EUGON LT100 AGAR

EUGON LT100 AGAR es el agar ISO alternativo al TSA en cosmética, tan solo mejorado por LPT Neutralizing Agar (ISO 100.012)

Agar de uso general para muestras con propiedades antimicrobianas, según las nuevas Normas ISO de microbiología cosmética: NF T75-611 (Poder inhibitorio intrínseco), ISO 21149 (recuento de aerobios), ISO18415 (detección de microorganismos), ISO22718 (Staphylococcus aureus), ISO21150 (E.coli), ISO22717 (Pseudomonas aeruginosa), ISO 18416 (Candida albicans).

COMPOSICIÓN

Triptona 15,0 g
Peptona de soja 5,0 g
L-Cystina 0,7 g
Cloruro Sódico 4,0 g
Sulfito sódico 0,2 g
Glucosa 5,5 g
Lecitina de huevo 1,0 g
Octoxynol 9 1,0 g
Agar-agar 15,0 g

(Fórmula por litro) pH final: 7,0 ± 0,2

PREPARACIÓN

Disolver 47,4 gramos en 1 litro de agua bidestilada que contenga 5 ml de polisorbato Tween 80 (SDA071). Agitar calentando hasta ebullición. Autoclavar a 121° C durante 15 minutos. El color final del medio es crema. No sobrecalentar. Agitar hasta su completa solidificación para evitar grumos.

PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO. AGITE EL BOTE ANTES DE USAR. MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO.

DESHIDRATADO CODIGO: DMT205

CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO:

DESHIDRATADO: Polvo grueso, Crema

PREPARADO: Estéril, Paja

CONTROL DE CRECIMIENTO CUANTITATIVO 48-72 h a 37°C aproximadamente, o bien 3-5 días a temperatura ambiente (21-28°C aproximadamente):

Enterococcus faecalis MKTA 29212, Excelente. Con respecto a PCA estandarizado*, recuento 98-220 %. Si se añadió TTC, colonias blancas y medio naranja alrededor.
Bacillus subtillis MKTA 6633, Excelente Con respecto a PCA estandarizado*, recuento >108-276 %. Si se añadió TTC, colonias anaranjadas o doradas, medio lila alrededor que más tarde vira a naranja.
E.coli MKTA 25922, Excelente, Colonia amarilla, Viraje amarillo. Con respecto a PCA estandarizado*, recuento 63-127 %. Si se añadió TTC, colonias crema o rojas, medio naranja alrededor.
Pseudomonas aeruginosa MKTA 9027, Excelente, Colonia amarilla, Viraje amarillo. Con respecto a PCA estandarizado*, recuento 35-122 %. Si se añadió TTC, colonias rojas o doradas, medio lila alrededor.
Staphylococcus aureus MKTA 6538P, Excelente. Con respecto a PCA estandarizado*, recuento 23-103 %. Si se añadió TTC, colonias anaranjadas, medio naranja alrededor.
Candida albicans MKTA 10231, Excelente, colonias blancas. Con respecto a TSA estandarizado*, recuento 108 %. Si se añadió TTC, colonias blancas o rosadas.

* El que cumple con recuperación superior al 92-125% con respecto a cepas cuantitativas trazables a la cepa tipo. Incertidumbres detectadas entre todos los lotes a lo largo de un año (la mayoría de la incertidumbre se debe a la cepa y a la proporción de cepas acompañantes inoculadas, no al medio).

PRESENTACIÓN: MEDIO DESHIDRATADO.

SIEMBRA E INTERPRETACIÓN

Para aislar microorganismos procedentes de productos cosméticos inhibitorios: Repartir 0,1-0,5 ml del caldo Eugon LT100 Neutralizing Broth (MICROKIT ref. DMT204) enriquecido en la superficie de una placa. Esperar que se absorba e incubar invertida a 35°C ± 2,5 °C, durante 48-72 horas. Observar si hay aparición de cualquier colonia e identificarla.
Para contar aerobios procedentes de productos cosméticos inhibitorios: Sembrar en masa 1 ml de cada dilución decimal realizada en el Neutralizing Diluent SCDLP20 (MICROKIT ref. DMT203). Incubar cada placa invertida a 35°C ± 2,5 °C, durante 72 ± 6 horas.

