Archivo de la categoría: medios de cultivo

informacion, novedades, nuevos métodos relacionados con los medios de cultivo, Microbiología de alimentos, aguas, medicamentos, cosméticos y ambiente:

Quanti-P/A Clostricult (QPA-CP y QPA-CSR)

Quanti-P/A Clostricult (QPA-CP y QPA-CSR)

Vea también el video del modo de empleo: https://www.youtube.com/watch?v=A8WifR8mZ1k

 3 fases de la disolución de un artefacto negro, después convertido, mediante amasado con pellizcos, en una nube azul oscuro, y luego bien disuelto, sin residuos.

Necesidad de contar por ambas caras (cara 1: 15 colonias, cara 2: 32 colonias). La destreza en su uso permite distinguir con el tiempo las colonias que solo se ven por una cara, de las que se ven por ambas, permitiendo así un recuento más exacto.

En muestras de alimentos, se puede incluir 1 g del alimento completo y analizarlo junto con los 99-100 ml del diluyente, no es necesario emplear bolsas Stomacher con filtro. Las partículas del alimento (en la foto, salmón) se distinguen perfectamente de las 4 colonias negras.

Colocación durante su incubación.

Linealidad en QPA-CP

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Si desea más información sobre nuestro MICROKIT® P/A COLICULT rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto . O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16

MICROKIT® P/A COLICULT-MCC

MICROKIT® P/A COLICULT-MCC

COLIFORMES / Escherichia coli

Detección Presencia / Ausencia (P/A) en 100 (250) ml de agua

   INTRODUCCIÓN:

Medio estéril COLICULT Cromofluorogénico (MCC Broth DMT900) para detección P/A (o recuento NMP empleando cubetas NMP Ref:1001020) de E.coli (fluorescente azul bajo luz de 366 nm VMT050 e indol + con reactivo de Kovacs SBH056) y demás

coliformes (viraje a azul), que puede elegir en tres formatos diferentes:

  1. RPL303 Frascos tomamuestras con caldo estéril hidratado y tapón a rosca para añadir en ellos 100 mL de la muestra de agua. Cajas 10u ó 9x10u
  2. FPA900 Viales prepesados de polvo estéril con tapón a rosca para añadir a 100 mL de la muestra de agua (no incluido bote 100 mL VML155 o bolsa standup 100 mL B2787B estériles). Cajas 40u ó 10x40u
  3. DMTI900- Botes 100 g de polvo estéril y cucharilla dosificadora para añadir a 100 mL de la muestra de agua (no incluido bote 100 mL VML155 o bolsa standup 100 mL B2787B estériles), Bote para 100 test

De gran utilidad como screening negativo de muestras rutinarias, al ser un método más fácil de emplear que la filtración de membrana y más fiable (escasez de falsos positivos y de falsos negativos, que en filtración de membrana es de nada menos que el 21% de las muestras analizadas en el mundo, por el estrés provocado durante la filtración).

 

También muy útil para que las potabilizadoras no dejen de analizar en festivos y fines de semana, ya que este método puede ser empleado por personal no especialista en microbiología, el mismo guarda de la depuradora puede hacerlo. La única precaución es que el operario no toque ni el agua ni el polvo con sus manos, para evitar contaminaciones artificiales.

 

MODO DE EMPLEO: Es necesario tratar previamente el agua clorada, mediante Tiosulfato Sódico, para que las células dañadas subletalmente se recuperen, excepto en los frascos tomamuestras RPL303, que ya lo incluyen.

Añadir los 100 mL de agua de muestra en el frasco o en el recipiente estéril que se va a utilizar; en el caso de los viales, añadir todo el contenido sobre el agua; en el caso de los botes de 100g, añadir una cucharadita rasa sobre el agua y cerrar el bote con la cucharilla dentro para los posteriores usos. Agitar para homogeneizar. Incubar 8-48 horas a 35-37° C (Coliformes totales y E.coli) ó a 44° C (Coliformes Fecales y E.coli). La muestra inoculada sirve también de medio de transporte, por lo que no es necesario incubar inmediatamente después de la toma de la muestra, pudiendo transcurrir varias horas entre toma e incubación.

Para aguas envasadas o de baño, se analizan 250 mL, por lo que debe añadir 2 viales ó dos cucharaditas por muestra (no se pueden usar los frascos RPL303 para 250 mL, al haber sido diseñados sólo para 100 mL). El medio funciona correctamente desde mitad hasta el doble de concentración, por lo que no es necesario afinar 2,5 viales ó 2,5 cucharaditas)

 

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS: El viraje a color azul (XGal) demuestra la Presencia de Coliformes (totales o fecales según la Tª  de incubación) en la muestra de agua. La Fluorescencia azul (luz azul por MUG) que se observa en la oscuridad bajo U.V.A. de 366 nm (linterna VMT050) demuestra la presencia de E.coli en la muestra de agua (confirmar con 0,5 ml de KOVACS-SBH056): anillo rojo de Indol en superficie es prueba positiva. E.coli   O157 H7 se detecta por ser XGal + (vira a azul), de acuerdo con la definición moderna de coliforme;  MUG – (no fluorescente a pesar de ser E.coli) e indol + (anillo rojo).

Es necesaria la ausencia (no viraje), que equivale a 0 ufc/100 mL (ó en 250 mL). Sólo en caso positivo debería repetirse la muestra por método cuantitativo si se requiere un recuento concreto, aunque la legislación exige 0 y por tanto no importa si hay 2 ó 950, en ambos casos el agua no es potable.

