Archivo de la categoría: medios de cultivo

informacion, novedades, nuevos métodos relacionados con los medios de cultivo, Microbiología de alimentos, aguas, medicamentos, cosméticos y ambiente:

KOSMEFASHION LAB

KOSMEFASHION LAB

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Si desea más información sobre nuestros rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto. O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16

LISTERIA CHROMOCYTOGENES AGAR

LISTERIA CHROMOCYTOGENES (Ottaviani and Agosti) MICROKIT AGAR

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Si desea más información sobre nuestros rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto . O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16

 

 

LISTERISWABS GREEN

LISTERISWABS GREEN

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Si desea más información sobre nuestros rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto . O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16

 

EL METODO P/A

EL MÉTODO P/A  (PRESENCIA/AUSENCIA) PARA ANALISIS DE AGUAS:  KITS PREPARADO

1- POTABILIDAD MICROBIOLOGICA DE LAS AGUAS MEDIANTE EL METODO DE PRESENCIA/AUSENCIA (Kits preparados sin necesidad de Filtración de Membrana ni de Número Más Probable)

Extraído de la Directiva Europea sobre aguas de consumo humano, (obligada desde el 3/XI/2001, y sobre todo desde su transcripción a B.O.E. 45 de fecha 21/2/2003). Ésta nueva Normativa, además de afectar a las aguas potables y envasadas, también afecta a todas las aguas de uso en industrias alimentarias, para producción, lavado, etc.:

TIPO DE ANÁLISIS  PARÁMETRO                      NIVEL GUIA KIT P/A MICROKIT

 

Desde la publicación de estos datos, la técnica MPN para controlar la potabilidad de aguas queda obsoleta, quedando relegada sólo a recuento en productos no filtrables; en efecto, al hablar la legislación de ausencia en 100 ml no se puede utilizar la técnica de MPN y extrapolar resultados a partir de una muestra significativamente inferior (33 ml) a los 100 ml requeridos.

Los recuentos en 100 ml pueden realizarse con la técnica de MF, pero en el caso que nos ocupa podemos utilizar las MPN-RACKS (Ref: 1001020) para convertir cualquier kit P/A en Número Más Probable.

Por todo ello surge con fuerza la nueva técnica de Presencia /Ausencia (P/A), útil tanto para trabajo de campo como para Laboratorio, cuando lo que se precisa no es recuento, sino detección de un microorganismo en grandes muestras.

Todos los kits P/A de MICROKIT incorporan inactivadores de la eventual presencia de cloro en el agua, que actuaría como bacteriostático y enmascararía los resultados como falsos negativos.

El método P/A es mucho más sensible (tienen muchos menos falsos negativos) que el método MF, pero es menos específico (tienen más falsos positivos). Por ello es tan útil como screening negativo, para poder procesar un gran número de muestras. Si el kit da negativo, el resultado es negativo. Pero si el kit sale positivo, hay que confirmar esa muestra aislando en placa e identificando colonias aisladas.

Nuestros kits están validados para uso en aguas continentales, no marinas ni salinas.

        Todos nuestros kits P/A permiten ahorrar 4-8 horas de incubación si, antes de inocularlos, se precalienta a 37°C la muestra de agua en un baño María.

NOTA: Para analizar agua de mar, se debe diluir ésta a razón 1:10 en agua destilada estéril, ya que la salinidad del mar (3,7-4,5%) sería excesiva para los kits.

 

1-A  KIT P/A DE DETECCION DE COLIFORMES (TOTALES Y/O FECALES) Y E.COLI EN 100 ml DE AGUA (Caldo MICROKIT® P/A MCC-COLICULT ® Cromofluorogénico) Referencia: RPL303

La legislación española (BOE 21/2/03) exige la ausencia de E.coli y de Coliformes totales en 100 ml de agua de consumo humano (la clásica potable y además la de uso en industria alimentaria).

Las dos posibilidades contempladas hasta ahora para este análisis (Número Más Probable ‑NMP‑ y Filtración de Membrana ‑FM‑) eran tediosas en su manipulación (9 tubos la primera, aparato de filtración la segunda) y los resultados obtenidos en Coliformes implicaban un alto porcentaje de resultados falsamente negativos (18 % en el primer caso y 36 % en el segundo según JACOBS & Co., Mayo ’86, Comparison of Membrane Filter, Multiple Fermentation Tube and Presence/Absense (P/A) Techniques for detecting Total Coliforms in Small Community Water Systems, App. Env. Microbiol., Vol. 51, n.º 5, pp. 1007-1012).

Con el nuevo método de Presencia/Ausencia, que ya es oficial en U.S.A., el porcentaje de falsos negativos se reduce considerablemente, ya que la muestra es de 100 ml (muy superior que en la técnica NMP) y las bacterias no sufren como en la técnica de FM. Además de su mayor sensibilidad, el método P/A es el más cómodo de inocular y el más simple de interpretar.

Cada vez son más los autores que coinciden en que no hay mejor parámetro indicador de la contaminación fecal de las aguas que la especie Escherichia coli. Efectivamente, las enterobacterias son un grupo demasiado extenso que contiene muchos representantes naturales en las aguas, que no indican contaminación fecal. Y los coliformes también cuentan con especies naturales en las aguas, además de ser un grupo artificial (hay especies como el mismo E. coli con cepas coliformes y con cepas que al no producir gas al fermentar la lactosa, no son coliformes). Su división en coliformes totales y coliformes fecales (parámetro éste más selectivo) no resolvía  totalmente el problema.

Por ello el kit de Coliformes y E. coli P/A resulta de gran interés para análisis de potabilidad como parámetro más estricto que el descrito en la legislación anterior a Febrero de 2003, y cumple perfectamente con la nueva legislación, al haberse validado en ensayos intercolaborativos y en el intercomparativo SEILAGUA, realizados en España durante 1999-2003, donde demuestra un 10% más de sensibilidad (escasez de falsos negativos) que el método MF para el parámetro E.coli.

El kit se basa en la moderna y reconocida técnica del MUG, o fluorescencia indicadora de E. coli. Se incuba a 35 ó 44,5 ºC (según se busquen, además de E. coli, coliformes totales o fecales, respectivamente) durante sólo 24 (-48) horas. Y del X-Gal que hace que los coliformes viren el agua a azul turquesa a aprtir de la fermentación del sorbitol, con lo cual no se escapan los coliformes lactosa negativos.

Haya o no coliformes (hay cepas de E. coli que no fermentan la lactosa ni el sorbitol ni, por tanto, pueden considerarse coliformes strictu sensu), observar en la oscuridad completa con luz U.V.A. de 366 nm (linterna MICROKIT). Si aparece fluorescencia azul claro (comparar con un control positivo -kit inoculado con cepa de E. coli– y con un control negativo -kit inoculado con agua estéril-), añadir  1 ml de reactivo de Indol Kovacs (MICROKIT SBH056). Si tras unos segundos aparece en superficie un anillo de color rojo-cereza, la presencia de E. coli es absolutamente confirmativa, por lo que no son necesarias identificaciones posteriores.

Como control positivo puede utilizarse la cepa E. coli (CRIOSTRAIN MKTA 25922). Recomendamos asimismo la participación en servicios intercomparativos como SEILAGUA, para validar los procedimientos y los operarios.

MODO DE EMPLEO

  1. Añadir 100 ml de agua de muestra abriendo el tapón o bien pinchando en el obturador.
  2. Cerrar el tapón sin apretar a fondo (para que escape el exceso de gas que se pueda generar).
  3. Agitar para mezclar.
  4. Incubar en posición vertical a 35 ºC  0,5 durante 24‑48 horas. Si se buscan específicamente Coliformes fecales, incubar a 44,5 ºC (aunque si no había Coliformes totales, lógicamente tampoco habrá Coliformes fecales).

INTERPRETACION DE RESULTADOS

Observar la producción de turbidez (crecimiento bacteriano inespecífico), el viraje del medio incoloro a azul (reacción positiva ONPG-XGal, típica de los coliformes) y la fluorescencia en la oscuridad con luz ultravioleta de 366 nm (reacción positiva del MUG, típica de E.coli). En este último caso añadir unas gotas de Kovacs (SBH056) directamente, para confirmar E.coli (formación de anillo rojo)con la prueba del indol.

PRESENTACION

Cajas con 10 frascos. Caducidad desde fabricación: 1 año.

Conservar entre 4 y 25 ºC, en la oscuridad.

Este kit sustituye, desde principios de 1998, al antiguo RPL303 de Coliformes + E.coli con campana Durham y al antiguo RPL300 de Coliformes totales + Coliformes Fecales con campana Durham.

Validación: Realizada durante 7 años de intercomparación de 70 laboratorios de toda España en más de 700 muestras duplicadas. Se demuestra comparado con filtración de membrana en el medio oficial (Tergitol Chapman TTC Agar), una sensibilidad del 100% frente al 97,7% del método oficial para coliformes, así como una sensibilidad del 100% para E.coli frente al 95,65% del método oficial. Una especificidad del 100% para coliformes frente al 94,25% del método oficial y del 100% para E.coli frente al 94,57% del método oficial. Y un límite de detección de hasta 3±2 ufc/100 ml frente a 5±2 ufc/100 ml del método oficial.

Si analiza muchas muestras al día, vea las versiones viales P/A y Botes P/A.

1-B  KIT AUXILIAR PARA RECUENTO TOTAL EN 1 ml DE AGUA: TUBOS NUTRIENT AGAR TTC + PLACAS Petri (Agar Nutritivo TTC, Agar Común TTC)                   Referencia: RPL305

Según el B.O.E. 226 de 20/09/90, en un agua potable no han de aparecer más de 10 bacterias aerobias por mililitro (incubando a 37 ºC) ni más de 100 bacterias aerobias por mililitro (incubado a 22 ºC).

El recuento en 1 ml puede realizarse con la técnica MF (MICROKIT UFM006, UFM012), pero resulta más lógico utilizar la técnica tradicional como en alimentos, dado que la técnica MF encuentra sus ventajas cuando el tamaño de la muestra es muy superior a 1 ml (de hecho, si se utiliza MF para 1 ml hay que añadir al menos 25 ml de Agua Peptonada estéril para que la filtración sea homogénea en toda la membrana).

Con el Kit que presentamos, Ud. ya no necesita autoclavar medios deshidratados, ni realizar recuentos aproximados. El medio esta estéril y listo para su empleo, y el recuento es exacto. Las colonias crecen rojas sobre el medio, blanquecino. No hace falta tratar la muestra contra el cloro, el medio ya incorpora Tiosulfato Sódico.

La caducidad de 2 años, permite mantener un stock sin riesgo de echar a perder reactivos, ventaja importante sobre las placas preparadas.

Para seguir más estrictamente el BOE 21/2/2003 (ISO 6222) usar tubos de Yeast Extract Agar (TPL060).

