Método de detección de Yersinia enterocolitica en alimentos

Yersinia enterocolitica, método de detección en alimentos mediante CIN Agar y varias pruebas confirmativas, rápidas y definitivas

 

CIN YERSINIA AGAR (BASE)

Aislamiento de Yersinia enterocolitica s/ISO 10273:2003 tras enriquecer adecuadamente el alimento

 

COMPOSICIÓN

Extracto de carne                    20 g/L

Extracto de levadura                2 g/L

Mannitol                                  20 g/L

Piruvato sódico                        2 g/L

Cloruro sódico                         1 g/L

Sulfato magnésico                    0,010 g/L

Desoxicolato sódico                 0,5 g/L

Rojo neutro                              0,03 g/L

Cristal Violeta                          0,001 g/L

Agar‑agar                                 12 g/L

pH final: 7,4 ± 0,2

 

PREPARACIÓN

Disolver 28,75 g en 500 ml de agua destilada, calentando hasta hervir y agitando. NO AUTOCLAVAR.

Enfriar a 50 ºC y añadir 1 vial de Yersinia Supplement SBH021 (Cefsulodina 0,0015 g/l, Irgasan 0,004 g/l, Novobiocina 0,0025 g/l final de medio), reconstituido con 5 ml de agua destilada estéril.

Mezclar.

PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO

AGITE EL BOTE ANTES DE USAR.

MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO

DESHIDRATADO CODIGO: DMT036

 

CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO

Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar laboratorio, tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,…)

DESHIDRATADO: Polvo fino, Rosa   PREPARADO: Estéril, Rosado

EVALUACIÓN DEL RENDIMIENTO ISO/TS 11133-2 Aplicando el método ISO 10273 o el indicado en el Manual MICROKIT actualizado, 24 h a 30°C aprox:

Yersinia enterocolitica, MKTA27729**, Bueno, colonias translúcidas con centro  color rosa oscuro.

Escherichia coli WDCM00013, Inhibido total o parcialmente.

Staphylococcus aureus WDCM00034, Inhibido total o parcialmente.

Proteus mirabilis MKTA 43071**, Inhibido.

Pseudomonas aeruginosa WDCM00025, Inhibido.

Streptococcus faecalis WDCM00210, Inhibido.

**Las colecciones TIPO prohiben el uso de su referencia por lo que indicamos la nuestra, directamente trazable a la colección TIPO.

 

PRESENTACIÓN

MEDIO DESHIDRATADO BASE Y SUPLEMENTOS.

 

NOTA

El Cefsulodin Irgasan Novobiocin Agar (CIN) es un medio selectivo para aislamiento de Yersinia enterocolítica en muestras clínicas y alimentos. Es el más idóneo para aislamiento selectivo de Y. enterocolítica. Por el sodio desoxicolato, cristal violeta e Irgasan, son inhibidas las bacterias Gram (+), algunas Gram (‑) y las enterobacterias. Sólo algúnas cepas de Citrobacter freundii, Serratia liquefaciens y Enterobacter aglomerans pueden crecer sobre CIN Agar, con un aspecto similar al de Yersinia enterocolítica.

 

SIEMBRA

Sembrar en estría para conseguir colonias aisladas Incubar a 22‑25 ºC aproximadamente durante 48 horas. Si se desea enriquecer la muestra, incubarla previamente durante 28 días a 4 ºC aproximadamente en tubos de agua peptonada tamponada.

 

INTERPRETACIÓN

Yersinia enterocolítica crece con colonias rosa‑púrpura, rodeadas de un borde transparente (colonias en «ojo de buey»). El diámetro de la colonia varía de unas cepas a otras, pero permanece constante para cepas del mismo serotipo.

CONFIRMACIÓN      

Para confirmar en menos de 4 horas Yersinia enterocolitica desde las colonias en ojo de buey en el agar CIN:

1. Oxidasa: Negativa (-). (Para diferenciar de Aeromonas, que también puede crecer en CIN y es Positiva).
2. Urea (Test de ureasa rápido): Positivo (+). Yersinia es una productora potente de ureasa; el viraje a fucsia ocurre en 1-2 horas si sembramos varias colonias en un microtubo con 0,5 mL de caldo Urea.
3. Ornitina (ODC): Positiva (+, violeta). Hacer caldo ODC con Extracto de levadura 5 g/L, L-Ornitina 10 g/L, Glucosa (como disparador del metabolismo) 0,5 g/L, y Púrpura de Bromocresol como indicador 0,01 g/L, ajustar a pH final 6,0. Inocular varias colonias en un microtubo (con 0.5 ml de caldo). Cubrir el caldo con 2 ó 3 gotas de Aceite de Vaselina o Parafina estéril (la descarboxilación de la ornitina requiere condiciones de anaerobiosis)
4. Kligler (KIA) o TSI: Lectura A/A (Pico amarillo / Fondo amarillo) debido a la fermentación de sacarosa y glucosa, sin gas y sin H₂S.

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