Archivo de la categoría: microbiologia de medicamentos

Optimización en los análisis microbiológicos de
MEDICAMENTOS Nuevos métodos de análisis microbiológicos utilizados exitosamente en los laboratorios líderes

Galerías de identificación

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Galerías de identificación enzimática

Galerías de identificación enzimática: conozca en sólo 4 h la especie a la que pertenece su colonia (Gram negativo, Gram positivo o levadura)

Hoy queremos ofrecerles las clásicas galerías de Identificación de colonias de bacterias No Fermentadoras RAPID-NF para microbiología farmacéutica y cosmética. Como sabe, los NF son los Gram negativos que no fermentan los azúcares (como sí hacen las Enterobacterias), es decir, los microorganismos oxidasa positivos que suelen salir en las placas: Acinetobacter-Aeromonas-Alcaligenes-Brevundimonas- Burkholderia-Moraxella-Ochrobactrum-Plesiomonas- Pseudomonas-Sphingomonas-Stenotrophomonas-Vibrio…

Sus ventajas:

1-tardan sólo 4 h en dar los resultados, no 24-48h como las demás galerías, ya que son enzimáticas en vez de bioquímicas ¡sabrá el mismo día si se trata de un inocuo o por el contrario es un patógeno!

2-se siembran en un solo paso, no necesita pipetear cada pocillo gracias a su diseño “en tejado”

3-se complementan  con otras galerías de las mismas características para Enterobacterias (E.coli, Salmonella, Shigella, Pluralibacter, Klebsiella, Enterobacter, Serratia…), otras para Estafilococos, otras para otros Gram positivos (Estreptococos, Enterococos, Listeria, Acidolácticas…), otras para Anaerobios (Clostridium, acidolácticas anaerobias…) y otras para levaduras (Candida-Kluyveromyces-Pichia-Rhodotorula-Saccharomyces-Yarrowia…).  Ver pdf con todas ellas:

https://www.microkit.es/fichas/Galerias-RAPID.pdf

4-son galerías procedentes de USA (ABL) con más de 40 años de implantación en el mercado Norteamericano, con mucho más éxito allá que las más famosas galerías bioquímicas de Europa, a causa de la rapidez de obtención de resultados y al hecho de emplear la misma base de datos (BACDIVE)

Consejo

Si una vez identificada la colonia, desea  saber rigurosamente si se trata de un patógeno o por el contrario es un inocuo del grupo I de riesgo biológico, puede consultar su TRBA en internet (o bien mirar en su colección favorita, ya que muchas colecciones TIPO lo indican en su oferta de cepas). No se fíe de otras fuentes, ya que la mayoría de microorganismos inocuos pueden provocar enfermedades en inmunodeprimidos y salen en internet con artículos publicados que dan la falsa sensación de que se trata oficialmente de graves patógenos, cuando muchas veces no se consideran como tales (al menos para la población general).

Antes de usar una u otra galería

A veces en los medios selectivos salen sorpresas, no podemos fiarnos de los aspectos coloniales, hemos visto hasta microorganismos Gram positivos como Bacillus cereus creciendo en agar Cetrimida, por ejemplo. Si antes de elegir una galería u otra, desea estar segur@ de que no perderá su tiempo y su dinero, porque la colonia finalmente no era del grupo que sospechaba, consulte en el link de abajo el folleto “Pre-identificación” con pruebas inmediatas de MICROKIT para discernir de qué grupo se trata, que aunque tenga el membrete obsoleto, sigue siendo una de las herramientas más apreciadas por numerosos laboratorios de su sector, que la emplean como poster en sus paredes

https://www.microkit.es/pdf/pre-identificacion.pdf

Esto mismo en video completo antes de elegir la galería adecuada:

https://youtu.be/knxE5wH-kCI

Y cómo se usan las galerías:

https://youtu.be/9j4tbyghvZA?si=LOoLL8udqeTBOkcO

Haga sus consultas de galerías de identificación en: microkit@microkit.es

Haga sus pedidos de galerías de identificación en pedidos@microkit.es

MICROBIOLOGICAL STRAINS

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Optimised Conservation of Microbiological Strains

1. Optimised Preservation of In-House and Analytical Strains

Only a few decades ago, the preservation of microbial strains relied on weekly or monthly subculturing in long-nose slant CTA medium tubes.

In laboratories managing large strain collections for epidemiological or R&D purposes, this process often required the full-time dedication of a research analyst.

Later, pharmacopoeias recommended the use of TSB with glycerol in cryovials, enabling storage for up to one year in many cases—although some microorganisms still proved unstable under these conditions.

The introduction of porous porcelain beads (similar to the coloured beads used in children’s necklaces) revolutionised the process.
With these beads, only a single bead needed to be retrieved for re-seeding, allowing the remaining ones to be refrozen without compromising viability. This innovation led to the concept of “cryoballs.”

However, many microorganisms continued to show poor survival under standard cryogenic conditions—losing viability after repeated freeze–thaw cycles or within a few months of storage.

To address this challenge, MICROKIT, established in 1989, collaborated with leading research institutions to develop several highly effective strain preservation systems:

CRIOTECA®-SKM

A cryovial system containing a Skim Milk–based cryogenic medium that significantly extends the lifespan of most microorganisms stored in strain libraries, outperforming traditional TSB–glycerol formulations.
More information

MPT Tubes

Developed specifically for Vibrio cholerae, which remains difficult to preserve. MPT Agar tubes enable re-seeding just once per year, with room-temperature stability.

CRIOTECA®-CAMPY

Tailored for Campylobacter spp., providing markedly improved preservation results compared with standard cryogenic systems.

CRIOTECA®-YM

Designed for fungi (yeasts and moulds), this formulation ensures long-term viability when frozen.

ANAEROTECA

Created for anaerobic microorganisms, especially Clostridium spp., these tubes maintain excellent viability for years at room temperature thanks to a specially designed anaerobic medium.

Advantages of MICROKIT Preservation Systems

  • Superior cryovial design: truly hermetic seal, wide and secure cap, external threading to minimise contamination risk.
  • Efficient use of freezer space: up to 100 vials stored in the space required for only 40 of other brands — an essential benefit considering the high cost of freezer storage.
  • Premium CRIOBOX packaging: transparent, durable and compact.
  • Proven reliability: CRIOTECA®, ANAEROTECA® and MPT are among MICROKIT’s best-selling and most trusted product lines, used worldwide and frequently recommended by satisfied customers.

2. Use of Quantitative Strains

In addition to our preservation systems, MICROKIT designs and manufactures Quantitative Strains, currently offering the 73 most commonly used strains across the food, cosmetics, pharmaceutical and water industries.
More information

Outstanding Stability and Quality

Our lentil-shaped quantitative strains offer exceptional longevity of two years from manufacture—twice as long as most competing brands.
They are highly stable, requiring no frozen or refrigerated transport, and remain viable for weeks at room temperature without performance loss.
Despite these advantages, they remain competitively priced.

Trusted by numerous ISO 17025-accredited laboratories, each batch of MICROKIT Quantitative Strains includes a comprehensive Quality Control Certificate, detailing:

  • Reference to the universal ISO 11133-2 collection (WDCM)
  • Traceability to the type strain
  • Passage number from the type collection
  • Count and deviation (CV%) within the batch
    • Performed on TSA/SDA and at least one selective medium (the most relevant for each microorganism)
    • Often complemented with a chromogenic selective medium

See our full export catalogue (2024)

Contact and Orders

For documentation or pricing enquiries, please contact us at:
export@microkit.es

To place an order, please send your request to:
pedidos@microkit.es

 

Microbiology: Best Kits and Media

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Microbiology: 10 Problems, 10 MICROKIT Solutions

The Best Kits and Media in Microbiology

Across laboratories worldwide, microbiologists face ten recurring challenges that can affect the accuracy, reliability and efficiency of their analyses.
At MICROKIT, we have developed ingenious, easy-to-implement solutions that optimise analytical performance and ensure consistent, high-quality microbiological results.