MODO DE EMPLEO E INTERPRETACION DE RESULTADOS

  1. Fundir 2 tubos al Baño María (98 ºC aproximadamente). No sobrecalentar o el medio virará a rosa-rojo.
  2. Añadir 1 ml de agua de muestra en una placa Petri estéril. Duplicar la operación. Trabajar junto a la llama de un mechero para conseguir unas condiciones asépticas en el ambiente.Verter el contenido de un tubo (atemperado hasta que no queme la mano), a una de las placas con muestra. Duplicar la operación en la otra placa con muestra.
  3. Cerrar las placas y hacerlas girar 10 veces en cada sentido para mezclar la muestra con el medio. Dejar solidificar.
  4. Incubar las placas con el agar arriba, una a 37 ºC durante 24 horas y otra a 22 ºC durante 72 horas.
  5. Contar todas las colonias, que habrán virado a rojo, contrastando estupendamente con el medio de cultivo y haciendo el recuento sumamente fácil.
  6. No deben aparecer más de 10 colonias en la primera placa, ni más de 100 en la segunda.

PRESENTACION

Kits de 40 tubos + 40 placas para 20 análisis dobles de recuento total en 1 ml de agua. Caducidad desde fabricación: 1 año. Conservar entre 2 y 25 ºC, en la oscuridad.

Como control positivo puede utilizarse una cepa de E.coli (CRIOSTRAIN MKTA 25922) o de Pseudomonas aeruginosa (CRIOSTRAIN MKTA 9027), por ejemplo. Recomendamos asimismo la participación en servicios intercomparativos como SEILAGUA, para validar los procedimientos y los operarios.

Material necesario no incluido: Estufa a 35-37 ºC (VRP001), Pipetas estériles 1 ml (VFR273), Zona aséptica: Si no dispone de cabina de flujo laminar, puede usar lámpara de alcohol (VLM068) y Envirostéril (VJM002).

NOTA: Desde la creación de las CompactDryPlates®-TC, estas plaquitas resultan mucho más adecuadas para recuento total en 1 ml de agua porque absorben directamente el ml de muestra de agua sin necesidad de fundir medios como sucede en el método clásico, incluido el kit mencionado arriba. Los resultados de la validación para aguas no pueden ser más alentadores y demuestran que la siembra por fusión en masa de agares calientes es un punto crítico más importante de lo que se cree. Nos remitimos al folleto de las CompactDryPlates®-TC y al certificado de validación intercolaborativa de Microkit sobre las mismas.

1-C KIT P/A PARA LA DETECCION DE ENTEROCOCOS FECALES GRUPO D DE LANCEFIELD EN 100 ml DE AGUA (ENTEROCULT MICROKIT® P/A modificado) Ref: RPL301

 

Kanamicina Aesculina Azida (KAA) Broth es un caldo para detección presuntiva de estreptococos del grupo D de Lancefield en muestras de alimentos y aguas (CENAN). Aplicado a la concentración adecuada, y con ciertas modificaciones, permite la utilización en kits P/A.

 

MODO DE EMPLEO

  1. Añadir 100 ml del agua de muestra.
  2. Cerrar sin apretar a fondo.
  3. Agitar para mezclar.
  4. Incubar a 37 ºC (41°C) durante 24‑48 horas.

Como control positivo puede utilizarse la cepa Enterococcus faecalis (CRIOSTRAIN MKTA 29212). Recomendamos asimismo la participación en servicios intercomparativos como SEILAGUA, para validar los procedimientos y los operarios.

INTERPRETAClON DE RESULTADOS

La aparición de turbidez con ennegrecimiento indica que la muestra tiene estreptococos fecales, sobre todo si el medio pierde su fluorescencia natural bajo luz de 366 nm (linterna MICROKIT).

PRESENTACION: Cajas con 10 frascos. Caducidad desde fabricación: 1 año.

Conservar entre 2 y 25 ºC, en la oscuridad.

Validación: Realizada durante 7 años de intercomparación de 70 laboratorios de toda España en más de 700 muestras duplicadas. Se demuestra comparado con filtración de membrana en el medio oficial para enterococos fecales (Slanetz-Bartley Agar + Bilis Esculina Azida Agar), una sensibilidad del 100% frente al 95,6%  del método oficial. Una especificidad del 100%  frente al 61,0% del método oficial. Y un límite de detección coincidente en ambos métodos.

Si analiza muchas muestras al día, vea las versiones viales P/A y Botes P/A.

1-D KIT AUXILIAR PARA RECUENTO DE CLOSTRIDIOS SULFITO REDUCTORES EN 20‑50 ml DE AGUA (Agar SPS parafinado modificado concentrado)                   Referencia: RPL062

Los anaerobios no crecen muy bien con el método de Filtración de Membrana (MICROKIT UFM014, UFM011) y el método P/A no es válido en muchas legislaciones, que admiten 1 UFC de Clostridio Sulfito-Reductor en 20-50 ml de agua. Por ello, hemos diseñado un kit especialmente preparado para poder realizar recuento y P/A en muestras de gran volumen (hasta 50 ml).

MODO DE EMPLEO E INTERPRETACION DE RESULTADOS:

  1. Fundir al Baño María a 98 ºC.
  2. Inocular en profundidad, mediante una pipeta caliente, los 20-50 ml de agua de muestra calentada a 75 ºC (si la parafina solidifica antes de sacar la pipeta, recalentar el conjunto a 75 ºC durante el mínimo tiempo necesario para que la parafina vuelva a licuar). El shock térmico elimina las formas vegetativas y activa la germinación de las esporas.
  3. Voltear sin agitar para mezclar sin airear el medio, una sola vez.
  4. Incubar a 35‑37 ºC durante 24‑48 horas.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

PRESENTACION: Cajas con 10 frascos. Caducidad desde fabricación: 1 año.

Como todos los kits para anaerobios, NO debe guardarse en nevera, para impedir que el medio se oxigene con el frío. Conservar a 21-25 ºC, en la oscuridad.

Como control positivo puede utilizarse la cepa Clostridium perfringens (MKTA 13124) o mejor el saprófito Clostridium sporogenes (CRIOSTRAIN MKTA 11437). Recomendamos asimismo la participación en servicios intercomparativos como SEILAGUA, para validar los procedimientos y los operarios.

1-E KIT PARA P/A DE CLOSTRIDIUM PERFRINGENS Y SUS ESPORAS CLOSTRICULT MICROKIT® P/A Referencia: RPL 308

 

Elaborado a partir de caldo TSC (CLOSTRICULT-2) para adaptarse a las optimizaciones observadas mediante los servicios SEILAGUA®, desde Octubre de 2005, se optimiza de nuevo en Mayo 2007 para facilitar la anaerobiosis con más agentes reductores y con parafina líquida. Añadir 100 ml de agua de muestra, dejando una cámara de aire de 5 cm de altura. Cerrar el tapón sin apretar a fondo. Voltear sin agitar, para mezclar sin oxigenar. Incubar a (37 ºC) 44-46 ºC durante 18-48-(72) horas. Si busca sólo esporas, realizar un shock térmico de 5-10 minutos a 86 ºC. El viraje a negro (que suele expandirse de abajo arriba) a 44-46 ºC indica presencia de Clostridium perfringens (o de sus esporas si se realizó shock térmico). El viraje a negro a 37 ºC indica sólamente presencia de Clostridios sulfito-reductores (o de sus esporas si se realizó shock térmico).

Como control positivo puede utilizarse la cepa Cl. perfringens (CRIOSTRAIN MKTA 13124). Recomendamos asimismo la participación en servicios intercomparativos como SEILAGUA, para validar los procedimientos y los operarios.

El usuario final es el único responsable de la destrucción de los microorganismos que se hayan multiplicado en el interior de cada tubo o frasco, de acuerdo con la legislación medioambiental vigente.

Añada cloro o lejía hasta el borde con cuidado de no tocar ni derramar el cultivo (si al abrir los botes sale gas a presión o líquido, lavar bien las manos con agua corriente y jabón), o bien autoclavar, antes de desechar a la basura.

Validación: Realizada durante 7 años de intercomparación de 70 laboratorios de toda España en más de 700 muestras duplicadas. Se demuestra comparado con filtración de membrana en el medio oficial para Clostridium perfringens y sus esporas (mCP Agar y también frente a TSC Agar), una sensibilidad del 77,3 % frente al 14,33%  del método oficial y al 56,0% del TSC. Una especificidad del 100%  frente al 100% del método oficial y del 95,8% del TSC. Y un límite de detección de 3 a 10 veces más cercano a 1 ufc/100 ml que el método oficial: 2±1 ufc/100 ml con un 85% de detecciones frente a 8±7 ufc/100 ml en TSC Agar con sólo un 40% de detecciones.

Si analiza muchas muestras al día, vea las versiones viales P/A y Botes P/A.

2- EL METODO MICROKIT® P/A PARA OTROS PARAMETROS (Kits preparados sin necesidad de Filtración de Membrana ni de número Más Probable)

Además del parámetro de POTABILIDAD en las aguas, existen otros de gran importancia en la industria y medio ambiente. Presentamos los kits P/A diseñados especialmente para todos ellos. Todos cuentan con 1 año de caducidad desde fabricación, se presentan en cajas de 10 unidades e incorporan inactivadores de la eventual presencia de cloro en el agua. Se almacenan entre 2 y 25 ºC al abrigo de la luz.

El modo de empleo también es común a todos ellos: Añadir hasta 100 ml del agua o del líquido de muestra, agitar e incubar.

Se describen a continuación la utilidad, las condiciones de incubación y la interpretación de resultados de todos ellos:

2-A  MICROKIT® P/A PARA LA DETECCION DE PSEUDOMONAS sp. (Y AEROMONAS / PLESIOMONAS) EN 100 ml DE AGUA (Caldo GSP modificado)      Referencia: RPL309

La presencia de estos microorganismos es indicadora de infiltración de aguas naturales, residuales o no, y puede provocar la formación de limos obstructores de circuitos. En ciertos países, como Holanda, la legislación exige la ausencia de Aeromonas en las aguas potables. La aparición de Pseudomonas diminuta en aguas filtradas por 0,22 µm implica la rotura de los filtros.

Además distintas especies como Pseudomonas aeruginosa son patógenas para el hombre; ciertas especies de Aeromonas son patógenos animales muy indeseables en piscifactorías y algunas cepas de Aeromonas hydrophila han provocado enfermedad en el hombre; y Plesiomonas shigelloides provoca en el hombre cuadros gastroenteríticos similares a los de Shigella o Vibrio.

Este kit es útil para análisis de aguas purificadas en laboratorios cercanos al mar, a cauces de ríos y lagos, a pozos…, así como para análisis de aguas de piscinas y playas, aguas de barcos, acuicultura, etc.

El kit se incuba a 30-37 ºC durante 24-72 horas.

El viraje a naranja o amarillo es indicador presuntivo de Aeromonas/Plesiomonas.

El viraje a azulado o violáceo es indicador presuntivo de especies de Pseudomonas.

Cualquier turbidez sin viraje es sospechosa.

Turbidez y/o viraje deben confirmarse sembrando una gota del líquido del kit en la superficie de una placa de GSP Agar (MICROKIT DMT148) e identificando las colonias crecidas (MICROKIT KBH262).