 

Material necesario no incluído: Tiosulfato Sódico para eliminar el cloro (SMT976) excepto en los frascos tomamuestras RPL303, que ya lo incluyen. Bote estéril 100ml (VML155), o bolsa estéril autosellable Stand-Up (B2787B). Estufa o incubador 35-37ºC (SIL12AR ó SIL24AR).

En homenaje a nuestro querido amigo, el Dr. Juan José Marcén, que falleció antes de conocer el éxito mundial de la fantástica idea que nos regaló en los años 90, este kit se regala a todas las ONGs que nos los pidan junto con otros parámetros P/A.

PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO O PARA ANÁLISIS DE CAMPO. MANTENER FUERA DEL ALCANCE Y DE LA VISTA DE LOS NIÑOS Y ANIMALES.

EXTREMADAMENTE HIGROSCÓPICO: MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO. AGITE EL BOTE ANTES DE USAR. EN ZONAS DE ELEVADA HUMEDAD AMBIENTAL, GUARDAR EL BOTE BIEN CERRADO EN UN TUPPER HERMÉTICO CON SILICAGEL.

 

CONTROL DE CALIDAD: Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar laboratorio, tras largos fletes, tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,…)

DESHIDRATADO: Polvo crema    PREPARADO: Paja

CONTROL DE CRECIMIENTO 8-24 h a 37°C aproximadamente:

  • E.coli WDCM 000013, vira a azul, da fluorescencia azul en la oscuridad bajo 366 nm y genera anillo rosa de indol, en 8h si el inóculo es alto y no procede de muestras estresadas, en 18-24h en caso contrario.
  • Enterobacter aerogenes  WDCM 00175: Vira a azul-turquesa en 18 h. No da fluorescencia con 366 nm. Indol – (no rojo en superficie)
  • Pseudomonas aeruginosa WDCM 00026, no vira a azul, no da fluorescencia azul en la oscuridad bajo 366 nm y no genera anillo rosa de indol.
  • Enterococcus faecalis WDCM 00009: Inhibido.

El usuario es el único responsable de la eliminación de los microorganismos según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.

Si desea más información sobre nuestro MICROKIT® P/A COLICULT rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto . O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16

MICROKIT® P/A CLOSTRICULT

MICROKIT® P/A CLOSTRICULT

 Clostridium perfringens y sus esporas

Detección Presencia / Ausencia (P/A) en 100 (250) ml de agua

INTRODUCCIÓN:

Medio estéril CLOSTRICULT Cromogénico diseñado por MICROKIT con base TSC y atmósfera de anaerobiosis para detección P/A (o recuento en su formato Quanti-P/A Ref: QPA-CP) de C.perfringens y sus esporas (el agua vira a negro opaco), que puede elegir en tres formatos diferentes:

  1. RPL308 Frascos tomamuestras con caldo estéril hidratado y tapón a rosca para añadir en ellos 100 mL de la muestra de agua. Cajas 10u ó 9x10u
  1. FPA902 Viales prepesados de polvo estéril con tapón a rosca para añadir a 100 mL de la muestra de agua (no incluido bote 100 mL VML155 o bolsa standup 100 mL B2787B estériles). Cajas 40u ó 10x40u
  2. DMTI902- Botes 100 g de polvo estéril y cucharilla dosificadora paraañadir a 100 mL de la muestra de agua (no incluido bote 100 mL VML155 o bolsa standup 100 mL B2787B estériles), Bote para 33 test

 

De gran utilidad como screening negativo de muestras rutinarias, al ser un método más fácil de emplear que la filtración de membrana y más fiable (escasez de falsos positivos y de falsos negativos, que en filtración de membrana es de nada menos que el 21% de las muestras analizadas en el mundo, por el estrés provocado durante la filtración).

También muy útil para que las potabilizadoras no dejen de analizar en festivos y fines de semana, ya que este método puede ser empleado por personal no especialista en microbiología, el mismo guarda de la depuradora puede hacerlo. La única precaución es que el operario no toque ni el agua ni el polvo con sus manos, para evitar contaminaciones artificiales.

Recuerde que este parámetro es el único indicador de probable presencia de Enterovirus-Norovirus y protozoos (Cryptosporidium, Giardia, Entamoeba…) en el agua.

MODO DE EMPLEO: Es necesario tratar previamente el agua clorada, mediante Tiosulfato Sódico, para que las células dañadas subletalmente se recuperen, excepto en los frascos tomamuestras RPL308, que ya lo incluyen.

Añadir los 100 mL de agua de muestra en el frasco o en el recipiente estéril que se va a utilizar; en el caso de los viales, añadir todo el contenido sobre el agua; en el caso de los botes de 100g, añadir tres cucharaditas rasas sobre el agua y cerrar el bote con la cucharilla dentro para los posteriores usos. Voltear sin agitar para homogeneizar sin oxigenar. Incubar 18-48 horas a 35-37° C (según nuestras recomendaciones) ó a 42° C (según Normas ISO).

Si desea detectar sólo esporas, provocar un shock térmico: calentar la muestra de 100 ml de agua  15 minutos a 70-80 ºC antes de añadir el medio. No es necesario incubar con atmósfera de anaerobiosis, ya que el medio ya la incorpora. La muestra inoculada sirve también de medio de transporte, por lo que no es necesario incubar inmediatamente después de la toma de la muestra, pudiendo transcurrir varias horas entre toma e incubación.

Para aguas envasadas o de baño, se analizan 50 mL, por lo que debe añadir 50 mL de agua estéril a los 50mL de agua de muestra, o bien emplear el medio a la mitad de la concentración indicada.

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS: El viraje a color negro-opaco (aunque sólo sea en el fondo, que es por donde suele empezar a virar) demuestra la Presencia de Clostridium perfringens y sus esporas en la muestra de agua.

