Archivo de la categoría: Microbiología General

DEXTROSA TRIPTONA LEVADURA BROMOCRESOL AGAR

DEXTROSA TRIPTONA LEVADURA BROMOCRESOL AGAR Ensayo de fermentación para  Enterobacterias (UNE 34-557:1983, ISO 21528:2004, ISO 4702:1993).

ColorVioletaPurpuraCOMPOSICIÓN
Triptona 10,000 g
Extracto de Levadura 1,500 g
Glucosa 10,000 g
Cloruro de sodio 5,000 g
Púrpura de Bromocresol 0,015 g
Agar 15,000 g
(Fórmula por litro)
pH final: 7,0 ± 0,1

PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO. AGITE EL BOTE ANTES DE USAR.

PREPARACIÓN
Disolver 41,5 gramos de medio en 1 litro de agua bidestilada. Agitar lentamente para su completa disolución. Repartir en tubos. Autoclavar a 121 ºC durante 20 minutos.

PRESENTACIÓN: MEDIO DESHIDRATADO CODIGO: DMT178

CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO:
Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar laboratorio, tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,…)
DESHIDRATADO: Gris azulado
PREPARADO: Púrpura-lila

CONTROL DE CRECIMIENTO 24-48 h a 37°C aproximadamente:
E.coli MKTA 25922, Correcto, medio amarillo en 24 h
Pseudomonas aeruginosa MKTA 9027, Correcto, medio lila
Salmonella abony MKTN 6017, Correcto, medio amarillo en 24 h
Staphylococcus aureus MKTA 6538P, Pobre, medio amarillo tras 48 horas

SIEMBRA E INTERPRETACIÓN DEXTROSA TRIPTONA LEVADURA BROMOCRESOL AGAR
Inocular con las colonias crecidas en VRBG (DMT136 ó BCD088) e incubar a 37 ºC aproximadamente, durante 24h. Un color amarillo en la totalidad del tubo, acompañado normalmente de gas, indica una reacción positiva.

El usuario es el único responsable de la eliminación de los microorganismos según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.

Si desea más información sobre nuestro DEXTROSA TRIPTONA LEVADURA BROMOCRESOL AGAR o cualquier otro producto no dude en contactar con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es, o en nuestro teléfono 91-897 46 16.

DEXTROSA (GLUCOSA ANHIDRA) PARA MICROBIOLOGÍA

DEXTROSA (GLUCOSA ANHIDRA) PARA MICROBIOLOGÍA es una Base común usada como fuente de hidratos de carbono para microbiología, para fermentación y para asimilación.

COMPOSICIÓN
Solubilidad en agua: hasta 1 g por ml
Sulfitos < 15 ppm
Sulfatos < 200 ppm
Cenizas sulfúricas < 1,0 %
Calcio < 200 ppm
Cloruros < 125 ppm
Arsénico < 1 ppm
Agua < 1,0 %

MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO. PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO. PRESENTACION: EN POLVO

DESHIDRATADO CÓDIGO: DMT042

CONTROL DE CALIDAD
Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar laboratorio, tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,…)

DESHIDRATADO:Polvo blanco, inodoro y dulce.
PREPARADO: Estéril, incoloro, inodoro y dulce
CONTROL DE CRECIMIENTO 24-48 h a 37°C:

Integrada en el medio de cultivo PCA:
Enterococcus faecalis ATCC 29212, Excelente.
Staphylococcus aureus ATCC 6538P, Excelente.
E. coli ATCC 25922, Excelente.
Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Excelente.

PREPARACIÓN DEXTROSA (GLUCOSA ANHIDRA)
Se trata del azúcar procedente de la uva o de la hidrólisis del almidón. Es el monosacárido más usado en microbiología. Se añade en medios de cultivo a razón de 1 a 40 gramos por litro final de medio. Si se trata de ver el crecimiento en medios hiperosmóticos, se añaden hasta 500 g/l.

El usuario es el único responsable de la eliminación de los microorganismos según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.

Si desea más información sobre nuestro DEXTROSA (GLUCOSA ANHIDRA)o cualquier otro producto no dude en contactar con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es, o en nuestro teléfono 91-897 46 16.

AC BROTH

AC BROTH  es un caldo para control de esterilidad comercial y para enriquecimiento de aerobios.

COMPOSICIÓN
Peptona de carne 20.0 g
Extracto de carne 3.0 g
Extracto de Levadura 3.0 g
Extracto de Malta 3.0 g
Dextrosa 5.0 g
Ácido ascórbico 0.2 g
(Fórmula por litro)
pH final: 7,2 ± 0,2

MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO, EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO.
PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO. AGITE EL BOTE ANTES DE USAR.

PREPARACIÓN, MODO DE EMPLEO E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
Disolver 34 g de medio en 1 litro de agua bidestilada. Repartir en tubos o frascos y autoclavar a 121ºC durante 15 minutos. El color final del medio es ámbar claro. Mantener entre 15 y 30 °C en oscuridad y si el almacenamiento es prolongado, regenerar calentando al baño María en agua hirviendo sin agitar, para eliminar el aire disuelto, sólo unos instantes para no mermar la calidad de las vitaminas presentes. Inocular la muestra en condiciones asépticas. Incubar a 35ºC durante 7-14 días. Como el ácido ascórbico clarifica el medio, una turbidez mayor a la del frasco control o la presencia de colonias floculadas indica que la muestra no es estéril. Usado en control de esterilidad comercial en productos que no contengan conservantes mercuriales, ya que para aerobios proporciona mejores resultados que el FTM-Tioglicolato. También puede usarse como enriquecimiento de cualquier aerobio, incubando a su temperatura óptima de crecimiento durante 18-48 h.

