Archivo de la categoría: microbiologia de aguas

Optimización en los análisis microbiológicos de
AGUAS Y BEBIDAS.
Nuevos métodos de análisis microbiológicos utilizados exitosamente en los laboratorios líderes

MICROKIT® P/A-ENTEROCULT

KIT  MICROKIT® P/A-ENTEROCULT SELECTIVO-SPECÍFICO-CÓMODO-ECONÓMICO.

Un agua potable, desde un punto de vista más completo que el del análisis mínimo, no sólo está libre de coliformes en 100 ml demuestra; también están ausentes en ella los estreptococos fecales, indicadores de contaminación  fecal, más resistentes que los coliformes y a menudo más indicadores de contaminación por ganado que de contaminación humana. La nueva Directiva Comunitaria Europea da la máxima importancia a la ausencia de Enterococos en aguas de consumo humano.

Gracias al polvo Enterocult de MICROKIT, diseñado a partir de medio base KAA Broth, el análisis de ausencia de estreptococos fecales en aguas potables es ahora posible de la forma más cómoda y fiable conocida. La incorporación de Tiosulfato Sódico, ya incluido en el medio preparado de MICROKIT® P/A-ENTEROCULT , ahorra el tratamiento previo de la muestra con el mismo. Los viales de polvo irradiado no lo contienen, por ser altamente higroscópico. Si usa éstos en vez del medio preparado, trate la muestra previamente con Tiosulfato Sódico.

Enterocult

Añada a 100 ml de agua de muestra, 1 vial de 1g del polvo estéril ENTEROCULT. Cierre el bote y trabaje en condiciones asépticas para no contaminarlo con estreptococos fecales.

Agitar a temperatura ambiente hasta la completa disolución. Si fuese necesario, en muestras de agua muy fría, calentar el conjunto a 25-37°C. No calentar por encima de 37°C, ya que no se requiere ni se debe esterilizar. El color del agua debe ser ahora ámbar y debe emitir una fluorescencia natural, que queda más patente bajo luz de 366 nm y en la superficie.

Incubar a 35-37°C (41°C) durante 16-24-(48) horas.

El ennegrecimiento del agua y la pérdida de fluorescencia son prueba de presencia de estreptococos fecales, mientras que la falta de ennegrecimiento y el mantenimiento de su fluorescencia en 24 horas demuestran su ausencia.

Presentación:. Linterna U.V.A. 366 nm MICROKIT (VMT050). Viales pre-pesados para 100 ml de agua (FPA901). Frascos preparados con Tiosulfato Sódico incluido, para añadir directamente 100 ml de muestra de agua (RPL301).

Material necesario no incluído: Tiosulfato Sódico para eliminar el cloro (SMT976), Bote estéril 100ml (sólo se incluye si se solicita en el pedido) (VML155), Estufa o incubador 35-37 ºC (VRP001 ó VMT051). Control de calidad positivo: CRIOSTRAIN Enterococcus faecalis MKTA 29212. Recomendamos asimismo la participación en servicios intercomparativos como SEILAGUA, para validar los procedimientos y los operarios.

Validación:

Realizada durante 7 años de intercomparación de 70 laboratorios de toda España en más de 700 muestras duplicadas. Se demuestra comparado con filtración de membrana en el medio oficial para enterococos fecales (Slanetz-Bartley Agar + Bilis Esculina Azida Agar), una sensibilidad del 100% frente al 95,6%  del método oficial. Una especificidad del 100%  frente al 61,0% del método oficial. Y un límite de detección coincidente en ambos métodos

Si desea más información sobre nuestro MICROKIT® P/A-ENTEROCULT no dude en contactar con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es, o por teléfono en nuestro telefono 91-897 46 16

 

M-IDENT®- Pseudomonas aeruginosa

M-IDENT®- Pseudomonas aeruginosa es un Kit de confirmación de Pseudomonas aeruginosa en aguas por Filtración de Membrana s/Norma UNE 12780:2002 y en cosméticos.