Es necesaria la ausencia (no viraje), que equivale a 0 ufc/100 mL (ó en 50 mL). Sólo en caso positivo debería repetirse la muestra por método cuantitativo si se requiere un recuento concreto, aunque la legislación exige 0 y por tanto no importa si hay 2 ó 950, en ambos casos el agua no es potable. Si aún asi debe cuantificar(muestras positivas con Clostricult P/A), utilice Quanti-P/A-TSC (Ref: QPA-CP), que contienen este mismo medio con gelificantes en frío y atmósfera de anaerobiosis en una bolsa hermética.

Material necesario no incluído: Tiosulfato Sódico para eliminar el cloro (SMT976) excepto en los frascos tomamuestras RPL308, que ya lo incluyen. Bote estéril 100ml (VML155), o bolsa estéril autosellable Stand-Up (B2787B). Estufa o incubador 35-37ºC (SIL12AR ó SIL24AR).

En homenaje a nuestro querido amigo, el Dr. Juan José Marcén, que falleció antes de conocer el éxito mundial de la fantástica idea que nos regaló en los años 90, el kit de coliformes/E.coli se regala a todas las ONGs que nos los pidan junto con otros parámetros P/A.

PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO O PARA ANÁLISIS DE CAMPO. MANTENER FUERA DEL ALCANCE Y DE LA VISTA DE LOS NIÑOS Y ANIMALES.

EXTREMADAMENTE HIGROSCÓPICO: MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO. AGITE EL BOTE ANTES DE USAR. EN ZONAS DE ELEVADA HUMEDAD AMBIENTAL, GUARDAR EL BOTE BIEN CERRADO EN UN TUPPER HERMÉTICO CON SILICAGEL.

CONTROL DE CALIDAD: Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar laboratorio, tras largos fletes, tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,…)

DESHIDRATADO: Polvo crema    PREPARADO: Crema

CONTROL DE CRECIMIENTO 18-48 h a 37°C aproximadamente:

  • Clostridium perfringens WDCM 00007, vira a negro opaco desde las primeras 18h si el inóculo es elevado y no procede de muestras estresantes, en 48h en caso contrario.
  • E.coli WDCM 000013: Inhibido
  • Pseudomonas aeruginosa WDCM 00026: Inhibido.
  • Enterococcus faecalis WDCM 00009: Inhibido.

El usuario es el único responsable de la eliminación de los microorganismos según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.

Si desea más información sobre nuestro MICROKIT® P/A CLOSTRICULT rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto . O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16

SABOURAUD DEXTROSE CAF (CLORANFENICOL) AGAR CROMOGÉNICO

SABOURAUD DEXTROSE CAF (CLORANFENICOL) AGAR CROMOGÉNICO

Recuento selectivo de Levaduras y Mohos con mayor contraste de las colonias, que de este modo se detectan antes de aparecer, más rápidamente por su actividad metabólica anterior al crecimiento de sus células (verdes sobre medio crema), en base a UNE 34 821:1986 e ISOS cosméticas: NF T75-611 (Poder inhibitorio intrínseco), ISO 16212 (recuento de hongos), ISO 18416 (Candida albicans).

 

COMPOSICIÓN

  • Polipeptona micológica 10,00 g
  • Dextrosa                      40,00 g
  • Cloranfenicol       0,50 g
  • Agar‑agar   15,00 g

Mezcla cromogénica      c.s

(Fórmula por litro)

pH final: 5,6 ± 0,2

Irritante a causa del cloranfenicol

 

 

 

 

 

 

PREPARACIÓN

Disolver 65,5 g de medio en 1 litro de agua destilada. Calentar hasta ebullición, agitando para su completa disolución. NO Autoclavar. Si se autoclava, hacerlo a sólo 116ºC durante 1 minuto, o las colonias perderán mucho color.

PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO.

MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO. AGITE EL BOTE ANTES DE USAR.

DESHIDRATADO CODIGO: DMT503

Dos levaduras, Izda: Candida albicans Dcha: Saccharomyces cerevisiae

Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar laboratorio, tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,…)

DESHIDRATADO: Polvo grueso, Crema       PREPARADO: Estéril, Crema

CONTROL DE CRECIMIENTO CUANTITATIVO 3-5 días a temperatura ambiente (21-28°C aproximadamente):

  • Aspergillus niger MKTA 16404, Correcto, Colonias verdes y esporuladas de negro en 5 días. Con respecto a PCA estandarizado*, recuento 73-475 %, pero de forma selectiva.
  • Saccharomyces cerevisiae MKTA 9763, Correcto, colonias verde-oscuras. Con respecto a PCA estandarizado*, recuento 95-170 %, pero de forma selectiva.
  • Candida albicans MKTA 10231, Excelente, colonias verde-claro. Con respecto a PCA estandarizado*, recuento medio 122-144 %, pero de forma selectiva.
  • Staphylococcus aureus MKTA 6538P, Inhibido.
  • E.coli MKTA 25922, Inhibido.

* El que cumple con recuperación superior al 92-125% con respecto a cepas cuantitativas trazables a la cepa tipo. Incertidumbres detectadas entre todos los lotes a lo largo de un año (la mayoría de la incertidumbre se debe a la cepa y a la proporción de cepas acompañantes inoculadas, no al medio).

PRESENTACIÓN: MEDIO DESHIDRATADO,

NOTA: Medio base (SDA Caf) de uso muy extendido para el aislamiento y recuento de hongos (levaduras y mohos) en la industria alimentaria.

El cloranfenicol actúa como antibacteriano termoestable de amplio espectro, lo que da al medio una excelente selectividad con respecto al Sabouraud Dextrose Agar.