DESHIDRATADO CÓDIGO: DMT012

CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO AC BROTH
Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar laboratorio, tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,…)
DESHIDRATADO: Polvo, Crema
PREPARADO: Estéril, Ámbar claro, Transparente

CONTROL DE CRECIMIENTO 24-48 h 37°C aproximadamente:
Staphylococcus aureus MKTA 6538, tras inocular < 100 ufc, crecimiento correcto: turbidez importante
E. coli MKTA 25922, tras inocular < 100 ufc, crecimiento correcto: turbidez importante
Pseudomonas aeruginosa MKTA 9027, tras inocular < 100 ufc, crecimiento correcto: turbidez importante
Streptococcus pyogenes MKTA 19615, tras inocular < 100 ufc, crecimiento correcto: turbidez importante

PRESENTACIÓN: MEDIO DESHIDRATADO
El usuario es el único responsable de la eliminación de los microorganismos según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.

Si desea más información sobre nuestro AC BROTH o cualquier otro producto no dude en contactar con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es, o en nuestro teléfono 91-897 46 16.

 

AGUA DE MAR

Sales para preparar agua marina.AguadeMar

PREPARACIÓN
Disolver 37-42 g de medio en 1 litro de agua destilada. (Según salinidad deseada del mar en cuestión, mayor en el Mediterráneo que en el Atlántico) Calentar hasta ebullición, agitando hasta la completa disolución. Autoclavar a 121 ºC durante 15′.

PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO

MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO. AGITE EL BOTE ANTES DE USAR.

DESHIDRATADO CODIGO: DMT149

CONTROL DE CALIDAD
Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar laboratorio, tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,…).

DESHIDRATADO: Sal fina, Blanco. La eventual hidratación ambiental puede convertir el polvo fino en agregados más gruesos, sin que ello tenga importancia alguna en sus propiedades.

PREPARADO: Estéril, Incoloro

CONTROL DE CRECIMIENTO: Sustitutivo del agua de mar especialmente indicado para la microbiología del petróleo y productos marinos NO SE REALIZA CONTROL MICROBIOLOGICO.

PRESENTACION: MEDIO DESHIDRATADO

NOTA: Se utiliza como aditivo del agua bidestilada para medios de cultivo (PCA, Vibrio TCBS…) cuando se desean realizar estudios con microorganismos marinos. También es muy útil para rellenar acuarios marinos en lugares lejanos a la costa, o incluso cercanos a ella, cuando se busca agua sin patógenos.

El usuario es el único responsable de la eliminación de los microorganismos según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.

Si desea más información sobre nuestro AGUA DE MAR no dude en contactar con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es, o  en nuestro telefono 91-897 46 16.

MICROKIT Bioaerosol Sampler (MBS)

MICROKIT Bioaerosol Sampler (MBS) ha sido plenamente validado en las dos ultimas décadas yDiapositiva1 ya se emplean de rutina miles de unidades en todo el  mundo. Además, este es el equipo más económico del planeta para muestreos de aire por impacto sobre  medio de cultivo sólido. Se pueden emplear  tanto placas Petri de 90 mm como placas de contacto de 55 mm, siendo éstas más  recomendables al  obtener muy  superiores recuperaciones a causa de la ausencia de reflujos. Estos fungibles se pueden  encontrar en múltiples proveedores (incluido MICROKIT) a bajo coste y de muchos medios diferentes, lo que hace al MBS el más versátil de los instrumentos, que no dependen de fungibles específicos, sometidos a  arcas concretas.

MBS es inmejorable para validar salas blancas según los requerimientos ISO 14698 y Pharmacopea. Para aires interiores (aparte de las salas blancas), como son las fábricas y almacenes de alimentos, cosméticos, plantas de tratamiento de aguas, edificios y salas con aire acondicionado, es el equipo más económico del mundo para seguir la UNE 100012. Para aires críticos en hospitales es perfecto para seguir la UNE 171340 de quirófanos, Unidades de Cuidados Intensivos (UCIs, UVIs)… en hospitales.

CARACTERÍSTICAS DE UN “EQUIPO 10”
1. Validado bajo el programa UKDTIVAM como muestreador de referencia
2. Flujo estándar de 100 litros / minuto, calibrado en fábrica
3. Volumen de muestreo a elegir desde 25 hasta 2000 litros
4. Portátil y muy manejable, de muy bajo peso (700 g)
5. Baterías estándar (pilas recargables o alcalinas AA) fáciles de encontrar
6. Indicador de batería baja para cambiar o recargar las pilas a tiempo
7. Bajo ruido
8. Muestrea hasta 30.000 litros por carga (ej: 150 muestras de 200 l)
9. Usa placas Petri 90 mm o placas Rodac 55 mm según prefiera el usuario
10. Diseñado y fabricado en la UE

INCLUIDO EN EL MICROKIT BIOAEROSOL SAMPLER:
1. Placas de contacto para los primeros muestreos de prueba
2. Cabezal de acero inoxidable (mucho más duradero que el aluminio)
3. Manual de empleo impreso
4. Bolsa de transporte
5. Cargador de baterías Multi‐voltage Ansmann, con enchufes conectores Euro, USA, UK, Australia coches‐autos (12V)
6. Baterías cargadas Ansmann maxE NiMH, el MBS está listo para su uso nada más recibirlo
7. Certificado de Calibración
8. Protocolos MICROKIT para microbiología ambiental