NOTA: Dados los resultados de los intercomparativos Seilaparfum de microbiología cosmética de los ultimos años, seguiremos recomendando nuestro LPT Neutralizing Agar (DMT066, DMT227, RPL074, TPL0200) y nuestro LPT Neutralizing Broth (DMT217, RPL054, TPL053S), que tan inmejorables resultados proporcionan, aunque nos veamos obligados a fabricar también estos medios Eugon con motivo de las nuevas Normas ISO de microbiología cosmética y la probable ortodoxia que éstas generarán.

https://www.microkit.es/fichas/EUGON-LT100-AGAR.pdf

Solicite la fórmula actualizada (Reach) en microkit@microkit.es

Si desea más información sobre nuestro MEDIO EUGON LT100 AGAR rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto . O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16

Mac CONKEY BROTH PURPLE

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Mac CONKEY BROTH PURPLE es el caldo Farmacopea para enriquecimiento de E.coli y demás coliformes (medio G)
Presunción y enriquecimiento de COLIFORMES (ICMSF,
FDA, APHA, OMS) (ISO 9308-2:1990)

COMPOSICIÓN

De izquierda a derecha: Mac Conkey Broth Purple sin inocular, Salmonella (no amarillo) y E. coli (amarillo).

Digerido pancreático gelatina 20,00 g
Lactosa 10,00 g
Sales biliares 5,00 g
Púrpura de bromocresol 0,01 g
(Fórmula por litro)
pH final: 7,3 ± 0,2

PREPARACIÓN

Disolver 35 g. en 1 litro de agua destilada.
Autoclavar a 121 ºC durante 15 minutos.

PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO.
AGITE EL BOTE ANTES DE USAR.
MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO.

PRECAUCIÓN: CONTIENE SALES BILIARES.

DESHIDRATADO CODIGO: DMT076

CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO

DESHIDRATADO: Polvo grueso, Beige
PREPARADO: Estéril, violeta

CONTROL DE CRECIMIENTO 24-48 h a 37°C aproximadamente:

Enterobacter aerogenes MKTA 9489, Excelente, Acido positivo, amarillo, Con gas.
Escherichia coli MKTA 25922, Excelente, Acido positivo, Con gas.
Salmonella abony MKTN 6017, Bueno, Acido negativo, Sin gas.
Staphylococcus aureus MKTA 6538P, Inhibido.

PRESENTACIÓN: TUBOS 9 ml CON CAMPANA, FRASCOS, MEDIO DESHIDRATADO

NOTA: Medio selectivo para coliformes en agua y alimentos. Medio de enriquecimiento para medicamentos. La fermentación de la lactosa con acidificación (viraje del púrpura al amarillo) y la producción de gas (burbuja en la campana Durham) indican presencia de coliformes.

SIEMBRA

Para enumerar, inocular tubos con campana de acuerdo con la técnica del Número Más Probable o bien frascos para enriquecer. Incubar a 37 ºC aproximadamente, durante 48 horas.

INTERPRETACION

Viraje y gas: Presencia de coliformes y presencia presuntiva de E. coli. Viraje sin gas: Coliformes con baja probabilidad de E. coli. Ni viraje ni gas: Ausencia de coliformes y de E. coli.

El usuario final es el único responsable de eliminar los microorganismos de acuerdo con la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.

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https://www.microkit.es/fichas/Mac-CONKEY-BROTH-PURPLE.pdf

LÍQUIDO K PARA LAVADO DE MEMBRANAS FILTRANTES

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LÍQUIDO K PARA LAVADO DE MEMBRANAS FILTRANTES ACORDE A FARMACOPEA, SOLUCIÓN DE ENJUAGUE FARMACOPEA, RINSE BROTH

Líquido K para lavado de membranas filtrantes para MF acorde con USP y con Farmacopea Europea.

COMPOSICIÓN

Peptona de carne 5,0 g
Extracto de carne 3,0 g

(Fórmula por litro)

pH final: 6.9 ± 0,2

PREPARACIÓN

Disolver 8 g de medio en 1 litro de agua bidestilada que contenga 1 g de polisorbato 80. Autoclavar a 121 ºC durante 15 minutos. El color final del medio es amarillo claro.
PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO.

AGITE EL BOTE ANTES DE USAR

MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO.

DESHIDRATADO CODIGO: DMT189

CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO LÍQUIDO K

Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar laboratorio, tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,…)
DESHIDRATADO: Polvo beige
PREPARADO: Crema-amarillo
CONTROL DE CRECIMIENTO (Tras su uso y colocación de la membrana en TSA, 24-48 h a 37°C aproximadamente):

E. coli MKTA 25922 (Crecimiento correcto)
Bacillu. subtilis MKTA 6633 (Crecimiento correcto)
Staphylococcus aureus MKTA 6538P (Crecimiento correcto)
Pseudomonas aeruginosa MKTA 9027 (Crecimiento correcto)

PRESENTACIÓN: MEDIO DESHIDRATADO
MODO DE EMPLEO E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

Después de filtrar la muestra, enjuagar el filtro tres veces con 100 ml de líquido de lavado de membranas filtrantes. Si la muestra contiene muchos azúcares o grasas, puede duplicarse la concentración de polisorbato (2 g/l).

