Agar Lisina Hierro (LIA): Diferenciación de Salmonella y Arizona
El Lysine Iron Agar (LIA) es un medio de cultivo fundamental en microbiología, diseñado para la confirmación e identificación de Salmonella y Arizona basándose en su capacidad para descarboxilar la L-Lisina. Este medio es un estándar en el control de calidad, siendo referenciado en normativas como UNE-EN ISO 6579:2003.
Su uso es crucial, ya que permite la identificación de cepas de Salmonella y Arizona que podrían dar falsos negativos en el Agar Hierro Kligler (KIA). Por lo tanto, se recomienda su uso en paralelo con el KIA para una identificación completa.
Izda: Sin inocular. Centro y Dcha: Salmonella
Composición Nutricional
La efectividad del LIA reside en su equilibrio entre la L-Lisina, la glucosa (como fuente de carbono) y los indicadores de reacción.
| Componente | Cantidad por Litro (g) | Función Principal |
| L-Lisina | 5.0 g | Sustrato clave para la reacción de descarboxilación. |
| Polipeptona | 5.0 g | Fuente primaria de Nitrógeno y nutrientes. |
| Glucosa | 1.0 g | Fuente de fermentación inicial. |
| Extracto de Levadura | 3.0 g | Aporte de vitaminas y oligoelementos. |
| Citrato Férrico Amoniacal | 0.50 g | Indicador de H2S. |
| Tiosulfato Sódico | 0.040 g | Fuente de azufre para la producción de H2S. |
| Púrpura de Bromocresol | 0.015 g | Indicador de pH. |
| Agar-Agar | 15.0 g | Agente solidificante. |
Fórmula por Litro: pH final: 6.8 +/- 0.2
Preparación y Conservación
Preparación del Medio
- Disolución: Disuelva 29.5 gramos del medio deshidratado en 1 litro de agua bidestilada.
- Homogeneización: Caliente la mezcla agitando hasta alcanzar la ebullición para una disolución completa.
- Esterilización: Autoclave a 121 °C durante 10 minutos.
- Formato: Vierta en tubos para obtener la configuración de tubo inclinado con pico corto.
- Código Deshidratado: DMT179.
Control de Calidad
El medio se presenta como un Polvo fino, color Beige (deshidratado), y como Púrpura Estéril una vez preparado.
| Cepa de Referencia | Reacción del Pico (P) | Reacción de la Base (B) | Producción de H2S |
| Salmonella abony MKTN 6017 | Alcalina (Azul) | Alcalina (Púrpura) | Positiva (+) (Ennegrecimiento) |
| Escherichia coli MKTA 25922 | Alcalina (Azul) | Alcalina (Púrpura) | Negativa (–) |
| Shigella flexneri MKTA 12022 | Alcalina (Azul) | Ácida (Amarilla) | Negativa (–) |
Protocolo de Siembra e Interpretación
Siembra
Siembren la colonia de interés en el LIA siguiendo un doble método:
- Picadura: Introduzca el asa hasta el fondo de la base del agar.
- Estría: Realice un estriado en la superficie inclinada (pico).
Incubación: Incube a 35 – 37 °C aproximadamente, durante 24 horas.
Interpretación de Resultados
El LIA permite evaluar dos reacciones bioquímicas críticas, indicadas por el cambio de color (púrpura de bromocresol) y la presencia de H2S (ennegrecimiento).
1. Reacción de Lisina Descarboxilasa (Base)
- Resultado Positivo (Descarboxilación): El microorganismo descarboxila la Lisina, produciendo aminas y una fuerte alcalinización del medio, que vira el color del fondo a Azul Púrpura. (Típico de Salmonella typhi, Edwarsiella).
- Resultado Negativo: No hay descarboxilación, la fermentación de la glucosa predomina y acidifica el medio, virando el fondo a Amarillo. (Shigella, Citrobacter).
2. Reacción de Desaminasa y Glucosa (Pico)
- Reacción Positiva (Desaminasa): La desaminación de la lisina produce un ácido ceto, lo que acidifica el pico y lo hace virar a Rojo. (Típico de Proteus, Providencia).
- Reacción Negativa: La fermentación de la glucosa y la neutralización por productos alcalinos vira el pico a Azul Alcalino. (Salmonella, E. coli).
3. Producción de Sulfuro de Hidrógeno (H2S)
- La reacción del tiosulfato con el Citrato Férrico produce un Ennegrecimiento a lo largo de la línea de picadura. (Típico de Salmonella, Citrobacter, Edwarsiella).
| Especie | Pico (P) | Fondo (B) | H2S |
| Salmonella | Alcalina (Azul) | Alcalino (Púrpura) | Positivo (+) |
| Proteus | Roja | Ácido (Amarillo) | Negativo (–) |
| Shigella | Alcalina (Azul) | Ácido (Amarillo) | Negativo (–) |
| E. coli | Alcalina (Azul) | Neutro | Negativo (-) |
| Edwarsiella | Alcalina | Alcalino (Púrpura) | Positivo (+) |
| Citrobacter | Alcalina (Azul) | Ácido (Amarillo) | Positivo (+) |
Consideraciones de Uso
- Presentación: Medio Deshidratado.
- Disposición: Mantenga el bote bien cerrado, en lugar seco, fresco y oscuro. Agite antes de usar.
- Responsabilidad: El usuario final debe eliminar los microorganismos cultivados mediante autoclavado antes de su desecho, cumpliendo con la legislación medioambiental vigente.
Si desea más información y precios actualizados sobre nuestro LYSINE IRON AGAR (LIA) póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16