OTROS ACCESORIOS DISPONIBLES NO INCLUIDOS EN EL KIT:

  • Adicional cabezal de acero inox con 220 agujeros de 1.0 mm, como requieren las tablas MPN estándar en muestreos de aire (vea nuestro Protocolo MICROKIT para el aire para más información).
  • Adicional 4 pilas AA maxE Ansmann recargables, que son la ultima generación de baterías con efecto memoria minimizado y bajo rango de autodescarga (duran 1 año sin descargarse si se mantienen sin humedad ni temperaturas extremas). Están 100% cargadas para poderse utilizar de inmediato. Son de NiMH y tienen la elevada capacidad de 2100mAh.
  • Adicional cargador de baterías: Ansmann maxE Speed Set es un cargador que puede utilizar en cualquier país del mundo. Con los enchufes intercambiables, cualquier voltaje (V) y frecuencia (Hz) que tenga el pais o el coche, es el cargador perfecto para el MBS, incluso para trabajos de campo.
    Viene completo con 4 pilas AA Ansmann maxE recargables de NiMH y 2100mAh.
  • KIT de calibración: Suministrado en un maletín portátil y con todos sus accesorios, el MICROKIT Validation Kit le permite asegurar que su MBS MICROKIT Bioaerosol Sampler está en su óptima capacidad de muestreo satisfaciendo los estándares de los reguladores en industria. Una validaciónDiapositiva2 anual es necesaria en cualquier caso y más frecuentemente cuantos más muestreos se realicen. Las fábricas con varias plantas pueden tener un MBS por planta y un solo KIT de calibración para todas ellas. También deben exigir que el importador tenga un KIT de calibración para poder externalizar las calibraciones y no tener que comprar el KIT.

El KIT de calibración está desarrollado para ser usado exclusivamente con el MBS MICROKIT Bioaerosol Sampler. La validación no puede ser más sencilla. Este KIT no requiere posteriores calibraciones y está diseñado y fabricado con estándares dimensionales exactos, referenciados a estándares internacionales, de modo que el dispositivo de calibración queda fijado de por vida, minimizando sus costes. Una simple inspección visual le asegura su aptitud de uso.
Características del KIT de calibración:
1. Calibración trazable a los estándares internacionales
2. Ligero y fácil de emplear
3. No requiere baterías ni ningún tipo de fuente de energía
4. Suministrado en maletín con esponja interna
5. Suministrado con plataforma de flujo, placa Petri 90 mm, placa Rodac de 55 mm y destornillador  miniatura.
6. Cada unidad está referenciada y con su Certificado de Calibración
7. Peso 1.6 kg (incluido maletín y todos los accessorios)
8. Simple indicación visual de la calibración “punto caliente” que se traduce en una necesidad  nula de formación del operario
9. Diseñado y Fabricado en la UE bajo Norma ISO 9001
10. Dimensiones: maletín de 350 mm x 300 mm x 90 mm

