detección E.coli en agua de forma segura y eficaz mediante COLICULT P/A de MICROKIT, cromogénico y fluorogénico

MICROKIT® P/A COLICULT-MCC CROMOFLUOROGENIC BROTH SELECTIVO-ESPECÍFICO-CÓMODO-ECONÓMICO

El que se ha convertido ya en clásico MICROKIT-COLICULT P/A (DMT999) en pocos meses, a causa de su máxima recuperación de Coliformes y E.coli en 100 ml de agua, de su comodidad de uso y de su bajísimo coste, aún podía ser mejorado, y MICROKIT lo ha conseguido:

Efectivamente, la prueba de la fermentación de lactosa con campana Durham proporciona un cierto número de falsos positivos para Coliformes debidos a cepas gasógenas de Pseudomonas y Aeromonas, principalmente, capaces de crecer en este tipo de medios. Sin embargo, las tiras de citocromooxidasa de alta resolución de MICROKIT (KOT050), directamente sumergidas en el clásico COLICULT P/A incubado, viran en unos segundos a azul si se trata de un falso positivo, mientras que no viran si se trata realmente de coliformes, con lo que son una prueba adicional en todo resultado presuntamente positivo. Además, aunque sea la única manipulación adicional que requiere este polvo, la adición de campanas Durham estériles a los 100 ml de agua de muestra no deja de ser un engorro. Por fin, como en cualquier método clásico, los E. coli no fermentadores de lactosa y no fluorescentes con MUG (precisamente el E. coli patógeno O157:H7) no se detectan, siendo de los más controvertidos falsos negativos que existen hoy día.

Mediante MICROKIT-COLICULT CROMOFLUOROGENIC P/A BROTH (MCC)  se elimina este triple problema de falsos positivos (Pseudomonas, Aeromonas…), manipulación (c/Durham) y falsos negativos (E.coli O157):Al incorporar al medio COLICULT clásico sustratos cromogénicos específicos (X-Gal), no es necesario añadir campanas Durham esterilizadas, ya que la detección de coliformes no se lee por formación de gas sino por un clarísimo viraje del medio a azul-turquesa. Ello implica una ventaja adicional: Pseudomonas y Aeromonas no dan lugar a falsos positivos, ya que no viran el medio. Así, los laboratorios cuyas muestras obtengan frecuentes falsos positivos  con COLICULT, se ahorrarían la prueba adicional de la citocromooxidasa de alta resolución.

La detección de E.coli mediante la fluorescencia con MUG es idéntica en el nuevo medio.

Los E.coli no fermentadores de Lactosa y no fluorescentes con MUG (O157:H7) se detectan como coliformes, gracias al sorbitol y el X-Gal, con viraje del medio a azul. Aunque en la naturaleza no sea probable encontrar aguas con E.coli O157 que no vayan acompañados de cepas más normales de E.coli, nadie está a salvo de sabotajes, como ya se han dado en diversas industrias con casos más o menos conocidos (Pseudomonas aeruginosa, Aspergillus fumigatus, Desulfovibrio desulfuricans…), por lo que resulta necesario utilizar un método que también detecte dicha cepa, como es éste.

La incorporación de Tiosulfato Sódico, ya incluido en el medio preparado, ahorra el tratamiento previo de la muestra con el mismo. Los viales de polvo irradiado no lo contienen, por ser altamente higroscópico. Si usa éstos en vez del medio preparado, trate la muestra previamente con Tiosulfato Sódico.

El precio del nuevo medio sigue siendo más competitivo que el de cualquier otro método, y nada requiere menor manipulación que este producto para análisis mínimo de potabilidad microbiológica de aguas. Con 1 g/l el medio funciona siempre mejor; con 0,5 (máxima economía) sólo en aguas poco polutas; con 2 viales, el viraje es mucho más rápido.

La nueva Directiva Comunitaria Europea, por fin, da la mayor relevancia a la ausencia de E.coli en aguas de consumo humano y, secundariamente, a la ausencia de coliformes. Con MCC se detectan ambos parámetros a la vez.