La mezcla cromogénica que hemos añadido al medio base, permite una visión más rápida de las colonias incipientes de levaduras y mohos, al contrastar su color verde sobre el medio crema. Si los colores que obtiene son más tenues que los de las fotografías, es porque se ha sobrecalentado el medio, debe tener más cuidado la próxima vez. Esto también le sirve de indicador de que ha caramelizado los azúcares por sobrecalentamiento, lo cual en el medio base sólo se aprecia por un color caramelo en vez de crema, y esto repercute también en la fertilidad (% de recuperación de ufcs).

 SIEMBRA

En placas se siembra en superficie, extendiendo con un asa de Digralsky. Se puede sembrar en masa enfriando el medio a 45ºC, pero entonces los mohos y algunas levaduras crecerán más lentamente por falta de oxígeno. El medio se incuba a 20-25 ºC aproximadamente, durante 3-5 días.

 

INTERPRETACIÓN

Las levaduras aparecen como colonias verdes no filamentosas, a menudo mucosas. Los mohos crecen con colonias filamentosas, verdes y de margen difuso. Identificar al microscopio los mohos; para levaduras y mejores identificaciones de mohos, enviar las placas de cultivos puros a nuestro servicio de Identificación molecular.

El usuario final es el único responsable de la destrucción de los organismos que se hayan desarrollado, según la legislación medioambiental vigente. 

Si desea más información sobre nuestro SABOURAUD DEXTROSE CAF (CLORANFENICOL) AGAR CROMOGÉNICO rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto . O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16

KIT TSC-en bolsa de Anaerobiosis

 

KIT TSC-en bolsa de Anaerobiosis

Placas en cassettes semi-herméticos de TSC Agar para recuento de Clostridium perfringens, con anaerobiosis incluida

Kit diseñado para poder realizar de forma independiente, y sin necesidad de jarras/tuppers de anaerobiosis, un recuento de Clostridium perfringens en una sola muestra de agua.

El kit integra 3 componentes:

  • Bolsa autosellable que contiene una plaquita (cassette) semi-hermética de TSC y una bolsita generadora de anaerobiosis
  • El medio preparado es una plaquita semi-hermética (en formato cassette) de TSC Agar (ISO 14189), formato que permite la entrada de la atmósfera de anaerobiosis y, a la vez, retrasa enormemente la desecación del medio, lo que amplía su caducidad hasta a 6 meses desde fabricación si se mantiene a Tª constante de 21-25ºC.
  • El generador de atmósfera anaerobia en bolsa (Anaerocult-P) contiene tierra de diatomeas, Hierro, Acido Cítrico y Carbonato Sódico, componentes que permiten fijar rápidamente el oxígeno del aire y reducir el medio de cultivo, a la vez que crean grandes cantidades de anhídrido carbónico. La velocidad de creación completa de esta atmósfera es de menos de 30 minutos, y su mantenimiento es de varias horas.

NOTA: Si Ud. analiza dos muestras al dia, pida adicionalmente a este kit, cassettes de TSC Agar (PPL905), dado que en una misma bolsa del kit puede añadir un cassette adicional, apilado sobre el otro, e incubar así dos placas por kit. Lo cual resulta más económico por test (coste de una bolsa generadora de anaerobiosis dividido por 2 cassettes).

MODO DE EMPLEO

  • Abrir la bolsita autosellable y extraer la placa-cassette de TSC Agar y la bolsita de anaerobiosis.
  • Abra la placa y deposite sobre ella la membrana filtrada de 50, 100, 250…ml; cierre la placa y devuélvala a la bolsita autosellable. Extreme la precaución al filtrar, ya que perfringens es un anaerobio estricto cuyas células quedan inviables en presencia del oxígeno del aire; dado que, además, la filtración es un método estresante, esté pendiente de apagar el sistema de filtración en cuanto la muestra de agua haya pasado por la membrana: no permita que se filtre aire una vez ha terminado de filtrarse la muestra de agua.
  • Para analizar las esporas, repita la operación habiendo antes sometido la muestra de agua a un shock térmico de 15 minutos a 70-80 ºC, antes de filtrarla. En la misma bolsita autosellable caben 2 plaquitas-cassettes apiladas más la bolsita generadora de anaerobiosis.
  • Humedecer la bolsita generadora de anaerobiosis con 3 ml de agua. Introducirla en la bolsa autosellable que contiene la(s) plaquita(s) de TSC (y su membrana filtrada) y dejar al lado de la(s) plaquita(s). Es aconsejable añadir una tira de anaerotest (KKM039) para verificar que no hay fugas/entrada de aire externo. Cerrar el conjunto, verificando que la bolsa autosellable queda hermética.
  • Incubar en la estufa de cultivos: 16-24 h o bien 40-48 horas a 36-38 ºC aproximadamente o, más selectivamente, a 43-45°C aproximadamente.
  • Contar las colonias negras o grises. La reacción de ennegrecimiento en TSC es reversible, de modo que las colonias pueden volverse blancas-crema poco tiempo después de haber ennegrecido.
  • Para análisis cualitativo (si le da igual que haya 1 ó 100 ufc/100 ml, ya que en realidad sólo necesita saber que no hay ninguna ufc en la muestra), le recomendamos sustituya la estresante filtración por el método validado y directo, no estresante, que mejores resultados obtiene (sin falsos negativos): el Clostricult P/A (Ref: RPL308 en frascos tomamuestras estériles, FPA902 en viales de polvo estéril pre-pesado para 50-250 ml de muestra de agua ó DMTI902- en botes de polvo estéril con cucharilla dosificadora, bote suficiente para realizar 33 muestras en varias jornadas de trabajo.

