MICROKIT® MUG PLUS CROMOGENIC AGAR AGAR CROMOGÉNICO COLIFORMES Y E.COLI

MICROKIT® MUG PLUS CROMOGENIC AGAR (CROMOGÉNICO COLIFORMES Y E.COLI)  S/BOE 31-MARZO-2009

Agar selectivo para la detección simultánea confirmativa
de coliformes totales/fecales y E.coli en aguas y alimentos (cromógenos según ISO 16649-1:2001, AFNOR V08053-4)

 

INTRODUCCION

 

Los substratos cromógenicos desarrollados por los laboratorios BIOSYNTH AG, en concreto Salmon-Gal y X-Glucurónido, permiten la detección simultánea de coliformes (c

MICROKIT® MUGPLUS: Agar cromogénico para E. coli (colonias azules -olas-) y demás coliformes (colonias rosas -surf-). Campylobacter y Shigella crecen con colonias verdes (hierba) y otros Gram negativos con colonias crema (Pseudomonas -montañas-).

E.coli (colonias azules -olas-) y demás coliformes (colonias rosas -surf-). Campylobacter y Shigella (colonias verdes-hierba) y otros Gram negativos con colonias crema (Pseudomonas -montañas-).

olonias rojas) y E.coli (colonias azules) en el mismo medio de cultivo.
La acción simultánea de las peptonas seleccionadas en el medio, del piruvato y de los tampones fosfato, garantiza un rápido crecimiento colonial, incluso para los coliformes en estado subletal. El crecimiento de la flora acompañante Gram positiva, queda inhibido gracias al lauryl sulfato y a la mezcla de antibióticos Cefsulodina + Vancomicina.
El enzima Beta-D-galactosidasa, característica de los coliformes, actúa sobre el Salmon-GAL provocando la pigmentación roja o rosada en las colonias de coliformes.
E.coli, coliforme Beta-D-glucuronidasa positivo, actúa sobre el Salmon-GAL y sobre el X-Glucurónido (5-bromo-4-chloro-3-indoxyl Beta-D-glucurónido) de modo que sus colonias crecen de azul oscuro al añil.

 

COMPOSICION (g/l)

Inconfundibles colonias añil (no violetas ni esmeralda) de E.coli

Inconfundibles colonias añil (no violetas ni esmeralda) de E.coli

  • Peptonas 3´0
  • Cloruro Sódico 5´0
  • Dihidrógeno Fosfato Sódico 2´2
  • Hidrógeno Fosfato Disódico 2´7
  • Piruvato Sódico 1´0
  • Triptófano 1´0
  • Tergitol 7 0´15
  • Sorbitol 1´0
  • Mezcla cromogénica
  • (Salmon Gal 0,2 y X-Glu 0,2) 0´4
  • Agar-Agar 10´0
  • pH Final: 6´8 ± 0´2

MODO DE EMPLEO

Agitar el bote. Disolver 26,5 g en 1 litro de agua destilada, calentando hasta ebullición. Mantener durante 1 minuto. Agitar hasta su completa disolución. Añadir asépticamente, cuando el medio se haya enfriado a 55 ºC, 5 mg de Cefsulodina + 5 mg de Vancomicina (total 5 ml de solución estéril MICROKIT SMS400) para aumentar la selectividad del medio y eliminar la flora acompañante Gram positiva. No autoclavar. El medio final es blanquecino. No refundir más de una vez.
En alimentos, la siembra en profundidad elimina los Gram negativos no fermentadores, que en la técnica de Filtración de Membrana para análisis de aguas pueden dar lugar a falsos positivos y además reducir en un 50% la recuperación de los microorganismos diana; para evitarlo, añadir sobre la membrana una segunda capa de medio agarizado, previamente enfriado a 50 ºC. Esto no es tan necesario en aguas potables o poco contaminadas por flora acompañante.

