SULFITE IRON WILSON BLAIR CLOSTRIDIUM AGAR para la detección y recuento de Clostridios sulfito-reductores en alimentos (fórmula anterior a la del SPS Agar)
Detección de Clostridios sulfito-reductores (ISO 15213:2003 en alimentos, UNE 26461-2:1995 para recuento en aguas por Filtración de Membrana)
COMPOSICIÓN
- Extracto de levadura 5,0 g
- Triptona 15,0 g
- Peptona de soja 5,0 g
- BiSulfito disódico 1,0 g
- Citrato Fe-amónico 1,0 g
- Agar-Agar 15,0 g
(Fórmula por litro)
pH final: 7,6 ± 0,2
PREPARACIÓN
Disolver 42 g de medio en 1 litro de agua bidestilada. Calentar, agitando, hasta ebullición, para su completa homogeneización. Autoclavar a 121 ºC durante 15 minutos. Utilizar de inmediato a su preparación para evitar su oxigenación letal.
NOTA: Para mejorar el desarrollo de colonias negras de Clostridios, añada 1 vial del suplemento estéril VMT136 a cada 100-1000 ml de medio estéril, hervido para desoxigenarlo y una vez enfriado a unos 45-50 ºC.
PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO
MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO. AGITE EL BOTE ANTES DE USAR
LAS PARTÍCULAS PARDAS-NEGRAS, IRREGULARES QUE PUEDEN VERSE, PRECIPITAN AL ENFRIARSE EL MEDIO Y SON BUENAS PARA EL AUMENTO DE SU SENSIBILIDAD, DE ACUERDO CON LAS NORMAS UNE 13401 y UNE-EN-26461. NO CONFUNDIR CON COLONIAS!!!
PRESENTACION: MEDIO DESHIDRATADO, CODIGO: DMT551. TUBOS Y FRASCOS PREPARADOS.
CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO
Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar laboratorio, tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,…)
DESHIDRATADO: Polvo grueso,Amarillo
PREPARADO: Estéril, Beige
CONTROL DE CRECIMIENTO CUANTITATIVO 24 h a 37°C aproximadamente, en anaerobiosis:
- Clostridium sporogenes MKTA 11437, colonias gris-negras. Con respecto a PCA estandarizado*, recuento >114%, pero de forma más selectiva y diferencial.
- Clostridium perfringens MKTA 13124, colonias gris-negras. Con respecto a PCA estandarizado*, recuento >270%, pero de forma más selectiva y diferencial.
- Staphylococcus aureus MKTA 6538P, Crece con colonias blancas.
- Escherichia coli MKTA 25922, Inhibido
* El que cumple con recuperación superior al 92-125% con respecto a cepas cuantitativas trazables a la cepa tipo.
NOTA: Es más rápido pero menos selectivo que el SPS Agar.
Medio de Wilson Blair (no confundir con el Bismuth Sulfite Wilson Blair Agar para Salmonella) para la detección y recuento de clostridios sulfito reductores, mejorado para disminuir los falsos negativos.
SIEMBRA
Calentar la muestra 15 minutos a unos 70-80 ºC. Filtrar 100 ml de agua a través de 0,22 µm (VAC022). Añadir en la placa Petri y verter 18 ml del medio enfriado a unos 50 ºC (y si se desea, preparado a doble concentración), sin que se formen burbujas. Para siembra directa sin filtración de aguas cloradas, añadir 0,6 g de Tiosulfato sódico para inactivar el cloro. Incubar 16-24 h y 40-48 horas a 36-38 ºC aproximadamente (es más rápido que el SPS)., en anaerobiosis si no se ha quedado la membrana en profundidad.
INTERPRETACIÓN
Contar las colonias (no nubes) negras. Las colonias blancas o grises son presuntivas si la anaerobiosis no es correcta.
El usuario final es el único responsable de eliminar los microorganismos de acuerdo con la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.
Medio similar al SPS Agar
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