Como control positivo pueden utilizarse las cepas Pseudomonas aeruginosa (CRIOSTRAIN MKTA 9027) y Aeromonas hydrophila (CRIOSTRAIN MKTA 49141). Recomendamos asimismo la participación en servicios intercomparativos como SEILAGUA, para validar los procedimientos y los operarios.

2-B  MICROKIT® P/A PSEUDOCULT PARA LA DETECCION DE PSEUDOMONAS AERUGINOSA EN 100 ml DE AGUA (Caldo Cetrimida altamente selectivo y muy modificado, con cromógenos)

Referencia: RPL302

Este patógeno debe estar ausente en el agua de cualquier laboratorio, sobre todo si es de una fábrica de medicamentos o productos cosméticos.

El frasco se cierra, se pincha en la parte elástica del tapón una aguja provista de filtro y se introduce a incubar en estufa a 37±1ºC de 18 horas a 5 días.

El viraje a rosa en 18-24h, con fluorescencia en 48h bajo luz UVA de 366 nm (linterna MICROKIT VMT050) es altamente presuntivo de Pseudomonas aeruginosa, aunque tras las 48h puede virar a rojo. El viraje a salmón es presuntivo de Burkholderia cepacia. Un viraje a rojo intenso, opaco y rápido (24h), puede ser ocasionado por E.coli y, en aguas marinas, por ciertas especies de Aeromonas y de Vibrio. Debe confirmarse aislando colonias, estriando en Agar Cetrimida (MICROKIT DMT034, PPL011, TPL100, RPL010) e identificando las mismas (MICROKIT 245000). Como control positivo puede utilizarse la cepa Pseudomonas aeruginosa (CRIOSTRAIN MKTA 9027). Recomendamos asimismo la participación en servicios intercomparativos como SEILAGUA, para validar los procedimientos y los operarios.

La validación interna del kit demuestra su excelente capacidad de detección, que resulta incluso del 100% de sensibilidad para inóculos de 1-2 ufc de P.aeruginosa/100-250 ml de agua, lo cual es un límite de detección inmejorable. En 7 años de intercomparación de 70 laboratorios de toda España en más de 700 muestras duplicadas, se demuestra comparado con filtración de membrana en el medio oficial (Cetrimida CN Agar) una sensibilidad y una especificidad del 100% frente al 73,4%  y al 91,3% respectivamente del método oficial, así como un límite de detección 50 veces más cercano a 1 ufc/100 ml que el método oficial.

Si analiza muchas muestras al día, vea las versiones viales P/A y Botes P/A.

2-B-BIS: MICROKIT® P/A PARALA DETECCION DE BURKHOLDERIACEPACIA EN 100 ml DE AGUA (Caldo BCPT  selectivo, color anaranjado) Referencia: RPL323

Este oportunista del biofilm del agua se detecta incubando el kit a 35 ºC durante 24 horas. Sólo B.cepacia es capaz de crecer tan deprisa en este caldo cromogénico, provocando el viraje a rojo tinto. Como siempre, confirme los positivos estriando en placa de agar selectivo  e identificando las colonias (MICROKIT 245000). A las 48-72 horas otros microorganismos pueden provocar falsos positivos con virajes tardíos del mismo tono.  Puede conseguir que el kit sea muy selectivo añadiendo a cada frasco 0,14 ml del suplemento SMT301.

Como control positivo puede usarse  la cepa Burkholderia cepacia  (CRIOSTRAIN MKTA 25416) y como control negativo la de Pseudomonas aeruginosa (CRIOSTRAIN MKTA 9027). Recomendamos asimismo la participación en servicios intercomparativos como SEILAGUA, para validar los procedimientos y los operarios.

Si analiza muchas muestras al dia, vea las versiones viales P/A y Botes P/A.

 

2-C  MICROKIT® P/A PARA LA DETECCION DE VIBRIO HALÓFILOS  EN 100 ml DE AGUA (Caldo Alcalino HiperSalino MICROKIT)          Referencia: RPL310P

Las especies Vibrio alginolyticus, Vibrio vulnificus y Vibrio parahaemolyticus pueden producir intoxicaciones alimentarias. Por ello, este kit es muy necesario para análisis de aguas de piscifactorías, ríos, cetareas, viveros, barcos, playas, piscinas y demás aguas naturales.

El kit se incuba antes de que transcurran 8 horas desde la inoculación, a 35 ºC durante 24 horas para los Vibrio halófilos.

El viraje del medio de azul oscuro a azul-verdoso es presuntivo, por lo que debe confirmarse aislando en TCBS Agar (MICROKIT DMT119, PPL048) y Vibrio Saline TSAT ISO 8914 (MICROKIT DMT172). Las colonias verdes, azules y amarillas en TCBS y rojas en TSAT son de distintas especies patógenas de Vibrio, que se identificarán con kits adecuados (MICROKIT KBH262). En TSAT, Vibrio parahaemolyticus crece con colonias de 2-3 mm y color rojo oscuro. Confirmar con TSI Agar: Vibrio parahaemolyticus provoca pico rojo, fondo amarillo, sin ennegrecimiento ni gas. Vibrio alginolyticus crece con colonias rojas o blancas, pero muy grandes y lobuladas. Vibrio cholerae y V.vulnificus crecen con colonias incoloras-crema.

Control de calidad positivo: Lentículas MICROKIT Vibrio parahaemolyticus WDCM 00037. Recomendamos asimismo la participación en servicios intercomparativos como SEILAGUA, para validar los procedimientos y los operarios

2-C Bis  MICROKIT® P/A PARA LA DETECCION DE VIBRIO CHOLERAE EN 100 ML DE AGUA (Caldo TCBS modificado) Referencia: RPL312

Vibrio choleare es el agente causal del cólera, desgraciadamente cada vez más extendido en su cepa menos conocida y peligrosa a países desarrollados. Otras muchas especies de Vibrio son inocuas y muy didácticas. Este patógeno es frecuente en países tropicales y en la ruta de inmigración de africanos a Francia a través de España. El  kit se incuba 24 horas a  28 ºC, que es la temperatura ideal para este microorganismo, cuyo hábitat son los peces, de sangre fría. El viraje a amarillo es presuntivo de Vibrio cholerae.

Confirmar en Agar TCBS (DMT119, TPL503) e identificar las colonias con KBH262 y antisueros (ZM05, ZM06, ZM07, BAA001). El servicio SEILAGUA 2002-2003 demuestra que este kit es infinitamente más sensible (ausencia total de falsos negativos) que el método MF en TCBS Agar (con 100% de falsos negativos!!!). Sin embargo es poco específico, con frecuentes falsos positivos (por ej. E.coli), de ahi la necesidad de confirmar en placa: A diferencia de las Enterobacterias, Vibrio cholerae es oxidasa positivo. A diferencia de los Coliformes, es lactosa negativo. A diferencia de otros Vibrio, no crece con >6% (60 g/l) de ClNa.

Control de calidad positivo: Vibrio cholerae MKTA 14035. Recomendamos asimismo la participación en servicios intercomparativos como SEILAGUA, para validar los procedimientos y los operarios.

NUEVO: V.cholerae P/A Cromogénico, los positivos viran a rojizo (naranja, púrpura, ámbar) en 36h (y hasta en  5 dias para detectar los casos de estress extremo). Referencia: RPL312C

2-D  MYCOKIT P/A PARA LA DETECCION DE HONGOS (LEVADURAS Y MOHOS) EN 100 ml DE AGUA (Caldo Rosa Bengala Cloranfenicol modificado)      Referencia: RPL315

Izda: Mohos en superficie y fondo, Dcha: Levaduras enturbiando

Los laboratorios, industrias y las aguas naturales pueden verse invadidas por distintas especies de hongos que a menudo son alterativas de las propiedades organolépticas de los productos fabricados. Por ello, este kit resulta de gran interés en industria alimentaria y cosmética, sobre todo, así como en aguas de baños (hongos dermatofitos), como piscinas, playas, duchas…

Conviene que la muestra de agua sea de la superficie, sobre todo si hay espuma o suciedad, pues es ahí donde se acumulan estos microorganismos y sus esporas.

El kit se incuba a 21-25 ºC durante 3-7 días.

La turbidez demuestra presencia de levaduras, al ser el medio selectivo contra bacterias. Los fieltros superficiales o floculantes indican presencia de mohos. Si se desea, se pueden identificar las especies de levaduras (MYCOTUBE) y de mohos (microscopio y claves MICROKIT).

Control de calidad positivo: CRIOSTRAIN Candida albicans MKTA 10231. Recomendamos asimismo la participación en servicios intercomparativos como SEILALIMENTOS o SEILAPARFUM, para validar los procedimientos y los operarios.

NUEVO: MYCOKIT P/A Cromogénico, los positivos viran a verde desde las primeras 48h (y hasta 3 dias para los más lentos). Ref: Viales FPA950 (no se puede elaborar en frascos preparados tomamuestras P/A)

2-E  MICROKIT® P/A PARA LA DETECCION DE ESTAFILOCOCOS EN 100 ml DE AGUA (Caldo Mannitol hipersalino muy modificado)      Referencia: RPL320

La presencia de estafilococos en agua es muy frecuente en aguas de baño, que pueden quedar contaminadas por personas portadoras. Por ello, este kit es necesario para completar el análisis de aguas de piscinas, playas y baño en general, según la legislación actual, además de su interés en Laboratorios Farmacéuticos y cosméticos.

El kit se incuba a 37 ºC durante 24-48 horas. La turbidez prueba la presencia de estafilococos. El viraje a naranja o amarillo es presuntivo de presencia de Staphylococcus aureus, con cepas patógenas del hombre. Dada la posible presencia de falsos positivos (y a pesar de la adición de numerosos agentes selectivos al caldo Mannitol, que se ha optimizado en Mayo de 2007 mediante la adición de más agentes reductores y parafina líquida, que disminuyen el nivel de falsos positivos de micrococos y otros aerobios halófilos), confirmar en Agar Baird Parker (MICROKIT DMT016, PPL002, TPL125, RPL003, MBN106) y si aparecen colonias negras con borde blanco y halo, se trata de S. aureus; o bien en Agar Mannitol (DMT078, TPL066, RPL023, PPL907…) y si aparecen colonias amarillas, se trata de S.aureus. Confirmar si es cepa patógena con la prueba de la coagulasa (MICROKIT KWD094). El servicio SEILAGUA 2002-2003 demostró que este kit, incluso antes de su optimización de Mayo de 2007, es sumamente más sensible (ausencia total de falsos negativos) que el método MF en  Baird Parker o en Mannitol Salt Agar (con 29% de falsos negativos!!!). Sin embargo es poco específico, con frecuentes falsos positivos, de ahi la necesidad de confirmar en placa.

Como control positivo puede utilizarse la cepa Staphylococcus aureus (CRIOSTRAIN MKTA 6538P). Recomendamos asimismo la participación en servicios intercomparativos como SEILAGUA, para validar los procedimientos y los operarios.

Validación: En 7 años de intercomparación de 70 laboratorios de toda España en más de 700 muestras duplicadas, se demuestra comparado con filtración de membrana en el medio oficial (Baird Parker Agar y Mannitol Salt Agar) una sensibilidad del 100% frente al 71,0%  y al 60,0% respectivamente del método oficial, así como una especificidad 96,0% frente al 65,0% y 83,0% respectivamente. El límite de detección resulta un 70% más cercano a 1 ufc/100 ml que el del método oficial.