Ver tambien líquidos de enjuague de membranas A, D y K según USP en frascos estériles 100 ml y frascotes estériles 225 ml

El usuario es el único responsable de la eliminación de los microorganismos según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.

Si desea más información sobre nuestros LÍQUIDO PARA LAVADO DE MEMBRANAS FILTRANTES, rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto . O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16

https://www.microkit.es/fichas/LIQUIDO-PARA-LAVADO-ENJUAGUE-DE-MEMBRANAS-FILTRANTES-Y-ENVASES.pdf

ETHYL VIOLET AZIDE BROTH (EVA LITSKY)

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ETHYL VIOLET AZIDE LITSKY BROTH (EVA) es el caldo clásico confirmativo para detección y recuento de enterococos fecales por la técnica NMP. Confirmación de Estreptococos fecales a partir de caldo Azide Dextrose Rothe.

COMPOSICIÓN

Polipeptona 20,0 g
Glucosa 5,0 g
Cloruro sódico 5,0 g
Fosfato monopotásico 2,7 g
Fosfato dipotásico 2,7 g
Azida sódica 0,4 g

(Fórmula por litro) pH final: 7,0 ± 0,2

PREPARACIÓN

Disolver 35,7 g de medio en 1 litro de agua destilada. Repartir en tubos. Autoclavar a 121 ºC durante 15 minutos.

PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO. AGITE EL BOTE ANTES DE USAR. MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO.

PRECAUCIÓN: La Azida Sódica es tóxica (y explosiva en contacto con plomo). Evitar el contacto con la piel y las mucosas (y no desechar por las cañerías).

DESHIDRATADO CODIGO: DMT053

CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO

DESHIDRATADO: Polvo fino, Beige PREPARADO: Estéril, Ambar

CONTROL DE CRECIMIENTO 48 h a 37°C aproximadamente:

Escherichia coli MKTA 25922, Negativo.
Staphylococcus aureus MKTA 6538P, Negativo.
Enterococcus faecalis MKTA 29212, Correcto, depósito violáceo-anaranjado.
Pseudomonas aeruginosa MKTA 9027, Negativo.

PRESENTACIÓN: MEDIO DESHIDRATADO

NOTA: Medio selectivo para la determinación de los enterococos en el agua, que son índice de contaminación fecal. La Azida Sódica hace el medio selectivo. El medio confirma la presencia de estreptococos fecales procedentes del Caldo ROTHE (Azide Dextrose Broth).

SIEMBRA

De cada tubo positivo de Caldo Rothe se transfiere 1 ml a un tubo de Caldo Litsky y se incuba 48 horas a 37 ºC aproximadamente. Para obtener recuentos, seguir la técnica NMP (9 tubos).

INTERPRETACIÓN

Se consideran positivos los tubos que presentan en el fondo un precipitado de color púrpura- lila o naranja. Los Enterococos (E. faecalis, E. faecium) y los Estreptococos Fecales no Enterococos (S.bovis, S.equinus) son indicadores de contaminación fecal. Si en la muestra no hay coliformes fecales, es que la contaminación fué realizada semanas antes

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https://www.microkit.es/fichas/ETHYL-VIOLET-AZIDE-BROTH.pdf

Mac CONKEY AGAR

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Mac CONKEY AGAR, medio clásico para detección de E.coli y demás coliformes en muestras clínicas y medicamentos (y en cosmética, error ISO)

PHARMACOPEA MEDIO H
Aislamiento y detección de Coliformes (USP, APHA, FDA, ISO 21150 cosméticos)

COMPOSICIÓN

Serratia marcescens (a las 10), E.coli (a las 12, a las 2 y a las 6). Grupo KES (a las 4 y a las 8).

Peptona pancreática de gelatina 17,0 g
Triptona 1,5 g
Peptona de carne 1,5 g
Lactosa 10,0 g
Sales biliares 1,5 g
Cloruro sódico 5,0 g
Rojo neutro 30,0 mg
Cristal violeta 1,0 mg
Agar agar 13,5 g

(Fórmula por litro)
pH final: 7,1 ± 0,2

PREPARACIÓN

Disolver 50 g de medio en 1 litro de agua destilada.
Calentar lentamente hasta ebullición, agitando para su completa disolución.
Repartir en tubos ó frascos.
Autoclavar a 121 ºC durante 15 minutos.

PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO.
AGITE EL BOTE ANTES DE USAR.
MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO.

