MYCOKIT-PLUS: VIALES P/A HONGOS (CALDO CROMOGÉNICO)

MYCOKIT-PLUS: VIALES P/A HONGOS (CALDO CROMOGÉNICO)

El método P/A (Presencia/Ausencia) fue inventado durante la segunda guerra mundial para evitar que los soldados murieran por beber aguas contaminadas. Desde la década de los 1990, MICROKIT ha ido desarrollando numerosos Kits P/A cromogénicos para control de patógenos en aguas. Estos kits no sólo triunfan en todo el mundo gracias a las ONG que trabajan en la mejora del agua de bebida de los países tropicales, sino que además están reconocidos como el método más fiable, de acuerdo con sus numerosas validaciones y participaciones en servicios intercomparativos. Se pueden emplear en trabajo de campo y en el laboratorio y ahorran tanto el trabajo de filtración de membrana (MF) o de NMP, como su coste. Con ellos se puede decir

¡de la muestra a la estufa en 10 segundos!

 

MODO DE EMPLEO Y LECTURA DE RESULTADOS:

  • Se agrega 1 vial a los 100 mL de muestra de agua (ó 2 viales a los 250 mL, ya que el medio funciona perfectamente incluso a la mitad y al doble de la concentración indicada), vial que contiene pre-pesado el medio cromogénico estéril adecuado para los hongos en 100 mL de muestra líquida. Agitar para homogeneizar. Si el agua es clorada, añadir el tiosulfato sódico correspondiente para neutralizarlo.
  • Se incuba 2-3 días a 25ºC con una buena cámara de aire o con el tapón del recipiente sin cerrar, para que entre oxígeno del aire exterior
  • Si no ha cambiado de amarillo a color verdoso, se demuestra la ausencia de levaduras y mohos (sin falsos negativos) y si ha cambiado a cualquier gama del verde (depende de la actividad metabólica de cada cepa de levadura o de moho), se demuestra su presencia (sin falsos positivos, gracias al Cloranfenicol).

Así de sencillo. Y más efectivo que ningún otro método. Porque el método P/A no estresa los microorganismos como sucede con la MF, que obtiene recuperaciones muy deficientes. ¡Se acepta en la bibliografía internacional que cerca del 21% de las aguas que contienen coliformes-E.coli, cerca del 33 % de las aguas que contienen Pseudomonas aeruginosa y cerca del 49 % de las aguas que contienen Clostridios no son detectadas como positivas mediante el método MF!

 

 

 

 

 

Ventajas frente al clásico Hongos P/A (liquido rosa) de MICROKIT: Mayor rapidez de resultados (2-3 días), ya que la actividad metabólica (viraje a verde) se ve mucho antes que el crecimiento celular (turbidez, flóculos en 3-7 días), crecimiento que no obstante, también sirve aquí como confirmativo y para posterior identificación de la cepa. El medio cromogénico es igual de selectivo para hongos que el clásico, al incluir la cantidad adecuada de cloranfenicol.

 

PRESENTACIÓN: Caja de 40 viales, cada uno con 4 gramos de caldo en polvo cromogénico estéril para hongos (levaduras y mohos) en 100 mL de muestra líquida, Ref: FPA950, con ¡3 años de caducidad!

Si desea más información sobre nuestro MYCOKIT-PLUS rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto . O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16

LISTERIQUICK

LISTERIQUICK

Detección rápida y fiable de Listeria monocytogenes en alimentos

 

 

 

 

 

INTRODUCCIÓN:    El método ISO 11290 tiene como desventajas la lentitud de obtención de resultados y la no neutralización de los conservantes de la muestra, que conlleva a resultados falsamente negativos. En dicha Norma se realiza un pre-enriquecimiento revitalizador de 25 g de la muestra, 18-24 h a 30-35ºC en 225 ml de Caldo Semifraser. Al día siguiente se toma una alícuota (0,1 ó 1 mL) y se incuba en un post-enriquecimiento selectivo en 10 ml de Fraser Broth otras 18-24 h. Y de ahí se estría en placas de medio cromogénico Ottaviani & Agosti (que destronó al Oxford y al Palcam, que daban excesivos falsos positivos), incubando otras 18-24 h. De modo que todas las muestras (incluso las negativas) llevan un mínimo de 3 días (72 h) de demora en la obtención de los resultados presuntivos. Se emplean en total 3 medios y 4 suplementos de los cuales dos (Semifraser y Fraser) viran presuntivamente a negro con una proporción impresionante de falsos positivos y de falsos negativos, por lo que hay que seguir hasta el final. Otro que se emplea en otros protocolos, el BPW, no inactiva los conservantes, ni los metabolitos creados por la flora acompañante, permitiendo la aparición demasiado a menudo de resultados falsamente negativos.

