-MugPlus, el reactivo virará alrededor de la colonia de amarillo a rosa en cuestión de segundos.
Si se busca sólo E.coli, se puede incubar el CCA-MugPlus a 44ºC y añadir el reactivo sobre toda las placa en la que hayan crecido colonias azules o moradas.
Alrededor de las de E.coli, el reactivo formará un halo rosa sobre el fondo amarillo, confirmando que se trata de ella y no de otros coliformes.
Esto es de especial importancia en muestras en las que aparece una microbiota mixta con colonias de varios colores difíciles de distinguir para algunos analistas: los que están en la transición entre el azul de E.coli y el rojo-rosa de los demás coliformes: lila/magenta/fucsia.
De esta forma, el clásico reactivo de Kovac’s vuelve a ser un enorme aliado del analista en la microbiología actual con medios cromogénicos.
https://www.microkit.es/fichas/TRYPTONE-TRYPTOPHAN-WATER-PEPTONE-WATER-polvo.pdf
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