Archivo de la categoría: Microbiología de Alimentos

Optimización en los análisis microbiológicos de ALIMENTOS.
Nuevos métodos de análisis microbiológicos utilizados exitosamente en los laboratorios líderes

CLOSTRIDIUM BOTULINUM AGAR BASE

8 respuestas

Clostridium botulinum Agar MICROKIT permite la detección de este gravísimo patógeno en alimentos enlatados o envasados al vacío

Detección y enumeración selectiva de Clostridium botulinum en conservas, productos cárnicos y todo tipo de alimentos

COMPOSICIÓN

Hidrolizado pancreático de caseína 40,0 g
Extracto de levadura 5,0 g
Glucosa 2,0 g
Sodio Fosfato Dibásico 5,0 g
Sodio Cloruro 2,0 g
Magnesio sulfato 0,01 g
Agar- Agar 20,0 g
(Fórmula por litro)
pH final: 7,4  0,2

MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO. PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO. AGITE EL BOTE ANTES DE USAR.
CONTENIDO: 500 g
CÓDIGO: DMT038

PREPARACIÓN

Disolver 74,0 g de medio en 1 l de agua bidestilada. Llevar a ebullición, agitando hasta su total homogeneización. Autoclavar a 121 ºC durante 15 minutos. Enfriar a 45-50 °C y añadir 50 ml de emulsión de yema de huevo (SBH010), así como el contenido de un vial de Cl.botulinum Supplement (125 mg de D-Cicloserina, 2 mg de Trimetroprim y 38 mg de Sulfametoxazol, SBH008) reconstituido con 2,5 ml de agua destilada estéril y 2,5 ml de acetona. Mezclar bien y distribuir en placas de Petri estériles.

CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO

Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar laboratorio, tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,…)

DESHIDRATADO: polvo beige
PREPARADO: crema
CONTROL DE CRECIMIENTO 48 h a 35-37°C aproximadamente, en ANAErobiosis:

Clostridium botulinum, crece con colonias rodeadas de un borde iridiscente cuando se observan con luz oblicua. Al microscopio se observan bacilos gram positivos, esporulados.

PRESENTACIÓN: MEDIO DESHIDRATADO BASE + SUPLEMENTOS

SIEMBRA E INTEPRETACIÓN DE RESULTADOS

Sembrar 0’1 ml de las diluciones decimales en superficie y extender con un asa de Digralsky. Incubar a 37 ºC aproximadamente, durante 48h (y hasta 7 días) en condiciones anaerobias estrictas. Considerar como Clostridium botulinum, las colonias rodeadas de un precipitado iridiscente de lipasa cuando se observan con luz oblicua. Al microscopio se observan bacilos gram positivos, esporulados.

Clostridium botulinum Agar MICROKIT permite la detección de este gravísimo patógeno en alimentos enlatados o envasados al vacío, ahorrando los estabularios y la muerte de ratones de laboratorio

https://www.microkit.es/fichas/CLOSTRIDIUM-BOTULINUM-AGAR-BASE.pdf

El usuario es el único responsable de la eliminación de los microorganismos según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.

Si desea más información sobre nuestros MEDIO CLOSTRIDIUM BOTULINUM AGAR BASE rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto . O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16

DNA ase TEST AGAR

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Agar DNA-asa / Termonucleasa (UNE 34-820:1985)

Detección indirecta de la enterotoxina termoestable de Staphylococcus aureus

El Agar DNA-asa / Termonucleasa es un medio de cultivo diseñado para la detección indirecta de la enterotoxina termoestable (termonucleasa) producida por Staphylococcus aureus, siguiendo el método UNE 34-820:1985 (CENAN).

Este medio permite identificar estafilococos patógenos en función de su actividad DNA-ásica, un indicador clave de virulencia y capacidad enterotoxigénica.

⚗️ Composición del Agar DNA-asa / Termonucleasa

Por litro de medio:

Triptosa: 20,0 g
Ácido desoxirribonucleico: 2,0 g
Cloruro sódico: 5,0 g
Agar agar: 15,0 g
pH final: 7,3 ± 0,2

En el caso de Staphylococcus aureus DNA-asa positivo, se observa un halo transparente tras unos minutos de añadir HCl, especialmente visible en el cuadrante superior izquierdo de la placa.

Preparación del medio

Disolver 42 g de medio deshidratado en 1 litro de agua destilada.
Calentar con agitación hasta ebullición.
Autoclavar a 121 °C durante 15 minutos.
Conservar el medio preparado entre 4 y 8 °C, en lugar fresco, seco y protegido de la luz.
Agitar el frasco antes de usar.

Uso exclusivo en laboratorio. Mantener el envase bien cerrado para preservar sus propiedades.

Código deshidratado: DMT046

Control de calidad del medio

El control de calidad se realiza en los laboratorios MICROKIT, aunque se recomienda repetirlo en su propio laboratorio si:

El medio lleva más de 3 meses sin usarse.
Ha habido una desinfección general del laboratorio.
Se ha almacenado a temperatura elevada.
Presenta un aspecto anómalo aunque no haya caducado.

Staphylococcus aureus DNA-asa positivo (halo transparente

tras unos minutos de añadir HCl en el cuadrante superior izquierdo)

Características:

Deshidratado: polvo fino de color beige.
Preparado: estéril, color ámbar (azul si se añade azul de toluidina).

Prueba de fertilidad (18–48 h a 37 °C):

Cepa de control	Resultado	Observación
Serratia marcescens MKTA 8412	Excelente	Halo transparente tras añadir HCl
Staphylococcus aureus MKTA 6538P	Excelente	Halo transparente tras añadir HCl
Staphylococcus epidermidis MKTA 12228	Excelente	Sin halo transparente

Presentación disponible

Tubos preparados con azul de toluidina.
Frascos preparados (100 ml) con azul de toluidina.
Medio deshidratado.