LISTERIQUICK ha sido diseñado por Laboratorios MICROKIT, en 4 años de estudios tras el diseño de su homólogo Salmoquick, basándose en la Norma ISO 11290 pero optimizándola; el método varía, ahorrando 2 suplementos y acortando el tiempo de obtención de resultados a menos de dos días, sólo 36 horas! En este caso se realiza el pre-enriquecimiento revitalizador (e inactivador de conservantes y de metabolitos generados por el resto de la flora acompañante, que podrían interferir en el crecimiento de Listeria en un sinfín de matrices alimentarias) de 25 g de la muestra en 225 ml de Agua de Peptona Tamponada Neutralizante (BPNW), 20-30 minutos a temperatura ambiente. Se añaden al mismo 18 ml de LEB Broth a [x5] (una optimización del Fraser), se mezcla y se incuba el conjunto 18 h a 30-35ºC, constituyéndose así en un solo paso la revitalización de las Listeria dañadas, la inactivación de los graves problemas que no contempla la ISO 11290 y el aumento de la selectividad para la multiplicación de las Listeria presentes. En este medio mixto, las muestras con Listeria enturbian el caldo, por lo que de entrada en las primeras 18h ya tenemos una alerta de posible presencia de Listeria si el caldo está turbio. Pero otras bacterias también pueden crecer, por lo que hay que continuar con el segundo paso: Al día siguiente se estría en placas de Cromocytogenes (Ottaviani & Agosti) Agar, incubando otras 18h. De modo que las muestras sin crecimientos típicos de Listeria monocytogenes (colonias verdes con halo) son liberadas en sólo 36h.

PRECAUCIÓN: La validación de LISTERIQUICK ha sido realizada con los medios indicados, y de la marca MICROKIT. Cualquier variación sobre los medios o la marca invalida nuestra validación, de hecho este protocolo se ha probado y ¡NO FUNCIONA con BPW, ni con Fraser, ni con LEB de otras marcas, ni con Ottaviani & Agosti Agar + suplementos de otras marcas! Verificar si todo funciona bien en muestras de pollo, ya que en la validación retrasaban 18 h los resultados (también en el método ISO).

LISTERIQUICK es una herramienta simple, rápida y fiable, diseñada especialmente para simplificar y agilizar al máximo el control de alimentos con contaminación por Listeria, que es uno de los puntos más críticos y que más retrasan la liberación del lote en la industria alimentaria.

SIMPLE: Ahorra un medio de cultivo de dudosa utilidad (Semi-Fraser) y los dos suplementos del Fraser por los más modernos y eficientes medios que no necesitan suplemento alguno (BPNW y LEB Broth).

RÁPIDA: De la muestra a la liberación del lote en sólo 36 horas (frente a las 72 h habituales).

FIABLE: Validado en base a la Norma UNE-EN-ISO 16140 por el método de pares frente a la Norma ISO 11290, con inóculos muy bajos de distintas cepas de Listeria, variada flora interferente, matrices de todo tipo y 100% de eficiencia (ver publicación en bibliografía). Cuidado con las muestras de pollo.

Se presenta de dos formas: como kit preparado y listo para usar y como un conjunto de los 3 medios de cultivo deshidratados y suplementos necesarios para que el mismo laboratorio se lo pueda preparar.

  1. LISTERIQUICK-Estéril, Ref: KMT040: kit listo para emplear, incluye los 3 medios necesarios para detección rápida de Listeria (en sólo 36h), en presentación estéril y lista para su uso. 4×20 Tubotes prepesados y estériles BPNW (Ref: KBB002, con Cad: 2 años desde fabricación) para añadir a 225 ml de agua estéril, 4×20 tubos LEB Broth 18 ml [x5] (Ref: TPL0335, con Cad: 1 año desde fabricación) para añadir 25 minutos después al anterior, 2×45 Plaquis herméticas Cromocytogenes suplementadas (Ref: PPL970, con 6 meses de caducidad el día de su envío, para analizar al menos 14 muestras/mes). Ninguno de los componentes necesita nevera. Conservar en lugar fresco y seco, con una temperatura de entre 5ºC y 25ºC, eso sí, al abrigo de la luz. No congelar. Kit de 80 test (Emplee las 10 plaquis que le sobran para duplicados, verificaciones… no se le han cobrado)

 

 

 

 

  1. LISTERIQUICK-Iniciación, Ref: KMT041: conjunto de los 3 medios deshidratados y doble suplemento del agar, necesarios para detección rápida de Listeria (en sólo 36 h), para que cada laboratorio se lo prepare: 1x 500g BPNW (Ref: DMT011, para hacerse 62 frascos o bolsas Stomacher con 225 ml), 1x500g LEB Broth (Ref: DMT070, para hacerse 154 tubos de 18 ml a [x5], 1x500g Cromocytogenes Agar Ref: DMT700 Ref: SMT700+ (para hacerse 355 placas de 20 mL ó 473 placas de 15 mL) y su doble suplemento SMT700+ (para hacerse 250 placas de 20 mL ó 33 placas de 15 mL). En conjunto es más económico (2,31 €/test) que la adquisición de cada uno de los 3 medios por separado (3,13 €/test), para que el laboratorio se inicie en este método y pueda pedir después por separado los medios conforme vaya necesitando cada uno (Para alcanzar el mínimo precio de 2,31 €/test, pida 10 botes de cada uno de los 3 medios y 10 suplementos).