CONSERVACIÓN Y PRECAUCIONES

Almacenar a temperatura ambiente (ideal 15-25ºC) ¡no en nevera!, ya que en ésta la humedad es más fácil que deshidrate el medio de cultivo e hidrate/inutilice la bolsa de anaerobiosis. Es imprescindible almacenar en lugar seco y oscuro, ya que la humedad y la luz dañan irreversiblemente los medios de cultivo.

PRESENTACIÓN

Cajas de 25 test completos (Cada test en bolsita autosellable, cassette semi-hermético de TSC Agar y bolsita de anaerobiosis). REF: PPL905A

El usuario final es el único responsable de la eliminación de los microorganismos según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.       

Si desea más información sobre nuestro MICROKIT® P/A ENTEROCULT rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto . O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16                 

MICROKIT® P/A ENTEROCULT

MICROKIT® P/A ENTEROCULT

 Enterococos fecales

Detección Presencia / Ausencia (P/A) en 100 (250) ml de agua

            INTRODUCCIÓN:

Medio estéril ENTEROCULT diseñado por MICROKIT con base BEA para detección P/A (o recuento en su formato Quanti-P/A Ref: QPA-ETC) de Enterococos fecales (el agua vira de ámbar a negro opaco y pierde su iridiscencia), que puede elegir en tres formatos diferentes:

  • RPL301 Frascos tomamuestras con caldo estéril hidratado y tapón a rosca para añadir en ellos 100 mL de la muestra de agua. Cajas 10u ó 9x10u

 

  • FPA901 Viales prepesados de polvo estéril con tapón a rosca para añadir a 100 mL de la muestra de agua (no incluido bote 100 mL VML155 o bolsa standup 100 mL B2787B estériles). Cajas 40u ó 10x40u

 

 

  • DMTI901- Botes 100 g de polvo estéril y cucharilla dosificadora para añadir a 100 mL de la muestra de agua (no incluido bote 100 mL VML155 o bolsa standup 100 mL B2787B estériles), Bote para 100 test

 

 

De gran utilidad como screening negativo de muestras rutinarias, al ser un método más fácil de emplear que la filtración de membrana y más fiable (escasez de falsos positivos y de falsos negativos, que en filtración de membrana es de nada menos que el 6% de las muestras analizadas en el mundo, por el estrés provocado durante la filtración).

 

También muy útil para que las potabilizadoras no dejen de analizar en festivos y fines de semana, ya que este método puede ser empleado por personal no especialista en microbiología, el mismo guarda de la depuradora puede hacerlo. La única precaución es que el operario no toque ni el agua ni el polvo con sus manos, para evitar contaminaciones artificiales.

 

MODO DE EMPLEO: Es necesario tratar previamente el agua clorada, mediante Tiosulfato Sódico, para que las células dañadas subletalmente se recuperen, excepto en los frascos tomamuestras RPL301, que ya lo incluyen.

Añadir los 100 mL de agua de muestra en el frasco o en el recipiente estéril que se va a utilizar; en el caso de los viales, añadir todo el contenido sobre el agua; en el caso de los botes de 100g, añadir tres cucharaditas rasas sobre el agua y cerrar el bote con la cucharilla dentro para los posteriores usos. Agitar para mezclar. Incubar 18-24 horas a 35-37° C.

La muestra inoculada sirve también de medio de transporte, por lo que no es necesario incubar inmediatamente después de la toma de la muestra, pudiendo transcurrir varias horas entre toma e incubación.

Para aguas envasadas o de baño, se analizan 250 mL, por lo que debe añadir 2 viales ó dos cucharaditas por muestra (no se pueden usar los frascos RPL301 para 250 mL, al haber sido diseñados sólo para 100 mL). El medio funciona correctamente desde mitad hasta el doble de concentración, por lo que no es necesario afinar 2,5 viales ó 2,5 cucharaditas)

 

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS: El viraje del color ámbar inicial, transparente e iridiscente, a color negro-opaco (y pérdida de la iridiscencia que adquiere el agua en este medio) demuestra la Presencia de Enterococos fecales en la muestra de agua. Puede confirmar observando al microscopio que son cadenas de cocos Gram positivos y/o que son microorganismos catalasa negativos.

Es necesaria la ausencia (no viraje), que equivale a 0 ufc/100 mL (ó en 50 mL). Sólo en caso positivo debería repetirse la muestra por método cuantitativo si se requiere un recuento concreto, aunque la legislación exige 0 y por tanto no importa si hay 2 ó 950, en ambos casos el agua no es potable. Si aún asi debe cuantificar (muestras positivas con Enterocult P/A), utilice Quanti-P/A-ETC (Ref: QPA-ETC), que contienen este mismo medio con gelificantes en frío en una bolsa hermética.

     Material necesario no incluído: Tiosulfato Sódico para eliminar el cloro (SMT976) excepto en los frascos tomamuestras RPL301, que ya lo incluyen. Bote estéril 100ml (VML155), o bolsa estéril autosellable Stand-Up (B2787B). Estufa o incubador 35-37ºC (SIL12AR ó SIL24AR).

En homenaje a nuestro querido amigo, el Dr. Juan José Marcén, que falleció antes de conocer el éxito mundial de la fantástica idea que nos regaló en los años 90, el kit de coliformes/E.coli se regala a todas las ONGs que nos los pidan junto con otros parámetros P/A.

PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO O PARA ANÁLISIS DE CAMPO. MANTENER FUERA DEL ALCANCE Y DE LA VISTA DE LOS NIÑOS Y ANIMALES.