Pseu-aeruginosa3PRESENTACION:
KIT DE 9 TEST para la confirmación de colonias sospechosas de Pseudomonas aeruginosa:
– 9 tiras estables para el test de la Citocromo-oxidasa (KOT051-)
– 9 tubos líquidos de Caldo Acetamida, incoloro (TPL113).
– 1 gotero de 5 ml de Reactivo Nessler, suficiente para las 9 pruebas (SMT007).
– 9 tubos sólidos de Agar King B inclinado, de color crema (TPL012)
EL KIT M-IDENT®- Pseudomonas aeruginosa NO INCLUYE:
– Cepas de reserva (CRIOSTRAINS o SALVAJES), de trabajo o cuantitativas para validar los reactivos una vez llegados a fábrica o tras almacenamientos prolongados o inadecuados.
– Participación en servicios intercomparativos como SEILALIMENTOS, SEILAGUA® y SEILAPARFUM para validar los procedimientos y los operarios
– Lámpara de luz ultravioleta de 366 nm (ver Linterna MICROKIT VMT050)
Si desea más información sobre nuestro M-IDENT®- Pseudomonas aeruginosa no dude en contactar con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es, o por teléfono en nuestro telefono 91-897 46 16.

M-IDENT®-Escherichia coli

M-IDENT®-Escherichia coli  es un Kit de confirmación de Escherichia coli en aguas, alimentos y cosméticos s/Normas ISO/CD 6461-2:2002 e ISO 16649-2:2001.

MODO DE EMPLEO del M-IDENT®-Escherichia coli E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

Inocular una porción de la colonia sospechosa pura, procedente, de Tergitol Chapman TTC (o del medio que sea), en estría en el Agar TBX. Incubar 24 h a 36+2ºC, en condiciones aerobias. Observar el crecimiento de colonias caracterísitcas, verde-azuladas.

EColi-1Al mismo tiempo que se inocula en el Agar TBX, inocular por dilución en el Agua de Triptona con triptófano. Incubar 24 h a 44,5°C (si se incuba a 35-37°C, se pueden obtener falsos positivos de coliformes-no E.coli para la prueba del indol). Añadir 0,5 ml de Reactivo de Kovacs. Observar la inmediata aparición de un halo rosado en superficie, prueba positiva de Indol.

Escherichia coli, según Normas ISO/CD 6461-2:2002 e ISO 16649-2:2001, es toda colonia amarilla o anaranjada procedente de Tergitol Chapman TTC Agar, que crece en TBX Agar con colonias azules-verdosas y/o que resulta indol positivo en Agua de Triptona con Triptófano a 44,5°C.

EColi-2M-IDENT®-Escherichia coli  ES PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO

Si desea  más información sobre nuestro M-IDENT®-Escherichia coli no dude en contactar con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.eso por teléfono en nuestro telefono 91-897 46 16.

PRESENCIA/AUSENCIA

EL MÉTODO P/A (PRESENCIA/AUSENCIA) PARA ANALISIS DE AGUAS: KITS PREPARADOS

P-A 1

POTABILIDAD MICROBIOLOGICA DE LAS AGUAS MEDIANTE EL METODO DE PRESENCIA/AUSENCIA (Kits preparados sin necesidad de Filtración de Membrana ni de Número Más Probable)

Extraído de la Directiva Europea sobre aguas de consumo humano, (obligada desde el 3/XI/2001, y sobre todo desde su transcripción a B.O.E. 45 de fecha 21/2/2003). Ésta nueva Normativa, además de afectar a las aguas potables y envasadas, también afecta a todas las aguas de uso en industrias alimentarias, para producción, lavado, etc.:

 

TIPO DE ANÁLISIS PARÁMETRO NIVEL GUIA KIT P/A MICROKIT
1.      Parámetros mínimos: E. coli 0/100 ml RPL303
Estreptococos fecales D-Lancefield incluídos Enterococos (UE 5/12/98) 0/100 ml RPL301
2.      Microorganismos indicadores: Bacterias aerobias a 22 ºC. 10/1 ml RPL305
(Además de 1.) (Kit 40 Tubos + 40 placas)
Coliformes 0/100 ml RPL303
Clostridium perfringens y sus esporas 0/100 ml RPL308

Desde la publicación de estos datos, la técnica MPN para controlar la potabilidad de aguas queda obsoleta, quedando relegada sólo a recuento en productos no filtrables; en efecto, al hablar la legislación de ausencia en 100 ml no se puede utilizar la técnica de MPN y extrapolar resultados a partir de una muestra significativamente inferior (33 ml) a los 100 ml requeridos.