MODO DE EMPLEO E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

1.- Tomar 25 g del alimento en una bolsa Stomacher o en un frasco estéril

2.- Añadir 225 ml de Agua Peptonada Tamponada Neutralizante (Microkit DMT011)

3.- Homogeneizar durante 2 minutos y dejar actuar 20-30 minutos

4.- Añadir 18 ml de LEB Broth (Microkit DMT070) a concentración [x5]

5.- Homogeneizar e incubar 18 h a 30-35ºC

6.- Pueden leerse los resultados presuntivos desde las primeras 18 horas: la turbidez del caldo es tan presuntiva de presencia de Listeria como el ennegrecimiento del caldo ISO 11290; debe confirmarse con el siguiente paso:

7.- Estriar sobre placas de Cromocytogenes Agar (Microkit DMT700 + Suplemento SMT700+).

8.- Incubar las placas 18 h a 30-37ºC

9.- La aparición de colonias verdes, es altamente presuntiva de presencia de Listeria. Si están rodeadas de un halo opaco, son altamente presuntivas de L.monocytogenes (sólo algunas cepas de L.ivanovii producen también halo). Las colonias verdes (con o sin halo, igual que debería hacerse en el método ISO)  deben confirmarse en laboratorio mediante los kits bioquímicos e inmunológicos habituales, a elegir (X/R Broth DMT167 y sus dos suplementos DMT169 y DMT171, lo mismo en kit preparado KMT012, galerías CRYSTAL G+ 245140…). Muchas colonias presuntivas de la mayoría de medios de aislamiento de Listeria (Oxford, Palcam, McBride…) acaban siendo confirmadas como Micrococcus, Enterococcus o Staphylococcus ambientales; esto no sucede en Cromocytogenes, donde Listeria spp. crece con colonias verdes, L.monocytogenes con colonias verdes con halo y los demás no suelen crecer.

Bolsas Stomacher con 25 g de alimento, 225 ml de BPNW y 18 ml LEB Broth [x5] antes de incubar

BIBLIOGRAFÍA:
  Norma ISO 11290: Microbiología de los alimentos para consumo humano y alimentación animal. Método horizontal para la detección y recuento de Listeria monocytogenes.

Sanchis, J. Doble enriquecimiento simultáneo para detección rápida de Listeria monocytogenes en matrices alimentarias.  XXI Congreso SEM de Microbiología de los alimentos. Tarragona, IX-2018.

 

El usuario es el único responsable de la destrucción de los microorganismos generados en el interior del kit durante su uso, de acuerdo con la legislación medioambiental vigente. Sumerja en lejía o alcohol, o mejor autoclávelos, antes de desecharlos a la basura. Mantener fuera del alcance de los niños. No ingerir.           

Si desea más información sobre nuestro LISTERIQUICK rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto . O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16

 

 

USO DEL SALMOQUICK Y EL LISTERIQUICK EN OTRAS MATRICES

USO DEL SALMOQUICK Y EL LISTERIQUICK EN OTRAS MATRICES

Aunque SALMOQUICK y LISTERIQUICK han sido diseñados para alimentos (25 g de muestra), se puede extender su uso a otras matrices:

  • AGUAS

Dado que en aguas puede requerirse, para la búsqueda de Salmonella o Listeria, una muestra mínima muy superior a 25 mL (normalmente de 100 mL, 250 mL e incluso de 1 L) se debe filtrar por membrana de 0,45 µm la cantidad de muestra de agua necesaria, extremando la precaución de no dejar la membrana con la bomba encendida una vez se ha filtrado toda la muestra de agua, para evitar estresar las posibles Salmonella o Listeria presentes. Se añade la membrana filtrada a 25 ml de agua y con esta muestra concentrada (membrana en agua) se procede como explica el folleto SALMOQUICK ó LISTERIQUICK en alimentos, como si de una muestra de 25 g de alimento se tratase.

  • COSMÉTICOS

Se debe sustituir el Agua de Peptona Tamponada y Neutralizante (PBNW) por el caldo LPT Neutralizing Broth de MICROKIT. Por lo demás, el protocolo es idéntico al de alimentos explicado en los folletos SALMOQUICK y LISTERIQUICK.