1. Conservation of Microbiological Strains

From weekly reseeding in slant tubes to long-term preservation for years:
CRIOTECA® Skim Milk, ANAEROTECA®, and MPT–Vibrio cholerae slanted tubes provide reliable, cost-effective solutions.
More information

2. Air and Surface Disinfection

Disinfect the air and laboratory surfaces effectively — without UV blind spots.
AIRESANO produces a fine disinfectant fog that reaches every corner safely and evenly.
More information

3. Surface Microbiological Control

Alternative systems to Rodac plates and dipslides for every surface type:
Rapidswabs-TC, Rapidswabs-YM, Sulfate API Agar tubes, Listeriswabs-Green, and more.
More information
Listeriswabs-Green 2021

4. Surface Hygiene Validation

Validate cleaning effectiveness quickly and reliably.
KitProPLUS redefines hygiene monitoring — just as Uber transformed transport — providing rapid bioluminescence-based verification.
More information

5. Cosmetics Microbiology

Safety in cosmetics is not about the absence of four pathogens — but of fourteen, as required by EU Regulation No. 1223/2009.
Begin your self-control programme with Cosmetikit-EasyPlus, and advanced labs can add just one extra medium — CUP12A — for full assurance.

CUP-12A Chromogenic Agar
Neutralising Broth (Colourless)
Cosmetikit EasyPlus
Cosmetikit Water
Dry Plates 2021

6. Food Microbiology

Conventional methods for detecting Listeria and Salmonella are slow and costly.
Our Listeriquick-desh and Salmoquick-desh kits provide accurate detection in just 36 hours — no specialised devices required.

We also offer a wide range of classical and chromogenic media for food analysis.

Listeriquick & Salmoquick
Food Microbiology Media Overview
Chromogenic PCA
Rapid Sabouraud RYM Agar
MUGPLUS
CROMOKIT Chromogenic Media
Microkit Media Catalogue
Cromocytogenes
Salmonella-Shigella Broth
CromoSalm
Buffered Peptone Neutralising Water

7. Water Microbiology

Prepared plates often have limited shelf life.
MICROKIT offers hermetically sealed long-life plates for analysing water, beverages, and pathogen confirmation after enrichment.

Water Microbiology Media
Bacteriophages Scholten Agar
Plaquis Hermetic Plates

8. In-Situ Water Testing

How to perform water control on-site without being limited to chlorine kits?
Use our Mini-Drinking Water Kit, Vibrio cholerae P/A vials, and 100 g P/A bottles for convenient, accurate in-situ testing.

Drinking Water Kit
Swimming Pool Kit
P/A Kits in Sampler Bottles
P/A Powder Vials
P/A Kits in 100 g Bottles
Dry Plates 2021

9. Water Analysis – Clostridium Detection

Traditional detection of Clostridium perfringens via membrane filtration leads to up to 50% false negatives and a 1–3 log count reduction due to oxygen exposure.

Our Quanti-PA Clostricult Bags eliminate these issues, ensuring maximum precision, accuracy and linearity — without the need for anaerobic chambers.
More information

10. Special Dehydrated Media for Complex Challenges

MICROKIT provides specialised dehydrated media for a range of microbiological needs:

  • RNA-F bacteriophages and somatic coliphages
  • BPNW to neutralise food matrix effects
  • Rapid PCA Chromogenic for total aerobic count in 18–24h
  • Rapid YM Agar for yeast and mould counts in 18–36h
  • Salmonella-Shigella Broth to avoid false negatives
  • LPTN Broth to inactivate cosmetic preservatives
  • CUP12 Agar to detect 12 emerging cosmetic pathogens
  • Buffered Peptone Neutralising Water to reduce preservative interference

Full Media Catalogue and Details

Additional Tools

We also provide a complete range of colony confirmation kits compliant with ISO Standards, designed to make microbiological identification faster and easier.
More information

High-Precision Quantitative Microbiological Strains

Our Quantitative Strains are manufactured to the highest standards of stability and traceability, and are used by numerous ISO 17025-accredited laboratories.

Quantitative Strains Overview
Export Catalogue 2024

We Can Design the Solution You Need

MICROKIT can help you solve even the most complex microbiological challenges with custom-designed kits, media, and systems.

For more information: export@microkit.es
To place an order: pedidos@microkit.es

 

Microbiología: 10 problemas-10 soluciones

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Microbiología: 10 Problemas Microbiológicos y sus 10 Soluciones MICROKIT

¿Tienes problemas microbiológicos en tu laboratorio? No estás solo.
En microbiología aplicada, existen 10 problemas comunes que afectan a laboratorios de control de calidad, investigación, cosmética, alimentación y aguas.

MICROKIT ha desarrollado 10 soluciones prácticas, innovadoras y fáciles de implementar, que optimizan tus resultados analíticos y mejoran la fiabilidad de tus ensayos.

A continuación, te presentamos los 10 problemas microbiológicos más habituales y las soluciones recomendadas por MICROKIT.

1️⃣ Conservación de Cepas: De Semanas a Años

¿Sigues resembrando tus cepas cada semana o cada mes?
Con los sistemas Crioteca Skim Milk, Anaeroteca y MPT-Vibrio cholerae, podrás conservarlas durante años con total seguridad y sin pérdida de viabilidad.

Ficha técnica Crioteca y Anaeroteca (PDF)
Ficha MPT-Vibrio cholerae

 

 

 

 

 

 

2️⃣ Desinfección del Aire y Superficies del Laboratorio

Olvídate de las sombras de la luz ultravioleta.
Airesano desinfecta aire y superficies mediante una niebla uniforme, sin zonas negras y sin afectar equipos o muestras.

Más información sobre Airesano (PDF)

 

 

 

 

 

3️⃣ Control Microbiológico de Superficies

Alternativas rápidas y eficaces a las placas Rodac o laminocultivos tradicionales.
Soluciones como Rapidswabs-TC, Rapidswabs-YM, Sulfate API Agar Tubes o Listeriswabs-Green garantizan resultados fiables en todo tipo de superficies.

Listeriswabs Green (PDF)
Rapidswab Bacterias
Rapidswab Hongos

 

 

 

 

 

 

https://www.microkit.es/fichas/REDUCTORES-SULFATO-ANAEROBIOS-KIT-API.PDF

4️⃣ Validación de Limpieza: ¿Sus superficies están Correctamente Higienizadas?

El control de materia orgánica ya no necesita costosos aparatos de bioluminiscencia.
El KitProPlus ofrece una alternativa moderna, precisa y económica: es al control de limpieza lo que Uber fue al taxi.

KitProPlus (PDF)

 

 

 

 

 

 

 

5️⃣ Cosmética: Seguridad Microbiológica Total

La seguridad de un cosmético que exige el Reglamento (CE) Nº 1223/2009 no depende solo de 4 patógenos «ISO», sino de la ausencia de 14 microorganismos .
Cosmetikit-EasyPlus permite iniciar el autocontrol fácilmente y con máximo rigor.

Cosmetikit EasyPlus (PDF)

 

 

 

 

 

Los laboratorios que ya hacen su microbiología, pueden reforzar sus análisis con CUP12A, el medio universal cromogénico para 12 patógenos emergentes.
CUP12 Agar – Ficha técnica

 

 

 

 

 

 

 

Y ya pueden emplear el que ha demostrado, en intercomparación, ser el mejor caldo neutralizante y de enriquecimiento:

https://www.microkit.es/fichas/LPT-NEUTRALIZINGBROTH-INCOLORO.pdf

6️⃣ Alimentos: Resultados Rápidos sin Equipos Costosos

Detecta Listeria y Salmonella en solo 36 horas, sin necesidad de aparatos especiales, gracias a Listeriquick-desh y Salmoquick-desh.