INTRODUCCIÓN A LOS BIOAEROSOLES
Los bioaerosoles son las partículas vivas del aire, sean sólidas o líquidas. También se incluyen en esta denominación las moléculas biológicas más o menos grandes (por ejemplo la guanina de los ácaros) y los compuestos volátiles. Los bioaerosoles contienen microorganismos vivos. Pueden variar en tamaño desde fracciones de micra hasta más de 100 micras. Igual que las partículas inertes de polvo, los bioaerosoles están gobernados por las leyes de la gravedad pero son afectados y transportados por los movimientos del aire y sus turbulencias. Por ello el método de sedimentación pasiva sobre placas abiertas de medios de cultivo, se considera obsoleto y no aporta información cuantitativa fiable (no existe correlación nº microorganismos/nº colonias).
Las fuentes de bioaerosoles en el exterior son: la acción del viento sobre el suelo, el impacto del agua de lluvia, el cultivo de la tierra y el tratamiento de aguas residuales, el ganado, las granjas de animales, las plantas de procesamiento de alimentos, en particular de los productos lácteos, las centrales eléctricas (sobre todo las eólicas), las instalaciones de compostaje a escala industrial. Todas ellas pueden afectar a las zonas interiores mediante puertas y ventanas abiertas, entrada de personal con ropa contaminada… Fuentes interiores de bioaerosoles: en las plantas de procesamiento de alimentos, la higiene requiere que los niveles de microorganismos en el aire se
mantengan lo más bajo posible. Los hospitales y centros de salud son las peores fuentes de organismos patógenos, pero además requieren que los pacientes (Medicina  Preventiva) y trabajadores (Prevención de Riesgos Laborales) no estén expuestos a ninguno de ellos. La presencia de bioaerosoles indeseables se asocia a menudo con el síndrome del edificio enfermo (SEE), siendo uno de los principales factores que contribuyen a la enfermedad relacionada.
Muestreo de Bioaerosoles: Aunque el uso de la sedimentación pasiva sobre placas puede emplearse para recolectar microorganismos del aire, nunca puede dar una determinación cuantitativa (ufc/litro), sólo informa del no comparativo parámetro ufc/placa. Esta técnica pasiva sin muestreador de impacto además falla en las partículas más pequeñas, como son la mayoría de bacterias, que no caen y permanecen en suspensión. El método cuantitativo más simple y fiable de muestreo de aire es el uso de muestreadores de impacto como el MBS MICROKIT Bioaerosol Sampler. Es un impactador de un solo piso (como todos los equipos portátiles) que recolecta las bacterias y hongos del aire a un flujo estándar de 100 litros / minuto a través de una serie de poros de 1 mm de diámetro, y las estrella sobre un agar preparado en placas de contacto de 55 mm o en placas Petri de 90 mm, hasta un volumen que elige el usuario entre 25 y of 2.000 litros. El MBS es ligero, contiene baterías para hacer una inmensidad de muestreos sin tener que recargarlas o cambiarlas y no requiere baterías externas.
Placas-MBSLos medios agarizados utilizados pueden ser elegidos para buscar los microorganismos que se desee (bacterias, hongos, patógenos, microalgas ambientales…). Para recuento de bacterias se suele emplear TSA, PCA, Nutrient Agar o mejor LPT Neutralizing Agar (para eliminar los residuos de los desinfectantes empleados en aires y superficies). Para recuento de hongos (levaduras y mohos) se emplean MEA, YGC, Sabouraud o mejor Rosa Bengala Caf.Agar (para eliminar recuentos muy inferiores a la realidad, e invasiones de la placa por parte de mohos rápidos que así no dejan detectar a los lentos en los otros medios). Para algas y cianobacterias en envasadoras de agua se emplean los Agares Algas que ha diseñado MICROKIT. Hay otros muchos medios que pueden emplearse para microorganismos específicos (LW para micobacterias en zonas de tuberculosos de hospitales, Middelbrook para micoplasmas, BCYE para Legionella, Cromokit para MRSA…). Tras el muestreo con el MBS, las placas se incuban adecuadamente (en general 1 a 5 días de 25 a 37ºC) y se cuentan las colonias desarrolladas. Se aplica el factor de corrección NMP del protocolo MICROKIT para tener en cuenta que varios microorganismos pueden atravesar un mismo poro y formar una sola colonia. Así se obtiene, según sea el volumen muestreado por placa, el número de ufc/m3. Si como recomienda MICROKIT, se toman 5 placas de 200 l en sendos puntos críticos de cada sala, la suma de las 5 dará directamente el número de ufc presentes en 1 m3 de la sala. Porque el efecto desecación asegura que el muestreo de más de 200 litros por placa es completamente ineficaz.
Los microorganismos que encontramos en el aire no suelen vivir en el mismo: los rayos UV y las inclemencias del tiempo en un ambiente hostil con poco alimento (y a veces con poca humedad)  ienden a hacerlos inviables. Sin embargo suelen agregarse en partículas y entre sí (microcolonias) que aumentan su supervivencia. A mayor humedad ambiental más control es necesario, porque la supervivencia es mayor. Además algunas especies producen pigmentos para protegerse del efecto UV de la luz, por eso en la mayoría de aislados encontramos colonias pigmentadas de amarillo y rojo (bacterias como Micrococcus, Bacillus…, levaduras como Rhodotorula…, algas como Chlorella, Trebouxia, Anabaena) y mohos, más resistentes a los UV. Las células del bioaerosol pueden resistir largos períodos de tiempo en latencia, poniendo en riesgo a las personas que respiran aires “no potables” (por ejemplo el caso de los Aspergillus fumigatus que matan a personas operadas en quirófanos mal controlados) y, aun no siendo patógenos, provocando alteraciones en los productos fabricados.

Continúe leyendo datos del máximo interés sobre los bioaerosoles (muchos de ellos inéditos y descubiertos por nosotros hace ya más de una década) en nuestro Protocolo del aire MICROKIT, sólo al alcance de clientes del MBS.

Si desea más información sobre nuestro MICROKIT Bioaerosol Sampler (MBS) no dude en contactar con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es, o por teléfono en nuestro telefono 91-897 46 16.

MICROKIT® P/A-LEGIONELLA

MICROKIT® P/A-LEGIONELLA (Caldo GVPC ó BCYE Modificados). Para detección o revitalización en 1000 ml de agua.

Legionella pneumophila  causa la legionelosis o enfermedad del legionario y la fiebre de Pontiac, males tristemente extendidos POR TODO nuestro país a causa de torres de refrigeración y sistemas de acondicionamiento mal mantenidos. Afectan a personas inmunodeprimidas y al turismo, sobre todo, llegando a producir varios muertos cada año. Un país donde la principal riqueza es el turismo no puede permitirse esta fama por causa de la Legionella.

El método Presencia/Ausencia (P/A) ha demostrado ser más fiable que el de Filtración de Membrana (MF) a causa del exceso de falsos negativos de este último método (Jacobs & Co, 1986, App.Env.Microbiol.Vol.51, 5). Además es mucho más cómodo cuando no se requiere recuento, sino absoluta ausencia, como es el caso de Legionella pneumophila.

MICROKIT diseñó desde Noviembre de 1997 un kit P/A para enriquecimiento selectivo de Legionella en 500 ml de agua.