Principio del método y aplicación

El Agar Desoxirribonucleasa (DNA-asa) permite identificar estafilococos patógenos mediante la detección de la enzima DNA-asa, que degrada el ADN presente en el medio.
Se recomienda especialmente para confirmar la patogenicidad de colonias sospechosas de S. aureus aisladas en otros medios selectivos como Baird Parker, Mannitol Chapman o Vogel Johnson.

Aunque el calentamiento destruye las células de S. aureus, su enterotoxina puede resistir altas temperaturas, lo que puede originar toxiinfecciones alimentarias incluso tras procesos térmicos correctos.
Por ello, este método permite identificar indirectamente la presencia de enterotoxina estafilocócica termorresistente, correlacionada con la actividad termonucleasa.

Procedimiento para la detección de termonucleasa (método CENAN)

Mezclar 1 g de muestra con 1 ml de agua destilada (30–40 °C).
Triturar y homogeneizar.
Ajustar el pH a 5,5.
Calentar a 100 °C durante 20 minutos.
Enfriar rápidamente en baño de hielo (4 °C).
Centrifugar a 7.500 rpm durante 45 minutos.
Empapar discos de celulosa (VAC158) con el sobrenadante.
Colocarlos sobre una placa de Agar DNA-asa con azul de toluidina.
Cubrir con otro tubo del mismo medio fundido (45 °C).
Incubar 2–8 h a 50 °C.

➡️ La presencia de halos rosados alrededor de los discos indica actividad termonucleasa y, por tanto, la probable presencia de enterotoxina estafilocócica termorresistente.

Siembra e interpretación

Fundir el medio preparado (frasco o tubo con azul de toluidina).
Agitar para homogeneizar posibles fases oxidada/reducida.
Sembrar por estría en superficie (placa o tubo inclinado) con la colonia sospechosa.
Incubar 4–18 h a 37 °C.
Añadir HCl 1 N (solo en el medio sin azul de toluidina).

Resultados:

Colonias positivas: rodeadas de halo claro (lisis del ADN) o halo rosado (en el medio con azul de toluidina).
Colonias negativas: sin halo de lisis.

♻️ El usuario es responsable de la eliminación segura de los microorganismos según la legislación medioambiental vigente.
Autoclavar antes de desechar.

Nota final

Este medio permite el uso directo del Reactivo FF (Fosfatasa alcalina Fluorescente) para la confirmación inmediata de colonias. Añada una gota de este reactivo (MICROKIT KMTFF) sobre algunas colonias, incline la placa para eliminar el exceso de reactivo y observe si aparece una intensa fluorescencia azul en menos de 2 minutos bajo luz UVA de 366 nm (linterna MICROKIT VMT050). Si no hay emisión de esta luz azul, seguro que no se trata de S.aureus.

Más información

Si desea más información sobre nuestro medio DNA-asa Test Agar, puede:
Rellenar el formulario de contacto en www.medioscultivo.com/contacto
Escribirnos a microkit@microkit.es
O llamarnos al 91 897 46 16

Más detalles técnicos disponibles en:
https://www.microkit.es/fichas/DNA-asa-TEST-AGAR.pdf

MICROKIT® ABC CHROMOSALM AGAR

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AGAR CROMOGENICO SALMONELLA CHROMOSALM, APROBADO EN ISO 6579 COMO ABC AGAR. A DIFERENCIA DE LOS MAGENTA-GAL, ES MÁS SENSIBLE Y ESPECÍFICO

MICROKIT® ABC CHROMOSALM AGAR

Medio cromogénico para Salmonella (Investigación de la Beta-Galactosidasa )
(UNE 34-554:1983, UNE 34-818:1985, EN-12824:1997, UNE-EN ISO 6579:2003)

INTRODUCCIÓN

Presentamos el esperado medio cromogénico de MICROKIT para aislar colonias del género Salmonella de forma diferencial y específica. Totalmente diferente a los medios cromogénicos de Salmonella de otras marcas, que tienen cromógenos color rojizo mucho menos específicos.

Colonias verdes: Salmonella. Colonias negras: otras Enterobacterias, incluida Citrobacter. Colonias incoloras: Proteus

Salmonella puede diferenciarse de otras Enterobacterias gracias a su mecanismo para producir alfa-galactosidasa en ausencia de beta-galactosidasa. MICROKIT® CHROMOSALM incorpora dos sustratos cromogénicos, CHE-Gal y X-alfa-gal, que permiten visualizar esta actividad en la misma placa.

Efectivamente, CHE-Gal es metabolizado por la beta-galactosidasa, produciendo colonias negras en presencia de hierro, como ocurre en la mayoría de Enterobacterias.

X-alfa-gal es hidrolizado por Salmonella produciendo colonias verde-azuladas, claramente distinguibles de las de otras Enterobacterias, negras y de las de otros microorganismos, incoloras. Las reacciones cromogénicas están muy concentradas en las colonias, dejando al medio de su color natural, crema.

El resto del medio está basado en la fórmula DCA de Hynes, utilizando desoxicolato sódico y citrato sódico como inhibidores de la flora acompañante.

TODO TIPO DE SALMONELLAS

Gracias a todo ello, MICROKIT® CHROMOSALM detecta las cepas enterotoxigénicas de Salmonella (S.enteritidis, S.typhimurium, S.paratyphi…) y también detecta S.typhi, en todo tipo de muestras alimentarias, clínicas, agua…

Muchos medios para aislamiento de Salmonella (incluidos muchos otros modernos medios cromogénicos con Magenta-Gal) son poco selectivos y/o diferenciales, provocando un inmenso gasto en confirmaciones de colonias sospechosas que resultan ser negativas (Proteus, Citrobacter…).