  • ALIMENTOS INFANTILES

Dado que las legislaciones de numerosos países exigen la ausencia de Salmonella y/o de Listeria en alimentación infantil, no en 25 g sino en cantidades mucho mayores (hasta 5 Kg en algunos casos), deberemos emplear la cantidad de Agua de Peptona Tamponada y Neutralizante que sea necesaria para crear la dilución 1:10 con la cantidad de muestra requerida. Y el caldo SS o LEB también a la concentración necesaria para mantener el mismo ratio Agua de Peptona Tamponada y Neutralizante/ SS Broth o LEB que indican los folletos SALMOQUICK y LISTERIQUICK.

  • SUPERFICIES

Tanto Salmonella como Listeria se multiplican en las superficies de ciertos puntos críticos, formando biofilms, los cuales además incrementan su patogenicidad. Estos biofilms las encapsulan en grandes poblaciones (monoespecíficas o no) que suelen pasar desapercibidas al método de contacto (Rodac, laminocultivos) e incluso al rascado del método de barrido con escobillón o balleta. Se necesitan esponjas realmente abrasivas (MICROKIT VMT037) para arrancar las células y poder así detectarlas. Pulverice la superficie a analizar con agua estéril, espere 60 segundos, rasque con fuerza con una esponja abrasiva estéril MICROKIT, devuélvala a su bolsa original, llévela al laboratorio y trate dicha esponja como si de los 25 g de alimento se tratase, pasándola completa a los 225 ml de BPNW y siguiendo las instrucciones de los folletos SALMOQUICK y LISTERIQUICK.

El usuario es el único responsable de la eliminación de los microorganismos según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.

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CROMOKIT BURKHOLDERIA AGAR

CROMOKIT BURKHOLDERIA AGAR

Agar cromogénico para aislamiento selectivo y diferencial de Burkholderia cepacia en aguas, cosméticos y otras muestras, con base BCPT Agar.

COMPOSICIÓN

  • Polipeptona bacteriológica      6.00 g
  • Piruvato sódico                          6.00 g
  • Dihidrógeno fosfato potasio    4.35 g
  • Hidrógeno fosfato sodio          1.42 g
  • Sales biliares                               1.50 g
  • Amonio sulfato                          1.00 g
  • Magnesio sulfato                      0.20 g
  • Sulfato férrico amónico          0.01 g
  • Rojo fenol                                  0.02 g
  • Cristal violeta                            0,01 g
  • Agar-agar                                   12.0 g
  • Mezcla cromogénica               c.s
  • (Fórmula por litro)
  • pH final: ajustar a  6.2 ± 0.2

Detección en las primeras 24 horas. Izda: Pseudomonas aeruginosa, colonias rojas grandes. Dcha: Burkholderia cepacia, colonias rojas pequeñas. Medio salmón-crema.

Crecimiento a las 48 h: medio fucsia. Izda: Pseudomonas aeruginosa, colonias rojas grandes y con márgenes lobulados. Dcha: Burkholderia cepacia, colonias rojas menores y con márgenes redondos

PREPARACIÓN

Disolver 32,5 g de medio en 1 litro de agua bidestilada. Calentar hasta ebullición, agitando hasta la total homogeneización. No sobrecalentar. Autoclavar a 121 ºC durante 15 minutos. Si se desea hacer el medio más selectivo para análisis en aguas, enfriar a 45-50 °C y añadir 14 ml de solución BCPT Suplemento estéril selectivo (SMT301, que contiene Polimixina B (150.000 UI/L) y Ticarcilina (500,0 mg/L). Para máxima selectividad y evitar falsos positivos de Sphingomonas spp. y Moraxella spp., se puede añadir Gentamicina, aunque forman colonias diminutas y diferentes a las típicas de Burkholderia cepacia. En cambio Ochrobactrum anthropi y Delftia acidovorans sólo resultan distinguibles mediante identificación molecular, ya que las galerías comerciales dan, igual que este medio, falso positivo de B.cepacia.

Los antibióticos polimixina y ticarcilina del suplemento SMT301 restringen la productividad de algunas cepas de B.cepacia, por lo que no conviene usarlos para recuentos. Además todas las colonias crecidas en estos medios (base BCPT) sin suplemento, que han sido enviadas a nuestro servicio de identificación molecular, han sido siempre de patógenos emergentes como lo es Burkholderia. Para detección por estría tras enriquecimiento (para analizar muestras cosméticas de escasa carga microbiana), si se deben usar con los antibióticos, porque no hay que contar colonias y así se evitan muchos falsos positivos.

PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO. AGITE EL BOTE ANTES DE USAR. MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO, EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO.

DESHIDRATADO CÓDIGO: DMT555

MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO, EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO. PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO.