Los recuentos en 100 ml pueden realizarse con la técnica de MF, pero en el caso que nos ocupa podemos utilizar las MPN-RACKS (Ref: 1001020) para convertir cualquier kit P/A en Número Más Probable.

Por todo ello surge con fuerza la nueva técnica de Presencia /Ausencia (P/A), útil tanto para trabajo de campo como para Laboratorio, cuando lo que se precisa no es recuento, sino detección de un microorganismo en grandes muestras.

Todos los kits Presencia/Ausencia de MICROKIT incorporan inactivadores de la eventual presencia de cloro en el agua, que actuaría como bacteriostático y enmascararía los resultados como falsos negativos.

El método Presencia/Ausencia es mucho más sensible (tienen muchos menos falsos negativos) que el método MF, pero es menos específico (tienen más falsos positivos). Por ello es tan útil como screening negativo, para poder procesar un gran número de muestras. Si el kit da negativo, el resultado es negativo. Pero si el kit sale positivo, hay que confirmar esa muestra aislando en placa e identificando colonias aisladas.

Nuestros kits están validados para uso en aguas continentales, no marinas ni salinas.

        Todos nuestros kits Presencia/Ausencia permiten ahorrar 4-8 horas de incubación si, antes de inocularlos, se precalienta a 37°C la muestra de agua en un baño María.

Si desea más información sobre nuestros Kits Presencia/Ausencia rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto . O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16

SEILAGUA

SEILAGUA: servicio intercomparativo microbiológico.

Presentamos el primer servicio intercomparativo microbiológico diseñado, elaborado y  coordinado en  España, desde  Marzo  de  2002,  bajo Norma UNE 66543-1:1999 IN sobre Ensayos de Aptitud por Intercomparación de Laboratorios, y según las directrices de la guía ENAC-14 (Sept.2008) sobre participación en programas de intercomparación, por una empresa líder en diseño y fabricación de medios y kits, cuyo alcance de certificación internacional ISO 9001 por  parte de AENOR los incluye y avala, garantizando su buen hacer en cada auditoría anual. Sabíamos cómo apreciarían este servicio los clientes que precisan de herramientas externas de control confianza en sus resultados analíticos. Tras sólo un año, el éxito de este servicio rebasó todas nuestras espectativas, al participar en él muchos de los más importantes laboratorios de aguas de toda España.

¡EN 2013 LOS SERVICIOS SEILA CUMPLIERON 15 AÑOS!

En su primera generación (3/2002), el Servicio Intercomparativo MICROKIT para muestras de agua, SEILAGUA®, incluyó la presencia/ausencia de los patógenos de aguas que no tenían otros servicios:  Pseudomonas aeruginosa (o B.cepacia),Aeromonas hydrophila (descatalogado), Legionella pneumophila (cepa   no implicada en brotes),Staphylococcus aureus, Salmonella spp.,   Shigella spp. (nunca S. dysenteriae III), Vibrio cholerae (cepa de patogenicidad atenuada), Cianobacterias (Rto.desde 2007)

En su segunda generación (1/2003), se añadieron, tambien en presencia/ausencia (ya que la nueva Normativa habla de 0, no de <1,  de modo que la detección es cualitativa, por imperativo legal), los tres parámetros de la nueva legislación de aguas de consumo y aguas envasadas: E.coli+Coliformes, Enterococos fecales, Clostridium perfringens + sus esporas.