Listeriquick y Salmoquick (PDF)

 

 

 

 

 

 

 

 

Además, neutraliza el efecto matriz de conservantes y especias sustituyendo el agua de peptona clásica por Buffered Peptone Neutralizing Water.

Buffered Peptone Neutralizing Water

7️⃣ Microbiología de Aguas: Plaquis Herméticas de Larga Duración

Evita problemas de caducidad en tus placas preparadas.
Las Plaquis herméticas MICROKIT permiten el control de microbiología de aguas y bebidas (y patógenos tras enriquecimiento por estría), con una larga vida útil.

Plaquis Herméticas (PDF)

Además se apilan extremadamente bien, lo que evita los accidentes de las placas habituales

 

 

 

Y aplica ya la nueva Directiva UE 2023, buscando los causantes de la diarrea del viajero  y otros problemas mediante los medios más veteranos:

https://www.microkit.es/fichas/BACTERI%C3%93FAGOS-COL%C3%8DFAGOS%20SCHOLTEN%20AGAR.pdf

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

8️⃣ Control In Situ de Aguas

¿Solo kits de cloro? Hay mucho más.
MICROKIT ofrece soluciones completas para el control microbiológico directo: Mini-Drinking Water Kit, Vibrio cholerae P/A, botes 100 g P/A, y bolsas Quanti-P/A-TSC para análisis rápido.

Mini Drinking Water Kit (PDF)

 

 

 

 

> Botes P/A Estériles (PDF)


Quanti-PA Clostricult (PDF)

9️⃣ Legionella: Confirmación Rápida y Fiable

Confirma colonias de Legionella pneumophila (género, especie y serogrupo) de forma sencilla con M-Ident Virapid Legionella, la alternativa moderna a los métodos con látex.

M-Ident Virapid Legionella (PDF)

 

 

 

 

 

10.Medios Deshidratados Especiales: Soluciones Múltiples

MICROKIT ofrece una amplia gama de medios deshidratados para resolver múltiples desafíos microbiológicos:

 

MICROKIT: Soluciones a Medida para tu Laboratorio

En MICROKIT no solo ofrecemos productos, sino soluciones personalizadas para cada problema microbiológico, por complejo que sea.

¿Tienes un problema microbiológico enquistado?
Podemos diseñar una solución específica para tu laboratorio. Si no la tenemos ya.

Contáctanos: microkit@microkit.es

 

Laminocultivos Dipslides DESINFECTEST®

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Laminocultivos

Laminocultivos Dipslides DESINFECTEST®

El método más cómodo para control de superficies y de líquidos con alta carga microbiana potencial

La palabra laminocultivos fué inventada por MICROKIT hace 34 años, en 1989.

Con ella quisimos designar lo que en inglés se llamaba «Dipslides»: láminas con agar convexo que servían en aquellos tiempos sobre todo para urocultivos por inmersión.

Y, en unas pocas marcas, además, para control de superficies.

MICROKIT nació en esa fecha con un catálogo en el que exclusivamente  ofrecíamos laminocultivos.

Y vivimos sólo de estos «pirulos» durante el primer año, aunque en seguida integramos los discos de cartón nutrientes para Filtración de Membrana (MF) y creamos los primeros tubos preparados para fundir y elaborar placas en industria.

A ese catálogo sumamos poco después frascos,  placas preparadas y ampollas de MF.

Y más adelante nuestros propios medios deshidratados.

Los laminocultivos de MICROKIT se llaman DESINFECTEST®, nuestra primera marca registrada, ya que no nos dejaron llamarlos como queríamos: Microtest (ya estaba registrada para algo que nada tenía que ver con la microbiología).

Gama DESINFECTEST®

A lo largo de estas 3 décadas, conforme el mercado cambiaba y se hacía más exigente en microbiología, hemos ido reduciendo la gama de laminocultivos hasta la actual de los 4 de mayor éxito:

MBN101 AEM/AET Incoloro /Incoloro   – Bacterias totales tras desinfección                                (TSA-NEUTRALIZING AGAR TTC). (Para anaerobios, incube con  ANAEROKIT)
MBN103 EC-PLUS Crema/Rosado  Coliformes-E.coli y Salmonella Medio cromogénico E.coli + demás coliformes / Medio cromogénico para Salmonella. Caducidad: 2-4 meses.
MBN200 D-HACCP Incoloro / Púrpura    – Recuento Total (PCA+Neutralizing TTC) / Enterobacterias (VRBG Agar)
MBN407 MIX Incoloro / Rosa – Recuento total aerobios (bacterias+hongos) (PCA, Neutralizing, TTC) /- Levaduras y Mohos (rosa Bengala CAF Agar). Incubar a 25ºC para aerobios y hongos alterativos y a 35ºC para aerobios y hongos patógenos. Cad:  2-6 meses según el stock actual.

Los laminocultivos DESINFECTEST® tienen dos usos:

A) Control de superficies, por simple presión durante 10 segundos de cada una de las dos caras de la lengüeta, contra la superficie a analizar. La ventaja sobre las placas de Contacto «Rodac» es que tienen 10 cm2 en vez de 25 cm2, lo que permite muestrear superficies cóncavas y convexas con mayor facilidad. Y que el cierre a rosca le confieren mucha más larga caducidad.

B) Control de líquidos por inmersión, siempre que se espere un recuento superior a 1000 ufc/mL. Esto resulta ideal para ahorrarse hacer diluciones en ciertos líquidos donde la concentración de microorganismos puede ser muy alta: aguas residuales, taladrinas, combustibles… y por supuesto la orina en caso de UTI.

Valor diferencial

Las ventajas de DESINFECTEST® sobre otras muchas marcas de laminocultivos, son, sobre todo, dos:

1-que ocupan 10 cm2 reales de medio de cultivo sólido (otras son mucho más pequeñas o con medidas que obligan a conversiones complicadas para dar el recuento por cm2), y

2-que no se deslaminan ni se contaminan durante el transporte, gracias a un molde de plástico optimizado-inmejorable durante estas 3 décadas de uso

Por eso, DESINFECTEST® de MICROKIT sigue siendo el líder indiscutible en los laboratorios donde prima la calidad sobre cualquier otra consideración. Y ha permitido realizar millones de análisis en miles de laboratorios de toda España y parte del extranjero.

https://www.microkit.es/pdf/desinfectest.pdf

https://www.microkit.es/fichas/DESINFECTEST-LAMINOCULTIVOS-DIPSLIDES.pdf

Para más información, contacte con nosotros en microkit@microkit.es y para hacer sus pedidos, contacte con pedidos@microkit.es

No se pierda el vídeo:

https://youtu.be/qJB0elPYvVU

 

VRBG

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VRBG, el medio de cultivo para recuento de Enterobacterias, ahora en ecogránulos.

Evite respirar la desagradable bilis en medios como el VRBG, el VRBA (VRBL), el EE Broth o el BGBL 2%, gracias a su presentación en ecogránulos en vez del clásico polvo de la mayoría de marcas.

Así evitará respirar este maloliente e irritante medio.

Estos medios en polvo son nocivos para su nariz, garganta, ojos y pulmones… ¡deje de respirarlos!

Además sus nubes de polvo no sólo son irritantes: manchan la balanza, las poyatas y todo lo que esté cerca del bote cuando se emplea.

Los ecogránulos no forman nubes de polvo, ni tampoco forman grumos al hidratarlos. Además se disuelven mucho mejor que el polvo.

Y encima no se apelmazan en ambientes muy húmedos, como sucede con los medios en polvo.