NOTA:  Antes Pseudomonas cepacia, Burkholderia cepacia es una especie muy resistente que agrupa numerosas cepas de bacilos Gram negativos, Oxidasa positivos (a menudo oxidasa-lentos), No Fermentadores de Glucosa, Móviles. Algunas cepas pueden crecer en Agar Cetrimida sin fluorescencia y en Agar CN. Muchas cepas no crecen a más de 35°C. En TSA algunas cepas crecen con colonias regulares, redondeadas, blanquecinas, crema o amarillas. Deben identificarse molecularmente (MICROKIT SFI004), ya que las galerías bioquímicas no son nada fiables en este tándem de cepas denominado B.cepacia. Debe el nombre genérico a su descubridor y el específico, a haber sido descubierta infectando cebollas (Allium cepa), aunque se encuentra también en aguas y biofilms. Es una de las bacterias más versátiles que se conocen, capaz de usar más de 200 compuestos como nutrientes, entre los cuales se encuentran antibióticos, desinfectantes, pesticidas, hidrocarburos aromáticos policíclicos (HPA), tricloroetileno, policlorobifenilos, ftalatos… además de producir sus propios antibióticos para suprimir el crecimiento de otros competidores, así como matrices especiales para generar biofilms, lo que la hace extremadamente difícil de erradicar. Es frecuente como saprófito en aguas, ambientes húmedos y suelos. Se emplea en biorremediación de contaminaciones y en control de plagas fúngicas agrícolas,  pero tambien algunas cepas son serios patógenos oportunistas en infecciones nosocomiales. Parece que junto a otros Pseudomonadinos esta bacteria fué, desde el Arcaico, corresponsable del paso de la vida a Tierra, al sintetizar ciertas macromoléculas que actúan como inductores de la lluvia.

CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO

Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar laboratorio, tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,…).                    DESHIDRATADO:Polvo, rosado

PREPARADO: Estéril, crema-anaranjado a menudo con precipitados negros del hierro

CONTROL DE CRECIMIENTO 24-48 h a 35°C aproximadamente:

  • Burkholderia cepacia MKTA 25416, Crece con colonias rojas, pequeñas (<2 mm en 24 h), algunas cepas viran el medio bajo las colonias a rosa-fucsia, sobre todo a las 48h. Con respecto a PCA estandarizado*, recuento 75-294 %.
  • Burkholderia cepacia MKTN 10743, Crece con colonias rojas, vira el medio de debajo de las colonias a rosa-fucsia, desde las primeras 24h. Con respecto a PCA estandarizado*, recuento medio 75-294 %.
  • Pseudomonas aeruginosa MKTA 9027, Crece con colonias rojas, pero son muy grandes (>5 mm a no ser que haya tantas que compitan por el sustrato) e irregulares, además son fluorescentes bajo luz UVA de 366 nm.
  • Pseudomonas fluorescens MKTA 13525, Inhibido o lento y sin viraje, fluorescentes bajo 366 nm.
  • Staphylococcus aureus MKTA 6538, Inhibido
  • Escherichia coli MKTA 25922, Inhibido

* El que cumple con recuperación superior al 92-125% con respecto a cepas cuantitativas trazables a cepa tipo.

Polimorfismo de 3 cepas TIPO de Burkholderia cepacia en BCPT cromogénico: en 24 h una de ellas es más salmón que roja.

 

 

 

 

 

 

Polimorfismo de 3 cepas TIPO de Burkholderia cepacia en BCPT cromogénico: en 48 h todas son fucsia-rojas, pero de diferentes tonalidades. Y el viraje del medio salmón a fucsia es muy diferente de unas a otras cepas tipo.

MODO DE EMPLEO Y LECTURA DE RESULTADOS

Sembrar en estría sobre la placa preparada una alícuota del cosmético (previamente diluido y enriquecido en LPT Neutralizing Broth u otro caldo similar que sea neutralizante de todos los conservantes empleados actualmente y a la vez enriquecedor). En agua, sembrar una membrana por la que se hayan filtrado 100 ml). Incubar a 30-35°C durante 24-72 horas, ideal 48 h. Verificar el crecimiento de una estría roja intensa o de colonias rojas de 1,5-2 mm de diámetro, con o sin halo fucsia en el medio. Identificar por ID molecular (MICROKIT SFI004). El recuento/ml será la suma de los recuentos de las tres placas (por filtración, el recuento será el número de colonias/los 100 ml filtrados). De todas formas, no debe aparecer ni una sola colonia confirmativa en 1 g de cosmético enriquecido ni en 100 ml de agua farmacéutica o cosmética.

El recuento a 24h y a 48 h es similar, solo unas pocas colonias más a las 48h (11% en la cepa de NCTC, 7% en la cepa de DSMZ) y significativo: 70% en la cepa de ATCC.

PRESENTACIÓN: MEDIO DESHIDRATADO 500g (DMT555) y suplemento opcional en frasco pinchable estéril 100 ml (SMT301) c.s.p.7 litros de medio final. DryPlates-BCPT (DPP015), que en realidad son el origen de este medio cromogénico que ahora también ofrecemos deshidratado. Placas preparadas 90 mm con (PPLM56, mejor para detección por estría tras enriquecimiento) o sin (PPLM56NS, mejor para recuentos en aguas) suplemento de antibióticos. Plaquis herméticas 55 mm con (PPL942, mejor para detección por estría tras enriquecimiento) o sin (PPL942NS, mejor para recuentos en aguas) suplemento de Abb.

