Clostridium perfringens en agua, el kit que de verdad detecta su presencia se llama CLOSTRICULT P/A y se basa en el método Presencia/Ausencia
Laboratorios MICROKIT les ofrece el KIT MICROKIT®P/A-CLOSTRICULT en viales de polvo prepesado. SELECTIVO-ESPECÍFICO-CÓMODO-ECONÓMICO.
El parámetro de ausencia de Clostridium perfringens y sus esporas es fundamental como indicador
de ausencia de enterovirus y protozoos en un agua potable. En los países civilizados adquiere la máxima importancia este parámetro, al haber disminuido drásticamente, gracias a la implantación de los parámetros de control coliformes- E. coli, la transmisión hídrica de enfermedades bacterianas (Vibrio, E. coli O157:H7, Shigella, Salmonella…) y tomar el protagonismo estas otras enfermedades víricas/protozoarias. Afortunadamente, la Directiva Comunitaria Europea 98/83 de 3/12/1998 y los consecuentes R.D. 1074/2002 y R.D.140/2003 le dan gran protagonismo al parámetro “ausencia de Cl.perfringens y sus esporas” en aguas de consumo humano.
Gracias al NUEVO polvo MICROKIT® P/A-CLOSTRICULT, diseñado a partir de caldo en Base a TSC más concentrado, de color paja, (en CLOSTRICULT-1 la base era m-CP con SPS , de color lila, como en el kit-frascos y en CLOSTRICULT-2 era en base a TSC pero menos concentrado), el análisis de ausencia de esporas y formas vegetativas de Cl.perfringens, en aguas potables es ahora posible de la forma más cómoda y fiable conocida. Los viales de polvo irradiado no contienen Tiosulfato Sódico, por ser altamente higroscópico. Si usa éstos en vez del medio preparado, trate la muestra previamente con Tiosulfato.
Añada a 100 ml de agua de muestra, 1 vial de 3g del polvo estéril CLOSTRICULT-3. Cierre el bote y trabaje en condiciones asépticas para no contaminarlo con falsos positivos.
Voltear sin agitar/oxigenar a temperatura ambiente hasta la completa disolución. Si fuese necesario, en muestras de agua muy fría, calentar el conjunto a 25-37°C. No calentar por encima de 37°C, ya que no se requiere ni se debe esterilizar. Si se buscan esporas, realizar un duplicado, que debe calentarse un instante hasta 75°C para que germinen las esporas y mueran las formas vegetativas. Ello, además, facilitará la disolución del polvo. El líquido resultante ya no es lila, como en Clostricult-1, sino ámbar (nuevo medio especial para Cl.perfringens y sus esporas, en vez de ser para todos los Clostridios Sulfito-Reductores) y con precipitado.
Incubar a (37-)44-46°C durante 16-48 horas. El ennegrecimiento del agua desde abajo hacia arriba es prueba de la presencia de Cl.perfringens; si se realizó shock
térmico, es prueba de la presencia de sus esporas. Como todo método, los positivos requieren confirmación (sembrar en estría en m-CP o mejor en TSC e identificar las colonias aisladas). Frascos con el fondo negro en 48h indican presencia de estresados
NOTA: Para acelerar el viraje a negro, añada 1 vial del suplemento estéril VMT136 a cada 100-1000 ml de medio estéril, una vez enfriado a 45-50 ºC.
Presentación: Viales pre-pesados para 100 ml de muestra (FPA902). Frascos preparados con Tiosulfato Sódico y parafina incluidos, para añadir directamente 100 ml de muestra de agua (RPL308).
Material necesario no incluído en los viales de polvo: Tiosulfato Sódico para eliminar el cloro (SMT976), Parafina líquida (SDA081), Bote estéril 100ml (sólo se incluye si se solicita en el pedido) (VML155) o bolsa estéril STAND-UP (B2787B), Estufa o incubador 35-37 ºC (VRP001 ó VMT051). Control de calidad positivo: CRIOSTRAIN Clostridium perfringens MKTA 13124. Límite de detección según nuestra validación interna: 15 ufc (hasta 10 veces más sensible que el método MF). Recomendamos asimismo la participación en servicios intercomparativos como SEILAGUA, para validar los procedimientos y los operarios.
Validación: Realizada durante 7 años de intercomparación de 70 laboratorios de toda España en más de 700 muestras duplicadas. Se demuestra comparado con filtración de membrana en el medio oficial para Clostridium perfringens y sus esporas (mCP Agar y también frente a TSC Agar), una sensibilidad del 77,3 % frente al 14,33% del método oficial y al 56,0% del TSC. Una especificidad del 100% frente al 100% del método oficial y del 95,8% del TSC. Y un límite de detección de 3 a 10 veces más cercano a 1 ufc/100 ml que el método oficial: 2±1 ufc/100 ml con un 85% de detecciones frente a 8±7 ufc/100 ml en TSC Agar con sólo un 40% de detecciones.
NOTA: Los medios de cultivo, bien utilizados con el método P/A o bien con cualquier otro método, son presuntivos, jamás confirmativos (todos y en todas las marcas comerciales). Todo resultado positivo debería confirmarse con pruebas bioquímicas e inmunológicas para obtener resultados precisos. El método P/A es mucho más sensible (tienen muchos menos falsos negativos) que el método MF, pero algunas veces es menos específico (tienen más falsos positivos). Por ello es tan útil como screening negativo, para poder procesar un gran número de muestras. Si el kit da negativo, el resultado es negativo. Pero si el kit sale positivo, hay que confirmar esa muestra aislando en placa e identificando colonias aisladas.
Todos nuestros kits P/A permiten ahorrar 4-8 horas de incubación si, antes de inocularlos, se precalienta a 37°C la muestra de agua en un baño María.
Nuestros kits están validados para uso en aguas continentales, no marinas ni salinas.
Para más información sobre nuestras MICROKIT® P/A CLOSTRICOULT no dude en ponerse en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16
https://www.microkit.es/fichas/P-A-CLOSTRICULT-UE2-2019.PDF?v=2023
https://www.microkit.es/monograficos/21-Monograf–a-M–todos-alternativos-en-Control-microbiol–gico-de-aguas.pdf
No se pierda nuestro vídeo de los viales P/A:
https://youtu.be/6OfsD7zU_8U
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