Desde  la  tercera  generación (10-12/2003), los  participantes  que  lo deseen puede dar sus resultados con recuentos en los parámetros sin enriquecimiento, cuantos más participantes cuenten, más fiable será el informe estadístico posterior. También entonces se elimina Aeromonas hydrophila, por no analizarlo ningún participante. A petición de la inmensa mayoría de usuarios, se sustituye desde entonces por:

– Recuento de microorganismos cultivables a 22°C (el imperativo legal es que la flora saprófita ha de estar en menor concentración de 100 ufc/ml),

– Recuento de microorganismos cultivables a 37°C (la flora total asociada al hombre debe ser menor de 20 ufc/ml), por lo que es obligado realizar recuentos).

Cada microorganismo puede o no tener adscrito un “falso positivo”, o pariente similar, a fin de que el ejercicio sea más específico. En cada servicio los microorganismos diana pueden ser diferentes de entre los 13 indicados. Cada laboratorio buscará todos los microorganismos que desee de entre los 13 posibles inoculados, lo que supone un inmenso ahorro económico con respecto a otros servicios, mayor cuantos más parámetros se analicen. Máxima confidencialidad: Sólo cada laboratorio conoce su código secreto.

Este servicio es trimestral: Recibirá sus muestras la primera-segunda semana de Enero, Abril, Julio y Octubre. Puede apuntarse a 1, 2, 3 ó 4 servicios al año, a elegir, aunque le recomendamos los 4, para que pueda abarcar la presencia de la casi totalidad de los 13 parámetros, y para que pueda comprobar si las Acciones Correctoras que levante le ahorran la repetición de errores. En cada muestra hay 4 productos, además del folleto actualizado con protocolo y tabla de presentación de resultados:

seilagua– 3 botes de 1 litro de agua estéril, para evitar interferencias desconocidas de la flora inicial (almacenar a temperatura ambiente).

– 1 pipeta Pasteur estéril para transferir el inóculo.

– 1 tubo “INÓCULO SEILAGUA®”, con los microorganismos inoculados,  con  estabilidad  y   homogeneidad  contrastadas, recuentos  e incertidumbres conocidas y certificadas  (almacenar  a 4-15ºC hasta comenzar el análisis), con lentículas de inóculo.

-1 tubo con 9 ml de “CALDO REVITALIZADOR” de TODOS los posibles positivos (almacenar entre 4 y 21 ºC).

Se guardan un mes algunas muestras de contraste para quien quiera repetir sus análisis tras el informe.

Protocolo de trabajo: El día de comienzo del análisis (preferiblemente el siguiente a la recepción de la muestra y, como muy tarde, la semana anterior a su caducidad, impresa en la etiqueta), se incluirá el contenido del tubo revitalizador a 25ºC en el tubo de inóculo, cerrando  y  volteando suavemente 10  veces  y dejando reposar y disolver 30 minutos, con el tapón desenroscado pero colocado, a temperatura ambiente (20-30°C), para revitalización. Volver a agitar e inmediatamente después se repartirá con la pipeta estéril a razón de 3 ml por cada un de las 3 botellas de 1 litro de agua. Sea preciso en este punto, los resultados van a depender mucho de esto. Se cerrará bien cada botella y se agitará volteándola entre 25 y 50 veces. Los tres litros de agua resultantes son la muestra inicial. Aunque no analice todos los parámetros, no añada más de 3 ml por cada litro de agua. Si no analiza Legionella, añada a sólo 2 de las botellas de 1 L los 3 ml de inòculo revitalizado en cada una. Si analiza pocos parámetros será suficiente con inocular 3 ml en una sola de las 3 botellas de 1 L. Si le sobra inóculo, por no analizar todos los parámetros, puede realizar duplicados intracomparativos (de uso interno) o bien destruirlo en el autoclave. Analice la muestra intercomparativa como si se tratara de una más de sus muestras. NO MODIFIQUE el protocolo habitual de su laboratorio, sea Filtración de Membrana, P/A, siembra en masa, NMP, etc.