Otra ventaja es que como se granulan durante su fabricación, luego en almacenamientos prolongados no pueden crearse los gradientes de densidad de los distintos componentes que se crean en los medios deshidratados:

Observe como ejemplo más evidente, si no hay muchas más partículas negras en el fondo de los medios en polvo con hierro (ej: SPS, ISA…).

Señal de que las partículas densas migran abajo y si no se usa el contenido completo del bote de medio en polvo en una sola vez, estaremos preparando lotes completamente diferentes.

En otros medios, es posible que los Ecogránulos se puedan considerar un lujo, pero en los medios con bilis mencionados, es una necesidad y el tema de RRLL debería incidir en ello, por el bien de la salud y el bienestar de los analistas que trabajan con estos fastidiosos y tóxicos medios deshidratados.

https://www.microkit.es/fichas/VIOLET-RED-BILE-GLUCOSE-AGAR-VRBG-granulado.pdf

https://www.microkit.es/fichas/VIOLET-RED-BILE-LACTOSE-AGAR-VRBA.pdf

https://www.microkit.es/fichas/EE-BROTH-ENTEROBACTERIAE-MOSSEL.pdf

https://www.microkit.es/fichas/BRILLIANT-GREEN-BILE2-BROTH.pdf

Solicite más información y precios en: microkit@microkit.es

Haga sus pedidos en: pedidos@microkit.es

 

Peluches microbianos nuevos

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Peluches microbianos nuevos: 2 novedades y la nueva taza de los Frikiquecos

Presentamos los 2 nuevos peluches microbianos para añadir a la colección de Frikiquecos: Pseudomonas aeruginosa y Candida albicans.

Pseudomonas aeruginosa es una bacteria Gram negativa, no fermentadora-oxidasa positiva, frecuente en aguas y suelos, aunque es capaz de contaminar y comer incluso desinfectantes. A causa de su capacidad patogénica y su inmenso genoma, es uno de los 3 mayores problemas en la búsqueda de nuevos antibióticos a los que no sea resistente, junto al estafilococo MRSA y a Clostridium difficile.

Curiosamente la legislación sólo exige buscarlo explícitamente en medicamentos, aguas envasadas y aguas de hospital (en concreto de quirófanos y UVIs), cuando en aguas potables también puede producir los mismos problemas que en piscinas. E implícitamente en cosméticos («Seguridad e inocuidad» microbiológicas).

En personas sanas, suele provocar conjuntivitis e infecciones de heridas, por baño en piscinas cloradas.

Ver más información de Pseudomonas aeruginosa en nuestra monografía sobre ella:

https://www.medioscultivo.com/pseudomonas-aeruginosa/ ‎

 

Candida albicans es una levadura que vive como comensal en las mucosas, la piel y el tracto intestinal del 80% de las personas. En cuanto la persona toma antibióticos, corticoides, antihistamínicos o entra en inmunodepresión,  C.albicans suele pasar de su estado unicelular al estado pluricelular filamentoso, y volverse un molesto patógeno que irrita zonas que estaban sanas, como la boca y los genitales.

Tambien un exceso de higiene con jabón puede provocar su invasión, por eliminación de otras especies microbianas del ecosistema microbiano original. Pocos saben que su mejor combatiente es el kéfir (no el yogur), gracias a su levadura que lo combate: Kluyveromyces marxianus.

Ver más información de Candida albicans en nuestra monografía sobre hongos:

https://www.medioscultivo.com/levaduras-y-mohos/

 

Además, ahora tambien regalamos a nuestros estimados clientes, con sus pedidos de productos MICROKIT, la taza de desayuno (que no quema al usar el microondas) y contiene la foto de todos los peluches microbianos: haga su pedido superior a 500 € y le regalaremos uno de estos simpáticos recuerdos.

Siga con su colección, empezada hace ya más de una década, o comience una nueva con 2 peluches más y la taza.

 

https://www.microkit.es/fichas/Peluches-microbianos-FRIKIQUECOS.pdf

No te pierdas el vídeo de 4 minutos sobre los frikiquecos, relato redactado con IA tras darle nuestro texto y premisas;

mini-videos también generados con IA, a partir de nuestras fotos.

Por eso hay muchos frikiquecos en el video que en realidad no existen, se los inventó la IA y es imposible que se ciña estrictamente a nuestras fotos,

por más de 10 veces que le pedimos rehacerlo: resulta que la IA tiene su propia personalidad.

Aún así le han salido bastante graciosos esos virus inventados.

Y montaje global y voz de nuestro querido amigo Antonio:

https://www.youtube.com/watch?v=T5wdFirBySE

 

Pseudomonas aeruginosa búsqueda

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Pseudomonas aeruginosa búsqueda: medios de cultivo, métodos de detección y confirmación; novedades para su mejor control en instalaciones

Pseudomonas aeruginosa búsqueda

LAS MONOGRAFÍAS DE MICROKIT. Tema 13

MONOGRAFÍA    Pseudomonas aeruginosa

 

 

1-El microorganismo y su interrelación con el ser humano

Pseudomonas aeruginosa  es una bacteria Gram negativa, oxidasa positiva (no fermentador) y móvil (con un flagelo o penacho polar), capaz de generar pigmentos como la fluoresceína (verde-amarillento y fluorescente), mejor detectada con el medio King B, piocianina (verde-azulado) y piorrubina (pardo), mejor detectadas con el medio King A.

Generan tambien fluorescencia y pigmentos en el Agar Cetrimida, confiriéndole tras su crecimiento un olor característico a jabón o a licor o a «trapo sucio».

Los Pseudomonadales (incluido también Acinetobacter) se consideran los microorganismos que, a causa de la acumulación atmosférica de los compuestos que generan, provocaron las primeras condensaciones del vapor de agua en lluvia, lo que permitió el paso de la vida del mar primigenio a tierra.

Su hábitat incluye el suelo, los vegetales, las aguas naturales y también tiene especial preferencia por las duchas, las piscinas y las aguas purificadas de la industria farma-cosmética (junto a Burkholderia cepacia, ver monografía 8), formando biofilms resistentes a antibióticos y desinfectantes.

Lo que normalmente detectamos en el agua son sus formas planctónicas, que escapan del biofilm para colonizar nuevas zonas.

Tambien es frecuente, sin provocar enfermedad, en zonas húmedas del ser humano: axilas, ingles, boca…, siendo capaz de colonizar hasta los filtros de la cabina de flujo laminar a través de los aerosoles generados por el simple hecho de hablar o toser.

Es capaz de alimentarse de los compuestos más diversos (explosivos, petróleo, desinfectantes…), por lo que a veces en vez de desinfectar, en realidad estamos infectando la zona de trabajo.

Se trata de un patógeno humano del grupo 2 de riesgo biológico, aunque tambien ataca animales y vegetales.

En el hombre lo mismo ataca heridas, que el tracto respiratorio, las vias urinarias, los ojos… y puede provocar otitis, dermatitis y hasta sepsis (respuesta extrema del cuerpo a una infección, que puede dañar los propios tejidos y provocar la muerte).

 

 

2-Los tipos de productos donde la legislación exige su búsqueda o recuento, así como otros tipos de productos donde a nuestro criterio, sería recomendable analizarlos

-La legislación UE (Directiva Europea 2015/1787 de 6/X) y por ende la española (Real Decreto 1799/2010, modificado por RD 902/2018 de 20/7) exigen la búsqueda de P.aeruginosa en aguas envasadas (incluida agua de mar envasada). El Real Decreto 742/2013 11/11 y algunas Comunidades Autónomas exigen también su búsqueda en piscinas (ausencia en 100 mL, en otras recuento 0 en 100 mL, que al parecer no debe ser lo mismo que la ausencia). Curiosamente no se habla de buscar P.aeruginosa en aguas de consumo humano, cuando ya se han informado varios casos, incluso de retrocontaminación de la red desde los grifos privados o públicos.