PRECAUCIÓN: CONTIENE SALES BILIARES.
DESHIDRATADO CODIGO: DMT073

CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO

Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar laboratorio, tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,…)
DESHIDRATADO: Polvo, púrpura
PREPARADO: Estéril, Púrpura
CONTROL DE CRECIMIENTO 24-48 h a 37°C aproximadamente:

Enterobacter aerogenes MKTA 9489, Excelente , Colonias rojas.
Klebsiella oxytoca MKTA 13182, Correcto, colonia roja con precipitado.
Salmonella abony MKTN 6017, Excelente, Colonias incoloras. Con respecto a TSA estandarizado, recuento 100%.
Shigella flexneri MKTA 12022, Bueno, colonias incoloras
Escherichia coli MKTA 25922, Excelente, Colonias rojas con precipitado. Con respecto a TSA estandarizado, recuento 95%.

PRESENTACIÓN: TUBOS 20 ml, FRASCOS 100 y 250 ml, MEDIO DESHIDRATADO.
NOTA: Medio selectivo y diferencial para el aislamiento de las enterobacterias y para la diferenciación entre los coliformes y las enterobacterias patógenas que no fermentan la lactosa con producción de gas (APHA, FDA, USP XXI). Su selectividad se debe a la acción del Cristal Violeta y de las sales biliares.

SIEMBRA

En estría sobre la placa preparada o el tubo de agar inclinado. Con los tubos 20 ml y frascos 100 ml se preparan placas por fusión del medio. Las Placas de Contacto se aplican sobre la superficie problema, un instante y sin mover, o bien se introducen en un aparato para control del aire. Incubar a 37 ºC aproximadamente, durante 16 24 horas.

INTERPRETACIÓN

Los coliformes crecen con colonias rojas rodeadas por un halo de precipitación de las sales biliares, por acidificación. Las otras enterobacterias crecen con colonias incoloras. Proteus no invade la placa. E. coli forma colonias rojo violáceas con halo. Enterobacter aerogenes crece menor que E.coli y sin halo. Salmonella crece incolora.

El usuario final es el único responsable de eliminar los microorganismos de acuerdo con la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.

https://www.microkit.es/fichas/Mac-CONKEY-AGAR.pdf

Si desea más información sobre nuestros Mac CONKEY AGAR, rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto . O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16

Puntos críticos en la detección de Legionella pneumophila: GVPC y BCYE Broth

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Puntos críticos en la detección de Legionella pneumophila: GVPC y BCYE Broth . Temas que crean dudas en la Norma ISO 11731

Puntos Críticos en la Detección de Legionella pneumophila (ISO 11731)

La detección y enumeración de Legionella según la Norma ISO 11731 es un protocolo notoriamente problemático para los laboratorios cuando intentan implantarla, lo que a menudo resulta en una baja sensibilidad (media del 41,61% según SEILAGUA®) o en límites de cuantificación inaceptablemente altos (a menudo $> 200 - 800 UFC/litro$ ).

Hemos identificado cinco puntos críticos que comprometen la fiabilidad del análisis y ofrecemos soluciones probadas para superarlos.

1. Problema: La No-Revitalización de Células Subletales

Tras tratamientos de hipercloración, las células de Legionella (cuya prioridad es el biofilm, no el agua) se encuentran en estado subletal y no son detectadas.

Solución MICROKIT: Hemos diseñado dos caldos revitalizantes concentrados para añadir directamente a 1 litro de muestra de agua, permitiendo que las células se recuperen antes de la filtración:
- Caldo GVPC (Selectivo): Para aguas con alta carga microbiana (e.g., aguas de refrigeración). Disponible también en formato con torundas para rascado de biofilm (Ref: RPL330/TPL016).
- Caldo BCYE (No Selectivo): Para aguas de baja carga microbiana (e.g., potable), donde la flora acompañante es escasa (Ref: TPL017).
Protocolo de Revitalización:
1. Añadir el caldo agitado al litro de agua.
2. Agitar y dejar reposar 18-24 horas a temperatura ambiente ( $18-25^{\circ} C$ ).
3. Importante: No incubar a $35-37^{\circ} C$ , ya que la multiplicación de Legionella impediría el recuento de la flora original.
Resultado Comprobado: El uso de caldo revitalizante aumenta la sensibilidad en la detección hasta un $85%$ , según demuestran los resultados de los servicios intercomparativos SEILAGUA®.

2. Problema: Filtración de 1 Litro en una Sola Membrana

Filtrar 1 litro en una sola membrana genera estrés celular y el riesgo de que la membrana se fisure, resultando en falsos negativos o recuentos muy bajos.

Solución Recomendada: Filtrar el litro de muestra en 4 tandas de 250 ml utilizando membranas separadas.
- Aunque esto aumenta el material, asegura una recuperación significativamente superior de Legionella, tal como validan los participantes de SEILAGUA®.
Consejo para Ahorrar Material: Para reducir el gasto de placas, se pueden colocar dos membranas por placa de $90 mm$ (siempre que las zonas filtradas no se superpongan), reduciendo el requerimiento a solo dos placas por litro de agua.