Con una asombrosa especificidad (99,7%), MICROKIT® CHROMOSALM reduce drásticamente la necesidad de confirmar falsos positivos, ahorrando trabajo y grandes costes en medios adicionales, galerías bioquímicas y pruebas inmunológicas:

¡Requiere un 95% menos confirmaciones de colonias que los medios tradicionales!. De este modo, su aparente elevado coste de “medio cromogénico” es sólo un espejismo.

Pero además, con frecuencia, en los medios habituales para Salmonella, los crecimientos abundantes de flora acompañante enmascaran a Salmonella cuando está presente en bajas proporciones.

La incidencia de falsos negativos en MICROKIT® CHROMOSALM es también ínfima, ya que la sensibilidad es del 90,5%, obteniéndose un 14% más positivos reales que en los demás medios.

En Enero de 2003, publicación en XIX Congreso SEM Santiago, hemos validado este medio en un estudio intercolaborativo para 250 muestras naturales de todo tipo de alimentos, aguas y manipuladores, con 6 laboratorios participantes…

…resultando la mayor sensibilidad (del 89,47%), especificidad (del 98,45 %) y eficiencia (del 96,40 %) de todos los medios de aislamiento selectivo de Salmonella, con gran diferencia respecto a todos ellos.

COMPOSICIÓN (BASE Desoxicolato Citrato Agar)

Salmonella abony

Extracto de buey 5,00 g/l
Peptonas 5,00 g/l
Citrato Sódico 8,50 g/l
Desoxicolato Sódico 5,00 g/l
Citrato Férrico Amónico 0,50 g/l
IPTG 0,03 g/l
Mezcla Cromogénica 0,38 g/l
Agar-agar 12,00 g/l
pH final 7’2 ± 0’2

.
MODO DE EMPLEO

Disolver 36’5 gramos de medio MICROKIT® CHROMOSALM en 1 litro de agua bidestilada a temperatura ambiente (ideal 21-25 ºC). Dejar embeber 10 minutos, calentar hasta ebullición, agitando hasta la total homogeneización.

Esterilizar manteniendo la ebullición durante 1 minuto. No autoclavar. No sobrecalentar. Los frascos sólo se pueden refundir una vez.

Enfriar rápidamente a 47 ºC y dispensar en placas Petri.

Una vez preparadas, las placas pueden mantenerse una semana a 2-8 ºC, en la oscuridad, precintadas para evitar su desecación.

Sembrar en estría las muestras clínicas procedentes de caldo Selenito, y las muestras alimentarias procedentes de los medios de pre-enriquecimiento más enriquecimiento habituales (ver ISO 6579 de Salmonella).

Incubar 18-24 horas a 37 ºC aproximadamente.

LECTURA DE RESULTADOS 24–48 h a aprox. 37°C

S. typhimurium MKTN 12190 Colonias verde-azuladas. Recuperación 96,3-200% con respecto a TSA estandarizado (El que cumple con recuperación superior al 92-125% con respecto a cepas cuantitativas internacionales, trazables a la cepa tipo).
Salmonella abony MKTN 6016 Colonias verde-azuladas (alguna cepa, si es beta-galactosidasa positiva, puede crecer con colonias negras o incoloras *). Tamaño 1-2 mm.
E.coli MKTA 25922: Colonias negras (o no crece)
Shigella flexneri MKTA 12022: Colonias incoloras (alguna cepa, si es beta-galactosidasa positiva, puede crecer con colonias negras). Tamaño 1-2 mm.
Citrobacter freundii MKTA 8090: Colonias negras.
Proteus mirabilis MKTA 14153: Colonias incoloras o verde claro con olor a pescado. Tamaño 0,5-2 mm.
Klebsiella oxytoca MKTA 13182: Colonias negras, mucosas. Tamaño 1-2,5 mm.
Pseudomonas aeruginosa MKTA 9027: Colonias incoloras o verdes fosforescentes. Tamaño 0,5-1 mm.

BIBLIOGRAFÍA

Perry, J.D., Ford, M., Taylor, J., Jones, A., Freeman, R., Gould F.K. 1999. A New Chromogenic Agar for selective Isolation of Salmonella spp. J.Clin.Micro. 37: 766-768.
*Salmonella are normally alpha-galactosidase positive (green colonies) but beta-galactosidase negative (not black colonies). In the original publication they tested 556 strains of S.enteriditis and all growth green, that is alpha gal positive. Out of the 1022 Salmonella tested after, only 2 were reported colourless: a Braenderup and a Saintpaul. So, it is possible to get an exception but they are very rare.
Sanchis, J. y otros 11 autores, 1/2003, XIX Congreso SEM Santiago.: Validación del medio CHROMOSALM mediante un estudio intercolaborativo en los más diversos tipos de matrices.
Sanchis, J. 09-2014: XIX Congreso Nacional de Microbiología de los Alimentos. Doble enriquecimiento simultáneo para detección de Salmonella. J. Sanchís. MICROKIT.

https://www.microkit.es/fichas/CROMOSALM-MICROKIT-AGAR.pdf

PRESENTACIÓN

MICROKIT® CHROMOSALM se comercializa en:
* Envases 100 g ( para unos 3 litros de medio final), ref: DMT500-. 500 g ref: DMT500
* Frascos hidratados y estériles, para fundir, de 100 ml, ref: RPL012.
* Tubos preparados 15 ml para elaborar una placa, ref: TPL402.
* Placas preparadas 25 ml (3 meses de caducidad), ref: PPLM55

AGAR CROMOGENICO SALMONELLA CHROMOSALM, APROBADO EN ISO 6579 COMO ABC AGAR. A DIFERENCIA DE LOS MAGENTA-GAL, ES MÁS SENSIBLE Y ESPECÍFICO

ATENCIÓN, MÉTODO RÁPIDO PARA SALMONELLA (SALMOQUICK):

Uniendo este avance a un enriquecimiento mixto acelerado (mezclando los medios del preenriquecimiento revitalizador y neutralizante:

225 ml Buffered Peptone Neutralizing Water de MICROKIT DMT011+

enriquecimiento selectivo 18 ml SS Broth concentrado [x5] de MICROKIT DMT067)

e incubándolos juntos en las 18 h previas;

permite la detección fiable de Salmonella en sólo 36 h desde la muestra inicial.

