M-CP AGAR (BASE) con fosfatasa ácida para detección y recuento de Clostridium perfringens en aguas de consumo humano
Medio base para el aislamiento y recuento selectivo de Clostridium perfringens y sus esporas, según Directiva 98/83 CE 3/XI/1998 sobre aguas destinadas al consumo humano, según Real Decreto 1074 18/X/2002 sobre aguas de bebida envasadas y según Real Decreto 140 7/II/2003 sobre calidad de las aguas de consumo humano.
COMPOSICIÓN m-CP Agar
- Triptosa 30,0 g
- Extracto de levadura 20,0 g
- Sacarosa 5,00 g
- Hidrocloruro de L-Cysteina 1,00 g
- Sulfato Magnésico.7 hidrato 0,10 g
- Púrpura de bromocresol 0,04 g
- Agar-Agar 15,0 g
(Fórmula por litro) pH final: 7,6 ± 0,2
En vial pinchable aparte 100 ml (cócktel de suplememtos MICROKIT SMT001):
- D-Cicloserina 400 mg
- Sulfato de Polimixina B 25 mg
- D-Glucosuro de indoxilo (previamente disuelto en 8 ml de agua estéril) 60 mg
- Solución Difosfato de fenolftaleína al 0,5 %, esterilizada por filtración 20 ml
- Cloruro Férrico.6 hidrato al 4,5%, esterilizada por filtración 2 ml
(Fórmula por litro final de medio)
PREPARACIÓN
Disolver 7,1 g de medio en 100 ml de agua destilada. Calentar agitando hasta ebullición. Autoclavar a 121 ºC durante 15 minutos.
Enfriar a 45°C aproximadamente y añadir, pinchando asépticamente, 10 ml del cócktel de suplementos (MICROKIT SMT001).
Si el medio, violeta, ha virado a verdoso o amarillento durante su almacenamiento o fusión, por acidificación atmosférica, es imprescindible ajustar ahora el pH con NaOH 0,1 N hasta que el medio esté violeta.
Agitar bien y verter sobre placas Petri estériles. Dejar solidificar y una vez frío voltear las placas para que el agua de condensación no barra la superficie del medio. Cerrar con cinta de sellado (Ref. MICROKIT: PARAFIL). Las placas que no se vayan a usar en el día se guardan en nevera (8-15°C) y en total oscuridad hasta su utilización (máximo una semana, aunque la oxigenación puede provocar letalidad). De todas formas se recomienda la siembra de la membrana en profundidad antes de añadir el medio a la placa, por lo que es mejor preparar sólo las cantidades de medio que se vayan a consumir en el momento, de ahí el interés de presentar el cócktel de suplementos en vial pinchable.
MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO. AGITE EL BOTE ANTES DE USAR. PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO. MANTENGA EL MEDIO PREPARADO BASE A 15-21°C; Y EL MEDIO COMPLETO Y EL SUPLEMENTO A 8-15°C, EN TOTAL OSCURIDAD.
PRESENTACIÓN: DESHIDRATADO CODIGO: DMT052 Y SUPLEMENTO CÓCKTEL LÍQUIDO PREPARADO EN FRASCO 100 ml, CÓDIGO SMT001
MEDIO COMPLETO PREPARADO EN PLAQUITAS HERMÉTICAS MF, CÓDIGO PPL910. MEDIO COMPLETO PREPARADO EN VERSIÓN LÍQUIDA PARA MF, AMPOLLAS 2 ml, CODIGO FPL602; VIALES PINCHABLES 100ml, CÓDIGO RPL048.
CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO
Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar el laboratorio, tras conservar a alta Tª por fallos de refrigeración, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya llegado la fecha de caducidad teórica de su etiqueta…)
DESHIDRATADO: Polvo gris-violáceo.
PREPARADO: Agar violeta, homogéneo, traslúcido. Suplemento rojizo, translúcido, puede contener precipitados por su elevada concentración, que se disuelven tras agitar y añadir al medio base.
CONTROL DE CRECIMIENTO 24-48 h a 44°C aproximadamente, en anaerobiosis:
- Clostridium sporogenes MKTA 11437, Bueno, Colonias amarillo-verdosas. Con respecto a PCA estandarizado*, recuento 80-213%.
- Clostridium perfringens MKTA 13124, Bueno, Colonias amarillo-verdosas. Con respecto a PCA estandarizado*, recuento 117-255%.
- Bacillus subtillis MKTA 6633, Inhibido
- Staphylococcus aureus MKTA 6538P, Inhibido.
- E.coli MKTA 25922, Inhibido.
* El que cumple con recuperación superior al 92-125% con respecto a cepas cuantitativas trazables a la cepa tipo. Incertidumbres detectadas entre todos los lotes a lo largo de un año (la mayoría de la incertidumbre se debe a la cepa y a la proporción de cepas acompañantes inoculadas, no al medio).
MODO DE EMPLEO E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS m-CP Agar
Sembrar la membrana filtrada evitando la formación de burbujas entre el filtro y el medio. Incubar en estricta ANAerobiosis, 24 horas a 44±1°C. Para detectar las esporas, duplicar la muestra, realizando sobre el duplicado un shock térmico de 5-10 minutos a unos 86 ºC previo a la incubación, a fin de conseguir su germinación.
Medio altamente selectivo para el género Clostridium, y diferencial para Cl.perfringens: sólo Cl.perfringens crece con colonias amarillo-verdosas que, según la bibliografía, viran a rosa tras 30 segundos de exposición a vapores de hidróxido amónico. Hemos comprobado que este viraje a rosa a veces es a azulado o verdoso, en función del nivel de acidificación que provoque la cepa de Cl.perfringens y del ajuste del pH del medio. Sin embargo, una muy superior recuperación se consigue con los medios TSC y TSN (ó TSN+C). Además los vapores de amonio son tóxicos tanto para el usuario como para la cepa, por lo que es mejor confirmar con Lactose Sulfite Broth (DMT140 Medio deshidratado, TPL018 Tubos con campana Durham) s/ UNE EN 13401, o mejor aún con el cómodo M-Ident Clostridium perfringens (KMT008) según ISO/CD 6461-2:2002 de aguas.
El usuario final es el único responsable de eliminar los microorganismos de acuerdo con la legislación medioambiental vigente. Autoclavar o inundar en lejía antes de desechar a la basura.
Si desea más información sobre nuestros M-CP AGAR (BASE) rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto . O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16