Clostridium perfringens en TSC.
Idem en TSC con MUP bajo luz UVA de 366 nm
MUP fosfatasa Clostridium perfringens para la confirmación de colonias sospechosas de Agar TSC en aguas de consumo humano
El MUP (Metil-Umbeliferil Phosfate, Ref: MICROKIT reacciona con las colonias de Cl.perfringens emitiendo fluorescencia azul bajo luz UVA de 366 nm (linterna MICROKIT VMT050).
PRESENTACIÓN
Puede adquirirse el reactivo en polvo (SMT009), para añadir a TSC Agar, o bien ya preparado en PLAQUIS® herméticas de MICROKIT (Ref. PPL929) a las que debería añadirse una segunda capa de TSC Agar fundido y atemperado a 45°C tras depositar la membrana.
PREPARACIÓN DEL REACTIVO EN POLVO:
Disolver 45 g de TSC Agar en 1 l de agua bidestilada. Calentar, agitando, hasta ebullición, para su total homogeneización. Autoclavar a 121 ºC durante 15 minutos o mejor a 116 ºC, 15 minutos.
El color final del medio es crema.
Enfriar a 50 ºC y añadir asépticamente 400 mg de D- Cicloserina estéril (4 viales de 100 mg de SMS252).
Añadir también, por cada 500 ml de medio enfriado a 50°C, 55-100 mg de suplemento MUP (Metil-Umbeliferil Phosfate, que reaccionará con las colonias.
A mayor concentración de MUP, más nitidez se obtendrá en la fluorescencia.
Verter de inmediato en placas y no recalentar. Utilizar de inmediato a su preparación para evitar la letal oxigenación.
PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO. MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO. AGITE EL BOTE ANTES DE USAR.
MODO DE EMPLEO:
Según UNE-EN 26461-2, calentar la muestra 15 minutos a 70-80 ºC.
Filtrar 100 ml de agua a través de 0,22 µm (VAC022).
Añadir en la placa Petri y verter 18 ml del medio enfriado a 50 ºC (y si se desea, preparado a doble concentración), sin que se formen burbujas.
Es preferible sembrar la membrana filtrada entre dos capas de medio, añadiendo la segunda capa a 45-47°C justo antes de solidificar.
Incubar 18-24 (-48) horas a 43-46 ºC aproximadamente, en anaerobiosis.
INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS:
Clostridium perfringens MKTA 13124 crece con colonias negras, pardas o grises, blancas si la anaerobiosis no es correcta, fluorescentes bajo luz UVA de 366 nm gracias al MUP.
PR > 0,7 respecto al número de ufc certificadas e inoculadas en otro lote validado de TSC Agar sin MUP.
Con respecto a TSA recuento 75-252%, variabilidad que depende de la composición y carga de la flora acompañante inoculada.
Precaución:
Una vez añadido el MUP al medio TSC al elaborar las placas, la caducidad es rigurosamente de una semana, si no, pueden obtenerse falsos negativos
MUP fosfatasa Clostridium perfringens para la confirmación de colonias sospechosas de Agar TSC en aguas de consumo humano
https://www.microkit.es/fichas/MUP.pdf
El usuario final es el único responsable de eliminar los microorganismos de acuerdo con la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.
Si desea más información sobre nuestros MUP Metil-Umbeliferil Phosfate rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto . O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16