2-F  FICOKIT (MICROKIT® P/A PARA LA DETECCION DE ALGAS MICROSCOPICAS EN 100 ml DE AGUA) (Caldo Algas Modificado) Referencia: RPL307

Para la detección de todo tipo de algas microscópicas en aguas (Cianofíceas, Clorofíceas, Diatomeas, etc.), desarrollamos FICOKIT, test de presencia / ausencia en 100 ml de muestra.

De gran interés en acuicultura, piscinas, aguas envasadas, aguas naturales, aguas de refrigeración y lavado, etc., FICOKIT contiene un caldo de cultivo especialmente formulado para microorganismos fotosintéticos en general, a alta concentración, estéril y listo para su uso, al que se han añadido agentes que aceleran el crecimiento vegetal.

Tomar la muestra de agua (50‑100 ml) rascando las superficies bañadas por la misma y agitando. Es recomendable que la muestra sea lo más representativa posible, por lo que pueden añadirse pequeños trozos del medio ambiente cercano y, si el agua de muestra es muy limpia, un filtro enrollado de 0,45 um de poro por el que se hayan filtrado 5 litros o más del agua de muestra. Pero siempre añadiendo directamente al kit un mínimo de 50 ml de agua, ya que el medio está a alta concentración y un máximo de 100 ml de agua, ya que hay que dejar una cámara de aire.

Incubar junto a una ventana con cortina traslúcida donde no incida directamente la luz del sol, durante 2‑30 días (los resultados serán siempre más rápidos en primavera, dado el fotoperiodo ideal). La temperatura ambiente ideal es de 21‑25 ºC.

Sobre todo en lugares poco soleados y en invierno, pueden reproducirse artificialmente estas condiciones con fotoperiodo de 16 horas de luz/8 horas de oscuridad mediante fluorescentes de menos de 3.200 LUX situados a 4,5 metros de los frascos de FICOKIT.

La aparición de fieltros, mucosidades, filamentos o turbidez con los colores  propios de la fotosíntesis (verde, verde azulado, verde amarillento, rojizo, pardo…), indica presencia de microorganismos fotosintéticos en la muestra.

Estos microorganismos alteran las propiedades organolépticas, producen limos obturadores y en algunos casos son tóxicos.

Ver claves de algas MICROKIT para diferenciar cianofíceas, clorofíceas, diatomeas, etc. al microscopio y poder identificar incluso a nivel de géneros.

Como control positivo puede utilizarse la cepa Chlorella vulgaris (CRIOSTRAIN “MKT Clor-1″). Recomendamos asimismo la participación en servicios intercomparativos como SEILAGUA, para validar los procedimientos y los operarios.

2-G  CIANOKIT (MICROKIT® P/A PARA LA DETECCION DE ALGAS CIANOFICEAS O CIANOBACTERIAS Y OTRAS BACTERIAS FOTOSINTETICAS EN 100 ml DE AGUA)    (Caldo Algas con suplemento para cianobacterias)   Referencia: RPL306

De gran interés para acuicultura, piscinas, aguas minerales, aguas estancadas, aguas de abastecimiento, etc., este kit diseñado por MICROKIT IBERICA, contiene un medio de cultivo especial para cianofíceas, estéril y listo para su uso.

Las cianofíceas son algas/bacterias muy primitivas que pueden provocar problemas de toxicidad en las aguas donde proliferan.

Oscillatoria erythraea, especie planctónica marina, produce una toxina mortal para los peces, cuando su concentración es elevada, y que intoxica la cadena alimenticia, pudiendo ser mortal para el hombre (enfermedad tropical «ciguatera»).

Lyngbya majuscula puede provocar dermatitis necrótica a los bañistas de playas contaminadas por ella.

En aguas continentales, sobre todo, Aphanizomenon flos-aquae, Anabaena flos-aquae, Schizothrix calcicola, Lyngybya gracilis, Oscillatoria nigroviridis, Calothrix crustacea, Nostoc muscorum, Symploca muscorum, Tolypothrix byssoidea y Microcoleus lyngbyaceus son varias especies que se ha comprobado producen una amplia gama de toxinas.

Anabaena circinalis, Symploca hydroides y algunas especies de Microcystis, provocan dermatitis por baño en aguas donde proliferan.

Recientemente Paul R. Hunter (Sept.1995, Cyanobacteria in fresh waters, Microbiology Europe Vol. 3, Nº 5) recopila los ultimos casos de mayor relevancia internacional, con dolor de cabeza, diarrea, vómitos, conjuntivitis, otitis, fiebre, urticaria, asma… provocados en personas tras 2-48 horas del contacto (a veces simple baño, ni siquiera consumo) con aguas donde se ha dado un bloom algal de cianofíceas en Inglaterra.

En cualquier caso, un agua con abundantes cianofíceas jamás debe ser consumida. Incluso deben cerrarse las aguas con blooms de cianofíceas a las actividades recreativas, pues se han dado casos de neumonía a canoistas que navegaban sobre un bloom algal de Microcystis aeruginosa.

Se establece una clasificación de la polución de las aguas, en función de los grupos de cianocífeas existentes. En aguas extremadamente polutas, proliferan especies de Spirulina y Anabaena. En aguas polutas, proliferan especies de Oscillatoria y Phormidium. En aguas moderadamente polutas, proliferan Anabaena flos-aquae, Aphanizomenon flos-aquae, y diversas especies de Nostoc y Oscillatoria. En cambio se consideran puras las aguas ricas en especies de la Stigonematácea Hapalosiphon.

En aguas estancadas de verano, sobre todo, las sustancias nitrogenadas se agotan y las cianofíceas, capaces de fijar nitrógeno atmosférico (con heterocistes, sobre todo), libres de competencia, proliferan. Esto es más frecuente en aguas continentales que en aguas marinas. Y cada vez más frecuente en aguas europeas, por el aporte fosfatado que proporcionan los vertidos de fertilizantes en agricultura.

Con CIANOKIT puede detectarse la presencia de cianofíceas antes de que sea demasiado tarde. Con las claves de identificación que pueden solicitarse a MICROKIT, puede, además, avanzarse en el pronóstico de la toxicidad del agua.

Las algas acuáticas pueden encontrarse en superficie, flotando como NEUSTON (sus proliferaciones se denominan «flores de agua» y pueden crear anoxia en las aguas inferiores); o bien en la masa de agua, formando el PLANCTON; o bien adheridas a superficies y en el fondo, o BENTOS.

A menudo colorean el agua de diversos tonos azulados (cianofíceas), rojos (dinofíceas-mareas rojas- y cianofíceas), pardos (diatomeas) o verde-amarillentos (clorofíceas) cuando se encuentran en grandes concentraciones.

Una buena recolección de muestras, debe incluir los tres tipos de hábitats descritos: El NEUSTON se recoge dejando entrar agua superficial en un bote, sin agitar. Si es visible se toma con pinzas. El PLANCTON se puede coger con una red de 20-60µm de poro, aunque si su concentración es suficientemente alta, bastará con tomar una muestra de 250 ml en un frasco, entre dos aguas, sin agitar y sin rapidez. El BENTOS se tomará rascando la superficie sólida con una navaja o pasando un tubo de recolección suavemente por la zona superficial del sedimento.

Sembrar cada tipo de muestra (Neuston, Plancton y Bentos) en un frasco de CIANOKIT. El Plancton es preferible sembrarlo tras dejar sedimentar el frasco de muestra de 3 a 24 horas, y tomando la muestra del fondo con una pipeta o jeringa.

Dejar una buena cámara de aire (medio frasco).Cerrar. Agitar para mezclar la muestra con el medio de cultivo.

La incubación se realizará junto a una ventana. En zonas poco soleadas y en invierno, se hará mejor en una habitación con una temperatura de 20C, con fluorescentes de luz blanca fría, situados a 4’5 metros de los frascos (intensidad jamás superior a 3.200 LUX), con un fotoperiodo de 16 horas de luz/8 horas de oscuridad, durante 2-30 días. Nunca se debe dejar que la luz directa del sol incida sobre los frascos, aunque si es indirecta ayudará a acelerar los resultados. Debe realizarse, al menos, un análisis semanal, para que la prevención sea eficaz.

Las cianofíceas se denominan también «algas azules», pero muchas especies son verdes, rojas, violetas, negras… Cualquiera de estos colores, desarrollado en el líquido o en las paredes y fondo de CIANOKIT, son indicadores de presencia de cianofíceas, independientemente del aspecto afieltrado, mucoso, turbio o filamentoso que pueda adquirir.

Debe confirmarse al microscopio, pues otras algas pueden dar lugar a falsos positivos. Otras bacterias fotosintéticas también pueden proliferar en CIANOKIT, aunque es difícil porque precisan las condiciones anaerobias que consiguen en los sedimentos de los lagos.

NOTA: PARA RECUENTO, UTILICE EL MEDIO DESHIDRATADO O LAS PLAQUIS® HERMETICAS DE CIANAGAR.

Control de calidad positivo: CRIOSTRAIN MKT Cian-2 (Cócktel Spirulina + Microcoleus + Oscillatoria). Recomendamos asimismo la participación en servicios intercomparativos como SEILAGUA, para validar los procedimientos y los operarios.

Ver las claves de algas MICROKIT para identificar a nivel de género.

El usuario final es el único responsable de la destrucción de los microorganismos que se hayan multiplicado en el interior de cada frasco, de acuerdo con la legislación medioambiental vigente. Añada cloro o lejía hasta el borde, con cuidado de no tocar ni derramar  el cultivo, antes de desechar a la basura. Si al abrir los botes sale gas a presión o líquido y se salpica, lavar las manos con agua corriente y jabón.

Si desea más información sobre nuestros METODOS P/A rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto . O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16

RAPIDSCREEN-RAPIDTEST

RAPIDSCREEN-RAPIDTEST

Tubos preparados para la valoración rápida del contenido bacteriano

Diferentes tonos de viraje en función de la carga microbiana y el tiempo de incubación

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Este kit, permite realizar una estimación rápida, sencilla y económica del contenido microbiano (recuento total de bacterias) en todo tipo de productos (alimentos, lácteos, aguas sucias, materias primas, productos químicos, orina…).

Con los tubos de RAPIDSCREEN podrá valorar en sólo unas horas los contenidos bacterianos altos, sin necesidad de aparataje (en casos extremos, ni siquiera se precisará una estufa de cultivos, mientras la temperatura de incubación de la fábrica, oficina o laboratorio sea siempre la misma).

RAPIDSCREEN se basa en reacciones metabólicas microbianas, que alteran las moléculas cromogénicas incluidas. El cambio se traduce a simple vista por un viraje del medio, de color amarillo a rojo púrpura (si el producto analizado tiene color propio, el viraje puede ser al color derivado de su mezcla; por ejemplo, la leche, blanca, hace virar el medio a rosa).