3. Problema: El Shock Ácido

El tratamiento ácido para eliminar la flora competitiva puede, de forma simultánea, reducir significativamente la viabilidad de Legionella, especialmente si el tiempo de contacto se prolonga.

Solución: En aguas de baja carga microbiana (como las potables), donde el riesgo de flora acompañante es menor, es recomendable omitir el shock ácido para evitar esta pérdida de viabilidad.

4. Problema: La Selectividad Excesiva del Agar GVPC

El medio GVPC Agar es tan selectivo que a menudo inhibe incluso el crecimiento de Legionella. Las cepas certificadas muestran que los recuentos en GVPC son típicamente un logaritmo (factor 10) inferiores a los obtenidos en BCYE.

Solución (Doble Placa): En aguas de baja carga microbiana, se propone utilizar dos placas por litro:
- Una placa de GVPC Agar (selectivo).
- Una placa de BCYE Agar (no selectivo) para alertar sobre una selectividad excesiva en la placa GVPC.
Calidad de los Medios: Es crucial usar placas preparadas de máxima recuperación (como nuestras referencias PPLS30 y PPLS31) en lugar de medios deshidratados o placas económicas, ya que la composición de la ISO 11731 es difícil de optimizar.
Control de Crecimiento (No-Legionella): Para el control negativo de crecimiento (medio donde Legionella no debe crecer), sugerimos utilizar el Nutrient Agar o PCA-Water (YEA), que es más económico y accesible que el BCYE-Cys o el Agar Sangre.

5. Problema: Inmunodetección por Látex (Baja Robustez)

La confirmación serológica de colonias suele realizarse mediante pruebas de látex, que es la técnica inmunológica menos robusta y que ofrece más problemas de sensibilidad. La inmunofluorescencia ya está en desuso.

Solución Rápida y Robusta: Sugerimos el uso de inmunocromatogramas (Rapid Sticks), como los M-Ident Virapid Legionella (Ref: MKTVR2). Esta alternativa ofrece un máximo rendimiento, bajo coste y rapidez superior a las pruebas de látex, tanto en género como en especie, como en serogrupo.

https://www.microkit.es/pdf/legionella-virapid.pdf

https://www.microkit.es/monograficos/9-Legionella-monograf–a.pdf

Mac CONKEY AGAR MUG

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Mac CONKEY AGAR MUG es un medio fluorogénico para detección diferencial de E.coli (fluorescente) de los demás coliformes (no fluorescentes)

Enumeración de coliformes y diferenciación de E.coli en la primera siembra.

COMPOSICIÓN

Peptona de caseina 17,000 g
Peptona de carne 3,000 g
Cloruro sódico 5,000 g
Lactosa 10,000 g
Sales biliares 1,500 g
Rojo neutro 0,030 g
Cristal violeta 0,001 g
MUG 0,100 g
Agar agar 13,500 g
(Fórmula por litro)
pH final: 7,1 ± 0,2

Mac Conkey Agar MUG con E. coli fluorescente (curiosamente rosa en vez de azul) bajo luz U.V. 366 nm.

PREPARACIÓN

Disolver 50 g de medio en 1 litro de agua destilada.
Calentar agitando hasta ebullición Autoclavar a 121 ºC durante 15 minutos.

PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO.
AGITE EL BOTE ANTES DE USAR. MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO.

PRECAUCIÓN: CONTIENE SALES BILIARES.

DESHIDRATADO CODIGO: DMT074

CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO

CONTROL DE CRECIMIENTO 18-24 h a 37°C aproximadamente:

Salmonella abony MKTN 6017, Colonia Incolora sin zona fluorescente.
Bacillus subtilis MKTA 6633, Negativo.
Pseudomonas aeruginosa MKTA 9027, Correcto, colonia incolora sin zona fluorescente.
Escherichia coli MKTA 25922, Correcto, Colonia violeta oscuro con zona fluorescente.
Klebsiella oxytoca MKTA 13182, Correcto, colonia violeta oscura sin zona fluorescente.

PRESENTACIÓN: TUBOS PREPARADOS 20 ml, FRASCOS PREPARADOS 100 ml, MEDIO DESHIDRATADO, DESINFECTEST-EC.

