AGAR TCBS PARA VIBRIO

VIBRIO TCBS AGAR es el medio de cultivo más clásico para detección de Vibrio parahaemolyticus, Vibrio cholerae y demás especies de Vibrio

Selección de Vibrio cholerae (ICMSF, APHA, FDA) y V.parahaemolyticus (ISO 8914:1990 modificada). ISO/TS 21872-1:2007.

COMPOSICIÓN

• Triptona                    10,00 g
• Extracto de levadura   5,00 g
• Tiosulfato sódico      10,00 g
• Citrato sódico           10,00 g
• Cloruro sódico          10,00 g
• Bilis                            8,00 g
• Sacarosa                   20,00 g
• Citrato férrico             1,00 g
• Azul de timol              0,04 g
• Azul de bromotimol    0,04 g
• Agar‑agar                  14,00 g

(Fórmula por litro)

pH final: 8,6 ± 0,2

                       

 

 

 

PRECAUCIÓN: CONTIENE SALES BILIARES.

PREPARACIÓN   

Disolver 88 g de medio en 1 litro de agua destilada. Para vibrios hiperhalófitos ( V. parahaemolyticus, …) puede requerir la adición de otros 20-50 g/l de Agua de Mar (DMT149) o de Cl Na (BCB101).

Calentar agitando hasta ebullición para su disolución. Hervir 1 minuto y enfriar o bien autoclavar a 116 ºC durante 5 minutos, aunque resulta más recomendable el primer método. Añadiendo después TTC (SDA018) cuando el medio se ha enfriado a 45°C, el TCBS es más diferencial.

PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO. AGITE EL BOTE ANTES DE USAR. MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO

DESHIDRATADO CODIGO: DMT119

CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO

Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar laboratorio, tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,…)

DESHIDRATADO: Polvo fino, Crema-verdoso  PREPARADO: Estéril, Verde

CONTROL DE CRECIMIENTO 24-48 h a temperatura ambiente (21-28°C aproximadamente):

• Escherichia coli MKTA 25922, Escaso, colonia translúcida.
• Enterococcus faecalis MKTA 29212, Escaso, Colonias muy pequeñas y amarillas.
• Vibrio cholerae MKTA 14035, Bueno, Colonias amarillas.
• Vibrio parahaemolyticus MKTC 613, Bueno con 30-60 g/l de ClNa, Colonias azules.

PRESENTACIÓN:

FRASCOS PREPARADOS, MEDIO DESHIDRATADO, TUBOS INCLINADOS CON Y SIN 30 g/l ClNa.

Medio selectivo indicado para el aislamiento y el recuento de Vibrio. (ICMSF, FDA, APHA). Por su pH alcalino y su contenido en sales, inhibe el crecimiento de la mayor parte de microorganismos, excepto los halófilos.

 NOTA 1:

-Numerosas especies de Vibrio provocan enfermedades gastrointestinales y sistémicas en el hombre por ingesta de pescados y mariscos crudos o mal cocinados, ya que en el agua raramente alcanzan la dosis infectiva necesaria: V.cholerae, V.parahaemolyticus, V.mimicus, V.fluvialis, V. hollisae, V.furnisii, Otros como V. alginolyticus, V.damsela, V.vulnificus, V.metscnikovii… podrían también estar implicados. Todos ellos son marinos costeros, excepto V.cholerae y V.mimicus que viven en aguas continentales. La mayor frecuencia de sus toxiinfecciones se produce en verano.

 NOTA 2:

-La mayoría de capturas de pescado (hasta el 96%) y marisco (100% de cocinas) costeros en verano contienen V.parahaemolyticus, lo cual no ocurre el resto del año.

El agua del grifo y el vinagre destruyen gran parte de las células presentes en el pescado, por ello es conveniente lavarlos bien bajo el grifo y acidificarlo por debajo de pH 4,5.

El cocinado destruye sus células, desde 15 minutos a 60°C. La refrigeración frena su crecimiento y la congelación incluso lo hace decrecer.

Se deben prevenir las contaminaciones cruzadas de pescado cocinado con pescado crudo, ya que en sólo 10 minutos duplica su población y en unas horas pueden desarrollarse millones. Se concentra en la piel, agallas e intestino de los pescados.

También provoca otitis e infecciones de heridas. Si no se detecta en las matrices indicadas y en verano, a menudo no es por su ausencia sino porque no se pre-enriquece adecuadamente en TSB, de modo que los microorganismos estresados no se manifiestan ni en el caldo de enriquecimiento Alkaline Saline ni en el agar de aislamiento selectivo TCBS.