Sin la existencia de actividad metabólica microbiana con crecimiento de la población, no puede tener lugar el viraje, con lo que se eliminan los falsos positivos de otros métodos cromogénicos más conocidos.

El viraje es más rápido cuanto mayor sea la flora microbiana (desde 1 hora en muestras muy contaminadas, con 107 bacterias por mililitro). Siempre que el contenido bacteriano sea superior a 1.000 UFC/ml (o gramo), se obtienen resultados el mismo día!. Las muestras menos contaminadas se pueden concentrar por filtración (0,45 µm), introducir la membrana enrollada en el tubo de Rapidtest y extrapolar los resultados a los mililitros filtrados.

La incubación puede hacerse a temperatura ambiente (ideal 18-25ºC), pero es mejor realizarla a 30ºC ó a 37ºC (en un incubador/estufa –VMT051/VRP001-) para que el viraje sea más rápido. Una vez elegida la temperatura de incubación, no debe ser variada, para que los resultados de los diferentes lotes sean comparables.

El test puede ser realizado por personal no especializado, por lo que incluso industrias sin laboratorio, pueden ya realizar un screening rápido de la carga microbiana de sus proveedores -materias primas- y de su producto terminado. Es muy fácil de utilizar.

Cada tipo de producto, según su contenido en grasas, conservantes, transparencia, etc. tendrá un comportamiento diferente con el test, por lo que debe calibrarse el kit en cada caso. Para un mismo tipo de producto, la correlación entre el tiempo requerido para el viraje y la carga microbiana, es excelente. Por ello, si para un producto determinado se establece el tiempo de viraje en función de diferentes niveles de contaminación (ver más adelante, CALIBRACION), puede estimarse la contaminación de las muestras simplemente con el tiempo de viraje.

Validación

Para validar el kit con su producto, tome 10 muestras muy contaminadas y realice en cada una 10 diluciones decimales en tubos 9 ml APT (MICROKIT TPL007), para así obtener una población total de 100 submuestras. De cada una de ellas siembre 1 ml en un tubo de RAPIDSCREEN y 1 ml, en masa, mezclando en placa preparada con PCA (MICROKIT TPL071 fundido a 100 ºC y enfriado a 45 ºC antes de añadir el mililitro de muestra). Incube todo a una temperatura concreta (ideal 35 ºC) y compare resultados, registrándolos mediante una tabla cuyas ordenadas muestren el recuento en placa y cuyas abscisas muestren el tiempo de viraje.

Ejemplo realizado en una industria cárnica (no aplicable a otras industrias, ni siquiera del mismo sector):

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

De modo que en esta industria, cuando Rapidscreen vire en 2 horas indicará que hay nada menos que 108 microorganismos por gramo, cuando vire en 3 horas indicará que hay 106, cuando vire en 7 horas indicará que hay 105 y cuando vire en 13 ó más horas indicará que hay como máximo 103 microorganismos por gramo de muestra.

Modo de empleo y lectura de resultados

Añadir a un tubo 1 ml del producto o, en productos sólidos, 1 ml de la solución madre (disolución de 1 gramo en 10 ó 100 ml de agua peptonada tamponada MICROKIT; en este caso, los resultados se multiplicarán por 10 ó 100), o bien la membrana de filtración enrollada.

Los productos congelados o refrigerados tardan mucho más tiempo en producir el viraje, por lo que deben atemperarse antes de homogeneizarse.

Incubar a 35 ºC

Controlar el tiempo de viraje a rojo. El cambio de color se inicia por un rosado en el fondo del tubo, que se intensifica y extiende más adelante a la totalidad del tubo.

Compare con su tabla de calibración para interpolar de forma inmediata cuál es el recuento.

Si no desea mirar la estufa a intervalos cortos de tiempo, establezca cuál es el valor límite por encima del cual el producto no es válido y acuda a la estufa una vez transcurrido dicho tiempo; si el tubo está rojo, el lote no será aceptable y si no lo está, sí.

Caducidad y presentación

La caducidad es de 6 meses tras su fabricación. Ver la fecha exacta impresa en cada caja.

La presentación es de cajas de 20 tubos y de cajas de 200 tubos. Referencia: KAJ001.

La temperatura de conservación no es muy importante, aunque es preferible que sea de 2 a 8 ºC. Lo que sí es imprescindible es MANTENER PROTEGIDO DE LA LUZ! (No sacar de la caja cerrada hasta el momento de uso y mantener ésta en un armario oscuro o en una nevera). No congelar.

CONTROL DE CALIDAD:

Como control positivo rápido ( 24 h) puede utilizar una cepa de E.coli (CRIOSTRAIN MKTA 25922). Como control positivo lento ( 48 h) puede utilizar una cepa de Pseudomonas aeruginosa (CRIOSTRAIN MKTA 9027).

El usuario es el único responsable de la destrucción de los microorganismos generados en el interior del kit durante su uso, de acuerdo con la legislación medioambiental vigente. Destruir por inmersión en lejía. Mantener fuera del alcance de los niños. No ingerir.

Si desea más información sobre nuestro RAPIDSCREEN-RAPIDTEST rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto . O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16

DESINFECTEST ® – LAMINOCULTIVOS

DESINFECTEST ®

Laminocultivos “dipslides” para control microbiológico industrial y ambiental

 

INTRODUCCIÓN

DESINFECTEST® es la más moderna gama de laminocultivos de MICROKIT. Se trata de kits listos para su uso que permiten el análisis microbiológico de líquidos crudos, de superficies y de colonias obtenidas en medios de cultivo generales. Han sido especialmente diseñados para industria.

Están formados por una lámina que se inserta en el tapón de un tubo hermético y transparente. La lámina está rellena, por cada cara, de un medio de cultivo convexo, de ahí el nombre que le aplicamos de laminocultivo (en inglés, «dipslide»).

Cada tipo de DESINFECTEST® tiene dos medios de cultivo diferentes, uno en cada cara, específicos cada uno para un tipo de análisis, general o selectivo (ver la gama mas adelante).

Por su sencillez, DESINFECTEST® pueden ser utilizado por personal no especializado, tanto en trabajo de campo como de laboratorio. Los resultados obtenidos son perfectamente comparables a los de los métodos convencionales siempre que se sigan las instrucciones al pie de la letra.

DESINFECTEST® se basa en el principio de que todo microorganismo, alimentado por el medio agarizado adecuado a una temperatura y en un tiempo concretos, da lugar a una colonia característica que es observable a simple vista.

Para el análisis de líquidos crudos la ventaja es la comodidad y el ahorro de diluciones siempre que la contaminación esté entre 1.000 y 10.000.000 de microorganismos por mililitro. El apéndice final de la lamina permite que el líquido sobrante tras la inmersión resbale y no se acumule al final del medio de cultivo, lo que impide que se obtengan recuentos falseados y heterogéneamente distribuidos en el medio de cultivo, como pasa en otros laminocultivo

Para el análisis de superficies, la ventaja frente a las Placas de Contacto (ENVIROCOUNT®) es que el sistema hermético permite transportar el kit sin necesidad de un especial cuidado, incluso para análisis de campo.

Para el análisis de colonias obtenidas en medios de cultivo generales, DESINFECTEST® es una forma económica, y con larga caducidad, de tener un pequeño stock de medios de cultivo selectivos que nos orientarán sobre el tipo de microorganismo que hemos encontrado: Enterobacteria, Coliforme, Salmonella, E. coli, Estafilococo, Micrococo, Pseudomonas, Aeromonas, Bacillus, Lactobacillus, Listeria, Levadura, Moho u otro. El conjunto de los diversos tipos de DESINFECTEST® se convierte así en una batería completa de preidentificación de microorganismos.

LA SENSIBILIDAD DE LOS DIPSLIDES ES DE HASTA 1 ufc/mm2  Y DESDE 1000 ufc/ml.

Todo usuario de DESINFECTEST®, conoce las ventajas de este producto, que lleva más de una década resolviendo los problemas de control microbiológico de superficies y de líquidos crudos, en cientos de usuarios de España, resto de Europa y otros países.

La pega que ha tenido hasta ahora este producto es que la lámina no era flexible, por lo que para control de superficies recónditas, había que desmontarla del tapón. Además, su producción artesanal provocaba un nivel de contaminaciones al que no estabamos habituados en ningún otro producto.

Conscientes de estos problemas, de difícil solución, nos hemos decidido por fin a cambiar de proveedor, a fin de conseguir la completa satisfacción de todos nuestros clientes: Los nuevos DESINFECTEST® tendrán la lámina flexible para poder analizar superficies más cómodamente. Y su producción a nivel industrial limitará las contaminaciones y deslaminaciones a niveles muy inferiores.

El lado negativo del cambio es que, al ser desde ahora una producción a gran escala, en vez de artesanal, no podemos mantener una gama tan completa como hasta ahora, ya que nuestra producción mínima es de 1000 u, no de 200 u como hasta ahora (no obstante, consulte la posibilidad de otras combinaciones para programaciones de, al menos, 300 u/mes). Hemos rediseñado las combinaciones, con los medios más exitosos, quedando como siguen las cuatro únicas referencias que hemos desarrollado, para las que MICROKIT cuenta con los derechos de distribución exclusiva en el ámbito mundial:

DESINFECTEST®  Referencia       Medios-Utilidad                                                   Color Medio

 

AEM/AET              MBN101         TSA Neutralizing Agar TTC (AET)                             Incoloro

PCA + TTC-Recuento total (AEM)                              Incoloro

 

EC                          MBN103         Salmonella Cromogenic Agar                                   Crema

Coliformes + E. coli Cromogenic Agar                      Crema

 

ARICPC                MBN200         Neutralizing Agar incoloro +TTC  (AET)                 Incoloro

VRBG Agar + Inactivadores (E)                                Púrpura

 

MIX                       MBN407         Neutralizing Agar incoloro +TTC (AET)                 Incoloro

Rosa Bengala Caf.-Hongos ambientales (LM)          Rosa

MODO DE EMPLEO

(Leer además las instrucciones del tipo concreto de DESINFECTEST® con el que se va a trabajar, especificadas más adelante).

1.‑ Para líquidos:

Desenroscar el tapón e introducir la lámina en la muestra durante un instante (máximo 5 segundos). La calidad de la muestra no se ve afectada por la inmersión del laminocultivo, que es estéril y no contiene productos tóxicos.

Si se dispone de poco volumen de muestra, dejarla gotear sobre cada medio de cultivo con la ayuda de una pipeta Pasteur (MICROKIT VFR273)

El mismo tubo del laminocultivo puede servir de recipiente para ser llenado con el líquido de muestra y sumergir allí la lámina agarizada. En tal caso no debe olvidarse vaciarlo tras la inmersión.

Si el líquido es muy espeso, o incluso si se trata de un sólido previamente desmenuzado, debe diluirse a razón de 10 ml o 10 g) en un frasco de 100 ml de Agua Peptonada Tamponada (MICROKIT RPL007) y luego multiplicarse por 10 los resultados obtenidos.

Si la muestra se prevé muy contaminada (con más de 1.000.000 microorganismos por mililitro) debe diluirse 1 ml en un frasco de 100 ml de Agua Peptonada Tamponada estéril (MICROKIT RPL007) y luego multiplicarse por 100 los resultados obtenidos.