EL SERVICIO SEILAGUA ESTÁ OFICIALMENTE   AVALADO POR:
Específicamente por   el alcance de nuestro certificado de empresa   ISO9001:“AENOR certifica   que el sistema de Aseguramiento de la calidad adoptado por la  empresa LABORATORIOS MICROKIT, S.L.    para  …La prestación del   Servicio de organización de ensayos intercomparativos para detección de microorganismos,  que  se    realizan    desde  los  establecimientos  Central  y Factoría, es conforme a las exigencias de la Norma   Española UNE-EN ISO9001:2000”. Esta afirmación se audita cada año, eliminando posibles recelos de algunos desconocedores de estos servicios. SEILAGUA ® está diseñado para Laboratorios ISO 17025, para   Laboratorios ISO 9001 y para   Laboratorios de industrias y potabilizadoras   (acueductos) comprometidas con la   calidad de sus análisis y con la mejora continua.
LABORATORIOS REFERENTES DE SEILAGUA:
Muchos laboratorios públicos y privados han incluido su participación en SEILAGUA en sus páginas Web, por lo que respetando su confidencialidad, lo avalan.

Los resultados deberá remitirlos en la tabla de presentación de resultados actual,  directamente al email confidencial consultastecnicas@microkit.es, como tarde la primera semana del mes siguiente al del envío: Febrero, Mayo, Septiembre y Noviembre. Presente los resultados de recuentos por duplicado o mejor por triplicado. Incluya la máxima información sobre su método, medios y kits confirmativos. Los laboratorios que remitan los resultados fuera de plazo no serán tenidos en cuenta en el informe, y no podrán reclamar abono alguno del coste del servicio, aunque se les enviará el informe. El informe final  contiene los VALORES ASIGNADOS para cada parámetro y los  resultados según los métodos usados (para que cada laboratorio identifique mejor el origen de sus problemas), con detección de No Conformidades y propuestas de Acciones Correctoras, Listas de comprobación de cada parámetro, conclusiones   para cada parámetro, calificación del RENDIMIENTO de cada laboratorio participante… El informe es realizado, desde Julio de 2004, por un microbiólogo doctorado, con gran experiencia en estos temas. Se enviará a los clientes 1-4 semanas después de la recepción de los resultados de los laboratorios (en Febrero, Mayo, Septiembre y Noviembre), POR E-MAIL.

Inscripción: Adjunte el comprobante de la transferencia que realice a la cuenta que le proporcionaremos (si no es cliente habitual de MICROKIT ni trabaja a través de distribuidor), por el valor indicado + 7% IVA, junto con sus datos (empresa, persona, dirección completa, teléfono, fax, CIF…), y el número/fechas de las muestras a las que se apunta, al fax 91-897 46 41. Si es cliente habitual de MICROKIT no es necesario el pago previo. Si trabaja a través  de  distribuidor consúltenos; dada  la  naturaleza  confidencial de  este servicio necesitamos sus datos para envío directo y asignarle su código secreto, aunque la factura siga haciéndola su proveedor. Fecha límite de la inscripción: 3 semanas antes del siguiente servicio. Las solicitudes posteriores se tramitarán desde el siguiente trimestre.

REFERENCIA: SMT004. p.v.p. El precio por muestra incluye hasta 15 parámetros positivos + negativos! Consulte el precio actualizado.

Si desea repetir el análisis, tras  conocer los  resultados, pida un SEILAINÓCULO- reproducibilidad AGUAS, ref:  SRI004.  Es  preferible que lo pida junto al SEILA, para que podamos asegurarle que aún quedan en stock inóculos idénticos.seilagua2

PRESENTACION DE RESULTADOS SEILAGUA®

Los resultados de los microorganismos buscados en SEILAGUA® deberá darlos como DETECTADO o NO DETECTADO en 1ml, 100-250 ml, según se desee, y en

1 litro (Legionella), usando las tablas actualizadas adjuntas en cada envío. Si realiza recuentos, especifíquelos en la columna de RECUENTO, por duplicado, o mejor por triplicado. Si no realiza recuentos, no rellene las casillas de recuento. Es imprescindible no utilizar tablas obsoletas ni otras diferentes a  las  enviadas  por MICROKIT, o el tratamiento de datos podría cometer errores y no serán tenidas en cuenta.