EXTREMADAMENTE HIGROSCÓPICO: MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO. AGITE EL BOTE ANTES DE USAR. EN ZONAS DE ELEVADA HUMEDAD AMBIENTAL, GUARDAR EL BOTE BIEN CERRADO EN UN TUPPER HERMÉTICO CON SILICAGEL.

 

CONTROL DE CALIDAD: Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar laboratorio, tras largos fletes, tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,…)

DESHIDRATADO: Polvo crema    PREPARADO: Ámbar, transparente

CONTROL DE CRECIMIENTO 18-24 h a 37°C aproximadamente:

Enterococcus faecalis MKTA 29212, Correcto, medio opaco y negro, sin iridiscencia en el menisco
Escherichia coli MKTA 25922, inhibido completamente.

Bacillus subtillis MKTA 6633, Inhibido completamente.

Staphylococcus aureus MKTA 6538P, Inhibido completamente.

 

El usuario es el único responsable de la eliminación de los microorganismos según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.

Si desea más información sobre nuestro MICROKIT® P/A ENTEROCULT rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto . O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16

MYCOKIT-PLUS: VIALES P/A HONGOS (CALDO CROMOGÉNICO)

MYCOKIT-PLUS: VIALES P/A HONGOS (CALDO CROMOGÉNICO)

El método P/A (Presencia/Ausencia) fue inventado durante la segunda guerra mundial para evitar que los soldados murieran por beber aguas contaminadas. Desde la década de los 1990, MICROKIT ha ido desarrollando numerosos Kits P/A cromogénicos para control de patógenos en aguas. Estos kits no sólo triunfan en todo el mundo gracias a las ONG que trabajan en la mejora del agua de bebida de los países tropicales, sino que además están reconocidos como el método más fiable, de acuerdo con sus numerosas validaciones y participaciones en servicios intercomparativos. Se pueden emplear en trabajo de campo y en el laboratorio y ahorran tanto el trabajo de filtración de membrana (MF) o de NMP, como su coste. Con ellos se puede decir

¡de la muestra a la estufa en 10 segundos!

 

MODO DE EMPLEO Y LECTURA DE RESULTADOS:

  • Se agrega 1 vial a los 100 mL de muestra de agua (ó 2 viales a los 250 mL, ya que el medio funciona perfectamente incluso a la mitad y al doble de la concentración indicada), vial que contiene pre-pesado el medio cromogénico estéril adecuado para los hongos en 100 mL de muestra líquida. Agitar para homogeneizar. Si el agua es clorada, añadir el tiosulfato sódico correspondiente para neutralizarlo.
  • Se incuba 2-3 días a 25ºC con una buena cámara de aire o con el tapón del recipiente sin cerrar, para que entre oxígeno del aire exterior
  • Si no ha cambiado de amarillo a color verdoso, se demuestra la ausencia de levaduras y mohos (sin falsos negativos) y si ha cambiado a cualquier gama del verde (depende de la actividad metabólica de cada cepa de levadura o de moho), se demuestra su presencia (sin falsos positivos, gracias al Cloranfenicol).

Así de sencillo. Y más efectivo que ningún otro método. Porque el método P/A no estresa los microorganismos como sucede con la MF, que obtiene recuperaciones muy deficientes. ¡Se acepta en la bibliografía internacional que cerca del 21% de las aguas que contienen coliformes-E.coli, cerca del 33 % de las aguas que contienen Pseudomonas aeruginosa y cerca del 49 % de las aguas que contienen Clostridios no son detectadas como positivas mediante el método MF!

 

 

 

 

 

Ventajas frente al clásico Hongos P/A (liquido rosa) de MICROKIT: Mayor rapidez de resultados (2-3 días), ya que la actividad metabólica (viraje a verde) se ve mucho antes que el crecimiento celular (turbidez, flóculos en 3-7 días), crecimiento que no obstante, también sirve aquí como confirmativo y para posterior identificación de la cepa. El medio cromogénico es igual de selectivo para hongos que el clásico, al incluir la cantidad adecuada de cloranfenicol.

 

PRESENTACIÓN: Caja de 40 viales, cada uno con 4 gramos de caldo en polvo cromogénico estéril para hongos (levaduras y mohos) en 100 mL de muestra líquida, Ref: FPA950, con ¡3 años de caducidad!

Si desea más información sobre nuestro MYCOKIT-PLUS rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto . O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16

LISTERIQUICK

LISTERIQUICK

Detección rápida y fiable de Listeria monocytogenes en alimentos

 

 

 

 

 

INTRODUCCIÓN:    El método ISO 11290 tiene como desventajas la lentitud de obtención de resultados y la no neutralización de los conservantes de la muestra, que conlleva a resultados falsamente negativos. En dicha Norma se realiza un pre-enriquecimiento revitalizador de 25 g de la muestra, 18-24 h a 30-35ºC en 225 ml de Caldo Semifraser. Al día siguiente se toma una alícuota (0,1 ó 1 mL) y se incuba en un post-enriquecimiento selectivo en 10 ml de Fraser Broth otras 18-24 h. Y de ahí se estría en placas de medio cromogénico Ottaviani & Agosti (que destronó al Oxford y al Palcam, que daban excesivos falsos positivos), incubando otras 18-24 h. De modo que todas las muestras (incluso las negativas) llevan un mínimo de 3 días (72 h) de demora en la obtención de los resultados presuntivos. Se emplean en total 3 medios y 4 suplementos de los cuales dos (Semifraser y Fraser) viran presuntivamente a negro con una proporción impresionante de falsos positivos y de falsos negativos, por lo que hay que seguir hasta el final. Otro que se emplea en otros protocolos, el BPW, no inactiva los conservantes, ni los metabolitos creados por la flora acompañante, permitiendo la aparición demasiado a menudo de resultados falsamente negativos.