–P.aeruginosa debe buscarse (según legislación española y europea, actualizada en 2021) en los siguientes ingredientes alimentarios: concentrado refinado de péptidos de camarones, extracto de cresta de gallo, Clostridium butyricum. Tradicionalmnete se ha buscado en refrigerados, congelados y neveras como algo más genérico: “bacterias psicrófilas”.

-En medicamentos no estériles, la farmacopea exige la búsqueda activa de P.aeruginosa. Tambien las GMPs exigen su búsqueda activa en las aguas de uso farmacéutico.

-En cosméticos, emulando la farmacopea, surgió la Norma ISO 22717 que habla de los mismos medios. Para seguir GMPs, aunque sean menos explícitas que en medicamentos, se debe buscar P.aeruginosa en aguas de uso cosmético, donde es bastante frecuente cuando se busca por primera vez.

 

 

3-Los métodos oficiales para su detección/recuento

-En aguas la legislación exige el seguimiento de la Norma ISO 16266, que habla del Agar Cetrimida CN (un Cetrimida especial con menos cetrimida que el pharmacopea y con Ácido Nalidíxico), por Filtración de Membrana. Las colonias sospechosas (verde-azuladas o amarillas, fluorescentes; o pardo-rojizas) se confirman con la oxidasa (+), Acetamida-Nessler (+) y King B (Fluoresceína, agar F).

-En alimentos se emplea el Agar Cetrimida clásico (pharmacopea).

-En medicamentos se sigue pharmacopea con enriquecimiento en TSB (Medio A) y aislamiento en Cetrimida Agar (medio N), confirmando con la prueba de la citocromo-oxidasa +.

-Y en cosméticos no existe legislación específica, pero se sigue la Norma ISO 22717 que también habla del Agar Cetrimida (fórmula farmacopea) y de la confirmación de colonias sospechosas con Oxidasa y con King A (Piocianina, agar P) en vez del King B. 

  

 

4-Los métodos alternativos que mejoran la rapidez de los resultados y la robustez del análisis

Método Filtración de membrana

El problema de buscar Pseudomonas aeruginosa en aguas, por Filtración de membrana, es que se destruyen numerosas células durante la filtración y se obtiene nada menos que un  33% de muestras con resultado falsamente negativo (datos de 18 años de intercomparación Seilagua).

Método Presencia/Ausencia

Microkit creó hace ya casi 3 décadas el Pseudocult P/A, un caldo cromogénico selectivo que, añadido a 100-250 ml de muestra de agua, genera color rosado-rojo en 24-72h y fluorescencia en presencia de Pseudomonas aeruginosa. La validación que demostró el 33% de falsos negativos por filtración fué precisamente frente al Pseudocult, que detecta el 100% de positivos.

Confirmación

Lógicamente todo presunto positivo en Pseudocult se debe confirmar estriando en Agar Cetrimida y siguiendo las confirmaciones antes mencionadas. Mientras que los presuntos negativos son confirmativamente negativos.

Dada la ortodoxia que obliga a “contar ceros” en algunas legislaciones (0 ufc/250 ml en vez de decir ausencia/250 mL), se puede usar el medio Pseudocult con tubos o con cubetas NMP.

Otro problema del método clásico es que el Agar Cetrimida suele tardar 48 h en permitir ver las colonias de P.aeruginosa. MICROKIT resolvió este problema en 2013 durante el diseño de las Dryplates-PS, mediante la adición al Agar Cetrimida, del mismo cromógeno del Pseudocult, lo que permite visualizar las colonias desde las primeras 18 h de incubación. Después diseñó este mismo medio en formato deshidratado, con el nombre Cromokit Rapid Pseudomonas Agar.

La confirmación de P.aeruginosa en Agar Cetrimida es muy sencilla: basta con hacerles a las colonias la prueba de la oxidasa, que debe ser positiva, ya que son aerobios estrictos. Las tiras de MICROKIT están estabilizadas y no se ponen azules con el oxígeno del aire.

Otra prueba más definitiva es la Acetamida-Nessler, positiva para P.aeruginosa (ver foto en la página 2 de esta monografía).

Ambas pruebas y la del King B se pueden conseguir juntas en el kit M-Ident-P.aeruginosa.

Falsos positivos

A veces en Agar Cetrimida pueden crecer curiosamente algunos Gram positivos (ej: Bacillus spp), generando confusión; el primer paso para descartar falsos positivos en Agar Cetrimida debe ser la inmediata prueba del Neogram directa en las colonias, descartando las que no filamentan.

  

  

5-Cómo vemos el futuro en la detección de este grupo

 La búsqueda de Pseudomonas aeruginosa en aguas de consumo humano, en duchas y en aguas de uso cosmético debería ser obligada por Ley. La mayoría de problemas microbiológicos que encontramos en numerosas fábricas de cosméticos son aguas infestadas de P.aeruginosa (y/o de Burkholderia cepacia) porque nadie las controla.

 

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Escherichia coli y demás coliformes

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Escherichia coli  y demás Coliformes: MONOGRAFÍA

Escherichia coli y demás Coliformes

LAS MONOGRAFÍAS DE MICROKIT. Tema 11

 

1-Escherichia coli y demás Coliformes:  su interrelación con el ser humano

Coliformes

Las bacterias coliformes se han venido definiendo hasta el siglo pasado como las bacterias  Gram negativas y entéricas (viven en el tracto intestinal de los animales de sangre caliente, incluido el ser humano), con forma de bacilos, sin esporas, que fermentan la lactosa con producción de gas. Sin embargo, los avances en medios de cultivo cromogénicos de las dos ultimas décadas, han permitido redefinirlos de una forma más enzimática que bioquímica, simplemente como las bacterias  Gram negativas y entéricas que son Galactosidasa positivas (Salmon-Gal, X-Gal…) y oxidasa negativas. Son Enterobacterias, anaerobias facultativas, e incluyen muy diversas especies, sobre todo algunas de los géneros KES (Klebsiella, Enterobacter, Serratia), incluso alguna de Citrobacter y alguna de Salmonella…

E.coli

Pero la especie más conocida de coliforme es sin duda Escherichia coli (coliforme significa “con forma de coli”), probablemente la bacteria más buscada por el ser humano en miles de laboratorios y con miles de pruebas de campo cada día en todo tipo de muestras: aguas, alimentos, cosméticos, medicamentos, superficies…

Porque es un indicador de infiltración de aguas residuales y/o de operarios que no se han lavado las manos tras ir al baño y pueden contaminarlo todo con otras bacterias entéricas patógenas; por tanto es un indicador de higiene del producto final.

E.coli no es una bacteria propia del agua, ni de las manos, sino del aparato digestivo, de hecho en agua no sobrevive más de unas horas y en otras matrices, como los cosméticos, todavía menos.

Por eso se considera mejor indicador  de contaminación fecal al complejo Enterococos fecales (aunque muchos sean más típicos de los animales que del hombre, la contaminación fecal por animales es tan grave como la de origen humano y con efectos incluso peores).

E.coli fermenta la glucosa como buena Enterobacteria y la lactosa como buen coliforme, con la producción de ácido y gas en menos de 24 horas, reduce los nitratos a nitritos, descarboxila la L-ornitina y su prueba de IMViC es ++–. Desde el avance en medios de cultivo cromogénicos, se considera simplemente el coliforme que es Glucuronidasa positivo (antes fluorescencia por MUG, ahora cromogénesis por X-Glu) e indol positivo.

