E COLI-COLIFORMES MCC® +/- EN TUBO: NUEVO KIT DE DETECCIÓN Kit para la detección positiva o negativa

Detección rápida E.coli: tubos MCC P/A para control de su presencia o ausencia en 1 gramo ó mililitro de muestra

La detección de E.coli en microbiología alimentaria e industrial es un proceso

necesario y, a menudo, poco sencillo. El Mercado Internacional es rico en kits que identifican E.coli, pero a partir de colonias que han tardado 1 ó 2 días en crecer previamente en medios de cultivo sólidos. Con ello, la confirmación de la presencia/ausencia de E.coli necesita de varias manipulaciones y, además viene a tardar 48-72 horas, tiempo que, a menudo, resulta excesivo en productos perecederos y que obliga a la industria a una fuerte inversión en stock de producto acabado (lotes de 2-3 días esperando el visto bueno microbiológico).

Presentamos el KIT DE DETECCION POSITIVOS/NEGATIVOS elaborado en España por MICROKIT que permite la confirmación de E.coli en las primeras 4‑24 horas a partir de la muestra inicial. Además, permite la detección de coliformes en el mismo tiempo, dato que, a menudo, también exige la legislación de nuestro país. Si necesita hacer recuento de E.coli, nos remitimos a nuestro Kit de Recuento E coli – MUG PLUS (Ver más adelante). También disponemos de viales de 2 ml con caldo MUG PLUS, para la técnica de Filtración de Membrana (FPL400), así como de los medios deshidratados con MUG en caldo y en agar: MICROKIT COLICULT MCC (DMT900-) ( con el que se elabora el Kit E coli MCC +/- en tubo) y MUG PLUS AGAR (DMT400-) (con el que se elabora el KIT de recuento E. coli-MUG-PLUS).

PRINCIPIO, EFECTIVIDAD Y LIMITACIONES

Adicionado a los medios de cultivo selectivos para coliformes, el compuesto fluorogénico 4‑metil‑umbeliferil‑beta‑D‑glucurónido (MUG) posibilita la detección directa de E.coli. El MUG, hidrolizado por el enzima beta‑glucuronidasa, presente en la mayor parte de las cepas de E.coli (97%), libera el compuesto 4‑metil‑umbeliferona, fuertemente fluorescente cuando se observa bajo luz ultravioleta de 366 nm (suministrada en cómoda y económica linterna por MICROKIT).

Todas las cepas analizadas por FENG & HARTMAN (1982, Fluorogenic Assay For Inmediate Confirmation of E.coli, App.Env.Microbiol., 43, 1320) de E.coli enteropatógenos han sido beta-glucuronidasa positivas, incluido el patógeno E.coli O124 que con el método clásico no se detecta, al ser anaerogénico.

Se ha definido a los coliformes como las enterobacterias capaces de fermentar la lactosa produciendo gas. Un método más moderno es el sustrato cromogénico X-Gal, que vira el medio a azul turquesa en presencia de coliformes.

Con el primer componente del kit, los tubos de E.coli MCC +/- Broth MUG, se analiza la fluorescencia (excelente dada la falta de color del medio), y la reacción de coliformes por viraje a azul tras la incubación. El medio no necesita temperatura selectiva de 44,5º durante 24‑48 horas, aunque puede usarse si se desea. Una sóla célula de E.coli queda detectada en menos de 24 horas. Además, se pueden obtener resultados positivos desde las 4 horas de incubación, dependiendo de la concentración inicial de E.coli.

No hay falsos negativos: Se detectan el 100% de las cepas de E.coli enterotoxigénicas, aunque no produzcan gas ni fermenten la lactosa y aunque sean sensibles a altas temperaturas de incubación y a medios selectivos. Se detectan las cepas anaerógenas, que representan el 5% de las cepas de E.coli aislado en alimentos. No interfiere la presencia de Proteus vulgaris, que en las técnicas conveccionales puede suprimir la producción de gas por E.coli. Tampoco interfiere la presencia de otras enterobacterias. Por tanto, NO HAY falsos negativos. El 3% de E.coli es beta-glucuronidasa negativo, por lo que no da fluorescencia, pero virará el medio a azul por ser coliformes.