NOTA: El compuesto fluorogénico 4 Metil Umbeliferil Beta D Glucurónido (MUG), añadido al Mac Conkey Agar, permite la detección directa en placa de E. coli. La enzima Beta Glucuronidasa, presente en el 97% de las cepas de E.coli, hidroliza el MUG presente en el medio, liberando el compuesto 4 Umbeliferona, fuertemente fluorescente cuando se observa en la oscuridad bajo luz de 366 nm (Linterna MICROKIT). La mayoría de cepas enteropatogénicas de E.coli son Beta Glucuronidasa +. Miembros del género Citrobacter y del grupo KES (Klebsiella, Enterobacter, Serratia) pueden dar falsos positivos con MUG: Confirmar con la prueba del Indol, que sólo es positiva para E. coli.

SIEMBRA

Preparar placas fundiendo tubos o frascos y sembrar en estría o en masa. Incubar a 37 ºC aproximadamente, durante 18 24 horas. Si se prolonga la incubación no se distinguirán las colonias fluorescentes de las no fluorescentes.

INTERPRETACIÓN

Enterobacterias: Colonias incoloras. Coliformes: Colonias rojas. E. coli: Fluorescencia azul bajo luz U.V. 366 nm (linterna MICROKIT), en la oscuridad. Confirmar con la prueba del indol.

El usuario final es el único responsable de eliminar los microorganismos de acuerdo con la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.

Si desea más información sobre nuestros MEDIO Mac CONKEY AGAR MUG , rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto . O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16

https://www.microkit.es/fichas/Mac-CONKEY-AGAR-MUG.pdf

LEGIONELLA BCYE AGAR

6 respuestas

LEGIONELLA AGAR (BCYE , BCYE -Cys, GVPC…) son los medios de cultivo estándar para la detección y recuento de Legionella

Aislamiento selectivo de Legionella por el método MF o por siembra directa (ISO 11731:1998, ISO 11731-2:2004)

COMPOSICIÓN

Medio BASE (BCYE-Cys):

Carbón activado 2,0 g
Extracto de levadura 10,0 g
Agar Agar 22,0 g
Alfa-ketoglutarato (sal mono-K) * 1,0 g
(Fórmula por litro)
pH final: 6,9 ± 0,1

GVPC Suplemento Selectivo+Nutritivo estéril en solución 200 ml SBL604
Agite contundentemente y añada en asepsia 40 ml a 500 ml de medio enfriado a 50 ºC (o bien 8 ml a 100 ml de medio).

Puede contener precipitados por su elevada concentración pero desaparecen al diluir en el medio BCYE base. c.s.p. 2’5 l de medio.

Contiene las proporciones precisas, según ISO 11731, de: Tampón ACES, -Cetoglutarato, KOH, Clorhidrato de L-Cisteina, Pirofosfato férrico, Vancomicina, Cicloheximida, Polimixina y Glicina.

Contiene elementos tóxicos, evitar el contacto con la piel.

NOTA 1: La ref. SBL605 es idéntica al suplemento GVPC pero sin la Cisteína.

NOTA 2: EL caldo GVPC para preenriquecimiento revitalizador, es idéntico al Agar GVPC pero sin Agar-Agar y con el carbón granulado (ver kit P/A Legionella en tubos preparados, ref.RPL330). Ideal para usar antes de la ISO 11731 y encontrar de forma mucho más sensible y exacta la Legionella.

PREPARACIÓN (conversión del medio deshidratado en medio preparado)

Disolver 17 gramos de medio en 500 ml de agua bidestilada.

Calentar hasta hervir para la total disolución.

utoclavar a 121 ºC, 15 minutos.

El color final del medio es negro.

Enfriar a 45-50 ºC y, para el medio selectivo GVPC, añadir asépticamente 40 ml de Legionella Supplement-200 ml (SBL604, tampón ACES/KOH; nutritivo con -ketoglutarato, clorhidrato de L-cisteina y pirofosfato férrico; y selectivo, con Vancomicina, Polimixina, Cicloheximida y Glicina) ;

para el medio BCYE-Cys, añadir 40 ml de Legionella-Cys Supplement-200 ml (SBL605, tampón ACES/KOH, -ketoglutarato y pirofosfato férrico);

y para el medio BCYE, no son imprescindibles los antibióticos.

Mezclar muy bien y verter 20 ml/placa cuando el medio esté a punto de solidificar, para que la distribución del carbón activo sea lo más homogénea posible.

No sobrecalentar o el agar se volverá demasiado blando: Es posible que sea necesario añadir aún más Agar-agar (BCB006) para minimizar la friabilidad del agar, si se va a sembrar con asa (aceptado en ISO 11731).

PARA USO EXCLUSIVO
EN LABORATORIO.

MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO
EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO.

DESHIDRATADO CODIGO: DMT007

CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO

DESHIDRATADO: Polvo, Negro
PREPARADO: Estéril, Negro.