Si la muestra se prevé poco contaminada (con menos de 1.000 microorganismos por ml) se recomiendan otros métodos (consultar al Servicio Técnico de MICROKIT), aunque si sólo se precisa ver presencia/ausencia de algún microorganismo, puede enriquecerse en una caldo selectivo antes de usar el DESINFECTEST®.

En cualquier caso, dejar escurrir el líquido sobrante, depositando el apéndice del final de la lámina sobre un papel secante. No agitar nunca. Volver a enroscar el laminocultivo en su tubo sin apretar al máximo. Incubar en posición vertical, preferiblemente con el tapón arriba, el tiempo y a la temperatura indicados mas adelante para cada tipo de DESINFECTEST®.

2.‑ Para control de superficies:

Desenroscar el tapón con cuidado de no tocar los medios de cultivo con los dedos.

Tocar con un medio de cultivo la superficie de análisis, ejerciendo una ligera presión y sin desplazarlo, durante unos instantes (mejor unos 10 segundos). Repetir la operación con el otro medio en una superficie muy cercana a la primera, pero nunca exactamente en la misma. La flexibilidad de la lámina permite acceder a superficies difíciles sin necesidad de desmontarla del tapón.

Si la superficie de análisis es rugosa, curva o de difícil acceso, barrerla con una torunda estéril previamente humedecida en Agua Peptonada Tamponada estéril (MICROKIT RPL007) y, después, hacerla girar sobre la superficie de un medio extendiendo el inóculo por toda la superficie del agar. Repetir la operación con otro escobillón para el otro medio de cultivo.

Volver a enroscar el laminocultivo en su tubo sin apretar al máximo.

Incubar en posición vertical, preferiblemente con el tapón arriba, el tiempo y a la temperatura indicados más adelante para cada tipo de DESINFECTEST®.

3.‑ Para identificación de colonias:

Las colonias obtenidas en medios de cultivo generales pueden identificarse mediante dos pasos sucesivos:

1  Uso de medios de cultivo selectivos orientativos del tipo de microorganismo.

2  Identificación de las colonias aparecidas en éstos con kits bioquímicos e inmunológicos específicos (ver para cada tipo de DESINFECTEST® explicado más adelante o consultar al servicio técnico telefónico de MICROKIT).

Los medios de cultivo selectivos más rentables desde el punto de vista economía/caducidad son los laminocultivos. Por ello, tener un stock de una caja de cada tipo de DESINFECTEST® cada semestre, puede sacar de apuros a muchos laboratorios que habitualmente centran sus análisis en el recuento total.

La colonia obtenida en el medio de cultivo general (TSA, PCA, LPT100 Agar, Nutrient Agar, PCA‑Carbón, D/E Neutralizing Agar …) se toma con la ayuda de un asa de siembra estéril y se introduce en un tubo de 9 ml de Buffered Peptone Water (MICROKIT TPL007). Se agita bien y se deja reposar unos minutos. Se introduce un asa calibrada hasta la mitad del tubo, se saca y se deja gotear, sin agitar.

La película que queda en el círculo del asa se extiende en zig zag sobre una cara del laminocultivo, recorriendo la mayor extensión posible, sin pasar dos veces por el mismo punto, a fin de obtener colonias aisladas que luego puedan utilizarse en la identificación bioquímica o inmunológica. Se repite la operación con la misma asa calibrada estéril en la otra cara del laminocultivo, y así sucesivamente en los demás medios del resto de DESINFECTEST®.

Se cierra y se incuba cada laminocultivo en posición vertical, preferiblemente con el tapón arriba, el tiempo y a la temperatura indicados más adelante para cada tipo de DESINFECTEST®

LECTURA DE RESULTADOS

(Leer además las instrucciones del tipo concreto de DESINFECTEST® con el que se va a trabajar, especificadas más adelante).

Tras la incubación recomendada en cada tipo de DESINFECTEST®, se compara visualmente la concentración de colonias de cada medio con las tablas de resultados incluidas en cada caja de DESINFECTEST®.

1.‑ Para líquidos:

Los resultados obtenidos aquí serán semicuantitativos.

Existe una clara correlación entre la densidad de colonias desarrolladas en un laminocultivo y el número de microorganismos por mililitro que hay en la muestra (Mossel, Genner, etc).

Comparar la densidad de colonias de cada medio con las tablas de resultados incluidas en cada caja de DESINFECTEST®.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Así obtendremos el orden de magnitud de contaminación en valores exponenciales de 10 (1.000, 10.000, 100.000, 1.000.000…) cfu/ml. Si es superior a los valores permitidos por la legislación o por las normas internas del laboratorio para el producto concreto, el lote no es  válido. En caso contrario, tampoco debe olvidarse que es necesario continuar con los controles de forma rutinaria, al menos uno por cada lote.

Si el valor obtenido es superior a 100.000 cfu /ml en bacterias o levaduras, o a 30 colonias/cara en mohos, conviene repetir el test a partir de una dilución de la muestra en Agua Peptonada Tamponada estéril (MICROKIT RPL007), y luego multiplicar el resultado obtenido por el factor de dilución

Para los medios selectivos, no se suele buscar recuento, sino presencia o ausencia de alguna colonia a partir de caldos de enriquecimiento.

2.‑ Para control de superficies:

Los resultados obtenidos aquí serán cuantitativos. Cada colonia ha crecido a partir de un microorganismo inicial. Por tanto, el número de colonias de cada cara indica el número de microorganismos que había en los 8 cm2 de superficie analizados con cada medio.

Con las tablas de resultados se facilita el recuento para los valores altos: Comparar la densidad de colonias de cada cara con las tablas de resultados incluidas en cada caja de DESINFECTEST®

BACTERIAS Y LEVADURAS
Arriba, ufc/ml de muestra líquida.
Abajo, ufc/cm2 de muestra de superficies.
≤1×103 5×103 1×104 1×105 1×106 ≥1×107

MOHOS FILAMENTOSOS
Arriba, ufc/ml de muestra líquida.
Abajo, ufc/cm2 de muestra de superficies.
ligera moderada importante

 

 

 

 

 

 

 

 

Deben servir de alerta resultados superiores a 40 microorganismos por cara en superficies de trabajo de industrias poco higiénicas y en superficies de alimentos no cocidos, a 8 en suelos de restaurantes, cocinas, habitaciones de hospitales, baños, a 4 en retretes y a 1 en guarderías, lavabos, mesas de hospitales, superficies de catering y lavandería… De todas formas y, en general, nada mejor que la propia experiencia en su fábrica y su producto para saber cuando los valores se disparan de forma alarmante. Por ello es tan interesante el uso rutinario de DESINFECTEST®.

3.‑ Para identificación de colonias:

No se efectúa recuento. El medio selectivo en el que haya crecimiento será indicador del tipo de microorganismos de que se trata.

Debe confirmarse, antes de emitir un diagnóstico, con kits específicos adecuados, sean bioquímicos o sean inmunológicos (consultar al Servicio Técnico Telefónico de MICROKIT).

NOTA: Si la presencia de microorganismos es muy abundante, se puede obtener un crecimiento uniforme, formándose un velo que puede pasar desapercibido; en tal caso la superficie pierde su brillo. Para estos casos, debe analizarse de nuevo la muestra tras diluirla a razón de 0,1 g (o ml) en 100 ml de Agua Peptonada Tamponada estéril (MICROKIT RPL007), y después multiplicar el resultado obtenido por 1.000. A veces no aparecen colonias en el medio de cultivo, y sí entre éste y el plástico soporte. En tal caso, debe repetirse el análisis, pues es señal de que no se dejó gotear bien el líquido sobrante tras la inmersión. Algunos medios viran al color típico de las colonias cuando la concentración de éstas es tan alta que no se distinguen; así, su presencia no pasa desapercibida.

PRECAUCIONES

  • Leer bien las instrucciones para cada tipo de laminocultivo.
  • No tocar las láminas agarizadas.
  • No abrir más que en el momento de uso, para conservar la esterilidad.
  • No utilizar más que una sola vez cada laminocultivo.
  • Desechar los laminocultivos que, ocasionalmente, aparezcan contaminados, deslaminados, retraídos, caducados o secos.
  • Evitar los cambios de temperatura para que no aparezca agua de condensación y para que el agar no pierda convexidad. No congelar. Mantener a una temperatura ambiente comprendida entre 4 y 25 ºC, pero sin cambios diurnos/nocturnos importantes, lejos de las corriente de aire y de la luz (sobre todo el Agar Rosa Bengala).
  • Destruir los laminocultivos usados mediante incineración, inmersión prolongada en desinfectantes (lejía, alcohol …) o autoclavado.
  • Use cepas de referencia CRIOSTRAINS, de trabajo o cuantitativas, para validar los reactivos una vez llegados a fábrica o tras almacenamientos prolongados o inadecuados.

CADUCIDAD

La caducidad de los laminocultivos es de 6 meses desde fabricación (Cad. mínima de venta 2 meses). No obstante, puede prolongarse hasta 3 meses después de la fecha de caducidad impresa en la caja, si se mantienen en nevera a 8-12 ºC, sin variación de temperatura y siempre que los agares mantengan su convexidad por encima del reborde de plástico de la lámina.

LA GAMA MAS COMPLETA DE LAMINOCULTIVOS: DESINFECTEST ®

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

DESINFECTEST®-AEM/ AET: Recuento total, con inactivadores, de bacterias aerobias mesófilas y totales:

Este índice es indicador de higiene. Cuanto mayor sea el recuento, más rápidamente se degradará el producto.

Ambas caras tienen Agar Neutralizing sin púrpura y con TTC.

Bacillus subtilis crece con amplias colonias rugosas, Escherichia coli crece con colonias húmedas y cremosas, Pseudomonas aeruginosa crece con colonias incoloras y Staphylococcus aureus crece con colonias amarillas. Otros muchos microorganismos crecen con colonias más o menos características.

El TTC tiñe las colonias de rojo, permitiendo una clara diferenciación respecto al fondo. Si toda la cara se tiñe de rosado, es que el recuento es tan alto que las colonias compiten por el sustrato hasta el punto de ser diminutas y no verse. El Neutralizing inactiva los residuos de derivados de amonio cuaternario, fenoles, formoles, iodo, cloro, mercurio, glutaraldehido … que pueda haber en la muestra o superficie.

Este laminocultivo se incuba a 35‑37 ºC durante 24‑72 horas. Se leen todas las colonias (ver tabla de resultados superior).

Se obtiene el recuento total de aerobios mesófilos incluidos los de crecimiento lento y los subletales tras las desinfecciones.

DESINFECTEST®-MIX: Recuento total de hongos (levaduras y mohos) saprófitos-ambientales, alterativos y parásitos-patógenos:

Los hongos saprófitos, alterativos o ambientales son un índice indicador de higiene. Cuanto mayor sea el recuento, mas rápidamente se degradará el producto.