Coliformes fecales

Los coliformes fecales son los coliformes capaces de crecer a 44ºC, están más asociados a contaminación fecal, ya que muchos otros coliformes viven fuera del tracto intestinal y no son patógenos. Como tal, E.coli es tambien el coliforme fecal por excelencia, y no se considera patógeno, ya que es la bacteria comensal, anaerobia facultativa, con más ufc/g que hay en el cuerpo humano

Coliformes patógenos

En cambio otros muchos coliformes sí son patógenos; existen varias cepas, incluidas las verotoxigénicas (VTEC) de E.coli (O157 y otras productoras de toxina Shiga), que son patógenos tan graves como Shigella (no olvidemos que Sh.dysenteriae es considerada patógeno de riesgo del grupo 3, igual que VTEC. Esta cepa es una causa importante de muerte en niños menores de 5 años. Se diferencia de las otras E.coli en que no fermenta el sorbitol, no crece a 44 °C y no produce β-glucoronidasa. Otras cepas causan infecciones urinarias por entrada por la uretra (por higiene deficiente), convirtiéndose en patógenas como casi cualquier cepa comensal humana que saquemos de su hábitat natural y la pasemos a otro órgano. En cambio otras cepas de E.coli ayudan al ser humano en diversos procesos de biotecnología, como la producción de vitaminas B y K.

 

2-Los tipos de productos donde la legislación exige la búsqueda o recuento de Escherichia coli / Coliformes, así como otros tipos de productos donde a nuestro criterio, sería recomendable analizarlos

Aguas de consumo humano

-La legislación UE (Directiva Europea 2015/1787 de 6/X) y por ende la española (Real Decreto 902/2018 de 20/7) exigen la búsqueda diaria de E.coli y demás coliformes en aguas de consumo humano (incluidos grifos públicos y la empleada en industria alimentaria, olvidándose de los grifos privados y de otras industrias como la cosmética), incluyendo desde entonces en este mismo BOE las aguas envasadas. Y en aguas de baño: aguas continentales y playas (RD 1341/2007 de 11/X) y piscinas (RD 742/2013 de 27/9).

Alimentos

–E.coli debe buscarse o enumerarse (según legislación española y europea, actualizada en 2020) en los siguientes alimentos: carnes, cereales, cerveza, comidas preparadas, comidas dietéticas e infantiles, condimentos y especias, semiconservas, cuajo, frutas, hortalizas, zumos, verduras, galletas, harinas, horchatas, quesos, mantequilla, nata, cuajada, pastelería, bollería, confitería, repostería, moluscos, equinodermos, tunicados, pescados ahumados o en salmuera, moluscos y crustáceos sin cáscara, té y derivados, turrones y mazapanes. Coliformes en: cereales, comidas preparadas, comidas dietéticas e infantiles, frutas, hortalizas, verduras, gelatinas, galletas, helados, mantequilla, pescados ahumados o en salmuera. Enterobacterias en: alimentos para lactantes y dietéticos, cacao, golosinas, canales, carnes, jamón cocido, cerveza, semiconservas, cuajo, especias, galletas, gelatinas, helados, horchatas, jarabes, leche pasteurizada y en polvo, mantequilla, nata, yogur, cuajada, ovoproductos, pastelería, bollería, confitería, repostería, aperitivos, productos de la pesca, semiconservas, salsas, turrones, mazapanes, superficies de mataderos, superficies de trabajo de alimentos infantiles, superficies de hostelería, superficies de pastelería, alimentos para mascotas.

Medicamentos

-En medicamentos no estériles, la farmacopea exige la búsqueda activa de E.coli y demás Enterobacterias

Cosméticos

-Y en cosméticos, emulando la farmacopea, surgió la Norma ISO 21150 que habla de los mismos medios y se centra también en un solo indicador (E.coli), indicador que, es adecuado para aguas, medicamentos y alimentos (aunque por sus deficiencias como indicador respecto a los Enterococos fecales que ya hemos esbozado, en dichas matrices lo acompañan del otro indicador “coliformes”, o en otras, de “Enterobacterias”, pésimo indicador éste por incluir muchísimas especies que no proceden del tracto intestinal y porque los medios de cultivo que existen para esta familia obtienen una enorme cantidad de falsos negativos).

En cambio E.coli es muy mal indicador para cosméticos, ya que esta cepa no perdura en ellos ni siquiera unas horas, a causa de los potentes pools conservantes de estas matrices, por lo que miles de laboratorios están perdiendo tiempo y dinero buscando algo que sólo circunstancialmente van a encontrar (y raramente en los retest a 24h tras las fabricación), cuando podrían estar buscando algo que sí se encuentra, y muy a menudo, en cosméticos: coliformes patógenos, como Klebsiella pneumoniae, Pluralibacter gergoviae,  Serratia marcescens, Citrobacter freundii…

 

3-Los métodos oficiales para la detección/recuento de Escherichia coli / Coliformes

Aguas

-En aguas para E.coli y demás coliformes se sigue la Norma ISO 9308, una de cuyas partes habla del Agar Cromogénico CCA para Filtración de Membrana (que en Microkit creamos una década antes, en 1995, con el nombre de Agar MugPlus) y que sustituye al obsoleto Agar Tergitol-Chapman TTC;

…y otra de las partes habla del caldo de substrato definido ONPG+MUG para Número Más Probable (que en Microkit llamamos Colicult-ISO) y que sustituye  a los obsoletos Caldo Lauryl Sulfato o Caldo Lactosado;

Lamentablemente el MCC (Lauryl con MUG y X-Gal), de origen UE, no fue tenido en cuenta en esta ISO, aunque funcione mejor que el ONPG+MUG, a causa del poderío USA, ya que una Norma ISO jamás debió admitir la redacción de un protocolo sometido a patente de un único proveedor mundial, máxime habiendo alternativas más modernas y con varios proveedores UE como es el MCC; afortunadamente la patente USA ha caducado, pero la inercia de muchos laboratorios y la ortodoxia en acreditación ISO les impide cambiar.

Alimentos

-En alimentos para E.coli se suele seguir la Norma ISO 16649 que dejó obsoletos el antes ubicuo caldo BGBL y el Agar EMB Levine; pero como el moderno Agar TBX de dicha Norma es un medio de escasa recuperación, muchas industrias prefieren seguir AFNOR y emplear el mismo medio que la legislación exige en aguas (CCA, que en Microkit denominamos MugPlus). Para coliformes se suelen seguir las numerosas normas ISO que hablan del VRBL, aunque muchos laboratorios prefieren el ya mencionado CCA, que en Microkit denominamos MugPlus, que sirve para ambos parámetros (E.coli por X-Glu y demás coliformes por Salmon-Gal). Para Enterobacterias todo el mundo usa el VRBG de la ISO 21528, aunque existe a menudo la paradoja del VRBL/VRBG: que en una muestra haya más colonias de coliformes que de Enterobacterias, cuando todos los coliformes son enterobacterias, pero no a la inversa.

Medicamentos

-En medicamentos se busca E.coli mediante caldo McConkey Púrpura (medio G) o Lactosado (medio D) para enriquecimiento y Agar MacConkey (medio H) para aislamiento del mismo y de otros coliformes. Y las Enterobacterias mediante enriquecimiento en EE Broth Mossel (medio E) y aislamiento en VRBG (antes VRBL+G, medio F).

Cosméticos

-En cosméticos no existe legislación específica, sino la moda de buscar E.coli. Quienes se empeñan en seguir a ciegas las Norma ISO microbiológicas que no son de obligado cumplimiento en ese sector, usan Agar MacConkey y EMB Levine y quienes prefieren seguir su criterio profesional avalado por 17 años de intercomparación Seilaparfum, usan MugPlus Agar, que les da el doble valor E.coli (colonias azules) + demás coliformes (colonias rosas) sobre el fondo crema del medio, sin falsos negativos y con un medio enzimático diferencial, no selectivo, por lo que detecta mucho mejor las diana en matrices tan inhibitorias.