El medio era una modificación en caldo del BCYE+GVPC ISO 11731, lo que justificó su elevado coste. La ausencia de Agar permite su utilización como Caldo de Enriquecimiento Selectivo Directo sin necesidad de filtración, ahorrando la manipulación y el riesgo de generación de aerosoles propios de la filtración de membrana. Desde Noviembre/2001,  la adición de otro componente, diseñado por MICROKIT,  mejora el carácter diferencial del kit, que ya  no sólo es  un excelente screening en aguas de red sino también para aguas sucias, como son las aguas de las torres de refrigeración. Y el rediseño de su concentración,  permite su uso en 1000 ml de agua. Tras el imperativo legal R.D. 865/2003, que exige efectuar recuentos de Legionella pneumophila, el kit se readaptó para ser usado como caldo revitalizante; para evitar multiplicación celular, se comprobó que aplicándolo durante 24 horas a 25°C y siguiendo después el método ISO  11731, no había multiplicación celular pero sí detección incluso para recuentos con lentículas de 40 ± 10 ufc/l. Incubaciones a temperaturas mayores o menos prolongadas no dan buenos resultados.

Referencia: RPL330 Caja 20 test  (tubos + swabs) o bien TPL016 (sólo tubos) TPL017 (tubos de sólo BCYE broth para aguas con poca flora acompañante)

MODO DE EMPLEO:

Atemperar a 37°C y agitar vigorosamente el tubo para homogeneizar (puede estar sólido o cristalizado por su elevada concentración, y con el carbón granulado precipitado). Añadir todo su contenido a un recipiente estéril con Tiosulfato (DCPJC1N) donde se hayan recolectado 1000 ml del agua de muestra.

Raspar fuertemente con una de las torundas estériles incluidas en el kit (se pueden pedir aparte como VSN251), el biofilm y las costras calcificadas u oxidadas de las paredes del depósito, la alcachofa de la ducha o de los conductos donde el agua se estanca. Se debe agitar la torunda con limos dentro del agua de muestra, de modo que parte de dichos limos pase de la torunda al líquido, ya que L.pneumophila es bentónica y su presencia en el plancton es sólo su forma de dispersión. Este paso es fundamental para evitar un gran número de resultados falsamente negativos. Guardar la torunda en su  tubo, transportarla a temperatura ambiente, y guardarla a 4-8°C para posteriores envíos que eventualmente puedan realizarse a laboratorios de referencia y/o para siembra directa de los limos diluidos en placa, según Norma ISO 11731.

Si se desea analizar una muestra mayor de agua, pueden filtrarse los litros deseados por  membranas estériles de 0,2µm (VAC022) y añadir éstas a los 1000ml del agua en los que se realizará el test, o enrollarlas en el tubo del kit.

Agitar el conjunto, aplicarle un shock térmico de 30 minutos a 60 ºC (y/o bien acidificar la muestra 5 minutos a pH 2,2, aunque no recomendamos esta ultima práctica por ser el mayor punto crítico de eliminación de Legionella pneumophila además de la flora acompañante) a fin eliminar la flora competitiva (falsos positivos, demostrados sobre todo si la turbidez se da antes de 72 h), e incubar a (>25)-36-(<45) ºC, 1-5-(14) días. El carbón granulado se depositará después de la inoculación, en el fondo del frasco, absorbiendo metabolitos, residuos de biocidas y otros inhibidores de Legionella pneumophila. No volver a agitar.

Este Kit resulta incluso aún más útil que como P/A, como preenriquecimiento revitalizador y selectivo de muestras de agua: Incubar en 1 litro de agua de muestra a 25°C durante 24 horas y seguir la técnica ISO 11731 (o bien, si no se desea recuento, sino enriquecimiento selectivo, incubar 5 días a 37°C y luego sembrar en estría una gota del fondo con carbón, en GVPC Agar, por agotamiento, a fin de evitar el solapamiento de colonias). Los servicios intercompartivos SEILAGUA están demostrando que este método, seguido de siembra en BCYE +GVPC Agar recupera contundentemente más Legionella que el método ISO 11731 por filtración de membrana:

SENSIBILIDAD (escasez falsos-) por métodos según Servicio Intercomparativo de Aguas (SEILAGUA) AÑO 2002 (el P/A MICROKIT Legionella se usaba como enriquecimiento selectivo 5-14 días)

pa legionella2

El uso del Caldo Legionella GVPC de Laboratorios MICROKIT, antes usado como kit Presencia/Ausencia o como enriquecimiento selectivo, está obteniendo unos resultados impresionantes como paso revitalizador, para seguir la ultima Normativa, Y PODER REALIZAR RECUENTOS. Nadie puede reprobar el uso de este  kit como pre-enriquecimiento revitalizador 24 h a 25°C,  previo a la decantación y posterior filtración de membrana del litro, ya que Legionella pneumophilla en 24 h se revitaliza contundentemente, máxime con el bombardeo de biocidas que se utiliza últimamente. Los resultados comparativos cualitativos (cuantitativos no existen porque los participantes no los han dado) con y sin este nuevo protocolo de preenriquecimiento previo a la técnica ISO 11731, en los informes del servicio intercomparativo SEILAGUA 2003-2004 (para los servicios en los que se inoculó Legionella pneumophila), han sido aún más contundentes que en 2002 (en que se obtuvo una Sensibilidad 41,61% con MF y 77,50% con este kit usado como P/A o como enriquecimiento 5-14 días), con estos resultados de revitalización de 24 horas:

palegionella 1

* Destacamos que el inóculo en ese servicio era de sólo 30-50 ufc/litro, cuando en los otros servicios siempre era de 103 –106 ufc/litro.