 NOTA 3:

-Vibrio cholerae incluye el virulento biotipo clásico (que no hemoliza los hematíes de carnero y cabra pero si los de hombre y conejo), y el menos virulento pero pandémico biotipo El Tor (que sí hemoliza los hematíes de carnero y cabra). Aunque en la actualidad la mayoría de casos de esta enfermedad son  leves, puede ser mortal por deshidratación de hasta 20 litros de agua al día en la persona contagiada. También provoca otitis e infecciones de heridas. Se difunde por el agua y alimentos contaminados con ella, sobre todo con las heces de los individuos enfermos. Pero el agua continental es su reservorio natural.

 NOTA 4:

-El TCBS Agar está diseñado para detectar la mayoría de especies de Vibrio, pero no para los otros géneros de la familia Vibrionáceas: Aeromonas spp., Plesiomonas spp. y Photobacterium spp.

 SIEMBRA

Sembrar en superficie las placas, en estria, a partir del enriquecimiento en Alkaline Vibrio Broth (para V.cholerae) o en Vibrio Hipersaline Broth-Alkaline Saline Broth (para V.parahaemolyticus y otras especies halófilas), previamente preenriquecidos en TSB para eliminar el stress (este preenriquecimiento permite la detección un 50% más veces que sin él). Incubar de 18 a 24 horas a 28-35 ºC.

INTERPRETACIÓN

Vibrio cholerae

tipo El Tor forma colonias amarillas por fermentación de la sacarosa (naranjas si se añadió TTC) con viraje del medio a amarillo.

Toda prueba posterior debe realizarse desde colonias repicadas en Nutrient Agar-Vibrio DMT126 o de lo contrario se obtendrán falsos negativos.

Para evitar falsos positivos, recordar que a diferencia de las Enterobacterias, Vibrio cholerae es oxidasa positivo, a diferencia de los Coliformes, es lactosa negativo (aunque indol +) y a diferencia de otros Vibrio, no crece con >6% (60 g/l) de ClNa, pudiendo crecer en absoluta ausencia de ClNa.

Ciertas cepas de Vibrio cholerae se detectan mejor incubando a aproximadamente 28°C, temperatura más acorde con su reservorio natural (peces).

Vibrio parahaemolyticus

no fermenta la sacarosa (excepto cepas especiales, que crecen en TCBS amarillas con centro verde) y crece con colonias verde‑azuladas sin virar el medio, incluso añadiendo TTC.

Es oxidasa +, Lactosa-, Indol +  y crece hasta con 80 g/l de ClNa, no creciendo sin su presencia y teniendo su óptimo crecimiento con 30 g/l.

Vibrio alginolyticus

fermenta la sacarosa y crece en TCBS con grandes colonias amarillas (naranjas con TTC), virando el medio a amarillo.

Es oxidasa +, Lactosa-  y crece hasta con 100 g/l de ClNa, no creciendo sin su presencia y teniendo su óptimo crecimiento con 40 g/l.

Se distingue de V.parahaemolyticus porque en TSAT crece con colonias blancas y pequeñas, ocasionalmente con centro rojo, mientras éste crece con grandes colonias totalmente rojas.

Vibrio vulnificus

no fermenta la sacarosa y crece con colonias verde-azuladas en TCBS. Es oxidasa +, Lactosa +  y crece hasta con 60 g/l de ClNa, no creciendo sin su presencia.

También se distingue de V.cholerae por ser a menudo Lactosa +.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

El usuario final es el único responsable de la eliminación de los microorganismos según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.    

https://www.microkit.es/fichas/TCBS-VIBRIO-AGAR.pdf

Si desea más información y precios actualizados sobre nuestro TCBS VIBRIO AGAR rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto . O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16

https://www.microkit.es/monograficos/14-Vibrio-monograf–a.pdf

 

SULFITE IRON WILSON BLAIR CLOSTRIDIUM AGAR para la detección y recuento de Clostridios sulfito-reductores en alimentos (fórmula anterior a la del SPS Agar)

Detección de Clostridios sulfito-reductores (ISO 15213:2003 en alimentos, UNE 26461-2:1995 para recuento en aguas por Filtración de Membrana)

COMPOSICIÓN

• Extracto de levadura   5,0 g
• Triptona                   15,0 g
• Peptona de soja         5,0 g
• BiSulfito disódico               1,0 g
• Citrato Fe-amónico     1,0 g
• Agar-Agar                15,0 g

(Fórmula por litro)

pH final: 7,6 ± 0,2

PREPARACIÓN

Disolver 42 g de medio en 1 litro de agua bidestilada. Calentar, agitando, hasta ebullición, para su completa homogeneización. Autoclavar a 121 ºC durante 15 minutos. Utilizar de inmediato a su preparación para evitar su oxigenación letal.

