COLUMBIA AGAR base sangre Farmacopea Q, microorganismos difíciles, confirmación L.monocytogenes (ISO 11290) y L. pneumophila (ISO 11731)

Detección de microorganismos de crecimiento difícil, recuento total y ambiental, confirmación de Listeria monocytogenes (UNE-EN ISO 11290-1:1997 y UNE-EN ISO 11290-2:2000) y de Legionella pneumophila (ISO 11731:1998 y ISO 11731-2:2002)

COMPOSICIÓN

Aislamiento de microorganismos de crecimiento difícil en Agar Columbia suplementado con sangre de carnero al 5-7%

Digestato pépsico de carne 5,0 g
Digerido pancreático de corazón 3,0 g
Triptona 10,0 g
Extracto de Levadura 5,0 g
Cloruro sódico 5,0 g
Almidón de maiz 1,0 g
Agar-agar 15,0 g

(Fórmula por litro)
pH final: 7,3 ± 0,2

PREPARACIÓN

Disolver 44 gramos de medio en 1 litro de agua bidestilada. Calentar hasta ebullición, agitando, para su total homogeneización. Repartir en tubos o frascos. Autoclavar a 121 ºC durante 15 minutos. Enfriar, Si se desea mayor sensibilidad, enriquecer añadiendo 50-70 ml de sangre estéril desfibrinada de cordero (o caballo….). Evitar cualquier recalentamiento tras la adición de la sangre si no se desea “chocolateada”. Si no se añade sangre también permite el crecimiento de la mayoría de microorganismos.

PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO. AGITE EL BOTE ANTES DE USAR, PARA ASEGURAR LA HOMOGENEIZACIÓN DE LOS EVENTUALES GRADIENTES DE DENSIDAD DE LOS COMPONENTES. MUY HIGROSCÓPICO: MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO

DESHIDRATADO CODIGO: DMT308

CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO

Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar laboratorio, tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,…)
DESHIDRATADO: Polvo, Beige PREPARADO: Estéril, Rojo cereza tras añadir la sangre, ámbar antes de añadirla.
CONTROL DE CRECIMIENTO 24-48 h a aproximadamente 37°C, se añaden comentarios hemolíticos si se añade sangre:

• Escherichia coli MKTA 25922, Bueno, grises, Beta Hemolíticas.
• Enterococcus faecalis MKTA 29212, Bueno, No hemolítico (gamma).
• Streptococcus pyogenes MKTA 19615, Bueno, blancas, Beta Hemolíticas.
• Streptococcus pneumoniae MKTA 6303, Bueno, grises, Alfa-hemolítico
• Listeria monocytogenes MKTA 7644, Bueno, Beta Hemolítico.
• Clostridium sporogenes MKTA 11437, Bueno, grises, hemolíticas o no.

PRESENTACIÓN: MEDIO DESHIDRATADO BASE SIN SANGRE
NOTA: Medio de uso general utilizable para cultivar microorganismos de crecimiento difícil. El suplemento de sangre, además de enriquecer el medio con nutrientes especiales que permiten el crecimiento de los microorganismos más difíciles, permite detectar la actividad hemolítica de los estreptococos, estafilococos y otros microorganismos. Se suele usar de carnero o de caballo, pero cualquiera es válida, incluso la del operario siempre que no tenga enfermedades transmisibles a sus compañeros, o la excedente de un banco de sangre. Aunque es un medio muy rico sin siquiera la adición de sangre. Aún así, puede hacerse selectivo con la adición de diferentes suplementos en microbiología clínica. Resulta ideal para controles de contaminación ambiental, sobre todo en laboratorios farmacéuticos. Y para confirmación de la ausencia de Clostridios en medicamentos, incubando en anaerobiosis a partir del Reinforced Clostridial Medium (DMT307).

SIEMBRA E INTERPRETACIÓN

Sembrar en superficie, en estría o por agotamiento. O bien dejar placas abiertas durante 10-30 minutos, a las que se haya añadido al fabricarlas 1 gota/litro de agente antiburbujas (SBL001) para evitar su desecación durante la exposición.
Incubar a 35 ó 37 ºC aproximadamente, 24-72 horas, aeróbica o anaeróbicamente, en función de los microorganismos buscados. Aislar e identificar las colonias aisladas. Si se añade sangre, las cepas alfa-hemolíticas crecen con colonias rodeadas de un pequeño halo de lísis de sangre. Las beta-hemolíticas, con un gran halo. Las gamma-Hemolíticas, sin halo.

Bacillus thuringiensis en Agar Columbia suplementado con sangre

El usuario es el único responsable de la eliminación de los microorganismos según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.

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