Por todo ello, este método acortado es la herramienta que estaban esperando todas las fábricas de productos alimenticios para poder liberar lotes gracias a la detección precoz de este patógeno, que les retrasaba hasta ahora el resultado global del laboratorio microbiológico a 3-5 días.

Sin necesidad de técnicas alternativas indirectas y costosas, que además requieren aparatos lectores especiales

https://www.microkit.es/pdf/Salmoquick-2016.pdf

El usuario es el único responsable de la eliminación de los microorganismos según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.

Si desea más información sobre nuestros MEDIO MICROKIT® CHROMOSALM AGAR rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto . O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16

https://www.microkit.es/monograficos/5-Salmonella-y-Shigella-monograf–a.pdf

BUFFERED PEPTONE WATER GRANULADA

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BUFFERED PEPTONE WATER GRANULADA. Agua Peptonada Tamponada con máxima capacidad Tampón. En cómodos ecogránulos.

. Preenriquecimiento de Salmonella (FIL, UNE-EN ISO 6579:2003, ISO 3565, ISO 11290-2, UNE 34-818:1985, UNE 34 554:1983, ISO 8261:2001, ISO 6785:2001)

COMPOSICIÓN

Peptona 10,00 g
Cloruro sódico 5,00 g
Fosfato disódico 9,00 g
Fosfato monopotásico 1,50 g

(Fórmula por litro) pH final: 7,0 ± 0,2

PREPARACIÓN

Disolver 25.5 g de medio en 1 l de agua bidestilada. Dispensar en tubos o en frascos. Autoclavar a 121 ºC durante 15-20 minutos. El color final del medio es paja oscuro.

PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO. CONSERVAR EL BOTE BIEN CERRADO, EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO.

DESHIDRATADO CODIGO: DMT032

CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO

DESHIDRATADO: Granulado, Crema PREPARADO: Estéril, Ambar

EVALUACIÓN DEL RENDIMIENTO ISO/TS 11133-2 (Aplicando el método ISO 6579:2003, o el del Manual MICROKIT actualizado), 18 h a 37 ºC: Salmonella abony MKTN 6017, Excelente, Tras 45 minutos a 25°C, resiembra en TSA estandarizado* y obtención de >50-150% de colonias respecto al número de ufc inoculadas. Tras 18 h a 37°C, turbidez de ligera a elevada.

E. coli MKTA 25922, Excelente, Tras 18 h a 37°C, turbidez de ligera a elevada.
Staphylococcus aureus MKTA 6538P, Excelente, Tras 18 h a 37°C, turbidez de ligera a elevada.
Pseudomonas aeruginosa MKTA 9027, Excelente. Bacillus subtilis MKTA 6633, Excelente. Candida albicans MKTA 10231, Excelente.

*El que cumple con recuperación superior al 70 % (92-125 %) con respecto a cepas cuantitativas trazables a la cepa tipo. Incertidumbres debidas a las cepas y a las diferentes proporciones de flora acompañante.

Las colecciones TIPO prohiben el uso de su referencia por lo que indicamos la nuestra, directamente trazable a la colección TIPO.

PRESENTACIÓN: VIALES MF, TUBOS 9 ml, FRASCOS DE 100 A 225 ml CON PERLAS DE VIDRIO, MEDIO DESHIDRATADO

NOTA: El diluyente más ampliamente utilizado para preparar la solución madre, los stocks de suspensiones de productos sólidos previamente pulverizados o de productos líquidos, y sus diluciones. También es el más usado como medio de pre‑enriquecimiento de Salmonella y otros.

SIEMBRA E INTERPRETACION

Para realizar solución madre ó 1ª dilución, añadir 25 g de muestra en 225 ml de medio. Las demás diluciones decimales se hacen añadiendo 1 ml de la dilución anterior en 9 ml de medio, y así sucesivamente. Para Salmonella, se aprovecha la solución madre y se incuba 16-20 horas a 36-38 ºC aproximadamente. Se realizan subcultivos de 0.1 ml en 10 ml de Caldo Rappaport V.Soja (DMT196) y de 1 ml en 10 ml de Mueller Kauffman Tetrationato (DMT086 + VCC4023+VCC4634),. O bien, fuera de Norma, 10 ml en 100 ml de Selenito Cystina (DMT111) ó en 100 ml de caldo Salmonella-Shigella (DMT067).

Ver tambien:

https://www.microkit.es/fichas/BUFFERED-PEPTONE-WATER-granulada.pdf

https://www.microkit.es/monograficos/22-Monograf–a-Neutralizaci–n-de-conservantes-y-aditivos-en-producto-final–para-minimizar-falsos-negativos-en-alimentos.-Otras-soluciones.pdf

Para seguir farmacopea, vea:

https://www.microkit.es/fichas/BUFFERED-PEPTONE-SOLUTION-ClNa-pH7-PHARMACOPEA.pdf

Si desea más información sobre nuestros MEDIOS BUFFERED PEPTONE WATER GRANULADA, rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto . O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16

Si desea dar un paso más y emplear la solución que disminuye un 50% la probabilidad actual de obtener falsos negativos, vea este video:

ASPARAGINE PSEUDOMONAS BROTH

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ASPARAGINE BROTH

Caldo APHA / CENAN para detección y enumeración presuntiva (NMP) de Pseudomonas aeruginosa en aguas embotelladas, refrescos y otras bebidas

DESCRIPCIÓN GENERAL

El ASPARAGINE BROTH es un medio de enriquecimiento selectivo y mineral utilizado para la detección y enumeración presuntiva (NMP) de Pseudomonas aeruginosa en aguas envasadas, bebidas no alcohólicas y otras matrices líquidas, conforme a los métodos recomendados por la APHA y el CENAN.