A pesar de estos resultados tan impresionantes, el número de usuarios del caldo GVPC de MICROKIT ha ido disminuyendo alarmantemente incluso dentro de los participantes de SEILAGUA, lo que demuestra el daño que la aplicación estricta de la legislación puede hacer en la calidad de los resultados de un análisis. La posibilidad purista de que las células se repliquen en un preenriquecimiento de 24h a temperatura ambiente, es mucho menos alarmante que el hecho de que el método MF esté dando tantos falsos negativos a nivel nacional por no aplicar revitalización previa. El límite de detección en los laboratorios acreditados con el método ISO 11731, de cerca de hasta incluso 800 ufc/l, mejora contundentemente a, al menos, 40 ±10 ufc/l si intercalamos el caldo Legionella GVPC RPL330 durante 24 horas a 25°C.

 INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS:

      En el método P/A, toda muestra turbia se considera presuntamente positiva. Las muestras sin turbidez se consideran negativas, por lo que este kit actúa como screening negativo, ahorrando la metódica clásica en todas las muestras sin Legionella. En el nuevo diseño 11/2001, Legionella crece sin flóculos en el fondo y los falsos positivos, con el fondo floculado. Así, el kit pasa a ser más sensible en aguas con alta carga de flora acompañante.

En caso de presunto positivo, lleve la muestra incubada a un laboratorio especializado, o bien:

Si incubó 5-14 días, sembrar 0,1 ml de la zona profunda con carbón, donde se concentra la Legionella,  tambien por ser microaerófila (ahorrando así falsos positivos de las Pseudomonas, Micrococos y Bacillus acompañantes capaces de crecer en GVPC), sobre sendas placas de Legionella GVPC Selective Agar (MICROKIT placas PPL030, plaquitas PPL908, frascos preparados RPL018 o deshidratado DMT007 + suplemento SBL604), por extensión con asa de Digralsky (VRR154) o agotamiento. Incubar en las mismas condiciones que el  kit, en atmósfera húmeda (un vaso de agua dentro de la estufa, al menos). Las colonias de Legionella son, tras 2-15 días de incubación, pequeñas (1-2 mm), de color blanco-gris-azulado, brillantes, cristalinas, circulares, lisas, suavemente elevadas y con los bordes enteros. Como control positivo puede utilizarse la cepa Legionella pneumophila (CRIOSTRAIN MKTA 33152).

Confirmar las colonias Oxidasa + (lento) (MICROKIT KOT050), Catalasa + (MICROKIT KMT299) (y, si se puede esperar, sin crecimiento en Agar Sangre u otro medio general: TSA, PCA, YEA, Nutrient Agar…), con látex M-Legionella (KMB301) serogr.1-15.

Si incubó 24 horas a 25°C aprox., pase el litro de agua revitalizada, decantando el carbón, y calentando justo antes de filtrar, al método ISO 11731.

PRECAUCIONES: Legionella no es patógeno de alto riesgo (=clase III), pero evite la inhalación de aerosoles durante su incubación, sobre todo por parte de personas inmunodeprimidas. Esterilice el material y los kits utilizados, añadiéndoles abundantes carbón activo (MICROKIT SMT975) y lejía. El usuario es el único responsable de la eliminación de los microorganismos según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.

Material necesario no incluído: Frascos 1000 ml estériles para la incubación. Pueden utilizarse frascos tomamuestras de 1 litro con Tiosulfato (DCPJC1N). Cepas de control de Legionella pneumophila. Participación en servicios intercomparativos, como SEILAGUA.

Para más información sobre nuestro KIT P/A LEGIONELLA, no dude en ponerse en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16

KITS PREPARADOS MICROKIT® P/A

EL MÉTODO  MICROKIT P/A (PRESENCIA/AUSENCIA) PARA ANALISIS DE AGUAS: KITS PREPARADOS MICROKIT® P/A

P-A 1

Tradicionalmente el análisis microbiológico de aguas y otros productos que requieren una muestra mínima de 100 ml, se ha realizado por el método de los tubos múltiples por Número Más Probable (MPN) o por Filtración de Membrana (MF).

Ambos métodos suponen importantes manipulaciones, tiempo y un alto coste relativo; además, el segundo requiere aparataje de filtración.

Un tercer método, el de Presencia/Ausencia (P/A), hace ya casi una década que fue introducido por MICROKIT en nuestro país y ha demostrado no sólo ser el más cómodo de inocular y el más simple de interpretar, sino además el más fiable,  por su mayor sensibilidad; en efecto, publicaciones americanas anteriores (JACOBS & Co., Mayo/1986, App.Env.Microbiol., Vol. 51, nº 5, pp.1007-1012) ya demostraban una importante ventaja: nada menos que el 36% de detecciones por P/A, eran falsos negativos con MF y un 18% de detecciones por P/A, eran falsos negativos con MPN.

La nueva Directiva Europea de aguas de consumo humano (3/XI/1998) y el BOE 21/02/2003 obligan a la ausencia de E.coli, Enterococos y Clostridium perfringens y sus esporas en 100 ml de toda agua de consumo, incluidas las que intervienen en fabricación de alimentos. Ello permite aplicar el método más sencillo y sensible (P/A) a partir de ahora.

Un estudio intercolaborativo realizado en España entre Enero de 1998 y Mayo del 2000, coordinado por esta empresa, con 10 Laboratorios participantes, y 500 muestras comparativas (XII Congreso Nacional de Microbiología de los alimentos, Oviedo, 9/2000), valida las grandes ventajas del método: No necesita manipulaciones ni aparataje, es más sensible, los microorganismos no se estresan a causa de una filtración o de un cambio de hábitat (aguas salobres o marinas que en filtración dejan de rodear al microorganismo…). El servicio intercomparativo SEILAGUA 2002-2003 demuestra que el método P/A, con los kits de MICROKIT es, en conjunto, y a la vista de su extraordinaria sensibilidad, ¡hasta 5 veces más fiable que el método de Filtración de Membrana, en conjunto  entre los 11 parámetros microbiológicos comparados.