  

4-Los métodos alternativos que mejoran la rapidez de los resultados y la robustez del análisis de Escherichia coli / Coliformes

MugPlus o CCA

MICROKIT diseñó desde 1995 el MugPlus Agar (CCA) que es actualmente el medio oficial en aguas y el recomendado en alimentos y cosméticos tras 22 años de intercomparación Seilalimentos (y 17 años Seilaparfum). Las colonias de E.coli son azules (algunas cepas añil, otras turquesa) por el X-Glu y las de los demás coliformes rojizas (algunas cepas rosa claro, otras fucsia intenso) por el Salmon-Gal, muy bien distinguibles sobre el medio color crema.

TBX

El TBX Agar para quienes solo necesitan buscar E.coli (sin demás coliformes), sólo tiene uno de los dos cromógenos (X-Glu) que en este caso genera colonias verdes en E.coli, pero su composición (base TBA) lo hace demasiado selectivo incluso para las cepas diana (productividad cercana al 50%), por lo que muchos laboratorios lo sustituyen por el MugPlus-CCA (productividad >90%) aunque les dé más información de la que necesiten (colonias rojizas de coliformes) y las obvien para sólo enumerar las colonias azules de E.coli.

MCC Colicult

El caldo Lauryl Sulfato con MUG (fluorógeno para E.coli) y X-Gal (cromógeno para coliformes) que en MICROKIT llamamos MCC-Colicult ha sido el gran aliado, durante las dos ultimas décadas, de los laboratorios que requerían detección Presencia/Ausencia o recuento NMP de E.coli y demás coliformes. La entrada en vigor de la ISO 9308-2:2012 y su clasista elección de un caldo que sólo tenía un proveedor en el mundo, bajo patente, y que mezcla el fluorógeno MUG para E.coli con una reacción clásica bioquímica para coliformes (ONPG), propició el cambio a dicho caldo a numerosos laboratorios bajo acreditación ISO. La patente ha caducado, pero la inercia les impide volver a muchos al caldo doblemente enzimático MCC o incluso a usar el mismo ONPG + MUG de otras marcas. Afortunadamente la mayoría de laboratorios sin acreditación ISO, continuaron con el más moderno MCC-Colicult.

Otros medios

El Minerals Glutamate Broth  se emplea por Norma ISO 16649-3 en bivalvos.

En  biotecnología el Terrific Broth va  sustituyendo  en  algunas  aplicaciones  al  clásico  caldo LB Lennox.

El intento de añadir MUG a los clásicos Caldo Verde Brillante 2 o MacConkey Broth Purple no tuvieron mucho éxito por la opacidad que provocaba el colorante sobre la fluorescencia del MUG. Tampoco el VRBL-MUG o el MacConkey Agar-MUG tuvieron el éxito esperado, muchas personas no distinguen bien la fluorescencia. Tampoco los medios cromogénicos para E.coli O157 han superado el éxito del Sorbitol McConkey Agar. Ni los medios cromogénicos para Enterobacterias han conseguido mejorar los pésimos resultados del VRBG. A causa de la Normativa ISO, medios tan clásicos como el EC Broth, Lauryl Sulfato Triptosa Broth, Endo (Agar y caldo), m-FC (Agar y caldo), MacConkey Broth Purple… han caído en desuso.

Confirmación

En todos los casos, la confirmación de E.coli es muy sencilla, al requerir sólo el test del indol-Kovacs. Sin embargo, el protocolo clásico hace perder 18-24h, al tener que pasar la colonia sospechosa a agua de peptona con triptófano e incubar para observar después el anillo rojo de indol en superficie tras añadir el reactivo de Kovacs. MICROKIT ha añadido triptófano directamente a sus medios sólidos cromogénicos para E.coli, (MugPlus-CCA, TBX Agar) por lo que la confirmación de indol es inmediata: añadir la gota de indol Kovacs sobre la colonia sospechosa y ver si vira en unos segundos de amarillo a rojo.

Tambien la confirmación de Coliformes en estos medios es muy sencilla  basta con hacerles a las colonias la prueba de la oxidasa, que debe ser negativa, ya que los coliformes son fermentadores por definición y no necesitan de la citocromo-oxidasa como los aerobios estrictos. Las tiras de MICROKIT están estabilizadas y no se ponen azules con el oxígeno del aire.

Sería raro, por su composición, que en estos medios creciesen Gram positivos, pero pueden descartarse falsos positivos debidos a ellos con la inmediata prueba del Neogram directa en las colonias. 

 

5-Cómo vemos el futuro en la detección de Escherichia coli / Coliformes

 E.coli ya es el microorganismo más buscado en todo tipo de muestras, combinado con otros indicadores como son los parámetros coliformes o Enterobacterias, e incluso Enterococos fecales en aguas. Añadir el parámetro “y demás coliformes” en cosméticos debería ser inminente.

 

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Bacillus

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MONOGRAFÍA   Bacillus cereus y otros Bacillus spp. de interés en la industria, sean patógenos, sean alterativos o sean beneficiosos para el ser humano

Bacillus. LAS MONOGRAFÍAS DE MICROKIT. Tema 10

1-El microorganismo y su interrelación con el ser humano

El género Bacillus contiene 266 especies de bacilos Gram positivos, esporulados, que a diferencia de los clostridios, no son anaerobios estrictos (pueden ser aerobios estrictos o bien facultativos); también a diferencia de los Clostridium, sus esporas no deforman la célula.

El género Bacillus  ha sido recientemente revisado en una nueva edición del manual Bergey’s de sistemática en bacteriología, diferenciando varios nuevos géneros y numerosas nuevas especies.

Sin embargo, a medida que se definen mejor día a día por secuenciación genética, se descubren aún más numerosas nuevas especies (e incluso nuevos géneros).

La gran perjudicada por estos microorganismos es la industria alimentaria, donde además de numerosas especies alterativas: en conservas, sobre todo, B.stearothermophilus acidifican sin producir gas.

B.subtilis, B.pumilus, B.licheniformis acidifican con ablandamiento.

B.circulans genera gas nitrógeno.

B.polimyxa y B.macerans abomban con otros gases.

Alicyclobacillus acidocaldarius como típico acidotermófilo que genera mal olor en alimentos ácidos (guayacol).

B.coagulans (thermoacidurans) en zumos, tomates y otros productos de acidez incluso 4,2.

Bacillus sporthermodurans como especie alterativa típicamente resistente al proceso UHT gracias a sus esporas resistentes al calor (HRS)…

También se han descrito especies generadoras de toxiinfecciones alimentarias:

B.cereus en arroz, galletas, pizzas…

B.subtilis / B.brevis en empanadillas, carne…,

B.licheniformis en sopas, patés, embutidos, estofados, postres…

La industria farmacéutica y cosmética quedan tambien muy afectadas porque los pocos microorganismos del aire y superficies que son capaces de resistir en sus instalaciones, pertenecen también a menudo al género Bacillus.

Buenas y malas

Algunas cepas ayudan al ser humano,

por ejemplo B. thuringiensis en la guerra biológica contra la procesionaria del pino.

B.subtilis en investigaciones que han permitido grandes avances en el conocimiento de los procariotas.

B.stearothermophilus para la elaboración de kits de control biológico de autoclavado correcto o de control de la presencia de residuos de antibióticos en leche y otros alimentos.

B.megaterium es el ejemplo de células procariotas enormes en la enseñanza de la microbiología.