LECTURA DE RESULTADOS

Nueva imagen (5)Tras 18-24 horas de incubación a 35-37 ºC aproximadamente (ó 44,5 ºC aproximadamente para C. fecales), los resultados son: E.coli: Colonias de azul oscuro a añil (Salmon GAL y X-Glucurónido positivo) que resultan indol positivas (puede comprobarse directo en la colonia). Coliformes: Colonias rosas- rojas (Salmon GAL positivo) + las azules (E.coli). Otras enterobacterias: Colonias incoloras, excepto cepas como las Salmonella o Shigella Beta-D glucuronidasa positivas, que aparecen de color azul claro a turquesa. Muchas cepas de Shigella y de Campylobacter crecen con colonias verdes, pero también es del máximo interés que sean detectados, al ser microorganismos patógenos.

Unas pocas cepas de Enterococcus durans crecen con colonias rojas, pero también indican contaminación fecal del agua. Ciertas cepas de Staphylococcus aureus y de Bacillus crecen con colonias naranjas, pero nunca rosas-rojas. Otras cepas crecen con colonias crema que no se han de tener en cuenta. Las colonias con colores intermedios (violáceo-lila) proceden de ufc mixtas: diluir y repetir el análisis, o mirar una placa sembrada con una dilución mayor.
Confirme E.coli pinchando ó cubriendo sus colonias con reactivo de Kovacs. Si éste
vira a rojo-cereza antes de 1 minuto, la reacción es, definitivamente, confirmativa.

Color de la colonia Salmon-GAL X-Glucurónido Indol Rto. PCA estandarizado*

  • E.coli Azul oscuro-añil o turquesa + + + 58-125% **
  • Citrobacter freundii Rojo-rosa + – – 98-106%
  • Klebsiella oxytoca Lila-Granate + – – >99%
  • Enterobacter cloacae Rojo-rosa + – – 58-104%
  • Salmonella enteritidis Incoloro – – – 29-202%
  • Shigella flexneri Incoloro (azul en superficie) – – –
  • Salmonella MUG+ Azul claro – + –
  • E. coli O157 : H7 Rojo-rosa + – + 230%
    * El que cumple con recuperación superior al 92-125% con respecto a cepas cuantitativas trazables a cepa tipo.
    Incertidumbres detectadas entre todos los lotes a lo largo de un año (la mayoría de la incertidumbre se debe a la cepa y a la proporción de cepas acompañantes inoculadas, no al medio).
    ** En superficie, ya que en masa recupera el 200% más que en superficie
    Un estudio comparativo independiente (*) de validación cuantitativa entre este medio, otros cromogénicos, Endo y MFC demuestra que MUG PLUS® es el mejor medio de recuento de E. coli en aguas. La validación interna realizada por MICROKIT con centenares de muestras y la revalidación trimestral en Seilagua ®, Seilalimentos y Seilaparfum, lo confirman para agua y para todo tipo de matrices alimentarias y cosméticas.

PRESENTACION

* Botes de 100 g de medio de cultivo deshidratado en polvo agarizado. Referencia DMT400-
* Suplemento en frasco de 100 ml, con 100 mg de solución estéril de Cefsulodina + Vancomicina, para 20 litros de medio (5 ml/l). Referencia SMS400.
* Frascos de 100 ml de agar MUG PLUS® preparado con Cefsulodina+Vancomicina. Referencia RPL444.
* Frascos de 200 ml de agar MUG PLUS® preparado con Cefsulodina+Vancomicina. Referencia RPL244.
* Tubos de 20 ml de agar MUG PLUS® preparado con Cefsulodina+Vancomicina. Referencia TPL400.
* Viales 2 ml de caldo MUG PLUS® de MF con Cefsulodina+Vancomicina. Referencia FPL400.
* Viales pinchables de 100 ml de caldo MUG PLUS® de MF con Cefsulodina+Vancomicina. Ref. RPL400.
* Plaquitas herméticas de Agar MUGLUS® preparado con Cefsulodina+Vancomicina . Referencia PPL902

El usuario es el único responsable de la eliminación de los microorganismos según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.

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