NOTA: Para mejorar el desarrollo de colonias negras de Clostridios, añada 1 vial del suplemento estéril VMT136 a cada 100-1000 ml de medio estéril, hervido para desoxigenarlo y una vez enfriado a unos 45-50 ºC.

PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO

MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO. AGITE EL BOTE ANTES DE USAR

LAS PARTÍCULAS PARDAS-NEGRAS, IRREGULARES QUE PUEDEN VERSE, PRECIPITAN AL ENFRIARSE EL MEDIO Y SON BUENAS PARA EL AUMENTO DE SU SENSIBILIDAD, DE ACUERDO CON LAS NORMAS UNE 13401  y UNE-EN-26461. NO CONFUNDIR CON COLONIAS!!!

PRESENTACION: MEDIO DESHIDRATADO, CODIGO: DMT551. TUBOS Y FRASCOS PREPARADOS.

CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO

Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar laboratorio, tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,…)

DESHIDRATADO: Polvo grueso,Amarillo

PREPARADO: Estéril, Beige

CONTROL DE CRECIMIENTO CUANTITATIVO  24 h a 37°C aproximadamente, en anaerobiosis:

• Clostridium sporogenes MKTA 11437,  colonias gris-negras. Con respecto a PCA estandarizado*, recuento >114%, pero de forma más selectiva y diferencial.
• Clostridium perfringens MKTA 13124,  colonias gris-negras. Con respecto a PCA estandarizado*, recuento >270%, pero de forma más selectiva y diferencial.
• Staphylococcus aureus MKTA 6538P, Crece con colonias blancas.
• Escherichia coli MKTA 25922, Inhibido

* El que cumple con recuperación superior al 92-125% con respecto a cepas cuantitativas trazables a la cepa tipo.

NOTA: Es más rápido pero menos selectivo que el SPS Agar.

Medio de Wilson Blair (no confundir con el Bismuth Sulfite Wilson Blair Agar para Salmonella) para la detección y recuento de clostridios sulfito reductores, mejorado para disminuir los falsos negativos.

SIEMBRA

Calentar la muestra 15 minutos a unos 70-80 ºC. Filtrar 100 ml de agua a través de 0,22 µm (VAC022). Añadir en la placa Petri  y verter 18 ml del medio enfriado a unos 50 ºC (y  si se desea, preparado a doble concentración), sin que se formen burbujas. Para siembra directa sin filtración de aguas cloradas, añadir 0,6 g de Tiosulfato sódico para inactivar el cloro. Incubar 16-24 h y 40-48 horas a 36-38 ºC aproximadamente (es más rápido que el SPS)., en anaerobiosis si no se ha quedado la membrana en profundidad.

 INTERPRETACIÓN

Contar las colonias (no nubes) negras. Las colonias blancas o grises son presuntivas si la anaerobiosis no es correcta.

El usuario final es el único responsable de eliminar los microorganismos de acuerdo con la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.

https://www.microkit.es/fichas/SULFITE-IRON-WILSON-BLAIR-CLOSTRIDIUM-ISA-AGAR.pdf

https://www.microkit.es/fichas/SULFITE-IRON-SOLUCION-MADRE-Y-DILUCIONES-CLOSTRIDIUM-AGAR.pdf

Medio similar al SPS Agar

https://www.microkit.es/fichas/SPS-AGAR-polvo.pdf

Si desea más información sobre nuestro SULFITE IRON WILSON BLAIR CLOSTRIDIUM AGAR rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto . O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16

https://www.microkit.es/monograficos/7-Clostridium-perfringens-y-Clostridios-sulfito-reductores-monograf–a.pdf

 

SPS AGAR (Sulfite Polimixin Sulfadiacin Agar)

Medio selectivo para la detección y recuento de Clostridium sulfito-reductores en alimentos y aguas
Métodos AOAC – ICMSF – UNE 13401 – UNE-EN 26461

 

Clostridios sulfito-reductores en SPS Agar

DESCRIPCIÓN GENERAL

El SPS Agar (Sulfite Polimixin Sulfadiacin Agar) es un medio selectivo diferencial utilizado para la detección, aislamiento y recuento de Clostridium sulfito-reductores, incluyendo Clostridium perfringens y Clostridium sporogenes, en alimentos, aguas y muestras ambientales.