Bacillus coagulans (thermoacidurans) es un probiótico de enorme potencial, porque produce ácido láctico pero a diferencia de los Lactobacilos, además, produce esporas resistentes que atraviesan el tracto intestinal; se utiliza también para problemas digestivos en general, para el síndrome del intestino irritable (SII), para las enfermedades inflamatorias intestinales (EII, la enfermedad de Crohn y la colitis ulcerosa), para la colitis por Clostridium difficile, contra el crecimiento excesivo de bacterias «malas» en el síndrome de intestino corto y para la infección por Helicobacter pylori que produce úlceras; se emplea también para prevenir las infecciones respiratorias y para reforzar el sistema inmunológico.

Otras cepas en cambio son patógenas: B.anthracis del ántrax (carbunco), B.circulans, B.macerans, B.sphaericus…

Al ser un género tan prolífico, pocos medios de cultivo sirven para diferenciarlo de otros grupos de microorganismos (ej: DTA con polimixina).

Hay un clado, que contiene B. anthracis , B. cereus , B. mycoides , B. pseudomycoides , B. thuringiensis y B. weihenstephanensis, que bajo las normas actuales de clasificación, debería considerarse una misma especie , pero por razones fenotípicas, se mantiene dividido en ellas.

Trataremos en esta monografía de las dos especies de Bacillus que más afectan a la industria, uno como patógeno (B.cereus) y otro como alterativo (B.sporothermodurans):

Bacillus cereus

Esta cepa hidroliza la lecitina de la yema de huevo y no fermenta el manitol,

su temperatura óptima es de 30 a 37 °C, su temperatura de crecimiento varía entre 5 y 55 °C y su temperatura de germinación es de 5 a 8 °C;

y su pH óptimo es de 4,5 a 9,3, y su concentración de sal, de hasta un 7,5 %.

Su crecimiento puede ser extremadamente rápido (se puede duplicar en 20 minutos a 30ºC)  y verse en las placas desde sólo 6 horas tras la siembra.

Produce dos tipos de toxiinfecciones alimentarias:

-la forma diarreica (produce diarrea desde 8-16 horas tras la ingestión del alimento contaminado, típicamente verduras, sopas y embutidos);

-y la forma emética (produce vómitos desde 1-5 horas tras la ingestión), que es termoestable, por lo que puede causar toxiinfección en alimentos ya cocinados (ej: pizza, arroz recalentado), igual que sucede con St.aureus.

Bacillus sporothermodurans

Esta es otra especie de gran interés de este género Bacillus, porque es capaz de resistir incluso procesos de ultrapasteurización (UHT) y estropear después los productos así tratados (tetrabiks, postres…).

Junto con otras especies similares, se denomina HRS (siglas en inglés de esporas resistentes al calor).

 

2-Los tipos de productos donde la legislación exige su búsqueda o recuento, así como otros tipos de productos donde a nuestro criterio, sería recomendable analizarlos

–Bacillus cereus debe buscarse (según legislación española y europea, actualizada en 2020) en los siguientes alimentos:

caldos, consomés, sopas y cremas que lleven como ingredientes productos vegetales desecados (umbral 102 ufc/g y < 103 ufc/g), cereales en copos o expandidos (< 101 ufc/g), alimentos para bebés (umbral 50 ufc/g y < 500 ufc/g), especias / hierbas (umbral 103 ufc/g y < 104 ufc/g), galletas simples, rellenas o cubiertas (ausencia/g), derivados de levadura de S.cerevisiae (<100 ufc/g), tomate frito (<10 ufc/g), té y derivados (<103 ufc/g).

-En países tropicales se analiza en prácticamente todos los alimentos, ya que en zonas cálidas y húmedas su capacidad de proliferación (como la de casi todos los microorganismos, sean analizados o no en climas templados) aumenta exponencialmente.

-Del mismo modo que Listeria, buscar B.cereus sólo en el alimento, olvidándose de las instalaciones, no garantiza una correcta prevención, dado que también se acumula en el ambiente de la fábrica, por lo que puede crear problemas recurrentes.

Debería buscarse en aires y superficies de las fábricas de los alimentos antes mencionados.

-La búsqueda de Bacillus sporothermodurans no es obligada, ya que es un alterativo de riesgo biológico 1 (inocuo), de modo que las empresas que la buscan, lo hacen para prevenir el deterioro de su imagen corporativa, por fabricar alimentos con aspecto desagradable.

 

 3-Los métodos oficiales para su detección/recuento

Se aplica la Norma ISO 7932 de B.cereus y/o la posterior ISO 21871 de “presuntos“ B.cereus, donde el caldo de cultivo es el TSB-polimixina y el Agar es el Mossel (también llamado PREP y MYP) con rojo fenol, medio de color salmón, al que se añade polimixina B;

o bien el PEMBA, con azul de bromotimol, al que también se añade polimixina.

Las colonias presuntivas en el agar con rojo fenol tienen aspecto de gotas de cera, rosadas-fucsia, a menudo con lisis de la yema de huevo alrededor de las colonias y a menudo con viraje del medio a fuscia.

Para la confirmación presuntiva se emplea agar sangre, ya que B.cereus provoca hemólisis alrededor de sus colonias/estrías.

Para la confirmación definitiva se usan los test Dextrosa-Polimixina, VP, Nitratos y Movilidad.

 

4-Los métodos alternativos que mejoran la rapidez de los resultados y la robustez del análisis

MICROKIT diseñó desde Octubre de 2012 el  Cromokit B.cereus Agar, medio Mossel con un cromógeno específico que provoca  un viraje azul del centro de las colonias de B.cereus, lo que ayuda a distinguirlas de otras cepas en un primer paso.

Por lo demás, el medio es idéntico al Mossel.

Aunque no es un método alternativo y está dentro de la Norma ISO 7932, queremos destacar aquí  la aportación de MICROKIT en B.cereus, al ofrecer un kit (M-Ident-B.cereus) que incluye las 4 pruebas de confirmación de colonias sospechosas de dicha ISO (Dextrosa-Polimixina, VP, Nitratos y Movilidad).

Tambien fabricamos la patente USAL del kit de Identificación de especies de Bacillus, el M-Ident-Bacillus

Otra de nuestras aportaciones (tampoco es un método alternativo y sigue la Norma ISO 7932 y la ISO 18593-ANSES de superficies)  es el kit X-Swabs B.cereus para la búsqueda de B.cereus en superficies.

Disponemos también del medio para B.coagulans (B.thermoacidurans), el B.coagulans Agar.

Y del medio cromogénico rápido para detectar esporas resistentes al calor (entre ellas B.sporothermodurans): Cromokit HRS Rapid Agar.

Asimismo, ofrecemos los medios  para los acidotermófilos más típicos: Alicyclobacillus acidocaldarius (YSG Broth) y el BAT Agar…

…así como el kit de detección del consecuente Guayacol (subproducto que genera mal olor en zumos, néctares, bebidas de té frío y conservas ácidas).

También el medio general para Bacillus spp, el DTA (Dextrosa Triptona Purple Agar) que se suplementa con polimixina.

Y la polimixina estéril ya reconstituida, con o sin yema de huevo, en frascos pinchables para adaptarse a la dosis exacta que Ud. fabrique de medio.

 

 5-Cómo vemos el futuro en la detección de este grupo

 Como ya hemos esbozado, la búsqueda de B.cereus no se limitará a los alimentos y se ampliará a las instalaciones:

superficies con X-Swabs-B.cereus y aire con muestreadores como MBS o Microflow y medios DTA o Cromokit B.cereus Agar.

Y cada vez más laboratorios de autocontrol realizarán activamente la búsqueda de B.sporothermodurans y de Guayacol.

 

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https://www.microkit.es/fichas/BACILLUS-CEREUS-M-IDENT-KIT-ISO-7932-UE-2-2019-ALIMENTOS.pdf

https://www.microkit.es/fichas/BACILLUS-M-IDENT-GALERIA.pdf

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