LISTERIQUICK ha sido diseñado por Laboratorios MICROKIT, en 4 años de estudios tras el diseño de su homólogo Salmoquick, basándose en la Norma ISO 11290 pero optimizándola; el método varía, ahorrando 2 suplementos y acortando el tiempo de obtención de resultados a menos de dos días, sólo 36 horas! En este caso se realiza el pre-enriquecimiento revitalizador (e inactivador de conservantes y de metabolitos generados por el resto de la flora acompañante, que podrían interferir en el crecimiento de Listeria en un sinfín de matrices alimentarias) de 25 g de la muestra en 225 ml de Agua de Peptona Tamponada Neutralizante (BPNW), 20-30 minutos a temperatura ambiente. Se añaden al mismo 18 ml de LEB Broth a [x5] (una optimización del Fraser), se mezcla y se incuba el conjunto 18 h a 30-35ºC, constituyéndose así en un solo paso la revitalización de las Listeria dañadas, la inactivación de los graves problemas que no contempla la ISO 11290 y el aumento de la selectividad para la multiplicación de las Listeria presentes. En este medio mixto, las muestras con Listeria enturbian el caldo, por lo que de entrada en las primeras 18h ya tenemos una alerta de posible presencia de Listeria si el caldo está turbio. Pero otras bacterias también pueden crecer, por lo que hay que continuar con el segundo paso: Al día siguiente se estría en placas de Cromocytogenes (Ottaviani & Agosti) Agar, incubando otras 18h. De modo que las muestras sin crecimientos típicos de Listeria monocytogenes (colonias verdes con halo) son liberadas en sólo 36h.

PRECAUCIÓN: La validación de LISTERIQUICK ha sido realizada con los medios indicados, y de la marca MICROKIT. Cualquier variación sobre los medios o la marca invalida nuestra validación, de hecho este protocolo se ha probado y ¡NO FUNCIONA con BPW, ni con Fraser, ni con LEB de otras marcas, ni con Ottaviani & Agosti Agar + suplementos de otras marcas! Verificar si todo funciona bien en muestras de pollo, ya que en la validación retrasaban 18 h los resultados (también en el método ISO).

LISTERIQUICK es una herramienta simple, rápida y fiable, diseñada especialmente para simplificar y agilizar al máximo el control de alimentos con contaminación por Listeria, que es uno de los puntos más críticos y que más retrasan la liberación del lote en la industria alimentaria.

SIMPLE: Ahorra un medio de cultivo de dudosa utilidad (Semi-Fraser) y los dos suplementos del Fraser por los más modernos y eficientes medios que no necesitan suplemento alguno (BPNW y LEB Broth).

RÁPIDA: De la muestra a la liberación del lote en sólo 36 horas (frente a las 72 h habituales).

FIABLE: Validado en base a la Norma UNE-EN-ISO 16140 por el método de pares frente a la Norma ISO 11290, con inóculos muy bajos de distintas cepas de Listeria, variada flora interferente, matrices de todo tipo y 100% de eficiencia (ver publicación en bibliografía). Cuidado con las muestras de pollo.

Se presenta de dos formas: como kit preparado y listo para usar y como un conjunto de los 3 medios de cultivo deshidratados y suplementos necesarios para que el mismo laboratorio se lo pueda preparar.

  1. LISTERIQUICK-Estéril, Ref: KMT040: kit listo para emplear, incluye los 3 medios necesarios para detección rápida de Listeria (en sólo 36h), en presentación estéril y lista para su uso. 4×20 Tubotes prepesados y estériles BPNW (Ref: KBB002, con Cad: 2 años desde fabricación) para añadir a 225 ml de agua estéril, 4×20 tubos LEB Broth 18 ml [x5] (Ref: TPL0335, con Cad: 1 año desde fabricación) para añadir 25 minutos después al anterior, 2×45 Plaquis herméticas Cromocytogenes suplementadas (Ref: PPL970, con 6 meses de caducidad el día de su envío, para analizar al menos 14 muestras/mes). Ninguno de los componentes necesita nevera. Conservar en lugar fresco y seco, con una temperatura de entre 5ºC y 25ºC, eso sí, al abrigo de la luz. No congelar. Kit de 80 test (Emplee las 10 plaquis que le sobran para duplicados, verificaciones… no se le han cobrado)

 

 

 

 

  1. LISTERIQUICK-Iniciación, Ref: KMT041: conjunto de los 3 medios deshidratados y doble suplemento del agar, necesarios para detección rápida de Listeria (en sólo 36 h), para que cada laboratorio se lo prepare: 1x 500g BPNW (Ref: DMT011, para hacerse 62 frascos o bolsas Stomacher con 225 ml), 1x500g LEB Broth (Ref: DMT070, para hacerse 154 tubos de 18 ml a [x5], 1x500g Cromocytogenes Agar Ref: DMT700 Ref: SMT700+ (para hacerse 355 placas de 20 mL ó 473 placas de 15 mL) y su doble suplemento SMT700+ (para hacerse 250 placas de 20 mL ó 33 placas de 15 mL). En conjunto es más económico (2,31 €/test) que la adquisición de cada uno de los 3 medios por separado (3,13 €/test), para que el laboratorio se inicie en este método y pueda pedir después por separado los medios conforme vaya necesitando cada uno (Para alcanzar el mínimo precio de 2,31 €/test, pida 10 botes de cada uno de los 3 medios y 10 suplementos).