El usuario final es el único responsable de la destrucción de los organismos que se hayan desarrollado, según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar en la basura.     

Si desea más información sobre nuestro CROMOKIT BURKHOLDERIA AGAR rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto . O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16

MICROKIT® P/A PSEUDOCULT

MICROKIT® P/A PSEUDOCULT

Pseudomonas aeruginosa

Detección Presencia / Ausencia (P/A) en 100 (250) ml de agua

INTRODUCCIÓN:

Medio estéril PSEUDOCULT Cromofluorogénico diseñado por MICROKIT para detección P/A (o recuento NMP empleando cubetas NMP Ref:1001020 ó Quantitry de Idexx) de Pseudomonas aeruginosa (viraje del agua a rosa-rojo y además fluorescente azul bajo luz de 366 nm VMT050 e indol – con reactivo de Kovacs SBH056), que puede elegir en tres formatos diferentes:

RPL302 Frascos tomamuestras con caldo estéril hidratado y tapón a rosca para añadir en ellos 100 mL de la muestra de agua. Cajas 10u ó 9x10u

 

 

FPA908 Viales prepesados de polvo estéril con tapón a rosca para añadir a 100 mL de la muestra de agua (no incluido bote 100 mL VML155 o bolsa standup 100 mL B2787B estériles). Cajas 40u ó 10x40u. Para 250 mL d agua, ref: FPA903

 

 

DMTI908- Botes 100 g de polvo estéril y cucharilla dosificadora para añadir a 100 mL de la muestra de agua (no incluido bote 100 mL VML155 o bolsa standup 100 mL B2787B estériles), Bote para 50 test

 

 

De gran utilidad como screening negativo de muestras rutinarias, al ser un método más fácil de emplear que la filtración de membrana y más fiable (escasez de falsos positivos y de falsos negativos, que en filtración de membrana es de nada menos que el 33% de las muestras analizadas en el mundo, por el estrés provocado durante la filtración).

También muy útil para que las potabilizadoras no dejen de analizar en festivos y fines de semana, ya que este método puede ser empleado por personal no especialista en microbiología, el mismo guarda de la depuradora puede hacerlo. La única precaución es que el operario no toque ni el agua ni el polvo con sus manos, para evitar contaminaciones artificiales.

MODO DE EMPLEO: Es necesario tratar previamente el agua clorada, mediante Tiosulfato Sódico, para que las células dañadas subletalmente se recuperen, excepto en los frascos tomamuestras RPL302, que ya lo incluyen.

Añadir los 100 mL de agua de muestra en el frasco o en el recipiente estéril que se va a utilizar; en el caso de los viales, añadir todo el contenido sobre el agua; en el caso de los botes de 100g, añadir dos cucharaditas rasas sobre el agua y cerrar el bote con la cucharilla dentro para los posteriores usos. Agitar para homogeneizar. Incubar 24-72 horas (la rapidez del viraje depende del estado metabólico/estrés de la cepa) a 35-37° C. La muestra inoculada sirve también de medio de transporte, por lo que no es necesario incubar inmediatamente después de la toma de la muestra, pudiendo transcurrir varias horas entre toma e incubación.

Para aguas envasadas o de baño, se analizan 250 mL, por lo que debe añadir 1 vial FPA903 ó 4 cucharaditas por muestra (no se pueden usar los frascos RPL302 para 250 mL, al haber sido diseñados sólo para 100 mL). El medio funciona correctamente desde mitad hasta el doble de concentración, por lo que no es necesario afinar a 5 cucharaditas

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS: El viraje a color rosa-rojo demuestra la Presencia de P.aeruginosa en la muestra de agua. La Fluorescencia azul que se observa en la oscuridad bajo U.V.A. de 366 nm (linterna VMT050) confirma que se trata de P.aeruginosa (además con 0,5 ml de KOVACS-SBH056, NO hay anillo rojo de Indol en superficie). Ya que hay otros microorganismos  capaces de virar a rosa, pero no son fluorescentes ni indol -.

Es necesaria la ausencia (no viraje), que equivale a 0 ufc/100 mL (ó en 250 mL). Sólo en caso positivo debería repetirse la muestra por método cuantitativo si se requiere un recuento concreto, aunque la legislación exige 0 y por tanto no importa si hay 2 ó 950, en ambos casos el agua no es potable.

Material necesario no incluído: Tiosulfato Sódico para eliminar el cloro (SMT976) excepto en los frascos tomamuestras RPL302, que ya lo incluyen. Bote estéril 100ml (VML155), o bolsa estéril autosellable Stand-Up (B2787B). Estufa o incubador 35-37ºC (SIL12AR ó SIL24AR).