Su formulación está basada en la asparagina como única fuente de nitrógeno y glicerol como única fuente de carbono, lo que permite el desarrollo selectivo de bacterias no fermentadoras Gram negativas, siendo Pseudomonas aeruginosa la más característica.

COMPOSICIÓN (por litro)

Componente	Cantidad
Fosfato monopotásico	10,0 g
Fosfato dipotásico	1,0 g
Asparagina	2,0 g
Sulfato magnésico	0,5 g

pH final: 7,0 ± 0,2

PREPARACIÓN DEL MEDIO

Disolver 13,5 g de medio en 1 litro de agua bidestilada que contenga 8 ml de glicerol.
Agitar hasta su completa disolución.
Autoclavar a 121 ºC durante 15 minutos.
El medio presenta un color paja-verdoso tras la esterilización.

Para preparar el caldo a doble concentración, disolver 27 g en 1 litro de agua bidestilada con 16 ml de glicerol.

CONDICIONES DE ALMACENAMIENTO

Mantener el bote bien cerrado, en lugar seco, fresco y oscuro.
Agitar antes de usar, para homogeneizar posibles gradientes de densidad.
Uso exclusivo en laboratorio.

Código: DMT346

Aspecto del producto:

Deshidratado: Polvo grueso, color crema.
Preparado: Medio estéril, color paja-verdoso.

CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO

El control de calidad se realiza en nuestro laboratorio. Se recomienda repetirlo en el laboratorio del usuario siempre que cambien las condiciones (p. ej. más de 3 meses sin uso, tras desinfección del laboratorio o exposición a altas temperaturas).

Evaluación del rendimiento (24–48 h a 35–37 ºC):

Microorganismo	Resultado esperado	Observaciones
Pseudomonas aeruginosa MKTA 27853	Correcto	Turbidez evidente
Pseudomonas aeruginosa MKTA 10145	Correcto	Turbidez evidente
Staphylococcus aureus MKTA 6538P	Inhibido	No crecimiento

PRESENTACIÓN DISPONIBLE

Medio deshidratado (para preparación estándar o doble concentración).

PRINCIPIO Y APLICACIÓN

El ASPARAGINE BROTH permite el enriquecimiento selectivo de Pseudomonas aeruginosa al ser un medio estrictamente mineral.

La asparagina actúa como única fuente de nitrógeno.
La glicerina provee la única fuente de carbono disponible.
Los fosfatos estabilizan el pH y aportan la capacidad tampón.
El sulfato magnésico provee iones esenciales para el metabolismo bacteriano.

Solo las bacterias Gram negativas no fermentadoras son capaces de crecer en estas condiciones, lo que permite una detección presuntiva altamente específica.

MODO DE EMPLEO

Preparar tubos o frascos con el medio estéril.
Inocular series de 5 tubos por dilución (Método NMP):
- 10 ml, 1 ml y 0,1 ml de muestra.
Incubar a 35 ºC durante 24–48 horas.
Interpretación presuntiva:
- La aparición de turbidez (con o sin pigmentación fluorescente) indica posible presencia de Pseudomonas aeruginosa o de otros Gram negativos no fermentadores.

CONFIRMACIÓN DE RESULTADOS

Transferir una alícuota de cada tubo turbio a Caldo Acetamida (DMT003).
Incubar y añadir Reactivo Nessler (SDA002):
- Viraje a color amarillo-pardo → Confirmación positiva de Pseudomonas aeruginosa.

Este procedimiento corresponde al protocolo APHA/CENAN para confirmación bioquímica de Pseudomonas aeruginosa mediante hidrólisis de asparagina.

INTERPRETACIÓN

Resultado en caldo Asparagina	Confirmación en Acetamida	Interpretación final
Turbidez +	Amarillo-pardo	Pseudomonas aeruginosa confirmada
Turbidez –	Sin viraje	Negativo o no Pseudomonas
Sin crecimiento	—	Negativo

APLICACIONES PRINCIPALES

Detección y enumeración NMP de Pseudomonas aeruginosa en:
- Aguas embotelladas.
- Refrescos y bebidas no alcohólicas.
- Aguas de procesos industriales y farmacéuticos.

INFORMACIÓN ADICIONAL

Monográfico de Pseudomonas aeruginosa
Ficha técnica relacionada: Cetrimide CN Agar

Correo: microkit@microkit.es
Teléfono: 91 897 46 16

AC BROTH

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AC BROTH es un caldo para realizar el control de esterilidad comercial de alimentos y bebidas envasados y para enriquecimiento de aerobios

COMPOSICIÓN

Peptona de carne 20.0 g
Extracto de carne 3.0 g
Extracto de Levadura 3.0 g
Extracto de Malta 3.0 g
Dextrosa 5.0 g
Ácido ascórbico 0.2 g
(Fórmula por litro)
pH final: 7,2 ± 0,2

MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO, EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO.
PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO. AGITE EL BOTE ANTES DE USAR.