MODO DE EMPLEO E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

1.- Tomar 25 g del alimento en una bolsa Stomacher o en un frasco estéril

2.- Añadir 225 ml de Agua Peptonada Tamponada Neutralizante (Microkit DMT011)

3.- Homogeneizar durante 2 minutos y dejar actuar 20-30 minutos

4.- Añadir 18 ml de LEB Broth (Microkit DMT070) a concentración [x5]

5.- Homogeneizar e incubar 18 h a 30-35ºC

6.- Pueden leerse los resultados presuntivos desde las primeras 18 horas: la turbidez del caldo es tan presuntiva de presencia de Listeria como el ennegrecimiento del caldo ISO 11290; debe confirmarse con el siguiente paso:

7.- Estriar sobre placas de Cromocytogenes Agar (Microkit DMT700 + Suplemento SMT700+).

8.- Incubar las placas 18 h a 30-37ºC

9.- La aparición de colonias verdes, es altamente presuntiva de presencia de Listeria. Si están rodeadas de un halo opaco, son altamente presuntivas de L.monocytogenes (sólo algunas cepas de L.ivanovii producen también halo). Las colonias verdes (con o sin halo, igual que debería hacerse en el método ISO)  deben confirmarse en laboratorio mediante los kits bioquímicos e inmunológicos habituales, a elegir (X/R Broth DMT167 y sus dos suplementos DMT169 y DMT171, lo mismo en kit preparado KMT012, galerías CRYSTAL G+ 245140…). Muchas colonias presuntivas de la mayoría de medios de aislamiento de Listeria (Oxford, Palcam, McBride…) acaban siendo confirmadas como Micrococcus, Enterococcus o Staphylococcus ambientales; esto no sucede en Cromocytogenes, donde Listeria spp. crece con colonias verdes, L.monocytogenes con colonias verdes con halo y los demás no suelen crecer.

Bolsas Stomacher con 25 g de alimento, 225 ml de BPNW y 18 ml LEB Broth [x5] antes de incubar

BIBLIOGRAFÍA:
  Norma ISO 11290: Microbiología de los alimentos para consumo humano y alimentación animal. Método horizontal para la detección y recuento de Listeria monocytogenes.

Sanchis, J. Doble enriquecimiento simultáneo para detección rápida de Listeria monocytogenes en matrices alimentarias.  XXI Congreso SEM de Microbiología de los alimentos. Tarragona, IX-2018.

 

El usuario es el único responsable de la destrucción de los microorganismos generados en el interior del kit durante su uso, de acuerdo con la legislación medioambiental vigente. Sumerja en lejía o alcohol, o mejor autoclávelos, antes de desecharlos a la basura. Mantener fuera del alcance de los niños. No ingerir.           

Si desea más información sobre nuestro LISTERIQUICK rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto . O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16

 

 

USO DEL SALMOQUICK Y EL LISTERIQUICK EN OTRAS MATRICES

USO DEL SALMOQUICK Y EL LISTERIQUICK EN OTRAS MATRICES

Aunque SALMOQUICK y LISTERIQUICK han sido diseñados para alimentos (25 g de muestra), se puede extender su uso a otras matrices:

  • AGUAS

Dado que en aguas puede requerirse, para la búsqueda de Salmonella o Listeria, una muestra mínima muy superior a 25 mL (normalmente de 100 mL, 250 mL e incluso de 1 L) se debe filtrar por membrana de 0,45 µm la cantidad de muestra de agua necesaria, extremando la precaución de no dejar la membrana con la bomba encendida una vez se ha filtrado toda la muestra de agua, para evitar estresar las posibles Salmonella o Listeria presentes. Se añade la membrana filtrada a 25 ml de agua y con esta muestra concentrada (membrana en agua) se procede como explica el folleto SALMOQUICK ó LISTERIQUICK en alimentos, como si de una muestra de 25 g de alimento se tratase.

  • COSMÉTICOS

Se debe sustituir el Agua de Peptona Tamponada y Neutralizante (PBNW) por el caldo LPT Neutralizing Broth de MICROKIT. Por lo demás, el protocolo es idéntico al de alimentos explicado en los folletos SALMOQUICK y LISTERIQUICK.

  • ALIMENTOS INFANTILES

Dado que las legislaciones de numerosos países exigen la ausencia de Salmonella y/o de Listeria en alimentación infantil, no en 25 g sino en cantidades mucho mayores (hasta 5 Kg en algunos casos), deberemos emplear la cantidad de Agua de Peptona Tamponada y Neutralizante que sea necesaria para crear la dilución 1:10 con la cantidad de muestra requerida. Y el caldo SS o LEB también a la concentración necesaria para mantener el mismo ratio Agua de Peptona Tamponada y Neutralizante/ SS Broth o LEB que indican los folletos SALMOQUICK y LISTERIQUICK.

  • SUPERFICIES

Tanto Salmonella como Listeria se multiplican en las superficies de ciertos puntos críticos, formando biofilms, los cuales además incrementan su patogenicidad. Estos biofilms las encapsulan en grandes poblaciones (monoespecíficas o no) que suelen pasar desapercibidas al método de contacto (Rodac, laminocultivos) e incluso al rascado del método de barrido con escobillón o balleta. Se necesitan esponjas realmente abrasivas (MICROKIT VMT037) para arrancar las células y poder así detectarlas. Pulverice la superficie a analizar con agua estéril, espere 60 segundos, rasque con fuerza con una esponja abrasiva estéril MICROKIT, devuélvala a su bolsa original, llévela al laboratorio y trate dicha esponja como si de los 25 g de alimento se tratase, pasándola completa a los 225 ml de BPNW y siguiendo las instrucciones de los folletos SALMOQUICK y LISTERIQUICK.

El usuario es el único responsable de la eliminación de los microorganismos según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.

Si desea más información sobre nuestro MICROKIT® P/A PSEUDOCULT rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto . O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16