Todos los kits preparados por MICROKIT para P/A, incluyen inactivadores del cloro que pueda contener el agua de muestra. Se incuban, en general 24 horas a 37 ºC y se leen por virajes de color o turbidez. Son altamente selectivos pero, como todos los medios de cultivo, y como los otros métodos, no son específicos, por lo que pueden requerir posteriores confirmaciones bioquímicas y/o inmunológicas. Su única limitación es que no permiten recuento sino, como su nombre indica, si es positivo o no el parámetro buscado.

Presentación de los kits P/A MICROKIT.

La presentación de los kits P/A MICROKIT, la gama más completa a nivel internacional, varía en tres formatos (en la imagen, frascos y tubos preparados y estériles, y kits en polvo irradiado prepesado, para economizar costes):

1. Frascos preparados estériles (líquidos).P-A2

 

 

 

 

 

2. Viales o tubos de polvos prepesados irradiados.P-A3

 

 

 

 

 

3. Tubos preparados estériles (líquidos).

 

P/A (PRESENCIA/AUSENCIA) COMO MÉTODO DE ANÁLISIS DE AGUAS

Tradicionalmente, las muestras, en la mayoría de productos alimentarios, químicos y cosméticos se consideran suficientes si son de 1 ml (ó 1 g) porque la contaminación microbiana es relativamente elevada.

Cuando hablamos de productos limpios, como los farmacéuticos, las aguas potables y los refrescos, la muestra mínima representativa pasa a ser de 100 ml ó más, dada la baja concentración microbiana esperable, y los métodos tradicionales no sirven.

De ahí surgió hace muchas décadas el método del Número Más Probable (MPN), para realizar recuentos en líquidos presuntamente poco contaminados con métodos estadísticos.

Posteriormente, la técnica de Filtración de Membrana (MF), desarrollada ya durante la Segunda Guerra Mundial, substituyó a la antedicha por ser más representativa la muestra realmente analizada (100 ml frente a 33 ml, en general), entre otras importantes razones (ver kits UFM de MICROKIT).

Pero cuando en el producto no debe de haber ni un solo microorganismo, como es el caso, por ejemplo, de los coliformes totales, de los coliformes fecales y de los estreptococos fecales en aguas potables, el método MPN es inadecuado por defecto y el de MF lo es por exceso.

Surge así el método de Presencia/Ausencia (P/A), ideal para detectar la presencia (1 ó más células) o ausencia (ninguna célula) en muestras de hasta 100 ml.

El método P/A es mucho más sensible (tienen muchos menos falsos negativos) que el método MF, pero es menos específico (tienen más falsos positivos). Por ello es tan útil como screening negativo, para poder procesar un gran número de muestras. Si el kit da negativo, el resultado es negativo. Pero si el kit sale positivo, hay que confirmar esa muestra aislando en placa e identificando colonias aisladas. 

Todos nuestros kits P/A permiten ahorrar 4-8 horas de incubación si, antes de inocularlos, se precalienta a 37°C la muestra de agua en un baño María.

Nuestros kits están validados para uso en aguas continentales, no marinas ni salinas.

Diseñado y fabricado por LABORATORIOS  MICROKIT, S.L. desde 1.994.

Para más información sobre nuestras KITS PREPARADOS MICROKIT® P/A no dude en ponerse en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16

CROMOKIT BACILLUS CEREUS

CROMOKIT BACILLUS CEREUS AGAR

Medio cromogénico para recuento diferencial de B.cereus y otras especies relacionadas de Bacillus en alimentos (Con base de Agar Mossel CENAN, ICMSF, ISO 7932:2004, ISO 21871:2006).

PREPARACIÓN

Disolver 49,2 g del medio en 1 litro de agua destilada. Calentar agitando hasta ebullición para su bacillus cereusdisolución. NO Autoclavar. El color final del medio es salmón, transparente. Para conseguir selectividad, enfriar a 50 ºC y añadir asépticamente 10 ml de Polimixina B 106UI (Ref: SMS009, reconstituidas en 100 ml de agua estéril, o bien 50 ml de yema con polimixina Ref: SAJ001 para retener más tiempo el color del posible halo, al volverse el medio más opaco). Mezclar y repartir en placas, sin recalentar. Si se desea detectar especies como B.coagulans, B.pumilus, B.subtilis (colonias verdes o verde-amarillentas), B.megaterium (colonias amarillas y mucosas)… no añadir la polimixina, Pero entonces crecerán otros Gram positivos, a menudo con colonias azules, como los enterococos.

PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO. MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO EN LUGAR SECO FRESCO Y OSCURO. AGITE EL BOTE ANTES DE USAR.

CODIGO: DMT505

PRESENTACIÓN del CROMOKIT BACILLUS CEREUS : MEDIO DESHIDRATADO (500 g y 100 g); PLACAS PREPARADAS con 3 meses de caducidad a su recepción por el laboratorio.

CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO

Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar laboratorio, tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,…)

DESHIDRATADO: Polvo grueso, asalmonado  PREPARADO: Estéril, salmón

CONTROL DE CRECIMIENTO CUANTITATIVO 24-48 horas a 30 ºC aproximadamente:

Bacillus cereus MKTA 10876, Excelente, Colonias grandes, céreas, aplanadas, con centro azul claro. Algunas colonias muestran halo crema en el medio salmón. Inoculando 100 ufc de este microorganismo en este medio, crecen al menos 50 colonias típicas.

Bacillus thuringiensis MKTA 10792, Excelente, crece con colonias similares a las de B.cereus y a menudo halo crema en el medio salmón, pero los bordes de las colonias son irregulares.

Staphylococcus aureus MKTA 25923, Excelente, Colonias amarillas.

Enterococcus faecalis MKTA 29212, Inhibido completamente.

SIEMBRA

Las placas no deben estar recién hechas, ya que en este medio hay que dejarlas enfriar más de una hora para que la superficie quede bien dura. Sembrar en superficie 0,1 ml de muestra y su serie de diluciones decimales, extendiendo con un asa de Digralsky (VCL155, VRR154). Esta siembra es ideal para máximo recuento de microorganismos muy aerófilos como B.cereus. Incubar 24-48 horas a 30 ºC aproximadamente.

INTERPRETACIÓN

Contar como B.cereus todas las colonias planas, céreas, con centro azul y bordes regulares, con o bacillus cereus2sin viraje crema alrededor, ya que la mezcla cromogénica es específica para este subgrupo. Dado que B.cereus y B.thuringiensis son cepas bioquímicamente idénticas, el aspecto de sus colonias en este medio también lo es, aunque B.cereus crece con márgenes lisos, regulares, mientras B.thuringiensis lo hace con márgenes irregulares, con pequeños lóbulos. Tambien B.anthracis, algunas de cuyas cepas son el agente del letal ántrax, se considera actualmente por Bergey de este mismo grupo B.cereus.

El usuario final es el único responsable de la eliminación de los microorganismos según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.

Para cualquier consulta o aclaración sobre CROMOKIT BACILLUS CEREUS o cualquier otro producto MICROKIT no dude en ponerse en contacto con nosotros a través del número 91-897-46-16 o el correo electrónico microkit@microkit.es.

SEILAMBIENTE

SEILAMBIENTE: detección de microorganismos en Superficie+Aire

Laboratorios MICORKIT les ofrece el Primer servicio intercomparativo microbiológico diseñado, elaborado y coordinado en España, desde Enero de 2006, bajo Norma UNE 66543-1:1999 IN sobre Ensayos de Aptitud por Intercomparación de Laboratorios, para el  “Control de ambientes interiores, Industria Farmacéutica, Quirófanos…” SEILAMBIENTE.

Sabíamos cómo apreciarían este servicio los clientes de Control de ambientes interiores, Industria Farmacéutica, Quirófanos… que precisan de herramientas externas de control de calidad para sus validaciones, y aquellos que desean tener mayor confianza en sus resultados analíticos, y que hasta ahora estaban desamparados por la ausencia de servicios comparativos microbiológicos para estas matrices (aire y superficies). Lamentamos no poder ofrecer este servicio fuera de la Union Europea ni en Canarias, Ceuta o Melilla. Nuestra experiencia desde 1999 en este tipo de servicios para otras matrices (alimentos, aguas y cosméticos), el conocimiento profundo de la UNE 100012 sobre higienización de sistemas de climatización y el de la Norma ISO 17025 sobre acreditación de laboratorios, creemos nos hace candidato ideal para coordinar este servicio. Máxima confidencialidad: Sólo cada laboratorio conoce su código secreto

El Servicio Intercomparativo MICROKIT para muestras ambientales, SEILAMBIENTE, incluye el recuento total (SIN PATÓGENOS) de los siguientes indicadores:

SELAMBIENTE

Este servicio es anual: Recibirá sus muestras la tercera semana de Noviembre.

En cada muestra hay varios productos, además del folleto actualizado con protocolo  y tabla de presentación de resultados:

  • 6 botes de desinfectante ambiental Airesano (almacenar entre 15 y 25°C).
  • FRASCO pulverizadorSELAMBIENTE 2
  • 1 TUBO con LENTÍCULAS CUANTITATIVAS de 1os microorganismos inoculados “INÓCULO SEILAMBIENTE”. No se incluyen patógenos.
  • FRASCO con Solución Ringer

(No incluye las placas Rodac ni los laminocultivos necesarios)

 

INSCRIPCION.

Adjunte el comprobante de la transferencia que realice a la cuenta que le proporcionaremos si no trabaja a través de distribuidor ni es cliente habitual de MICROKIT, por el valor indicado en nuestra lista de precios vigente + 7% IVA, junto con sus datos (empresa, persona, dirección completa, teléfono, fax, CIF…), al fax 91-897 46 41 o al email microkit@microkit.es. Fecha límite de la inscripción: finales de Octubre. Las solicitudes posteriores se tramitarán para el siguiente año. REF: SMT006. Déjese becar fidelizando su consumo de medios y kits MICROKIT. A solicitud de los estimados usuarios, en vez de uno podemos realizar 2 ó 3 circuitos SEILAMBIENTE al año, siempre que haya suficientes participantes.

Si usted está interesado en inscribirse a nuestro programa SEILAMBIENTE 2014, dese prisa y póngase en contacto con nosotros, aún está a tiempo de inscribirse.

Si desea más información sobre nuestro Servicio SEILAMBIENTE, rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto . O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16