PREPARACIÓN, MODO DE EMPLEO E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

Disolver 34 g de medio en 1 litro de agua bidestilada. Repartir en tubos o frascos y autoclavar a 121ºC durante 15 minutos. El color final del medio es ámbar claro. Mantener entre 15 y 30 °C en oscuridad y si el almacenamiento es prolongado, regenerar calentando al baño María en agua hirviendo sin agitar, para eliminar el aire disuelto, sólo unos instantes para no mermar la calidad de las vitaminas presentes. Inocular la muestra en condiciones asépticas. Incubar a 35ºC durante 7-14 días. Como el ácido ascórbico clarifica el medio, una turbidez mayor a la del frasco control o la presencia de colonias floculadas indica que la muestra no es estéril. Usado en control de esterilidad comercial en productos que no contengan conservantes mercuriales, ya que para aerobios proporciona mejores resultados que el FTM-Tioglicolato. También puede usarse como enriquecimiento de cualquier aerobio, incubando a su temperatura óptima de crecimiento durante 18-48 h.

DESHIDRATADO CÓDIGO: DMT012

CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO AC BROTH

CONTROL DE CRECIMIENTO 24-48 h 37°C aproximadamente:

Staphylococcus aureus MKTA 6538, tras inocular < 100 ufc, crecimiento correcto: turbidez importante
E. coli MKTA 25922, tras inocular < 100 ufc, crecimiento correcto: turbidez importante
Pseudomonas aeruginosa MKTA 9027, tras inocular < 100 ufc, crecimiento correcto: turbidez importante
Streptococcus pyogenes MKTA 19615, tras inocular < 100 ufc, crecimiento correcto: turbidez importante

PRESENTACIÓN:

MEDIO DESHIDRATADO
El usuario es el único responsable de la eliminación de los microorganismos según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.

Si desea más información sobre nuestro AC BROTH o cualquier otro producto no dude en contactar con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es, o en nuestro teléfono 91-897 46 16.

https://www.microkit.es/fichas/AC-BROTH.pdf

ACIDOTERMÓFILOS OSMOTOLERANTES G.P.Y. BROTH

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ACIDOTERMÓFILOS OSMOTOLERANTES G.P.Y. BROTH caldo para detectar microorganismos alterativos resistentes al calor, acidez y presión osmótica

Caldo para recuento total de microorganismos acidotermófilos y osmotolerantes en alimentos. Detecta los heterotrofos osmoacidotolerantes que fermentan la glucosa con producción de gas.

COMPOSICIÓN
Peptona de Carne 5,0 g
Extracto de Levadura 5,0 g
Glucosa 40,0 g (Fórmula por litro)
pH final: Ajustar hasta 3,8 ± 0,2

PREPARACIÓN
Disolver 50 gramos en 1 litro de agua bidestilada. Ajustar pH a 3,8. Calentar, agitando, hasta ebullición, para su total homogeneización.
Añadir 10 ml por tubo con campana Durham. Autoclavar a 121ºC durante 15 minutos. Incubar 2-7 días a la temperatura óptima para los microorganismos buscados, en general 20-35°C. Contar por el método NMP o bien, para detección, dar como positivo todo tubo turbio con gas retenido en la campana.

PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO.
MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO.
AGITE EL BOTE ANTES DE USAR. DESHIDRATADO
CODIGO: DMT223

CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO ACIDOTERMÓFILOS OSMOTOLERANTES G.P.Y. BROTH
Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar laboratorio, tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,…).
DESHIDRATADO: Polvo grueso, Crema PREPARADO: Estéril, Crema Zygosaccharomyces pombe MKTA 24751, Correcto, turbidez y producción de gas.

PRESENTACIÓN: TUBOS 20 ml, FRASCOS 100 ml, MEDIO DESHIDRATADO.

El usuario es el único responsable de la eliminación de los microorganismos según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.

Si desea más información sobre nuestro ACIDOTERMÓFILOS OSMOTOLERANTES G.P.Y. BROTHr o cualquier otro producto no dude en contactar con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es, o en nuestro teléfono 91-897 46 16.

https://www.microkit.es/fichas/ACIDOTERMOFILOS-OSMOTOLERANTES-GPY-BROTH.pdf

CAMPYLOBACTER BLOOD FREE MEDIUM AGAR (BASE) (mCCD Agar)

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CAMPYLOBACTER AGAR BLOOD FREE MEDIUM AGAR

(BASE) (mCCD Agar) es el medio ISO 10272-1 para aislar Campylobacter spp. en alimentos Aislamiento selectivo para Campylobacter s/ ISO 10272-1:2006

COMPOSICIÓN

Extracto de carne                   10,00 g
Peptona de carne                  10,00 g
Triptona                                   3,00 g
Cloruro sódico                         5,00 g
Carbón activo                          4,00 g
Desoxicolato sódico                 1,00 g
Sulfato ferroso                         0,25 g
Piruvato sódico                        0,25 g
Agar‑agar                               13,00 g

(Fórmula por litro) pH final: 7,4 ± 0,2

PREPARACIÓN

Disolver 46 g en 1 litro de agua bidestilada. Calentar hasta ebullición, agitar hasta la completa disolución. Autoclavar a 121 ºC durante 15 minutos. Enfriar a 50 ºC y añadir asépticamente 1 vial de suplemento SKIRROW (SBH020) (mejor que 2 viales de suplemento PRESTON-BOLTON -SLM131-).

PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO. AGITE EL BOTE ANTES DE USAR, PARA ASEGURAR LA HOMOGENEIZACIÓN DE LOS EVENTUALES GRADIENTES DE DENSIDAD DE LOS COMPONENTES. MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO.

DESHIDRATADO CODIGO: DMT184

CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO

DESHIDRATADO: Polvo fino, Negro PREPARADO: Estéril, Negro.

EVALUACIÓN DEL RENDIMIENTO ISO/TS 11133-2(Aplicando el método ISO 10272, 18-72 h a 42 ºC en microaerofilia o el indicado en el Manual MICROKIT actualizado):

Campylobacter jejuni MKTA 29428, con acompañantes (E.coli MKTA 25922 y P.mirabilis MKTA 29906). Tras estriar e incubar, aparecen colonias típicas.

Campylobacter coli MKTA 43478, tras estriar e incubar, aparecen colonias típicas.