La cara rosa contiene Agar Rosa de Bengala con cloranfenicol, medio de color rosado especial para el crecimiento selectivo de hongos (levaduras y mohos) ambientales. La presencia de Rosa de Bengala restringe el tamaño de los mohos, impidiendo que los de crecimiento rápido invadan la superficie del medio, oculten a los más lentos e impidan el recuento. El cloranfenicol (CAF), antibacteriano de amplio espectro, proporciona una gran selectividad para los hongos.

Este medio es sensible a la luz, por lo que la preocupación general de guardar los laminocultivos en sus cajas y lejos de la luz se acentúa aquí. También la incubación, para este medio, debería hacerse en la oscuridad. La recuperación selectiva de levaduras y mohos en este medio es máxima, según demuestra un estudio comparativo de MICROKIT: Sanchis & Co. Técnicas de Laboratorio, Mayo de 1996.

La cara incolora es Neutralizing Agar incoloro y con TTC para recuento total  (como en AEM)

Este laminocultivo se incuba, para hongos ambientales, a 21-35 ºC durante 3-5 días. En general, a los tres días aparecen las levaduras y algunos mohos de crecimiento rápido, y a los 5 días aparecen todos los mohos Se leen todas las colonias (ver tabla de resultados inferior). Las colonias de levaduras aparecen con el mismo aspecto que la mayoría de bacterias, y también con colores diversos. Los mohos producen colonias filamentosas (no confundir con las colonias en «melena de león» de algunos Bacillus), pulverulentas y de colores diversos.

Candida albicans aparece en ambas caras con colonias exuberantes y blancas o rosadas. Confirmar la especie con galerías de identificación para levaduras (MICROKIT YEAST-IDENT).

Aspergillus niger y Rhizopus nigricans crecen en ambas caras con colonias filamentosas blancas o amarillas, que ennegrecen centrífugamente en unos días por formación de esporas.

Aspergillus flavus, aflatoxigénico, crece en ambas caras con colonias filamentosas amarillas.

Muchas especies de Alternaria crecen en ambas caras con colonias teñidas de marrón oscuro a causa de sus esporas.

Muchas especies de Penicillium y de Aspergillus crecen en ambas caras con colonias verdes, amarillas y azuladas a causa de sus esporas.

Las identificaciones de mohos deben hacerse con la ayuda de un microscopio y claves dicotómicas (MICROKIT regala unas si las solicita junto a su pedido).

Este laminocultivo se incuba, para bacterias ambientales (saprófitas), 1-3 días a temperatura ambiente (21-25 ºC). Todas las colonias crecerán rojas. Para bacterias patógenas y/o asociadas al hombre, se incuba a 35-37ºC, pero en este caso la cara de hongos sólo permitirá el crecimiento de homgos (levaduras y mohos) patógenos y oportunistas capaces de crecer a la temperatura de los animales de sangre caliente.

DESINFECTEST®-EC: Detección y recuento de Coliformes, Escherichia coli y Salmonella:

Los índices Coliformes y E. coli son diferentes indicadores de contaminación fecal por falta de higiene de las materias primas, los operarios, las aguas…

La aparición de Salmonella es extraordinariamente grave, pues es un serio patógeno que produce en nuestro país cerca de la mitad de las toxiinfecciones alimentarias.

Una cara contiene Agar cromogénico para Salmonella.

La búsqueda de Salmonella en superficies puede realizarse con este laminocultivo. Sin embargo, su búsqueda en productos requiere, además, un pre-enriquecimiento revitalizador (Agua Peptonada Tamponada Neutralizante estéril MICROKIT) y un postenriquecimiento multiplicador (Caldo Rappaport estéril MICROKIT o mucho mejor, caldo SS MICROKIT). Todo ello se incluye en el kit SALMOTEST de MICROKIT, que es perfectamente válido para búsqueda de ausencia de Salmonella en alimentos y otros productos.

La otra cara contiene Agar Cromogénico para E.coli y demás coliformes.

Este laminocultivo se incuba a 35-37 ºC durante 24 (-48) horas.

Salmonella crece en la cara de Agar cromogénico para Salmonella con colonias rojas o verdes. Otras enterobacterias pueden crecer, pero lo suelen hacer con otros colores. Confirmar sólo las colonias sospechosas, con KITS bioquímicos o inmunológicos de MICROKIT.

En la otra cara, las colonias púrpuras, rosas, rojizas o violáceas son de Coliformes y las colonias azules, violetas o turquesa que resultan indol positivas (Indol Kovacs SBH056, el reactivo vira de amarillo a rosa), son E.coli. Como E.coli tambien es coliforme, en el recuento de coliformes se suman todas las colonias rojizas y azules.

DESINFECTEST®-ARICPC:   

Una cara con Neutralizing Agar incoloro +TTC para recuento total (Ver AEM)

Otra cara con VRBG Agar + Inactivadores para recuento de Enterobacterias (colonias púrpura sobre medio púrpura)

SOLUCIONES A LAS LIMITACIONES DE LOS LAMINOCULTIVOS.

1.‑ Análisis cuantitativos

El sistema de laminocultivos o dipslides DESINFECTEST® es ideal para análisis de superficies, para análisis de campo, para laboratorios móviles y para pequeños laboratorios.

Sus resultados, excepto en el control de superficies, son semicuantitativos, por lo que también son ideales para muestras muy contaminadas. Pero si se requieren resultados cuantitativos o si se analizan productos con baja contaminación deben utilizarse tubos preparados MICROKIT con 20 ml de Agar adecuado, que se funden al Baño María y se añaden a 1 ml de la muestra vertida en una placa de Petri (Solicite catálogo de tubos MICROKIT).

Para realizar diluciones de la muestra se utilizarán tubos preparados MICROKIT con 9 ml del Caldo adecuado: Solución RINGER (TPL109), Agua Peptonada Tamponada (TPL007), Agua de Triptona (TPL034), Agua destilada estéril (TPL001) o LPT100 Neutralizing Broth (TPL023).

2.‑ Anaerobios

Los laminocultivos están pensados para la detección de microorganismos aerobios. Para anaerobios pueden utilizarse otras técnicas:

Anaerobios en general: Tubos parafinados con 9 ml de Agar Schaedler (TPL193) que se inoculan fundiendo el medio y añadiendo la muestra, volteando el tubo sin agitar y dejándolo solidificar en posición vertical.

Anaerobios Sulfito‑Reductores (Clostridios…): Tubos parafinados con 9 ml de Agar SPS (TPL049) o frascos parafinados con 50 ml de SPS a doble concentración (RPL062) que se inoculan como los anteriores.

Anaerobios Reductores del Sulfato (Desulfovibrio…): Tubos con 9 ml de Sulfate American Petroleum Institute Agar con capilar de inoculación (TPL048).

De todas formas, nada nos impide hacer un recuento de anaerobios con DESINFECTEST®-AEM/AET incubado, con el tapón sin apretar, en anaerobiosis (Bolsas de anaerobiosis KKM038 o generadores de atmósfera anaeróbica en jarra KKM036, e indicador de anaerobiosis KKM039). En tal caso, tomar la precaución de realizar un duplicado para los anaerobios esporulados, e incubar este segundo laminocultivo tras someterlo a un shock térmico a 65 ºC durante 3 horas, a fin de que germinen las esporas que de otra manera darían resultados falsamente negativos.

NOTAS FINALES SOBRE MUESTREO E INTERPRETACION DE RESULTADOS EN SUPERFICIES:

Después de evaluar el grado de contaminación ambiental, es necesario tener en cuenta los límites de aceptabilidad, que no pueden darse como norma general ya que no son comparables una sala estéril de un laboratorio farmacéutico con un almacén de cítricos, por ejemplo. Dichos limites deben ser fijados en función de las investigaciones propias, estudiando la correlación existente entre el nivel de la contaminación ambiental y el de la contaminación del producto, en el caso de la industria.

La investigación se hará siempre inmediatamente antes e inmediatamente después de la desinfección ambiental y, al menos, durante el primer mes (en Laboratorios Farmacéuticos, siempre), a diario. Posteriormente la frecuencia mínima será semanal. Un recuento similar  antes y después de la desinfección, es indicador de que el desinfectante elegido no es el adecuado. Recuentos ascendentes a lo largo de unos días seguidos, son indicadores de que ha llegado el momento de desinfectar de nuevo o de alternar el desinfectante.

Estudios internos inéditos demuestran que la distribución de microorganismos en superficies de ambientes humanos no es homogénea, sino heterogénea (contagiosa: muchas células junto a micropartículas de materia orgánica y pocas en grandes huecos). Por ello recomendamos una muestra mínima de 100 cm2 (10 caras de laminocultivo), que sí resulta representativa de la realidad.

Otro estudio interno, también inédito, demuestra que el medio sólido por contacto no toma el 100 % de la población de la superficie; depende de la naturaleza de la superficie y de la tensión superficial del medio (su hidratación y su composición). Al hacer un segundo contacto en la misma superficie exacta se vuelven a obtener recuentos de hasta un 40% con respecto a  la primera toma y en un tercer contacto de hasta un 10% con respecto a la primera toma. Por ello, recomendamos segundas tomas en la misma superficie para obtener resultados más cercanos a la realidad.

Para el recuento total, puede tenerse en cuenta la escala proporcionada por el Comite of Microbial Contamination of Surfaces of the Laboratory Section of the A.P.H.A. (Tras la desinfección):

LUGAR                                                          NUMERO DE COLONIAS POR 25 cm2

BUENO                     REGULAR                  MALO

 

Suelo habitación hospital                    0‑25                            26‑50                          más

 

Mesa habitación hospital                    0‑5                              6‑15                            más

 

Guardería                                           0‑5                              6‑15                            más

 

Suelo baño                                         0‑25                            26‑50                          más

 

Retrete baño                                       0‑15                            16‑25                          más

 

Tocador baño                                     0‑5                              6‑15                            más

 

En catering, Solberg and Co. (Food Technology 12‑1990) recomiendan recuentos inferiores a 1 colonia por 25 cm2 en productos recién lavados y a 4 colonias por 25 cm2 (3 caras de DESINFECTEST®)  en productos lavados hace dos semanas.

En Laboratorios Farmacéuticos, no es bueno obtener recuentos superiores a 5 UFC por 25 cm2-3 caras de DESINFECTEST®- (En zona estéril, el recuento deberá ser de 0).

En Superficies de fábricas de productos cárnicos, Niskanen and Pohja (1977) recomiendan un máximo de 480 cfu, de 25 Escherichia coli y de 25 Staphylococcus aureus por cada muestra de 25 cm2 (3 caras de DESINFECTEST®).

Por fin una Norma ISO termina con este caos de valores de aceptabilidad (UNE-EN-ISO 100.012), permitiendo que haya menos de 100 ufc/25 cm2 de bacterias y menos de 100 ufc/25 cm2 de hongos antes de la desinfección/limpieza; y que haya menos de 10 ufc/25 cm2 de bacterias y menos de 10 ufc/25 cm2 de hongos tras la limpieza o desinfección. Dado que un laminocultivo DESINFECTEST® tiene una superficie de 10 cm2, debe haber menos de 40 colonias de bacterias o de hongos por cara antes de la desinfección/limpieza  y menos de 4 colonias de bacterias o de hongos por cara tras la desinfección/limpieza. Ideal para ello resulta el DESINFECTEST®-MIX.