En homenaje a nuestro querido amigo, el Dr. Juan José Marcén, que falleció antes de conocer el éxito mundial de la fantástica idea que nos regaló en los años 90, el kit de coliformes/E.coli se regala a todas las ONGs que nos los pidan junto con otros parámetros P/A.

PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO O PARA ANÁLISIS DE CAMPO. MANTENER FUERA DEL ALCANCE Y DE LA VISTA DE LOS NIÑOS Y ANIMALES.

EXTREMADAMENTE HIGROSCÓPICO: MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO. AGITE EL BOTE ANTES DE USAR. EN ZONAS DE ELEVADA HUMEDAD AMBIENTAL, GUARDAR EL BOTE BIEN CERRADO EN UN TUPPER HERMÉTICO CON SILICAGEL.

CONTROL DE CALIDAD: Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar laboratorio, tras largos fletes, tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,…)

DESHIDRATADO: Polvo crema    PREPARADO: Paja

CONTROL DE CRECIMIENTO 24-72 h a 37°C aproximadamente:

  • Pseudomonas aeruginosa WDCM 00026, vira a rosa, da fluorescencia azul en la oscuridad bajo 366 nm y no genera anillo rosa de indol, en las primeras 24h si el inóculo es alto y no procede de muestras estresadas, en 48-72h en caso contrario.
  • E.coli WDCM 000013, vira a rojo, no da fluorescencia azul en la oscuridad bajo 366 nm y genera anillo rosa de indol.
  • Enterococcus faecalis WDCM 00009: Inhibido.

El usuario es el único responsable de la eliminación de los microorganismos según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.

Si desea más información sobre nuestro MICROKIT® P/A PSEUDOCULT rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto . O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16

TOTAL OCEANOGRAPHIC MICROKIT®AGAR (MARINE AGAR)

TOTAL OCEANOGRAPHIC MICROKIT®AGAR  (MARINE AGAR)

Recuento total en productos y aguas marinas.

COMPOSICIÓN

  • Mezcla de peptonas   14,500 g
  • Cloruro Sódico          37,000 g
  • Cloruro de Magnesio 11,000 g
  • Sulfato Sódico           4,000 g
  • Fosfato Disódico       2,500 g
  • Glucosa                     2,000 g
  • Cloruro de Calcio      1,159 g
  • Cloruro de Potasio    0,694 g
  • Bicarbonato Sódico   0,201 g
  • Bromuro potásico     0,100 g
  • Cloruro de Estroncio 0,042 g
  • Acido Bórico             0,027 g
  • Agar-Agar                 15,000 g
  • (Fórmula por litro)
  • pH: 7,2 ± 0,2

PREPARACIÓN

Disolver 86 gramos en 1 litro de agua bidestilada, calentando hasta ebullición y agitando hasta la completa homogeneización.

Autoclavar a 121 ºC, durante 15 minutos. No sobrecalentar.

PARA USO EXCLUSIVO  EN LABORATORIO.

MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO, EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO. AGITE EL BOTE ANTES DE USAR

DESHIDRATADO CODIGO: DMT334

CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO

Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar laboratorio, tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,…)

DESHIDRATADO: Polvo grueso, Tostado

PREPARADO: Estéril, Ambar, Precipitado

CONTROL DE CRECIMIENTO 72 h a temperatura ambiente (21-28°C aproximadamente):

  • Listeria monocytogenes MKTA 7644: Correcto
  • Aeromonas hydrophila MKTA 49141: Excelente
  • Pseudomonas aeruginosa MKTA 9027: Correcto, colonias verde-amarillentas.
  • Escherichia coli MKTA 25922: Correcto
  • Staphylococcus aureus MKTA 6538P: Correcto

PRESENTACIÓN: MEDIO DESHIDRATADO, TUBOS PREPARADOS

NOTA: Medio optimizado para recuento total de bacterias, levaduras y mohos procedentes de ambiente marino. Es por ello, ideal como sustituto del PCA en agua de mar y productos de la pesca.

 SIEMBRA E INTERPRETACIÓN

Sembrar la membrana de filtración en la superficie de una placa preparada, o bien 1 ml de muestra y su serie de diluciones decimales, en placas en masa. Incubar en condiciones adecuadas para saprófitos (72 h a 25°C aproximadamente) o para psicotrofos (10 días a 6°C aproximadamente). Contar todas las colonias (no filamentosas, bacterias no autótrofas y levaduras, filamentosas, hongos).

El usuario final es el único responsable de la eliminación de los microorganismos según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.

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TRIBUTIRIN AGAR (BASE)

TRIBUTIRIN AGAR (BASE)

Detección de microorganismos lipolíticos

COMPOSICIÓN

  • Peptona untuosa      5,5 g
  • Extracto de levadura 3,5 g
  • Agar‑agar                15,0 g
  • (Fórmula por litro)
  • pH final: 7,5 ± 0,2

Tributirin Agar (Base). Nótese el aspecto graso del medio deshidratado.