Escherichia coli MKTA 25922, inhibido: tras incubar, estriar e incubar, no aparecen casi colonias.

Staphylococcus aureus MKTN 6571, totalmente inhibido: tras incubar, estriar e incubar, no aparece ni una colonia.

Las colecciones TIPO prohiben el uso de su referencia por lo que indicamos la nuestra, directamente trazable a la colección TIPO.

PRESENTACIÓN:

MEDIO DESHIDRATADO BASE + SUPLEMENTOS , TUBOS PREPARADOS INCLINADOS.

NOTA:

Campylobacter jejuni puede contaminar aguas y alimentos, provocando infecciones a menudo mal clasificadas como salmonelosis muy frecuentes en bebés y por contaminaciones cruzadas en la nevera de alimentos crudos con otros ya cocinados. Para su búsqueda en alimentos y aguas, enriquecer 25 g de alimento o 500 ml de agua en Campy Broth (DMT024) + Suplemento PRESTON-BOLTON (SLM131), o bien añadir a 225 ml de Agua de Peptona Tamponada con 25 g de alimento, o a 500 ml del agua, el contenido de un tubo de CAMPY P/A concentrado (RPL332). Incubar 14-48 h a 43°C aproximadamente y sembrar en estría en la placa de Campy Agar.

SIEMBRA

Inocular las placas preparadas sembrando la muestra o el enriquecimiento en estría a fin de aislar colonias. Incubar a durante 24‑48 horas a 43 ºC aproximadamente, en una atmósfera enriquecida en CO2 (5% de Oxígeno y 10% de Anhídrido Carbónico) mediante KKM101 (en jarras de anaerobiosis) o KKM037 (en bolsas), o con el método de la vela de microaerofilia. Normalmente, C. jejuni crece en 24 horas, pero es oportuno reincubar las placas negativas otras 24 horas. La flora acompañante no crece a 43 ºC.

INTERPRETACIÓN

Las colonias de C. jejuni no son hemolíticas y pueden presentarse como grises y planas, con el borde irregular, o bien elevadas y redondas con aspecto mucoso. Este aspecto depende del grado de humedad de la superficie del agar. Confirmar con M-IDENT CAMPYLOBACTER LÁTEX (KMB001).

El usuario es el único responsable de la eliminación de los microorganismos según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.

Si desea más información sobre nuestro MEDIO CAMPYLOBACTER BLOOD FREE MEDIUM AGAR rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto o contacte a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o teléfono en el nº 91-897 46 16.

https://www.microkit.es/fichas/CAMPYLOBACTER-BLOOD-FREE-MEDIUM-AGAR.pdf

AEROMONAS AGAR (BILE SALT IRGASAN BRILLIANT GREEN AGAR)

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AEROMONAS BSI-BGA AGAR

(BILE SALT IRGASAN BRILLIANT GREEN AGAR) es un Agar selectivo para el aislamiento y la enumeración de Aeromonas spp. en alimentos, aguas, ambiente y muestras clínicas.

PREPARACIÓN

Disolver 45,5 gramos en 1 litro de agua bidestilada. Agitar calentando hasta ebullición. No autoclavar! No sobrecalentar! El color final del medio es púrpura. No refundir!

PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO. AGITE EL BOTE ANTES DE USAR, PARA ASEGURAR LA HOMOGENEIZACIÓN DE LOS EVENTUALES GRADIENTES DE DENSIDAD DE LOS OMPONENTES. MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO.

DESHIDRATADO CODIGO: DMT316

CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO

DESHIDRATADO: Polvo grueso, púrpura PREPARADO: Estéril, púrpura
CONTROL DE CRECIMIENTO 18-24 horas a 37°C aproximadamente: Aeromonas hydrophila MKTA 49140, Excelente, colonias rosas traslúcidas de 0,5-3 mm. Pseudomonas aeruginosa MKTA 10662, Excelente, colonias rosas traslúcidas de 0,5-1 mm. Staphylococcus aureus MKT 6571, Inhibido. E.coli MKT 9001, Inhibido.

PRESENTACIÓN: MEDIO DESHIDRATADO.

NOTA:

Basando su selectividad en el verde brillante e irgasan, no inhibe las cepas de Aeromonas sensibles a la ampicilina que es empleada en otros medios.

SIEMBRA E INTERPRETACIÓN:

En muestras clínicas, sembrar en superficie, en estría para aislar colonias. En muestras ambientales de agua, sembrar la membrana filtrada evitando la aparición de burbujas o de pliegues.

Para muestras de alimentos incubar previamente 18-24 horas a 37°C en agua de peptona alcalina (DMT151) y sembrar después un inóculo enriquecido en estría. El uso de este enriquecimiento en la investigación de Aeromonas spp. aumenta su frecuencia de detección hasta en un 40% de los casos.

Incubar 18-24 horas a 37°C.

Examinar las colonias típicas de Aeromonas: rosas y transparentes de 0,5-3 mm de diámetro. Identificarlas mediante la oxidasa (KOT050) y el medio O/F (DMT095):

Aeromonas es oxidasa positiva y muestra ambos metabolismos (oxidativo y fermentativo), mientras Pseudomonas, que también es oxidasa positivo, no tiene metabolismo fermentativo.

También pueden diferenciarse mediante TSI Agar (DMT127) porque Aeromonas crece con fondo ácido (amarillo) y pico alcalino (rojo) o inalterado (naranja), mientras Pseudomonas crece con fondo y pico inalterados (naranja).
Identificar la especie con galerías adecuadas.

NOTA:

Por lo general, las Aeromonas pueden crecer bien sobre los medios de cultivo convencionales en el laboratorio, tales como agar MacConkey, agar Hektoen, agar xilosa-lisina-desoxicolato (XLD), agar Salmonella-Shigella (SS) y agar nutriente sin adición de sales.