Lugares de muestreo

Es fundamental la elección de los puntos críticos de muestreo más representativos para controlar en ellos la higiene de forma rutinaria y realizar, así, las desinfecciones en el momento oportuno, ni antes ni después.

‑ Industria alimentaria: Zonas de procesado, equipos, cintas transportadoras, superficies de trabajo, salas de despiece, máquinas de escaldado, zonas de empaquetado, tanques de procesado, almacén de materias primas, almacén de producto terminado, manos y ropa de los manipuladores, suelos de oficinas, Laboratorio de Control Microbiológico, aparatos de aire acondicionado, W.C…

‑ Laboratorios de Control Microbiológico: Cabina de flujo laminar, superficies de manipulación microbiológica, estufas de cultivo, nevera, suelos, ropa y manos de los operarios, W.C…

‑ Hospitales: quirófanos (incluidos mesa de operaciones y utensilios), habitaciones de enfermos, salas de maternidad, U.C.I., salas de consulta, salas de espera, lavandería, cocina, aparatos de aire acondicionado, suelos de pasillos, W.C., laboratorios de bacteriología y micología…

‑ Otros lugares públicos: Guarderías, escuelas, residencias de ancianos, cocinas, oficinas, restaurantes, habitaciones de hoteles, lavabos, transportes públicos…

El usuario es el único responsable de la destrucción de los microorganismos generados en el interior del kit durante su uso, de acuerdo con la legislación medioambiental vigente. Destruir por inmersión en lejía. Mantener fuera del alcance de los niños. No ingerir.

Diseñado por LABORATORIOS MICROKIT, S.L. desde 1.989. Revisado en Octubre, 2016

DESINFECTEST ®  es marca registrada de Laboratorios MICROKIT, S.L.

El usuario final es el único responsable de la destrucción de los organismos que se hayan multiplicado, según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.

Si desea más información sobre nuestro  DESINFECTEST – LAMINOCULTIVOS rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto . O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16

 

LEGIONELLA GVPC, BCYE (con Fe y Cys), BCYE-Cys, (AGAR BASE)

LEGIONELLA GVPC, BCYE (con Fe y Cys), BCYE-Cys, (AGAR BASE)

Aislamiento selectivo de Legionella por el método MF o por siembra directa

(ISO 11731:2017, ISO 11731-2:2004)

COMPOSICIÓN

Medio BASE:

  • Carbón activado                              2,0 g
  • Extracto de levadura                        10,0 g
  • Agar‑Agar                                        22,0 g
  • Alfa-ketoglutarato (sal  mono-K) *  1,0 g
  • (Fórmula por litro)
  • pH final: 6,9 ± 0,1

GVPC Suplemento Selectivo+Nutritivo estéril en solución 200 ml SBL604

Agite contundentemente y añada en asepsia 40 ml a 500 ml de medio enfriado a 50 ºC (o bien 8 ml a 100 ml de medio). Puede contener precipitados por su elevada concentración pero desaparecen al diluir en el medio BCYE base. c.s.p. 2’5 l de medio. Contiene las proporciones precisas, según ISO 11731, de: Tampón ACES, «-Cetoglutarato, KOH, Clorhidrato de L-Cisteina, Pirofosfato férrico, Vancomicina, Cicloheximida, Polimixina y Glicina. Contiene elementos tóxicos, evitar el contacto con la piel.

NOTA 1: La ref. SBL609 es idéntica al suplemento GVPC (con Fe y Cys) pero sin los tres antibióticos del GVPC selectivo, para elaborar el BCYE (con Fe y Cys). La ref. SBL605 es idéntica al suplemento GVPC pero sin la Cisteína, para elaborar el BCYE-Cys, aunque éste se puede sustituir por simple TSA.

NOTA 2: EL caldo GVPC para preenriquecimiento revitalizador, es idéntico al Agar GVPC pero sin Agar-Agar y con el carbón granulado (ver kit P/A Legionella en tubos preparados, ref.RPL330). Ideal para usar antes de la ISO 11731 y encontrar de forma mucho más eficaz la Legionella tras revitalización.

PREPARACIÓN (conversión del medio deshidratado en medio preparado)

Disolver 17 gramos de medio en 500 ml de agua bidestilada. Calentar hasta hervir para la total disolución. Autoclavar a 121 ºC, 15 minutos. El color final del medio es negro. Enfriar a 45-50 ºC y, para el medio selectivo GVPC, añadir asépticamente 40 ml de Legionella Supplement-200 ml (SBL604, tampón ACES/KOH; nutritivo con α-ketoglutarato, clorhidrato de L-cisteina y pirofosfato férrico; y selectivo, con Vancomicina, Polimixina, Cicloheximida y Glicina); para el medio no-selectivo BCYE con Fe y Cys, añadir 40 ml de SBL609 (con Fe y Cys pero sin los antibióticos). Para el medio BCYE-Cys,  añadir 40 ml de Legionella-Cys Supplement-200 ml (SBL605, tampón ACES/KOH, α-ketoglutarato y pirofosfato férrico), aunque como es para ver que en él no crecen las Legionellas, se puede sustituir por simple TSA, donde tampoco crecen.  Mezclar muy bien y verter 20 ml/placa cuando el medio esté a punto de solidificar, para que la distribución del carbón activo sea lo más homogénea posible. No sobrecalentar o el agar se volverá demasiado blando: Es posible que sea necesario añadir aún más Agar-agar (BCB006)  para minimizar la friabilidad del agar,  si se va a sembrar con asa (aceptado en ISO 11731).

PARA USO EXCLUSIVO

EN LABORATORIO.

MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO

EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO.

DESHIDRATADO CODIGO: DMT007

CONTROL DE CALIDAD DE LOS MEDIOS GVPC y BCYE + Fe + Cys

Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar laboratorio,

tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,…)

DESHIDRATADO: Polvo, Negro

PREPARADO: Estéril, Negro.

CONTROL DE CRECIMIENTO 2 semanas a 37°C aproximadamente:

Legionella pneumophila MKTN 12821 serogrupo1, Correcto, colonias gris-azuladas, cristalinas, mucosas, en 2-15 días, en medio suplementado GVPC y en BCYE+Fe+Cys. No crece en medio BCYE-Cys, sin suplemento nutritivo de hierro y cisteína. En el medio BCYE con suplemento nutritivo pero sin antibióticos, crece aproximadamente el doble de población que en el GVPC. Con respecto a PCA estandarizado y suplementado,* recuento 126 %, pero de forma selectiva.

Legionella pneumophila serogrupo 2-15, MKTLeg-2, Idem.

Escherichia coli, MKTA 25922 parcialmente inhibido. Con respecto a PCA estandarizado y suplementado,* recuento 27 %.

Micrococcus luteus MKTA 9341, inhibido en el GVPC selectivo.

* El que cumple con recuperación superior al 92-125% con respecto a cepas cuantitativas trazables a la cepa tipo. Incertidumbres detectadas entre todos los lotes a lo largo de un año (la mayoría de la incertidumbre se debe a la cepa y a la proporción de cepas acompañantes inoculadas, no al medio).

PRESENTACION: MEDIO DESHIDRATADO (BCYE BASE) Y SUPL. GVPC / BCYE+Fe+Cys,  KITS P/A caldo revitalizante, PLAQUIS HERMÉTICAS Y PLACAS MF GVPC, FRASCOS PREPARADOS 100 ml (BCYE-BASE) + SUPL. GVPC / BCYE+Fe+Cys.Suplemento selectivo + nutritivo para GVPC (SBL604). Suplemento sin Cysteina para BCYE-Cys. Suplemento nutritivo Fe + Cys sin antibióticos para BCYE.

Nuevo: Placa preparada GVPC (con glicina, cisteína, hierro, ACES y antibióticos) pH 6,8 s/ISO 11731:2017 (Ref: PPLM60) y placa preparada BCYE (idem sin antibióticos ni glicina)  pH 6,8 s/ISO 11731:2017 (Ref: PPLM61)

MODO DE EMPLEO E INTERPRETACION DE RESULTADOS

Medio selectivo GVPC: Inocular  una membrana de filtración de 0’22 µm (VAC022,  no usar de 0,45 µm), o mejor 0´1 ml de un extracto del fondo del tubo tras la centrifugación a 2500 r.p.m., 20′ de una muestra rascada, o bien 0’1 ml del fondo del caldo de enriquecimiento concentrado (RPL330) sobre una placa. O aplicar una placa de contacto sobre la superficie, o bien introducirla en un aparato de control de aire. Preincubar estrictamente 30 minutos a 50 ºC para eliminar la flora competitiva acompañante. Incubar a 35 ºC aproximadamente, en atmósfera húmeda de 2 a 14 días. Las colonias de Legionella pneumophila son blanco-azuladas, brillantes, mucosas, de 1-2 mm Ø, circulares, lisas, algo elevadas y con los bordes enteros, fluorescentes (verde mate a menudo teñido de amarillo) en la oscuridad bajo luz UVA (linterna MICROKIT VMT050). Subcultivar 3 colonias en  BCYE+Fe+Cys  (sin antibióticos)  y en BCYE-Cys (o TSA), al menos 2 días a 36 ± 1°C.  Legionella crece en BCYE (con Fe y Cys) sin antibióticos (y en GVPC), pero no crece en BCYE-Cys (ni en medios generales tipo TSA, agar sangre, PCA, YEA, Nutrient Agar…). Las colonias deben confirmarse con oxidasa positivo, a menudo lento (KOT050), catalasa positiva (KMT299) y serotipado (MICROKIT-LEGIONELLA-VIRAPID VR002, QUE PUEDE USARSE DIRECTAMENTE EN EL PRIMER AISLAMIENTO DE GVPC Y AHORRARSE ASÍ EL TIEMPO Y COSTE DE LAS OTRAS PLACAS DE BCYE (con Fe y Cys) y BCYE-Cys (o TSA).  Contar sólo la placa de GVPC con más colonias de Legionella pneumophila. Si no se encuentra, expresar los resultados como “no detectada”, ya que a veces está presente y no crece. Peligro, microorganismos de alto riesgo para inmunodeprimidos, por inhalación de aerosoles (pero no llega a considerarse de Clase III).

NOTA: Los otros dos medios mencionados en la ISO 11731:2017 (BCYE con suplementos selectivos: BCYE+AB, Modified Wadowsky Yee: MWY) son alternativos, no son necesarios. Esta nueva versión 2017 de la Norma describe la fluorescencia de otras especies de Legionella: L.anisa, L.bozemanii, L.cherrii, L.dumoffii, L.gormanii, L.gratiana, L.parisiensis, L.steigerwaltii y L.tucsonensis) tienen autofluorescencia blanca brillante; L.erythra y L.rubrilucens aparecen rojas; L.pneumophila verde mate, a menudo teñido de amarillo .

El usuario final es el único responsable de la destrucción de los organismos que se hayan multiplicado, según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.

Si desea más información sobre nuestro  LEGIONELLA GVPC, BCYE (con Fe y Cys), BCYE-Cys, (AGAR BASE) rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto . O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16