Para consultas o aclaraciones sobre éste o cualquiera de nuestros servicios no dude en ponerse en contacto con nosotros en el número de teléfono 91- 897 46 16 o a través del correo electrónico microkit@microkit.es.

 

R2 MEDIUM OLIGOTROFIC AGAR (A.P.H.A.)

R2 Medium Oligotrofic Agar (A.P.H.A.) (Pharmacopea medio S), recuento total en aguas potables, con máxima recuperación, al continuar las células en un medio tan oligotrófico como la muestra de agua. Recomendado para recuento en aguas cloradas y farmacéuticas.

R

Recuento total por filtración de membrana en un agua destilada: Gran recuperación y diversidad de flora mixta

 

R

Recuento total por siembra en masa.

 

COMPOSICIÓN: Extracto de levadura (0.50 g), Extracto de carne (0.50 g), Hidrolizado de caseína (0.50 g), Dextrosa-Glucosa (0.50 g), Almidón soluble (0.50 g), Di-K-Hidrógeno Fosfato (0.30 g), Sulfato de magnesio (0.024 g), Piruvato de sodio (0.30 g), Agar-Agar (15.00 g) (fórmula por litro.

ph final: 7.2 +/- 0.2

PREPARACIÓN: Disolver 18 gramos de medio en 1 litro de agua bidestilada. Agitar, calentando hasta ebullición, hasta la total homogeneización. Autoclavar a 121ºC durante 15 minutos. MANTENER EL BOTE BIEN CERRADO EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO. AGITE EL BOTE ANTES DE USAR. DESHIDRATADO CÓDIGO: DMT215

CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO

Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar laboratorio, tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,…)

DESHIDRATADO: Polvo grueso, Beige.

PREPARADO: Estéril, Blanquecino.

CONTROL DE CRECIMIENTO CUANTITATIVO 72 h a 37°C aproximadamente (o bien 5 días a Tª ambiente 21-28°C aproximadamente):

Escherichia coli MKTA 25922, Correcto. Con respecto a PCA estandarizado*, recuento 132-161%

Enterococcus faecalis MKTA 29212, Correcto. Con respecto a PCA estandarizado*, recuento 166-177 %

Pseudomonas aeruginosa MKTA 9027, Correcto. Con respecto a PCA estandarizado*, recuento 85-143%

Staphylococcus aureus MKTA 6538P, Correcto. Con respecto a PCA estandarizado*, recuento 111-133%

Aeromonas hydrophila MKTA 49141, Correcto. Con respecto a PCA estandarizado*, recuento >100%.

* El que cumple con recuperación superior al 92-125% con respecto a cepas cuantitativas trazables a la cepa tipo. Incertidumbres detectadas entre todos los lotes a lo largo de un año (la mayoría de la incertidumbre se debe a la cepa y a la proporción de cepas acompañantes inoculadas, no al medio).

PRESENTACIÓN: MEDIO DESHIDRATADO, FRASCOS PREPARADOS, PLAQUITAS HERMETICAS MF.

 MODO DE EMPLEO E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

Inocular 1 ml en profundidad o mejor 0,1 ml en superficie, o aún mejor una membrana en superficie por la que se hayan filtrado 1-100 ml de muestra. Duplicar la muestra. Incubar una placa 5-7 días a 22 ºC aproximadamente y la otra 3 días a 30-37 ºC aproximadamente. Contar todas las colonias, que serán muchas más que en medios normales como PCA, TSA, Nutrient Agar, Total Charcoal Agar, LPT Neutralizing Agar… ( Sanchís, 9/99, Interlaboratorio sobre la recuperción de medios nutritivos para recuento total en aguas, XVII Congreso S.E.M.). La flora termófila se asocia a procedencia humana. La mesófila al proceso de depuración. Este medio no es adecuado para recuento en alimentos, superficies o aire, sólo es mucho más sensible en aguas puras.

El usuario es el único responsable de la eliminación de los microorganismos según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.

Para cualquier consulta o aclaración sobre este producto u otros no dude en ponerse en contacto con nosotros en el teléfono (91) 897 46 16 o en el e-mail microkit@microkit.es.