Basado en las recomendaciones de la AOAC y del ICMSF, este medio permite la identificación visual de los clostridios por la reducción de sulfito a sulfuro, que reacciona con el citrato férrico produciendo colonias gris-negras características.

Es un medio de alta selectividad y sensibilidad, gracias a la acción combinada de Polimixina B y Sulfadiacina, que inhiben flora acompañante no clostridial.

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COMPOSICIÓN (por litro)

pH final: 7,0 ± 0,1

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PREPARACIÓN DEL MEDIO

1. Disolver 40 g de medio en 1 litro de agua destilada.

2. Calentar agitando hasta ebullición para su completa disolución.

3. Repartir en tubos o frascos.

4. Autoclavar a 121 ºC durante 15 minutos, o preferiblemente a 116 ºC durante 15–30 minutos.

5. Enfriar rápidamente en baño de agua fría.

Recomendación: El autoclavado a 116 ºC es preferible, ya que preserva la sensibilidad del medio.
Utilizar inmediatamente tras la preparación para evitar su oxigenación, que resulta letal para los clostridios.

Suplemento opcional: Para potenciar la formación de colonias negras, añadir 1 vial del suplemento estéril VMT136 por cada 100–1000 ml de medio estéril, hervido y enfriado a 45–50 ºC.

Nota: Las partículas negras que pueden aparecer al enfriar son normales y aumentan la sensibilidad del medio, conforme a las normas UNE 13401 y UNE-EN 26461.

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CONDICIONES DE ALMACENAMIENTO

• Uso exclusivo en laboratorio.

• Mantener el bote bien cerrado, en lugar seco, fresco y oscuro.

Código: BCD901
Aspecto del producto:

• Deshidratado: Polvo beige.

• Preparado: Medio estéril, color crema-blanquecino.

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CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO

El control de calidad se realiza en nuestro laboratorio. Se recomienda repetirlo en el suyo si han cambiado las condiciones ambientales (tiempo prolongado sin uso, altas temperaturas, desinfección reciente, etc.).

Ensayo de rendimiento (24 h a 37 ºC en anaerobiosis)

* PCA estandarizado con recuperación ≥92–125 % respecto a cepas trazables a la colección tipo.
Las variaciones detectadas entre lotes se deben principalmente a las cepas inoculadas, no al medio.

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PRESENTACIÓN DISPONIBLE

• Tubos preparados (parafinados de 9 ml o sin parafina de 18 ml)

• Frascos parafinados de 50 ml (doble concentración)

• Frascos de 100 ml y 250 ml

• Medio deshidratado

• Tubo y frasco de SPS Agar parafinado

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SIEMBRA Y CONDICIONES DE INCUBACIÓN

Método recomendado: Siembra en profundidad (placas, tubos o frascos).

1. Para detectar esporas, calentar la muestra a 98 ºC, enfriar a 75 ºC y añadir 1 ml al tubo o frasco con el medio fundido.

2. Mezclar suavemente (sin agitar) para evitar oxigenación.

3. Enfriar en posición vertical (en tubos parafinados, la parafina solidifica en la superficie, creando anaerobiosis).

4. Para detección en aguas, usar frascos parafinados a doble concentración e inocular 20–50 ml de muestra.

5. Incubar a 35–37 ºC durante 24 horas en anaerobiosis.

Alternativa práctica: Inocular 1 ml sobre un tubo hervido y enfriado a:

• 75 ºC → detección de esporas

• 45 ºC → detección de formas vegetativas

Cerrar, voltear sin agitar, incubar en vertical y contar directamente las colonias negras que crecen en anaerobiosis (excepto los 3–5 mm superiores, oxigenados).

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INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

• Colonias negras: Clostridium sulfito-reductores confirmados.

• Colonias blancas: Presuntivas (anaerobiosis insuficiente).

El ennegrecimiento del medio se debe a la reducción del sulfito sódico a sulfuro, que precipita con el citrato férrico, generando un color gris o negro característico.

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GESTIÓN DE RESIDUOS

El usuario final es responsable de eliminar los microorganismos conforme a la legislación medioambiental vigente.
Autoclavar los materiales antes de su eliminación.