La debilidad de algunas cepas de E.coli en la emisión de fluorescencia con MUG hace recomendable la utilización del MUG REVELATION REAGENT, que se incorpora en el kit como segundo componente.

Añadiendo una gota a los tubos de E.coli MCC +/- Broth, se realza la fluorescencia de los tubos positivos de forma sorprendente e inmediata.

Según VAIANI et.col. (1985, Identificazione di E.coli su terreni contenenti MUG, Comunicazione Convegno AMCLI Lombarda, Varenna, 21/6/1985), existen cepas de Citrobacter, Klebsiella, Enterobacter, Serratia, Salmonella y Shigella, capaces de dar falsos positivos con MUG, es decir, fluorescencia. Por ello deben confirmarse los caldos fluorescentes con la prueba del indol, incorporada en el kit como tercer componente. Sólo E.coli es indol positivo.

MODO DE EMPLEO

1. Sembrar en un tubo de E.coli MCC +/- Broth:

• 1 ml de la muestra líquida.
• 1 gramo desmenuzado de la muestra sólida.
• 1 membrana de filtración enrollada por la que se hayan filtrado 100‑250 ml de muestra de agua (VAC073)
• 1 escobillón (MICROKIT VSN251) humedecido con agua destilada estéril (MICROKIT TPL001) con el que se haya barrido una superficie de trabajo de 25 cm cuadrados.
• 1 colonia que deseemos identificar.

2. Incubar a 37 ºC durante 18-24 horas (sólo 4-24 h. si partimos de colonia).La turbidez y el viraje a azul son indicadoras de presencia de coliformes.

3. Leer en completa oscuridad con la luz de 366 nm, preferiblemente añadiendo al tubo una gota de MUG REVELATION REAGENT. Este reactivo debe añadirse SIEMPRE que no haya fluorescencia, y cuando la fluorescencia es dudosa.

La presencia de fluorescencia azulada demuestra la presencia de E.coli de forma presuntiva. Un tubo no inoculado sirve como control negativo de fluorescencia. Se adjunta un tubo control positivo de fluorescencia que, aunque no tiene E.coli, sino productos químicos fluorogénicos, no debe abrirse para evitar su contaminación.

La ausencia de fluorescencia tras 24 horas de incubación descarta la presencia de E.coli.

4. Confirmar añadiendo 0,5 ml del reactivo INDOL Kovacs.

La aparición de un anillo rojo cereza en superficie en unos segundos es prueba confirmativa de presencia de E.coli. Es el conjunto de los tres test (viraje de X-Gal a azul, MUG e INDOL) y no cada uno por separado, lo que hace de este kit el método más cómodo, rápido y fiable del mercado para la detección de E.coli.

PRESENTACION

Kit completo de detección +/- de E.coli (KMT099+):

1. 20 tubos de E. coliMCC+/-Broth (TPL637).
2. 1 frasco de 5 ml de MUG REVELATION REAGENT (KBH064).
3. 1 frasco de 5 ml de reactivo INDOL (SDA056).
4. 1 tubo de control positivo de fluorescencia (VMT056).
5. 1 linterna ultravioleta de 366 nm (VMT050).

MATERIAL NECESARIO NO INCLUÍDO:

• Ø Estufa a 35-37 ºC (VRP001), Linterna UVA para E.coli (VMT050).
• ØZona aséptica: Lámpara de alcohol (VLM068) y Envirostéril (VJM002) si no se dispone de cabina de flujo laminar.
• ØCepas de referencia, de trabajo o cuantitativas para validar los reactivos una vez llegados a fábrica o tras almacenamientos prolongados o inadecuados. Como control positivo puede usar una cepa de E.coli (CRIOSTRAIN MKTA 25922).
• ØParticipación en servicios intercomparativos como SEILA para validar los procedimientos y los operarios.

Si se desea, los componentes se proporcionan por separado. Los tubos MCC +/- Broth en pedidos de 200 unidades ó más, resultan mucho más económicos. La caducidad es de un año. La duración del fluorescente de luz ultravioleta de 366 nm es de 100 horas; en la práctica, y por cuestión de ahorro de pilas, de varios años.

Para más información no dude en ponerse en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16

https://www.microkit.es/fichas/MCC-COLICULT-CHROMOFLUOROGENIC-BROTH.pdf?v=2023