MODO DE EMPLEO E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS:

1. Añadir 1 vial de 1gramo de MCC COLICULT® a 100 ml de agua de muestra. Dejar embeber unos instantes y agitar para la inmediata disolución (en muestras de agua muy fría, calentar el conjunto a 25-37°C). No calentar por encima de 37°C, ya que no se requiere ni se debe esterilizar. Si se usa el medio deshidratado no estéril, ideal para muchas otras matrices aparte del agua, autoclavar a 121°C durante 15 minutos antes de añadir la muestra.
2. Incubar a 35-37 (44)°C durante 16-48 horas.
3. Las muestras cuya agua o cuya superficie haya virado a azul-turquesa contienen coliformes. Las que no viran a azul-turquesa, NO contienen coliformes. Para casos de extrema urgencia, debe saberse que los positivos viran a azul claro en menos horas (más deprisa a mayor concentración de coliformes en la muestra), sobre todo si se añadieron 2 viales de medio (o medio a [2]).
4. Las muestras que emiten fluorescencia azul celeste cuando se observan en la oscuridad bajo luz U.V.A.de 366 nm (linterna MICROKIT, VMT050) contienen E. coli de forma presuntiva; confirmar añadiendo 1 ml de Indol Kovacs y observando la aparición de un anillo rojo en superficie, que confirma la presencia de E. coli. Las muestras sin tal  fluorescencia no contienen ninguna de las cepas clásicas de E. coli. La fluorescencia es muy evidente y no interfiere si el medio ha virado a azul-turquesa, pero cuidado, se pierde o atenúa tras añadir el Kovacs-Indol.
5. Las muestras que contienen E. coli de forma confirmativa, pero no contienen coliformes, no son aberrantes, ya que ciertas cepas de E. coli no se pueden considerar coliformes, por definición.
6. En las muestras azules sin fluorescencia puede haber E.coli O157 (MUG-, Lactosa -, X-Gal+), que se confirma por ser Indol +. MCC es el único método para análisis mínimo de potabilidad donde E.coli O157 no da lugar a sus peligrosos falsos negativos.

PRESENTACIÓN Y REFERENCIA:

Viales pre-pesados para 100 ml (FPA900). Frascos preparados con Tiosulfato Sódico incluido, para añadir directamente 100 ml de muestra de agua (RPL303).  Medio deshidratado NO estéril (DMT900). Linterna U.V.A. 366 nm MICROKIT (VMT050).

Material necesario no incluído: Tiosulfato Sódico para eliminar el cloro (SMT976), Bote estéril 100ml (sólo se incluye si se solicita en el pedido) (VML155), Estufa o incubador 35-37 ºC (VRP001 ó VMT051). Control de calidad positivo: CRIOSTRAIN E.coli MKTA 25922. Recomendamos asimismo la participación en servicios intercomparativos como SEILAGUA, para validar los procedimientos y los operarios.

Validación: Realizada durante 7 años de intercomparación de 70 laboratorios de toda España en más de 700 muestras duplicadas. Se demuestra comparado con filtración de membrana en el medio oficial (Tergitol Chapman TTC Agar), una sensibilidad del 100% frente al 97,7% del método oficial para coliformes, así como una sensibilidad del 100% para E.coli frente al 95,65% del método oficial. Una especificidad del 100% para coliformes frente al 94,25% del método oficial y del 100% para E.coli frente al 94,57% del método oficial. Y un límite de detección de hasta 3±2 ufc/100 ml frente a 5±2 ufc/100 ml del método oficial.

Para más información sobre nuestras MICROKIT® P/A COLICULT-MCC CROMOFLUOROGENIC BROTH no dude en ponerse en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16

https://www.microkit.es/fichas/P-A-COLICULT-UE-2-2019.pdf?v=2023

https://www.microkit.es/monograficos/11-E.coli-y-dem–s-coliformes-monograf–a.pdf