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INFORMACIÓN ADICIONAL

Monográfico sobre Clostridium perfringens y clostridios sulfito-reductores (PDF)
Correo: microkit@microkit.es
Teléfono: 91 897 46 16

Esquema sobre el uso de los tubos de SPS Agar parafinados, realizado en 1989

SPS (SULFITE POLIMIXIN SULFADIACIN) AGAR GRANULADO es el medio más empleado para recuento de clostridios sulfito-reductores en alimentos

Detección de clostridios sulfito‑reductores (AOAC,ICMSF)

COMPOSICIÓN

• Peptona de caseina    15,00 g
• Extracto de levadura 10,00 g
• Citrato de Hierro       0,50 g
• Sulfito sódico            0,50 g
• Polimixina‑B sulfato 0,01 g
• Sulfadiacina sódica    0,12 g
• Agar‑agar                  13,90 g

(Fórmula por litro)

pH final: 7,0 ± 0,1

PREPARACIÓN

Disolver 40 g de medio en 1 litro de agua destilada. Calentar agitando hasta ebullición para su completa disolución.

Repartir en tubos o frascos. Autoclavar a 121 ºC durante 15 minutos, o mejor a 116 ºC durante 15-30 minutos. Enfriar rápidamente el medio en un baño de agua fría. El uso a [2] es más recomendable. Utilizar de inmediato a su preparación para evitar su oxigenación letal.

NOTA: Para mejorar el desarrollo de colonias negras de Clostridios, añada 1 vial del suplemento estéril VMT136 a cada 100-1000 ml de medio estéril,  hervido para eliminar la oxigenación y una vez enfriado a unos 45-50 ºC.

PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO

MANTENER EL BOTE BIEN CERRADO EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO.

DESHIDRATADO CODIGO: DMT116

CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO

Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar laboratorio, tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,…)

DESHIDRATADO: Granulado, Beige

PREPARADO: Estéril, Crema-blanquecino

CONTROL DE CRECIMIENTO CUANTITATIVO 24 h a 37°C aproximadamente, en anaerobiosis:

• Clostridium sporogenes MKTA 11437,  colonias gris-negras. Con respecto a PCA estandarizado*, recuento 240-347%, pero de forma más selectiva y diferencial.
• Clostridium perfringens MKTA 13124,  colonias gris-negras. Con respecto a PCA estandarizado*, recuento 110-420%, pero de forma más selectiva y diferencial.
• Staphylococcus aureus MKTA 6538P, Inhibido.
• Escherichia coli MKTA 25922, Inhibido

* El que cumple con recuperación superior al 92-125% con respecto a cepas cuantitativas trazables a la cepa tipo. Incertidumbres detectadas entre todos los lotes a lo largo de un año (la mayoría de la incertidumbre se debe a la cepa y a la proporción de cepas acompañantes inoculadas, no al medio).

PRESENTACIÓN: TUBOS PREPARADOS (PARAFINADOS-9 ml O NO-18 ml), FRASCOS 50 ml A DOBLE CONCENTRACION PARAFINADOS, FRASCOS 100 y 250 ml, MEDIO DESHIDRATADO.

Selectivo para aislamiento/recuento de clostridios sulfito reductores. La reducción del sulfito ennegrece las colonias

SIEMBRA

En profundidad en placa con tubos y frascos fundidos, o en el propio tubo/frasco; incluso las membranas de MF, que se depositan entre 2 capas. Para esporas inocular tubos parafinados, calentando a unos 98 ºC, dejando enfriar a unos 75 ºC y añadiendo entonces 1 ml de muestra. Voltear sin agitar para mezclar con el medio y enfriar en posición vertical (para que la parafina solidifique en superficie en los tubos parafinados). Para buscar esporas en aguas, actuar igual pero con frascos parafinados a doble concentración y añadiendo 20‑50 ml de muestra. Incubar en anaerobiosis (los tubos, tubos parafinados y frascos parafinados no lo necesitan) a 35‑37 ºC aproximadamente, durante 24 horas.

INTERPRETACIÓN

Contar los puntos negros que aparezcan como clostridios sulfito‑reductores. Las colonias blancas son presuntivas si la anaerobiosis no es correcta.

El usuario final es el único responsable de la eliminación de los microorganismos según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.        

Si desea más información sobre nuestros SPS (SULFITE POLIMIXIN SULFADIACIN) AGAR GRANULADO rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto . O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16

https://www.microkit.es/monograficos/7-Clostridium-perfringens-y-Clostridios-sulfito-reductores-monograf–a.pdf