Sin embargo estos medios no son selectivos para ellas y los coliformes acompañantes enmascaran y dificultan su detección.

Diferentes medios de cultivo y métodos para el aislamiento de Aeromonas sp. de aguas se han propuesto: (APHA, 1989; Havelaar et al., 1987; Nishikawa y Kishi, 1987; Kersters et al., 1996), Agar Ampicilina Dextrina (ADA), Agar Sangre con Ampicilina (ASA), Agar CIN (Cefsulodina-Irgasan- Novobiocina, originalmenter creado para Yersinia enterocolitica).

Este ultimo permite el crecimiento de la mayoría de las especies y, en algunos estudios, consigue un incremento del 35% en las tasas de aislamiento.

OPTIMIZACIÓN

Sin embargo lo ideal para el estudio de las bacterias pertenecientes a la familia Aeromonadaceae es seguir los esquemas de Janda y col. y Satcher:

se inocula un tubo con agua peptonada alcalina a pH 8,4 (Ref: DMT151), con el fin de incrementar el desarrollo de especies de los géneros Aeromonas y Plesiomonas,

este caldo se incuba a 37°C durante 4 a 6 horas en condiciones de aerobiosis,

al cabo de ese tiempo se siembra en Agar Nutritivo, Agar Ampicilina-Almidón,

Agar Almidón-Sales Biliares-Verde Brillante (BBGS) según Nishikawa y Kishi

o mejor el presente agar Aeromonas Irgasan-Sales Biliares-Verde Brillante (Ref: DMT316), incubando a 37°C, en condiciones de aerobiosis durante 24 a 48 horas.

Se valoran las colonias obtenidas y se purifican las colonias de interés para su identificación bioquímica o molecular (Ref: SFI004+).

El usuario es el único responsable de la eliminación de los microorganismos según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.

Si desea más información sobre nuestro AEROMONAS AGAR (BILE SALT IRGASAN BRILLIANT GREEN AGAR) no dude en contactar con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es, o en nuestro teléfono 91-897 46 16.

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MATRICES IRRADIADAS

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Matrices Crudas Estériles: La Solución para la Validación Microbiológica

Ponemos a su disposición una amplia gama de matrices alimentarias crudas, pero estériles, esterilizadas mediante Rayos Gamma. Esta es la solución que su laboratorio ha estado esperando para realizar validaciones rigurosas y sin incertidumbre.

¿Por qué son Ideales para su Validación?

El desafío al validar métodos microbiológicos radica en mantener la integridad de la matriz cruda mientras se elimina la microbiota natural desconocida. Nuestras matrices lo resuelven:

Conservan las Cualidades Organolépticas: La irradiación con Rayos Gamma esteriliza la matriz sin degradar sus componentes (a diferencia del autoclavado), asegurando que la validación se realice sobre la naturaleza real de la muestra.
Adiós a la Incertidumbre: Al ser estériles, eliminan la flora natural. Usted comienza el experimento con un recuento base cero, lo que facilita el control y la precisión de sus resultados.
Emulación de Condiciones Naturales: Combinadas con nuestras cepas cuantitativas, puede inocular deliberadamente:
- Cepa diana, interferentes y acompañantes: Para emular positivos con flora cercana taxonómicamente, conociendo exactamente el resultado esperado.
- Solo cepas acompañantes: Para emular negativos y validar la especificidad del método.

Argumentos Clave para Entidades de Acreditación

La mayor fuente de incertidumbre en microbiología es el efecto matriz. Nuestras matrices irradiadas proporcionan una base sólida e indiscutible para validar la sensibilidad, especificidad, exactitud y precisión de sus métodos:

Control Total del Inóculo: Permiten demostrar que su método es capaz de detectar la cepa diana incluso frente a una alta concentración de microorganismos interferentes (algo imposible de controlar en una matriz natural).
Validación de Recuentos Totales: Permiten validar métodos de recuento en productos crudos (como carne o huevo) sin que la flora natural incremente falsamente el resultado.
Investigación de Patógenos: Eliminan la necesidad de confiar a priori en un método de referencia (que se pretende validar) para confirmar la ausencia de un patógeno (e.g., Salmonella) antes de inocular.

Información de Pedido y Manipulación

Tema	Detalle
Plazo de Entrega	2-4 semanas desde la recepción y aceptación del pedido en MICROKIT, ya que la irradiación se realiza bajo demanda.
Vida Útil Estimada	Tres meses desde la fecha de irradiación.
Almacenamiento	Mantener a $4-15^{\circ} C$ y en total oscuridad para maximizar la caducidad. No congelar.
Uso	Exclusivo para laboratorio.

Confirmación de Esterilidad (Garantía de Dosis)

La empresa irradiadora garantiza la aplicación de la dosis necesaria ( $10$ ó $25 KGy$ ), pero no la esterilidad absoluta. Para confirmar la esterilidad:

Muestra: Tomar el $10%$ del lote (el contenido de un frasco).
Protocolo: Añadir a $225 ml$ de Caldo Tioglicolato FTM bajo estrictas condiciones de asepsia.
Incubación: Sellar e incubar durante 7 días a $35-37^{\circ} C$ . No agitar durante ni después de la incubación.
Resultado (Confirmación de Esterilidad): El producto se considera estéril si el medio no está rojo más de $1/3$ de la altura de la superficie, y no presenta turbidez ni flóculos.
Nota: La presencia de turbidez o flóculos indica crecimiento. Se debe resembrar el caldo en un medio sólido (PCA) y incubar en aerobiosis y anaerobiosis para identificar el tipo de contaminante.

Para más información y precios actualizados sobre nuestros MATRICES IRRADIADAS, no dude en ponerse en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16.

https://www.microkit.es/fichas/MATRICES-IRRADIADAS.pdf