Tributirato de glicerilo (Tributirina) en frasco suplemento 100 ml

 

EL ASPECTO GRASO DEL MEDIO ES NORMAL.

 

 

 

 

PREPARACIÓN

Disolver 24 gramos del polvo en 1 litro de agua destilada que contenga 10 ml de tributirina (SDA078), llevando a ebullición y agitando vigorosamente hasta la completa suspensión.

Autoclavar a 121 ºC durante 10 minutos.

Agitar para eliminar grumos y verter en placas a unos 50 ºC sobre la muestra

 

halos de lipolisis de ambas especies, vistos por debajo

 

 

 

 

 

 

 

 

St.aureus y Yarrowia lypolitica.

 

 

 

 

 

 

 

PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO.  MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO.

DESHIDRATADO CODIGO: DMT125

CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO

Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar laboratorio, tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,…)

DESHIDRATADO: Untuoso, crema

PREPARADO: Estéril, Crema opalescente

CONTROL DE CRECIMIENTO 48-72 h a temperatura ambiente (21-28°C aproximadamente):

  • Bacillus subtillis MKTA 6633, Bueno, No forma halo.
  • Staphylococcus aureus MKTA 6538P, Bueno, dorado, en 48 horas forma halo.
  • Staphylococcus epidermidis MKTA 12228, Bueno, en 48 horas no forma halo.
  • Pseudomonas aeruginosa MKTA 9027, Excelente, pigmenta en 48 horas y  forma halo.
  • Yarrowia lypolitica MKTC 1468, Bueno,  Forma halo.

PRESENTACIÓN: FRASCOS 100 ml, MEDIO DESHIDRATADO BASE (UNTUOSO) Y SUPLEMENTO.

NOTA: Medio de cultivo diseñado para detectar microorganismos lipolíticos (bacterias: Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa…. y levaduras: Candida lypolitica, Yarrowia lypolytica….) en productos lácteos, cosméticos y otros productos. Se trata de una base nutritiva sencilla con el sustrato graso tributirato de glicerilo (tributirina). Este producto puede substituirse por mantequilla, pero los resultados en tal caso serán lentos y poco claros.

SIEMBRA

Inocular 1 ml de la muestra y su serie de diluciones decimales en placas preparadas o, mejor aún, en placas Petri sobre las que se añaden 20 ml del medio en frasco, fundido y enfriado a unos 45‑50 ºC. Incubar a 30 ºC aproximadamente, durante 2‑3 días

INTERPRETACIÓN

Contar las colonias que hayan producido un halo transparente de lipolisis a su alrededor. Los microorganismos que han atacado la tributirina también lo harán sobre la mantequilla.

El usuario final es el único responsable de la eliminación de los microorganismos según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.

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TOMATO JUICE BROTH (BASE) (MODIFICADO)

TOMATO JUICE BROTH (BASE) (MODIFICADO)

 Detección y recuento M.F. de flora acido-láctica

 COMPOSICIÓN

  •  Polisorbato Tween 80 1,00 g
  • Extracto de carne        20,00 g
  • Extracto de levadura   5,00 g
  • Glucosa                       20,00 g
  • Fosfato dipotásico       2,00 g
  • Acetato de sodio          5,00 g
  • Citrato triamonio        2,00 g
  • Sulfato de Magnesio    0,20 g
  • Sulfato de Manganeso 0,05 g
  • (Fórmula por litro)
  • pH final: 5’5 ± 0,5

 PREPARACIÓN

 Disolver 55 g en 1 litro de agua destilada que contenga 50 ml del suplemento SDA500 (suero de tomate). Si es necesario ajustar el pH a 5’5  ± 0’5.

Autoclavar a 121 ºC durante 15 minutos. Evitar el sobrecalentamiento.

PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO.

MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO. AGITE EL BOTE ANTES DE USAR

DESHIDRATADO CODIGO: DMT222

CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO

Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar laboratorio, tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,…)

DESHIDRATADO: Polvo grueso, Beige

PREPARADO: Estéril, Ambar, Turbio

CONTROL DE CRECIMIENTO 72 h a 37°C aproximadamente, en microaerofilia:

  • Lactobacillus plantarum MKTA 8014, Excelente.
  • Lactobacillus casei MKTA 7830, Excelente.
  • Staphylococcus aureus MKTA 6538P, Inhibido.

PRESENTACIÓN: MEDIO DESHIDRATADO (BASE), FRASCOS PREPARADOS 100 y viales de 2 ml.

 MODO DE EMPLEO E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

Añadir 2 ml de medio a cada cartón para la técnica M.F. y depositar la membrana sin que se formen burbujas. Incubar a 37 ºC aproximadamente, durante 2-3 días o bien a 30 ºC aproximadamente, durante 3-5 días. Todas las colonias blancas son de Lactobacilos y demás flora acidoláctica. Identificar con M-Acidificantes (KUS801).

El usuario final es el único responsable de la eliminación de los microorganismos según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.

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