CONTROL DE CRECIMIENTO 2 semanas a 37°C aproximadamente:

Legionella pneumophila MKTN 12821 serogrupo1, Correcto, colonias gris-azuladas, cristalinas, mucosas, en 2-15 días, en medio suplementado BCYE+GVPC. No crece en medio BCYE base, sin suplemento nutritivo de hierro y cisteína. En el medio BCYE con suplemento nutritivo pero sin antibióticos, crece aproximadamente el doble de población que en el GVPC. Con respecto a PCA estandarizado y suplementado,* recuento 126 %, pero de forma selectiva.
Legionella pneumophila serogrupo 2-15, MKTLeg-2, Idem.
Escherichia coli, MKTA 25922 parcialmente inhibido. Con respecto a PCA estandarizado y suplementado,* recuento 27 %.
Micrococcus luteus MKTA 9341, inhibido.

PRESENTACION: MEDIO DESHIDRATADO (BCYE-BASE) Y SUPL. GVPC, KITS P/A caldo revitalizante, PLAQUIS HERMÉTICAS MF GVPC, FRASCOS PREPARADOS 100 ml (BCYE-BASE) + SUPL. GVPC.

MODO DE EMPLEO E INTERPRETACION DE RESULTADOS

Medio selectivo GVPC:

Inocular una membrana de filtración de 0’22 µm (VAC022, no usar de 0,45 µm), o mejor 0´1 ml de un extracto del fondo del tubo tras la centrifugación a 2500 r.p.m., 20′ de una muestra rascada, o bien 0’1 ml del fondo del caldo de enriquecimiento concentrado (RPL330) sobre una placa.

O aplicar una placa de contacto sobre la superficie, o bien introducirla en un aparato de control de aire.

Preincubar estrictamente 30 minutos a 50 ºC para eliminar la flora competitiva acompañante. Incubar a 35 ºC aproximadamente, en atmósfera húmeda de 2 a 14 días.

Las colonias de Legionella pneumophila son blanco-azuladas, brillantes, mucosas, de 1-2 mm Ø, circulares, lisas, algo elevadas y con los bordes enteros, fluorescentes en la oscuridad bajo luz UVA (linterna MICROKIT).

Subcultivar 3 colonias en BCYE (sin antibióticos) y en BCYE-Cys, al menos 2 días a 36 ± 1°C. Legionella crece en BCYE sin antibióticos (y en GVPC), pero no crece en BCYE-Cys (ni en medios generales tipo agar sangre, PCA, TSA, YEA, Nutrient Agar…).

Las colonias deben confirmarse con oxidasa positivo, a menudo lento (KOT050), catalasa positiva (KMT299) y serotipado (M-IDENT-LEGIONELLA-VIRAPID MKTVR2, QUE PUEDE USARSE DIRECTAMENTE EN EL PRIMER AISLAMEINTO DE GVPC Y AHORRARSE ASÍ EL TIEMPO Y COSTE DE LAS OTRAS PLACAS DE BCYE y BCYE-Cys).

Contar sólo la placa de GVPC con más colonias de Legionella pneumophila. Si no se encuentra, expresar los resultados como “no detectada”, ya que a veces está presente y no crece. Peligro, microorganismos de alto riesgo para inmunodeprimidos, por inhalación de aerosoles (pero no llega a ser de Clase III).

El usuario final es el único responsable de la destrucción de los organismos que se hayan multiplicado, según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.

Si desea más información sobre nuestros MEDIOS LEGIONELLA BCYE AGAR, póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16

https://www.microkit.es/fichas/LEGIONELLA-GVPC-y-BCYE-AGAR-BASE.pdf

https://www.microkit.es/monograficos/9-Legionella-monograf–a.pdf

LB LENNOX BROTH

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LB LENNOX BROTH es un caldo para E.coli, empleado en estudios de biología molecular (ver tambien Terrific Broth)

Enriquecimiento, mantenimiento y propagación de E. coli
en estudios de microbiología molecular

COMPOSICIÓN

Triptona 10.0 g
Extracto de Levadura 5.0 g
Cloruro Sódico 5.0 g
(Fórmula por litro)
pH final: 7,0 ± 0,2

PREPARACIÓN

Disolver 20 g de medio en 1 litro de agua bidestilada. Agitar, calentando hasta ebullición para su completa disolución. Distribuir en tubos o frascos. Autoclavar a 121ºC durante 15 minutos. El color final del medio es ámbar claro, ligeramente opalescente. Incubar el tiempo y Tª adecuados para la cepa, en principio 18-24 horas a 35-44 °C.

PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO.
AGITE EL BOTE ANTES DE USAR
MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO.
DESHIDRATADO CODIGO: BCD095

PRESENTACIÓN: MEDIO DESHIDRATADO

CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO

Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar laboratorio, tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,…)
DESHIDRATADO: Polvo crema
PREPARADO: Blanquecino
CONTROL DE CRECIMIENTO 24-48 h a 37°C aproximadamente:

Escherichia coli MKTA 25922, Excelente
Pseudomonas aeruginosa MKTA 9027, Excelente
Staphylococcus aureus MKTA 6538P, Excelente

El usuario final es el único responsable de eliminar los microorganismos de acuerdo con la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.

Si desea más información sobre nuestros MEDIO LB LENNOX BROTH, rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto . O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16

https://www.microkit.es/fichas/LB-LENNOX-BROTH.pdf

Ver tambien Terrific Broth:

https://www.microkit.es/fichas/TERRIFIC-BROTH.pdf

y LURIA Agar Miller:

https://www.microkit.es/fichas/LURIA-AGAR-BASE.pdf

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ENTEROCOCCUS CROMOKIT AGAR (EPA)

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ENTEROCOCCUS EPA AGAR es el medio de cultivo cromogénico aprobado por la EPA de USA para el recuento de Enterococos fecales en aguas

Agar selectivo y cromogénico para la detección y recuento de enterococos fecales en aguas (MF) y en alimentos, en sólo 24 h (US-EPA).

COMPOSICIÓN

Peptona 10,0 g.
Extracto de levadura 30,0 g
Aesculina 1,0 g
Cicloheximida 0,05 g
Azida Sódica 0,15 g
Cloruro sódico 15,0 g
X-Glucosido 0,75 g
Agar-Agar 15,0 g

(Fórmula por litro) pH final: 7,1 ± 0,2

PREPARACIÓN

Disolver 72 gramos en 1 litro de agua bidestilada. Agitar calentando hasta ebullición. No sobrecalentar! Autoclavar a 121° C durante 15 minutos, acortando los tiempos de enfriamiento. El color final del medio es crema-ámbar.

Si se desea que el medio sea más selectivo, añadir, una vez enfriado a 47°C aproximadamente, justo antes de verter en placas, Ac.Nalidíxico a razón de 0,24 g disueltos en 5 ml de agua estéril que contenga unas gotas de NaOH 0,1 N (para facilitar su disolución).

PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO. AGITE EL BOTE ANTES DE USAR, PARA ASEGURAR LA HOMOGENEIZACIÓN DE LOS EVENTUALES GRADIENTES DE DENSIDAD DE LOS COMPONENTES. MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO.

DESHIDRATADO CODIGO: DMT322

CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO:

DESHIDRATADO: Polvo grueso, Crema PREPARADO: Estéril, Crema

CONTROL DE CRECIMIENTO 18-24 h a 37-41°C aproximadamente:

Enterococcus faecalis MKTA 19433, Excelente, colonias azules, diminutas.
Enterococcus faecium MKTA 9790, Excelente, colonias azules, diminutas.
Pseudomonas aeruginosa MKTA 27853, Inhibido.
Escherichia coli MKTA 25922, Inhibido.

PRESENTACIÓN: MEDIO DESHIDRATADO.

SIEMBRA E INTERPRETACIÓN

Filtrar 100 ml de agua (o bien la cantidad deseada) y colocar la membrana filtrada sobre una placa con medio. O bien sembrar en masa 1 ml de la solución madre del alimento. Incubar a 41°C aprox durante 18-24 horas. Las colonias azules, diminutas, son confirmativas para Enterococos fecales.

NOTA

Medio desarrollado para detección confirmativa en un solo paso, sin necesidad de transferir membranas en dos medios, con la ventaja adicional de permitir el recuento de enterococos fecales en las primeras 18-24 horas. La incubación a 41°C permite la detección más selectiva. La esculina es hidrolizada por los enterococos con formación de esculetina y dextrosa. La cicloheximida inhibe la aparición de levaduras y mohos y la Azida Sódica impide el crecimiento de Gram negativos. El X-Glucósido es el sustrato cromogénico específico para los enterococos glucosidasa positivos.

Medio robusto, diseñado para todo tipo de aguas (potables, envasadas, de baño, incluidas las marinas y las de estuarios, acuarios, cetareas…) e incluso para alimentos y avalado por la US Environmental Protection Agency (EPA).

Si desea más información sobre nuestros MEDIOS ENTEROCOCOS CROMOKIT AGAR, rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto . O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16

https://www.microkit.es/fichas/CROMOKIT-ENTEROCOCCUS-AGAR.pdf

https://www.microkit.es/monograficos/17-Medios-cromog–nicos-monograf–a.pdf

Prepárese para más de una sorpresa informativa cuando vea nuestro video sobre los medios Cromogénicos: https://www.youtube.com/watch?v=-JVPVWxY8ZE&t=271s

Enterococos fecales en Agar EPA de MICROKIT: