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Histamina Rapid Test Strip

Histamina Rapid Test Strip

Introducción

El análisis de la histamina en pescado fresco es una estrategia de control util en el sistema APPCC para que los productores de alimentos a base de pescado puedan evitar la formación de la escombrotoxina. La histamina es un producto de la descarboxilación de la histidina causada por el metabolismo de algunas bacterias en el pescado. La cantidad de histamina producida depende de la cepa microbiana, de la temperatura y del tiempo de exposición y puede alcanzar valores superiores a 1.000 ppm.

La ingesta de pescado con altos niveles de histamina se ha relacionado con intoxicaciones escombroideas, un serio problema de salud pública. Por encima de 200 ppm de histamina se suele producir este cuadro, el problema es que estos pescados pueden encontrarse aleatoriamente dispersos dentro del mismo lote. En pescados de gran tamaño puede incluso encontrarse concentrada en una zona y dispersa en el resto. Por ello debe hacerse una buena homogeneización del lote.

Un pescado de buena calidad contiene menos de 10 ppm de histamina, mientras que 30 ppm indican un deterioro importante y 50 ppm son evidencia de putrefacción. El nivel de acción respecto a defectos (DAL) para el cual se toman las medidas reglamentarias para la histamina es de 50 ppm.

Histamina Rapid Test es un inmunoensayo competitivo con partículas de oro en nitrocelulosa, para el análisis cuantitativo de histamina en peces escómbridos (atún, caballa, sardina) y en harina de pescado.

Tras una extracción en agua, la histamina de la muestra se deriva a N-acilhistamina de forma cuantitativa. La muestra tratada es diluida y se analiza con una tira reactiva. La cantidad de anticuerpo marcado con partículas de oro que se une a la histamina, inmovilizada en la nitrocelulosa, es inversamente proporcional a la concentración de histamina en la muestra.

Límite de Detección: 50 ppm

Contenido del kit (Referencia MICROKIT: HIST24, kits para 24 Test

  1. 24 Tiras para Histamina 2. 24 reactivos para acilación (tapón azul)
  2. 24 tubos con tampón de Acilación (tapón blanco) 4. 24 tubos con tampón de lavado (tapón rojo)

Almacenamiento y vida útil

  1. Conservar a temperatura ambiente (15-30ºC). ¡NO CONGELAR!
  2. Vida útil: 24 meses desde fabricación, verificar la fecha de caducidad real indicada en la etiqueta.
  3. Número de lote, consulte la etiqueta
  4. Señales de deterioro: rotura del bote contenedor de las tiras, presencia de líneas o manchas en la membrana antes de utilizar..

Precauciones

-Evitar el contacto de material biológico con la piel y mucosas. No pipetear con la boca.

-No comer, beber, fumar, almacenar o preparar comida, o aplicar cosméticos en el área de trabajo.

-No usar componentes caducados ni mezclar componentes de diferentes lotes

Tratamiento de las muestras

Protocolo basado en el método Oficial AOAC 937.07. Muestree según la reglamentación nacional.

1.Pescado fresco ó congelado

Descongelar las muestras en un refrigerador o en agua fría. No descongelar en agua caliente. Desechar el drenaje. Una vez descongeladas, mantener las muestras a 2-8ºC hasta el análisis.

Pescado entero: Limpiar, descamar y eviscerar. Si son de pequeño tamaño, usar 5-10 pescados. Si son grandes, cortar tres rodajas transversales de 2,5 cm de ancho: una tras las aletas pectorales, una entre la rodaja anterior y la cloaca y otra tras la cloaca. Eliminar las espinas y triturar para homogeneizar.

Filete de pescado: Emplear la pieza entera, triturando para homogeneizar.

2.Pescado y otros productos del mar en conserva

Triturar todo el contenido (sólido y líquido) de la lata o bote en una licuadora para homogeneizar.

3.Productos del mar conservados en aceite, salsa, salmuera o caldo

Drenar 2 minutos con un tamiz Nº 8 o secar el líquido con papel absorbente. Triturar el sólido en una licuadora para homogeneizar.

4.Harina de pescado

Mezclar la muestra para homogeneizar.

Procedimiento

1-Atemperar todos los componentes del kit a temperatura ambiente y trabajar a dicha temperatura.

2-Pesar 10 g de la muestra tratada y añadir 240 ml de agua destilada. Homegeneizar 1-2 minutos en una licuadora o trituradora, o bien agitar durante 10 minutos.

3-Filtrar el homogenado con papel de filtro plegado. Si se forma una capa grasa, eliminarla por succión.

4-Pipetear 100 µL del homogenado filtrado dentro del tubo Tampón de Acilación.

5-Cerrar con el tapón azul (contiene el reactivo de Acilación) y agitar vigorosamente.

6-Dejar incubando el tubo a temperatura ambiente durante 5 minutos.

7-Pipetear 100 µL de la muestra acilada en un tubo de tampón de lavado (tapón rojo), cerrar y mezclar suavemente.

8-Colocar una tira (con la flecha hacia abajo) en el tubo con tampón de lavado.

9-Dejar actuar 5 minutos y sacar la tira del tubo.

10-Leer el resultado a simple vista antes de que pasen otros 5 minutos.

Lectura de resultados

Examinar la presencia de bandas coloreadas:
Resultado negativo: La línea test (abajo) es más intensa que la línea control (arriba)

Resultado positivo: La línea test (abajo) es igual o menos intensa que la línea control (arriba)

Resultado inválido: La línea de control (arriba) no es visible (sea o no visible la línea test de abajo), señal de que la muestra no ha migrado adecuadamente: repetir con una nueva tira.

Validación

Este kit ha sido validado para atún (enlatado, aleta amarillo fresco/congelado), mahí-mahí (fresco/congelado), sardinas (enlatadas en aceite) y harina de pescado, lo cual no descarta su uso en otros pescados y presentaciones.

Control de calidad

El lote de este kit ha sido controlado por el fabricante, resultando negativo para < 50 ppm y positivo para >/=50 ppm

Si desea más información sobre nuestro Histamina Rapid Test Strip rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto . O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16

TRIBUTIRIN AGAR (BASE)

TRIBUTIRIN AGAR (BASE)

Detección de microorganismos lipolíticos

COMPOSICIÓN

  • Peptona untuosa      5,5 g
  • Extracto de levadura 3,5 g
  • Agar‑agar                15,0 g
  • (Fórmula por litro)
  • pH final: 7,5 ± 0,2

Tributirin Agar (Base). Nótese el aspecto graso del medio deshidratado.

Tributirato de glicerilo (Tributirina) en frasco suplemento 100 ml

 

EL ASPECTO GRASO DEL MEDIO ES NORMAL.

 

 

 

 

PREPARACIÓN

Disolver 24 gramos del polvo en 1 litro de agua destilada que contenga 10 ml de tributirina (SDA078), llevando a ebullición y agitando vigorosamente hasta la completa suspensión.

Autoclavar a 121 ºC durante 10 minutos.

Agitar para eliminar grumos y verter en placas a unos 50 ºC sobre la muestra

 

halos de lipolisis de ambas especies, vistos por debajo

 

 

 

 

 

 

 

 

St.aureus y Yarrowia lypolitica.

 

 

 

 

 

 

 

PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO.  MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO.

DESHIDRATADO CODIGO: DMT125

CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO

Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar laboratorio, tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,…)

DESHIDRATADO: Untuoso, crema

PREPARADO: Estéril, Crema opalescente

CONTROL DE CRECIMIENTO 48-72 h a temperatura ambiente (21-28°C aproximadamente):

  • Bacillus subtillis MKTA 6633, Bueno, No forma halo.
  • Staphylococcus aureus MKTA 6538P, Bueno, dorado, en 48 horas forma halo.
  • Staphylococcus epidermidis MKTA 12228, Bueno, en 48 horas no forma halo.
  • Pseudomonas aeruginosa MKTA 9027, Excelente, pigmenta en 48 horas y  forma halo.
  • Yarrowia lypolitica MKTC 1468, Bueno,  Forma halo.

PRESENTACIÓN: FRASCOS 100 ml, MEDIO DESHIDRATADO BASE (UNTUOSO) Y SUPLEMENTO.

NOTA: Medio de cultivo diseñado para detectar microorganismos lipolíticos (bacterias: Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa…. y levaduras: Candida lypolitica, Yarrowia lypolytica….) en productos lácteos, cosméticos y otros productos. Se trata de una base nutritiva sencilla con el sustrato graso tributirato de glicerilo (tributirina). Este producto puede substituirse por mantequilla, pero los resultados en tal caso serán lentos y poco claros.

SIEMBRA

Inocular 1 ml de la muestra y su serie de diluciones decimales en placas preparadas o, mejor aún, en placas Petri sobre las que se añaden 20 ml del medio en frasco, fundido y enfriado a unos 45‑50 ºC. Incubar a 30 ºC aproximadamente, durante 2‑3 días

INTERPRETACIÓN

Contar las colonias que hayan producido un halo transparente de lipolisis a su alrededor. Los microorganismos que han atacado la tributirina también lo harán sobre la mantequilla.

El usuario final es el único responsable de la eliminación de los microorganismos según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.

Si desea más información sobre nuestro TRIBUTIRIN AGAR (BASE) rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto . O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16

TOMATO JUICE BROTH (BASE) (MODIFICADO)

TOMATO JUICE BROTH (BASE) (MODIFICADO)

 Detección y recuento M.F. de flora acido-láctica

 COMPOSICIÓN

  •  Polisorbato Tween 80 1,00 g
  • Extracto de carne        20,00 g
  • Extracto de levadura   5,00 g
  • Glucosa                       20,00 g
  • Fosfato dipotásico       2,00 g
  • Acetato de sodio          5,00 g
  • Citrato triamonio        2,00 g
  • Sulfato de Magnesio    0,20 g
  • Sulfato de Manganeso 0,05 g
  • (Fórmula por litro)
  • pH final: 5’5 ± 0,5

 PREPARACIÓN

 Disolver 55 g en 1 litro de agua destilada que contenga 50 ml del suplemento SDA500 (suero de tomate). Si es necesario ajustar el pH a 5’5  ± 0’5.

Autoclavar a 121 ºC durante 15 minutos. Evitar el sobrecalentamiento.

PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO.

MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO. AGITE EL BOTE ANTES DE USAR

DESHIDRATADO CODIGO: DMT222

CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO

Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar laboratorio, tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,…)

DESHIDRATADO: Polvo grueso, Beige

PREPARADO: Estéril, Ambar, Turbio

CONTROL DE CRECIMIENTO 72 h a 37°C aproximadamente, en microaerofilia:

  • Lactobacillus plantarum MKTA 8014, Excelente.
  • Lactobacillus casei MKTA 7830, Excelente.
  • Staphylococcus aureus MKTA 6538P, Inhibido.

PRESENTACIÓN: MEDIO DESHIDRATADO (BASE), FRASCOS PREPARADOS 100 y viales de 2 ml.

 MODO DE EMPLEO E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

Añadir 2 ml de medio a cada cartón para la técnica M.F. y depositar la membrana sin que se formen burbujas. Incubar a 37 ºC aproximadamente, durante 2-3 días o bien a 30 ºC aproximadamente, durante 3-5 días. Todas las colonias blancas son de Lactobacilos y demás flora acidoláctica. Identificar con M-Acidificantes (KUS801).

El usuario final es el único responsable de la eliminación de los microorganismos según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.

Si desea más información sobre nuestro TOMATO JUICE BROTH rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto . O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16

TOMATO JUICE AGAR (BASE) (MODIFICADO)

TOMATO JUICE AGAR (BASE) (MODIFICADO)

Medio especialmente mejorado por nuestros laboratorios para la detección y recuento rápidos de flora acidoláctica en alimentos, cerveza, vinagres, …

COMPOSICIÓN

  • Tween 80                   1,00 g
  • Extracto de carne      20,00 g
  • Extracto de levadura 5,00 g
  • Glucosa                     20,00 g
  • Fosfato dipotásico     2,00 g
  • Acetato de sodio        5,00 g
  • Citrato triamonio      2,00 g
  • Sulfato de Magnesio  0,20 g
  • Sulfato de Manganeso   0,05 g
  • Agar‑agar                  15,00 g
  • (Fórmula por litro)
  • pH final: 5’5 ± 0,5

 

 

Lactobacillus plantarum

PREPARACIÓN

Disolver 70 g en 1 litro de agua destilada que contenga 50 ml del suplemento SDA500 (suero de tomate).

Calentar agitando hasta ebullición. Autoclavar a 121 ºC durante 15 minutos. Evitar el sobrecalentamiento.

PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO.

MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO. AGITE EL BOTE ANTES DE USAR

DESHIDRATADO CODIGO: DMT079

CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO

Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar laboratorio, tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,…)

DESHIDRATADO: Polvo grueso, Beige

PREPARADO: Estéril, Ambar opalescente

CONTROL DE CRECIMIENTO 72 h a 37°C aproximadamente, en microaerofilia:

  • Lactobacillus plantarum MKTA 8014, Excelente. Con respecto a PCA estandarizado*, recuento >99%.
  • Lactobacillus casei MKTA 7830, Excelente.
  • Staphylococcus aureus MKTA 6538P, Inhibido.

* El que cumple con recuperación superior al 92-125% con respecto a cepas cuantitativas trazables a la cepa tipo.

PRESENTACIÓN: MEDIO DESHIDRATADO (BASE), FRASCOS PREPARADOS 100 y 250 ml,

MODO DE EMPLEO E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

Fundir al baño María e inocular en superficie o mejor en profundidad. Incubar a 37 ºC aproximadamente, durante 2-3 días o bien a 30 ºC aproximadamente, durante 3-5 días. Todas las colonias blancas son de Lactobacilos. Este medio da unos resultados mucho más rápidos y exuberantes que otros medios desarrollados para flora acidoláctica.

NOTA: La adición de 0,5 g/l de L- Cisteína (tubos inclinados en pico largo, ref: TPL814) hace el medio más nutritivo y selectivo para Leuconostoc.

El usuario final es el único responsable de la eliminación de los microorganismos según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.

Si desea más información sobre nuestro TOMATO JUICE AGAR (BASE) (MODIFICADO) rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto . O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16

TOTAL CHARCOAL MICROKIT® PLATE COUNT AGAR

TOTAL CHARCOAL MICROKIT® PLATE COUNT AGAR

 Recuento total optimizado para superficies y en Filtración de Membrana (M.F.)

COMPOSICIÓN

  • Peptomix                25,5 g
  • Cloruro Sódico         5,0 g
  • Fosfato Disódico      2,5 g
  • Glucosa                     2,0 g
  • Carbón activado       3,0 g
  • Agar-agar                15,0 g
  • (Fórmula por litro)
  • pH final: 7,1 ± 0,2

 

Recuento de superficies. Flora mixta en ENVIROCOUNT y en DESINFECTEST® con Total Charcoal Agar. Véase la distribución contagiosa, aún más patente a la derecha, típica de superficies.

 

PREPARACIÓN

Disolver 52  gramos en 1 litro de agua bidestilada.

Calentar y agitar hasta la completa homogeneización.

Autoclavar a 121 ºC durante 15 minutos. No sobrecalentar.

 

PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO.

MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO.

AGITE EL BOTE ANTES DE USAR

PRESENTACIÓN: MEDIO DESHIDRATADO, CODIGO: DMT180

 

CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO

Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar laboratorio, tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,…)

 DESHIDRATADO: Polvo grueso, negro.  PREPARADO: Estéril, Negro mate.

CONTROL DE CRECIMIENTO CUANTITATIVO 24-48 h a 37°C aproximadamente (o bien 72 h a temperatura ambiente 21-28°C aproximadamente) y por siembra en superficie:

  • Escherichia coli MKTA 25922, Excelente. Con respecto a PCA estandarizado*,  recuento >150%.
  • Enterococcus faecalis MKTA 29212, Excelente. Con respecto a PCA estandarizado*,  recuento >150%.
  • Staphylococcus aureus MKTA 6538P, Excelente. Con respecto a PCA estandarizado*,  recuento >150%.
  • Pseudomonas aeruginosa MKTA 9027, Excelente. Con respecto a PCA estandarizado*,  recuento >150%.

* El que cumple con recuperación superior al 92-125% con respecto a cepas cuantitativas trazables a la cepa tipo.

NOTA: La singular mezcla de peptonas, extractos y demás componentes, ayudada por el efecto neutralizante del carbón (que elimina no sólo conservantes y desinfectantes de la muestra, sino además los metabolitos inhibitorios  segregados por las cepas de crecimiento rápido, con lo que las cepas lentas y menos vitales también crecen) permite un crecimiento magnífico de prácticamente cualquier cepa ambiental, incluidas bacterias, levaduras y mohos. La opacidad otorgada por el carbón permite contrastar las colonias con el fondo; y es el factor limitante para que el uso de este medio se haya de restringir a siembras en superficie (control de superficies, Filtración de Membrana y aislamientos en superficie). ESPONERA & Co, Técnicas de laboratorio, Junio-92. La recuperación con respecto a PCA es, como media, del 200% (Estudio intercolaborativo, Tecnicas de Laboratorio, Nov.2001)

SIEMBRA

Aplicar la placa de contacto sobre la superficie problema, sin restregar, durante un par de segundos. O bien depositar la membrana de filtración sobre la superficie de una placa preparada. O bien aislar colonias sembrando por agotamiento en placa. O bien realizar recuentos de muestras sembrando 0,1 ml en la superficie de una placa y repartiendo homogéneamente con asa de Digralsky. Incubar en las condiciones adecuadas para la flora buscada.

 INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

Contar todas las colonias (filamentosas, mohos; no filamentosas, bacterias y levaduras).

El usuario final es el único responsable de la eliminación de los microorganismos según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.

Si desea más información sobre nuestro TOTAL CHARCOAL MICROKIT® PLATE COUNT AGAR rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto . O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16

MICROKIT® P/A CLOSTRICULT

MICROKIT® P/A CLOSTRICULT

 Clostridium perfringens y sus esporas

Detección Presencia / Ausencia (P/A) en 100 (250) ml de agua

 INTRODUCCIÓN:

Medio estéril CLOSTRICULT Cromogénico diseñado por MICROKIT con base TSC y atmósfera de anaerobiosis para detección P/A (o recuento en su formato Quanti-P/A Ref: QPA-CP) de C.perfringens y sus esporas (el agua vira a negro opaco), que puede elegir en tres formatos diferentes:

  1. RPL308 Frascos tomamuestras con caldo estéril hidratado y tapón a rosca para añadir en ellos 100 mL de la muestra de agua. Cajas 10u ó 9x10u

 

 

 

 

  1. FPA902 Viales prepesados de polvo estéril con tapón a rosca para añadir a 100 mL de la muestra de agua (no incluido bote 100 mL VML155 o bolsa standup 100 mL B2787B estériles). Cajas 40u ó 10x40u

 

 

 

  1. DMTI902- Botes 100 g de polvo estéril y cucharilla dosificadora para añadir a 100 mL de la muestra de agua (no incluido bote 100 mL VML155 o bolsa standup 100 mL B2787B estériles), Bote para 33 test

 

 

 

 

 

De gran utilidad como screening negativo de muestras rutinarias, al ser un método más fácil de emplear que la filtración de membrana y más fiable (escasez de falsos positivos y de falsos negativos, que en filtración de membrana es de nada menos que el 21% de las muestras analizadas en el mundo, por el estrés provocado durante la filtración).

También muy útil para que las potabilizadoras no dejen de analizar en festivos y fines de semana, ya que este método puede ser empleado por personal no especialista en microbiología, el mismo guarda de la depuradora puede hacerlo. La única precaución es que el operario no toque ni el agua ni el polvo con sus manos, para evitar contaminaciones artificiales.

Recuerde que este parámetro es el único indicador de probable presencia de Enterovirus-Norovirus y protozoos (Cryptosporidium, Giardia, Entamoeba…) en el agua.

MODO DE EMPLEO:

Es necesario tratar previamente el agua clorada, mediante Tiosulfato Sódico, para que las células dañadas subletalmente se recuperen, excepto en los frascos tomamuestras RPL308, que ya lo incluyen.

Añadir los 100 mL de agua de muestra en el frasco o en el recipiente estéril que se va a utilizar; en el caso de los viales, añadir todo el contenido sobre el agua; en el caso de los botes de 100g, añadir tres cucharaditas rasas sobre el agua y cerrar el bote con la cucharilla dentro para los posteriores usos. Voltear sin agitar para homogeneizar sin oxigenar. Incubar 18-48 horas a 35-37° C (según nuestras recomendaciones) ó a 42° C (según Normas ISO).

Si desea detectar sólo esporas, provocar un shock térmico: calentar la muestra de 100 ml de agua  15 minutos a 70-80 ºC antes de añadir el medio. No es necesario incubar con atmósfera de anaerobiosis, ya que el medio ya la incorpora. La muestra inoculada sirve también de medio de transporte, por lo que no es necesario incubar inmediatamente después de la toma de la muestra, pudiendo transcurrir varias horas entre toma e incubación.

Para aguas envasadas o de baño, se analizan 50 mL, por lo que debe añadir 50 mL de agua estéril a los 50mL de agua de muestra, o bien emplear el medio a la mitad de la concentración indicada.

 

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS:

El viraje a color negro-opaco (aunque sólo sea en el fondo, que es por donde suele empezar a virar) demuestra la Presencia de Clostridium perfringens y sus esporas en la muestra de agua.

Es necesaria la ausencia (no viraje), que equivale a 0 ufc/100 mL (ó en 50 mL). Sólo en caso positivo debería repetirse la muestra por método cuantitativo si se requiere un recuento concreto, aunque la legislación exige 0 y por tanto no importa si hay 2 ó 950, en ambos casos el agua no es potable. Si aún asi debe cuantificar(muestras positivas con Clostricult P/A), utilice Quanti-P/A-TSC (Ref: QPA-CP), que contienen este mismo medio con gelificantes en frío y atmósfera de anaerobiosis en una bolsa hermética.

Material necesario no incluído: Tiosulfato Sódico para eliminar el cloro (SMT976) excepto en los frascos tomamuestras RPL308, que ya lo incluyen. Bote estéril 100ml (VML155), o bolsa estéril autosellable Stand-Up (B2787B). Estufa o incubador 35-37ºC (SIL12AR ó SIL24AR).

En homenaje a nuestro querido amigo, el Dr. Juan José Marcén, que falleció antes de conocer el éxito mundial de la fantástica idea que nos regaló en los años 90, el kit de coliformes/E.coli se regala a todas las ONGs que nos los pidan junto con otros parámetros P/A.

PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO O PARA ANÁLISIS DE CAMPO. MANTENER FUERA DEL ALCANCE Y DE LA VISTA DE LOS NIÑOS Y ANIMALES.

EXTREMADAMENTE HIGROSCÓPICO: MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO. AGITE EL BOTE ANTES DE USAR. EN ZONAS DE ELEVADA HUMEDAD AMBIENTAL, GUARDAR EL BOTE BIEN CERRADO EN UN TUPPER HERMÉTICO CON SILICAGEL.

 

CONTROL DE CALIDAD:

Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar laboratorio, tras largos fletes, tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,…)

DESHIDRATADO: Polvo crema    PREPARADO: Crema

CONTROL DE CRECIMIENTO 18-48 h a 37°C aproximadamente:

  • Clostridium perfringens WDCM 00007, vira a negro opaco desde las primeras 18h si el inóculo es elevado y no procede de muestras estresantes, en 48h en caso contrario.
  • E.coli WDCM 000013: Inhibido
  • Pseudomonas aeruginosa WDCM 00026: Inhibido.
  • Enterococcus faecalis WDCM 00009: Inhibido.

El usuario es el único responsable de la eliminación de los microorganismos según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.

Si desea más información sobre nuestro MICROKIT® P/A CLOSTRICULT rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto . O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16

MICROKIT® KITS P/A EN FRASCOS TOMAMUESTRAS

MICROKIT® KITS P/A EN FRASCOS TOMAMUESTRAS

Detección Presencia / Ausencia (P/A) en 100 ml de muestra de agua

INTRODUCCIÓN:

El método P/A ha sido validado para una óptima detección de patógenos en 100 mL de agua y de bebidas incoloras, cuando no se requiere recuento.

La legislación exige la ausencia absoluta de patógenos en aguas de consumo humano (extensible a todas las aguas de fabricación, no sólo de industrias alimentarias, sino también farmacéuticas y cosméticas, aguas de baño, etc), por lo que buscar patógenos por los métodos de Filtración de Membrana (MF) o de Número Más Probable (MPN) para poder enumerar colonias, carece de sentido: sería como necesitar siempre contar “cero”. Algunos laboratorios emplean los kits P/A como screening negativo y sólo en caso positivo repiten la muestra por método cuantitativo para saber cuantas ufc del patógeno hay en la muestra, aunque la legislación exige 0 y por tanto no importa si hay 2 ó 950, en ambos casos el agua no es apta.

La sorpresa es que la Filtración de Membrana no es fiable en la búsqueda de patógenos, porque demuestra en los servicios intercomparativos ser un método destructivo que provoca un número inaceptable de resultados falsamente negativos: en el 21% de las muestras analizadas para Coliformes-E.coli, 33% para Pseudomonas aeruginosa, 49% para Clostridium perfringens… no son detectados dichos microorganismos cuando están presentes, cuando se comparan con el método P/A y con los inóculos diana de las muestras ciegas. El método MPN es demasiado disperso, impreciso, porque obtiene resultados a menudo bastante alejados del valor inóculo (hacia arriba o hacia abajo).

Además el método P/A en frascos tomamuestras es el más fácil de emplear y de interpretar, incluso por personal no especializado en análisis (la única precaución es que el operario no toque ni el agua ni el medio con sus manos, para evitar contaminaciones artificiales), por lo que muchos laboratorios empiezan empleándolos, POR COMODIDAD, para fines de semana y festivos; y acaban aplicándolo a todas las muestras, POR FIABILIDAD.

Dada la sensibilidad cercana al 100% (ausencia de falsos negativos), el método P/A sirve de screening negativo de muestras: si la muestra sale negativa, se considera negativa y sólo en los pocos casos en que salga positiva, habrá que confirmarla estriando en placa de medio selectivo adecuado, para descartar falsos positivos.

 

MODO DE EMPLEO:

Añadir los 100 mL de agua de muestra en el frasco. Agitar para homogeneizar. La muestra inoculada sirve también de medio de transporte, por lo que no es necesario incubar inmediatamente después de la toma de la muestra, pudiendo transcurrir varias horas entre toma e incubación. Si el microorganismo diana es muy aerófilo, no cerrar el tapón. Incubar en las condiciones indicadas para cada parámetro/microorganismo.

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS: Tras la incubación, el viraje  del agua al color indicado para cada parámetro, demuestra la presencia del microorganismo buscado. La ausencia de viraje demuestra su ausencia.

 

PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO O PARA ANÁLISIS DE CAMPO. MANTENER FUERA DEL ALCANCE Y DE LA VISTA DE LOS NIÑOS Y ANIMALES. GUARDAR A TEMPERATURA AMBIENTE (8-25ºC), AL ABRIGO DE LA LUZ.

El usuario es el único responsable de la eliminación de los microorganismos según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.

GAMA COMPLETA:

En MICROKIT disponemos de kits P/A en frascos tomamuestras para TODOS los microorganismos indeseables del agua, en cajas de 10 y de 90 test. Ya llevan incorporado el Sodio Tiosulfato para neutralizar la posible presencia de Cloro. Si analiza muchas aguas al día, consulte los formatos más económicos de MICROKIT de los mismos caldos cromogénicos, en formato vial y formato de bote de 100 g con cucharilla dosificadora. Aún así, si necesita kits P/A para otros microorganismos no contemplados en este folleto, podemos diseñarlos y fabricarlos especialmente para Ud: CONSÚLTENOS

Los kits P/A pueden convertirse en recuento MPN simplemente añadiéndolos   a   cubetas  miniaturizadas   antes  de    incubar.

 

 

 

 

 

 

 

 

Si desea más información sobre nuestro MICROKIT® KITS P/A EN FRASCOS TOMAMUESTRAS rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto . O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16

RPL303 MCC P/A COLICULT® BROTH Coliformes (vira de paja a azul) y  E. coli (fluorescente con luz de 366 nm -linterna MICROKIT- e indol + en el mismo frasco).

Incubar 18-48 horas a 35-37° C

RPL301 ENTEROCULT: Enterococos fecales (vira de ámbar a negro opaco y pierde la iridiscencia de la superficie)

Incubar 18-48 horas a 35-37° C

RPL308 CLOSTRICULT: Clostridium perfringens y sus esporas (vira de paja a negro opaco sin necesidad de anaerobiosis, a veces solo vira el fondo)

Incubar 18-48 horas a 44-46°C (a 35ºC para buscar Clostridios sulfito-reductores)

RPL302 PSEUDOCULT Ps. aeruginosa (vira de incoloro a rosa-rojo y da fluorescencia azul bajo luz de 366 nm -linterna MICROKIT-).

Incubar 24-48 horas a 35-37° C, si se prevé muy estresada, incubar otros 2-3 días

RPL323 Burkholderia cepacia (vira de naranja a rojo tinto)

Incubar 24-48 horas a 35-37ºC

RPL309 Aeromonas/Pseudomonas/Plesiomonas (vira de rojo a naranja o púrpura)

Incubar 24-72 horas a 21-37ºC

RPL320 ESTAFILOCOCOS (vira de rojo a naranja)

Incubar 24-48 horas a 35-37ºC

RPL312 Vibrio cholerae (vira de verde a amarillo)

Incubar 8-48 horas a 21-35ºC

RPL312C Vibrio cholerae Cromokit (vira  a rojizo: naranja, púrpura, ámbar)

Incubar 36 horas a 21-35ºC, si se prevé muy estresado, incubar otros 2-3 días.

RPL310P Vibrio parahaemolyticus (vira de azul oscuro a verdoso)

Incubar 24 horas a 21-35ºC

RPL307 FICOKIT: ALGAS MICROSCOPICAS (vira de incoloro a verde, pardo, dorado, rojo o verde-azulado)

Incubar durante 2-14 días a 21-25ºC en fotoperiodo 16h luz/ 8h oscuridad

RPL306 CIANOKIT: CIANOBACTERIAS Y BACTERIAS FOTOTROFAS (vira de incoloro a verde-azulado o rojo)

Incubar durante 2-14 días a 21-25ºC en fotoperiodo 16h luz/ 8h oscuridad

RPL315 MYCOKIT -LEVADURAS Y MOHOS- (enturbia o flocula)

Incubar 2-14 días a 21-25ºC

RPL314 FERROKIT para bacterias del hierro

Incubar 2-14 días a 21-35ºC

CROMOKIT CAMPY AGAR

CROMOKIT CAMPY AGAR

Agar cromogénico para aislamiento selectivo y diferencial de Campylobacter en alimentos, aguas y muestras clínicas, en base a la Norma ISO 10272-1:2006.

COMPOSICIÓN

  •  Polipeptona bacteriológica      15.00 g
  • Extracto de levadura               9.00 g
  • Sales mix                                9.00 g
  • Agar-agar                                15.0 g
  • Mezcla cromogénica               1.10 g
  • Mezcla selectiva                     1.10 g
  • (Fórmula por litro)
  • pH final: ajustar a  7.4 ± 0.2

Atención: Bote de 100 g (para elaborar 2 litros de medio) y suplemento adjunto (añadir 0,21 g/L)

Colonias típicas de Campylobacter spp. en este medio

PREPARACIÓN

 Disolver 50,0 g de medio en 1 L de agua bidestilada. Remover para homogeneizar, calentando hasta ebullición sin parar de remover. NO AUTOCLAVAR. Enfriar rápidamente en un baño a 45-50ºC, agitando suavemente.

Añadir 210 mg del suplemento en 10 mL de agua bidestilada que no esté fría.  Agitar hasta su total disolución. Esterilizar por filtración con filtro de 0,45 µm (por ejemplo con jeringa y filtro de carcasa VHU237).

Añadir los 10 mL de esta solución estéril de suplemento al 1L de medio enfriado a 45-50ºC. Remover para homogeneizar.

Dispensar en placas Petri estériles y dejar solidificar. Las placas pueden almacenarse hasta un mes en nevera ¡no congelar! si están bien cerradas en bolsas autosellables, para evitar su deshidratación y contaminación.

PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO. AGITE EL BOTE ANTES DE USAR. MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO, EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO.

DESHIDRATADO CÓDIGO: DMT560- (bote de 100 g), incluye anexo suplemento selectivo + cromogénico

MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO, EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO. Y EL SUPLEMENTO REFRIGERADO A 4-8ºC.  PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO.

NOTAS

Las diferentes cepas de Campylobacter spp. son la causa principal de las toxiinfecciones alimentarias con gastroenteritis humanas en el mundo, donde se suele culpar falsamente al agente causal como Salmonella spp. De modo que la incidencia actual de Campylobacter spp. está subestimada, dado que por su dificultad de análisis (al ser un microorganismo microaerófilo), no se suele buscar en la mayoría de laboratorios agroalimentarios del mundo. Vive en el tracto intestinal de pollos, cerdos, ganado y mascotas y también se puede transmitir por contaminación cruzada de alimentos crudos/cocinados y por el agua. En niños menores de 2 años estas gastroenteritis debidas a Campylobacter spp. son especialmente frecuentes y pueden causar su muerte (OMS, nota 255).

En un estudio comparativo entre este nuevo medio cromogénico, el medio Karmali con carbón (Oxoid) y Campylosel con sangre (Biomerieux), realizado en el hospital Central de la armada de Argelia en 2016, se demuestra que el medio cromogénico es, en cepas termotolerantes de Campylobacter (C.jejuni y C.coli), exactamente igual de sensible (100%) que los otros dos medios clásicos, pero resulta mucho más específico (18% de falsos positivos, generalmente  Klebsiella oxytoca y Pseudomonas aeruginosa, frente al 48% del Karmali y al 57% del Campylosel). Además el medio cromogénico se lee mejor (colonias rojas y bien aisladas, frente a las colonias de aspecto variable gris o blanco de los otros medios en función de la edad del cultivo, que pueden ser confundidas con la flora acompañante).

CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO

Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar laboratorio, tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,…).                    DESHIDRATADO: Polvo

PREPARADO: Estéril, crema

CONTROL DE CRECIMIENTO 36-48 h a 42°C aproximadamente:

  • Campylobacter jejuni  WDCM 00073 Crece con colonias rojas. Respecto a Campy charcoal Agar, recuento >70 %.
  • Campylobacter coli  WDCM 00072, Crece con colonias rojas. Respecto a Campy charcoal Agar, recuento >70 %.
  • Escherichia coli MKTA 25922, Inhibido

El medio no ha sido diseñado para C.fetus, que podría no crecer. C.lari sí crece adecuadamente, con colonias rojas.

 MODO DE EMPLEO Y LECTURA DE RESULTADOS

Sembrar en estría sobre la placa preparada, una alícuota de la muestra de alimento  enriquecida en Campy Broth. Si la muestra es clínica o de heces, no suele precisar enriquecimiento.

Si la placa ha sido mantenida en la nevera, debe dejarse atemperar antes de la siembra.

Incubar a 42ºC durante 36-48h en atmósfera de microaerofilia (KKM037 o con el sistema de la jarra con vela). No es necesario esperar a la incubación de 72h típica de otros medios.

Confirmar las colonias sospechosas (rojas) con el látex M-Ident Campy (KMB001) y pruebas bioquímicas.

PRESENTACIÓN

MEDIO DESHIDRATADO 100g (DMT560-) y suplemento anexo c.s.p.2 L de medio final.

El usuario final es el único responsable de la destrucción de los organismos que se hayan desarrollado, según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar en la basura.         

Si desea más información sobre nuestro CROMOKIT CAMPY AGAR rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto . O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16

MICROKIT® P/A Burkholderia cepacia

MICROKIT® P/A Burkholderia cepacia

Detección Presencia / Ausencia (P/A) en 100 ml de agua

INTRODUCCIÓN:

Medio estéril Cromogénico diseñado por MICROKIT en base al BCA (BCPT), para detección P/A (o recuento NMP empleando cubetas NMP Ref:1001020 ó Quantitry de Idexx) de Burkholderia cepacia (viraje del agua a rojo burdeos en sólo 18-24h e indol – con reactivo de Kovacs SBH056), que puede elegir en tres formatos diferentes:

  1. RPL323 Frascos tomamuestras con caldo estéril hidratado y tapón a rosca para añadir en ellos 100 mL de la muestra de agua. Cajas 10u ó 9x10u

  1. FPA904 Viales prepesados de polvo estéril con tapón a rosca para añadir a 100 mL de la muestra de agua (no incluido bote 100 mL VML155 o bolsa standup 100 mL B2787B estériles). Cajas 40u ó 10x40u.DMTI904- Botes 100 g de polvo estéril y cucharilla dosificadora para añadir a 100 mL de la muestra de agua (no incluido bote 100 mL VML155 o bolsa standup 100 mL B2787B estériles), Bote para 50 test. De gran utilidad como screening negativo de muestras rutinarias, al ser un método más fácil de emplear que la filtración de membrana y más fiable (escasez de falsos positivos y de falsos negativos, que en filtración de membrana es de nada menos que el 33% de las muestras analizadas en el mundo, por el estrés provocado durante la filtración).

También muy útil para que las potabilizadoras no dejen de analizar en festivos y fines de semana, ya que este método puede ser empleado por personal no especialista en microbiología, el mismo guarda de la depuradora puede hacerlo. La única precaución es que el operario no toque ni el agua ni el polvo con sus manos, para evitar contaminaciones artificiales.

MODO DE EMPLEO:

            Es necesario tratar previamente el agua clorada, mediante Tiosulfato Sódico, para que las células dañadas subletalmente se recuperen, excepto en los frascos tomamuestras RPL302, que ya incluyen el tiosulfato.

Añadir los 100 mL de agua de muestra en el frasco o en el recipiente estéril que se va a utilizar; en el caso de los viales, añadir todo el contenido sobre el agua; en el caso de los botes de 100g, ponerse guantes estériles para no contaminar el medio y usarlo en cabina de flujo laminar; añadir 3 cucharaditas rasas sobre el agua y cerrar el bote con la cucharilla dentro para los posteriores usos. Agitar para homogeneizar. El color resultante es naranja, transparente. Incubar 18-48 horas (la rapidez del viraje depende del estado metabólico/estrés de la cepa, aun que casi siempre vira en 18h) a 35-37° C. La muestra inoculada sirve también de medio de transporte, por lo que no es necesario incubar inmediatamente después de la toma de la muestra, pudiendo transcurrir hasta horas entre toma e incubación.

Monitorice todos los puntos necesarios para el análisis preventivo de tendencias.

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS:

El viraje del agua a color rojo burdeos (vino tinto) y opaco demuestra la Presencia de B.cepacia en la muestra de agua. La ausencia de fluorescencia azul que se observa en la oscuridad bajo U.V.A. de 366 nm (linterna VMT050) confirma que no se trata de P.aeruginosa. Además, con 0,5 ml de KOVACS-SBH056, no hay anillo rojo de Indol en superficie, lo que descarta falsos positivos de coliformes. Ya que hay otros microorganismos  capaces de virar a rojo, pero son más lentos, fluorescentes o indol +. Puede conseguir que el kit sea muy selectivo añadiendo a cada frasco 0,14 ml del suplemento MICROKIT SMT301 (Ticarcilina + Polimixina). Preferimos ofrecer el kit sin suplemento porque algunas cepas de B.cepacia subletales podrían no crecer (por ejemplo la DSMZ 50181 no crece bien con los antibióticos).

Es necesaria la ausencia (no viraje), que equivale a       0 ufc/100 mL. Sólo en caso positivo debería repetirse la muestra por método cuantitativo si se requiere un recuento concreto, aunque la legislación exige 0 y por tanto no importa si hay 2 ó 950, en ambos casos el agua no es aceptable para fabricación de medicamentos y cosméticos.

Como siempre en microbiología, resiembre los positivos en estría en agar selectivo BCA (BCPT) e identifique las colonias con galerías bioquímicas (MICROKIT 245000) o con nuestro servicio de identificación molecular (SFI004).

Material necesario no incluído: Tiosulfato Sódico para eliminar el cloro (SMT976) excepto en los frascos tomamuestras RPL323, que ya lo incluyen. Bote estéril 100ml (VML155), o bolsa estéril autosellable Stand-Up (B2787B). Estufa o incubador 35-37ºC (SIL12AR ó SIL24AR).

PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO O INCLUSO PARA ANÁLISIS DE CAMPO. MANTENER FUERA DEL ALCANCE Y DE LA VISTA DE LOS NIÑOS Y ANIMALES.

Los viales FPA904 y botes DMTI904- son extremadamente higroscópicos: manténgalos bien cerrados en lugar seco, fresco y oscuro (no en nevera). Agite el bote antes de usar. En zonas de elevada humedad ambiental, guardar bien cerrados en un tupper hermético con silicagel. Los frascos RPL323 tampoco precisan nevera, sólo oscuridad.

CONTROL DE CALIDAD:

Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar laboratorio, tras largos fletes, tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,…)

DESHIDRATADO: Polvo, rosado, sólo existe versión agarizada y versión irradiada.

PREPARADO: Estéril, crema-anaranjado a menudo con precipitados negros de hierro

CONTROL DE CRECIMIENTO 18 h a 35°C aproximadamente:

  • Burkholderia cepacia MKTA 25416, Viraje a rojo burdeos, opaco
  • Burkholderia cepacia MKTN 10743, Viraje a rojo burdeos, opaco
  • Burkholderia cepacia MKTD 50181, Viraje a rojo burdeos, opaco
  • Pseudomonas aeruginosa MKTA 9027 (WDCM00026), Inhibido, Viraje ocasional a rojizo tras 24h
  • Escherichia coli MKTA 25922, Inhibido, Viraje ocasional a rojizo tras 24h
  • Staphylococcus aureus MKTA 6538, Inhibido

El usuario es el único responsable de la eliminación de los microorganismos según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.

Si desea más información sobre nuestro MICROKIT® P/A Burkholderia cepacia rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto . O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16

BACILUS SPOROTHERMODURANS CROMOKIT AGAR (HRS CROMOGENIC AGAR)

BACILLUS SPOROTHERMODURANS CROMOKIT AGAR (HRS CROMOGENIC AGAR)

La presencia de esporas altamente resistentes al calor de Bacillus sporothermodurans en leche pasterizada por el método Ultra Hight Temperature (UHT) se ha convertido en un problema importante en la industria láctea. Su presencia se considera indeseable, ya que obstaculizan los requisitos de esterilidad comercial. En un estudio (APPLIED AND ENVIRONMENTAL MICROBIOLOGY, Mar. 2005, p. 1480–1494), se han evaluado, mediante el uso de un selectivo tratamiento térmico de 30 minutos a 100°C, la presencia, fuentes, y naturaleza de las esporas potencialmente muy resistentes al calor en la leche cruda. Se detectaron altos números de estas esporas en la tela del filtro del equipo de ordeño y en muestras de cultivos y forrajes verdes. Se aislaron aproximadamente 700 cepas después del calentamiento selectivo. La colección de cepas mostró una notable diversidad, con representantes de siete géneros que forman esporas aerobias. Las más frecuentes esporas aisladas de leche UHT han sido Bacillus sporothermodurans (aerobio facultativamente anaerobio), Brevibacillus borstelensis, Paenibacillus lactis, Bacillus sphaericus, Bacillus licheniformis, y Brevibacillus brevis. El 23% de las 603 cepas formadoras de esporas pertenecen a 18 nuevas especies. La reducción de esta carga de esporas por buenas medidas higiénicas durante el ordeño probablemente podría reducir aún más el nivel de contaminación de la leche cruda, y de esta manera reducir al mínimo el recuento aeróbico de formadores de esporas de bacterias que podrían conducir al deterioro de la leche y los productos lácteos.

Las HRS (Heat Resistant Spores) o más coloquialmente “termorresistentes”, aparecen en muestras de leche UHT, sobre todo si el método de tratamiento térmico es “indirecto” (intercambiador de calor). Los métodos “directos” con inyección de vapor sobrecalentado son más eficaces, pero estas esporas también aparecen de vez en cuando. No son un problema para la salud (son microorganismos de riesgo biológico 1: sin riesgo para la salud) y aparentemente no alteran la leche, de modo que nos hemos acostumbrado a beber leche contaminada por estos microorganismos. El problema no es para el consumidor sino para la imagen de la industria.

MICROKIT ha desarrollado un medio de cultivo cromogénico, derivado del Plate Count Agar ISO 4833, con factores “doping” que permiten la visión de estas esporas germinadas en forma de colonias, que suelen ser diminutas y rojas, gracias a un cromógeno termoestable. El medio no es selectivo para B. sporothermodurans, de modo que también crecen en el mismo Bacillus licheniformis, Bacillus sphaericus y los demás esporulados alterativos de la leche UHT: las esporas termorresistentes (HRS). Pero se denomina así por el mayor conocimiento que tiene la industria láctea de la denominación “B. sporothermodurans” que de las siglas HRS.

COMPOSICIÓN

  • Triptona                                      5,0 g
  • Extracto de Levadura                  2,5 g
  • Glucosa                                       1,0 g
  • Factores doping MICROKIT          8,0 g
  • Agar‑agar                                   10,5 g
  • Cromógeno termoestable          c.s.
  • (Fórmula por litro)
  • pH final: 6,8 ± 0,2

Obsérvese la forma de volcán de las colonias, rojas, de Bacillus sporother-modurans

PREPARACIÓN

Disolver 27 g de medio en 1 litro de agua destilada.

Calentar hasta ebullición, agitando para su completa disolución.

Repartir en tubos o frascos. Autoclavar a 121 ºC durante 15 min o preferiblemente a 116°C durante 15 minutos. No sobrecalentar ni mantener fundido mucho tiempo. Refundir sólo una vez. El color final del medio es blanco-crema. A veces, por sobrecalentamiento, adquiere un tono rosado que retorna al crema cuando se vuelve a enfriar el medio, lo cual no afecta los resultados. Si lo desea, puede añadir trazas de vitamina B12 cuando el medio se está enfriando a 47-50ºC, aunque ya están incorporadas en el medio deshidratado. Si prefiere obtener colonias grandes, añada 37 g/L de BHI Broth (MICROKIT DMT022). Si desea una cierta selectividad en leche cruda, añada a 1 L de medio, cuando se está enfriando a 47-50ºC,  10 ml de un frasco pinchable de polimixina B (MICROKIT SMS009). O mejor someta a la leche cruda a un calentamiento UHT para eliminar toda la flora acompañante.

PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO. MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO. AGITE EL BOTE ANTES DE USAR.

DESHIDRATADO CODIGO: DMT532

CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO

Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar laboratorio, tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,…). DESHIDRATADO: Polvo grueso, Crema    PREPARADO: Estéril, Crema

EVALUACIÓN DEL RENDIMIENTO ISO/TS 11133-2   24-72 h a 37-55 ºC  o bien 3-5 días a 30 ºC, aplicando el método ISO 4833, ISO 2293, o el indicado en el Manual MICROKIT:

  • Bacillus sporothermodurans MKTD 10599, Excelente, pequeñas colonias rojas o fucsia, redondas, con forma de volcán (boina), PR >90% de colonias respecto al TSA.
  • Bacillus subtilis WDCM 00003, Excelente, colonias grandes, rojo burdeos, lobuladas, PR >90% de colonias respecto al número de ufc certificadas e inoculadas en TSA.
  • Bacillus cereus WDCM 00001, Excelente, colonias céreas, fucsia, enormes, lobuladas, PR >90% de colonias respecto al número de ufc certificadas e inoculadas en TSA.
  • Enterococcus faecalis WDCM 00009, Excelente, colonias pequeñas, rojas, redondas, con márgenes incoloros, PR >90% de colonias respecto al TSA.
  • Staphylococcus aureus WDCM 00032, Excelente, colonias rojo burdeos, grandes, redondas, mucosas, PR >90% de colonias respecto al TSA.

Las colecciones TIPO prohíben el uso de su referencia, por lo que indicamos la Universal WDCM según ISO 11133-2:2014 y la Colección de Cepas Nativas Tropicales.

PRESENTACIÓN: MEDIO DESHIDRATADO (100 g, 500 g, 5 Kg).

Recuento total de bacterias esporuladas en leche UHT y otros alimentos UHT (lácteos, gelatina, forraje…). Las colonias crecen en distintos tonos del rojo: rosa, naranja, púrpura…. sobre el tono crema del medio (excepto ciertos acidolácticos y ciertas levaduras, que crecen con colonias blancas, sin viraje, por lo que este medio los distingue de los aerobios). El color de las colonias no afecta a las pruebas de identificación posteriores que quisiera realizar.

 MODO DE EMPLEO E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

Inocular 1 ml de muestra de leche y su serie de diluciones decimales, en masa, para detectar precozmente la posible contaminación del lote, con esporas de este microorganismo (o bien estriar en superficie muestras ya alteradas).

Si se desea analizar la leche antes de la UHT, añada a cada L de medio 10 ml de Polimixina B (frascos pinchables MICROKIT SMS009), cuando está enfriándose a 47-50ºC, para eliminar buena parte de la flora acompañante. La polimixina es un antibiótico polipeptídico producido por una cepa de Bacillus polymyxa, activo frente a Gram negativos, ya que rompe violentamente su membrana plasmática. Atención: los iones Ca++ inhiben su acción. Aunque el mejor agente selectivo es el calor UHT, para buscar sólo sus supervivientes, con este medio (sin suplementos de antibióticos). De modo que para analizar leche cruda, es mejor someterla a un calentamiento similar a UHT antes de sembrarla en el medio de cultivo, a fin de eliminar la flora acompañante.

Incubar una placa a 30 ºC aproximadamente durante 3-5 días, e incubar otra placa a 37 y/o 55 ºC aproximadamente, durante 48-72 horas. Buscar las colonias rojas y pequeñas típicas de B.sporothermodurans, aunque cualquier otro tipo de colonia que aparezca, también demuestra una UHT deficiente. La recuperación supera el 20% por encima de la obtenida en PCA y el 16% por encima de la obtenida en TSA, gracias a ciertos factores doping descubiertos y agregados por MICROKIT. Esta fórmula, con menos agar, aumenta la sensibilidad del medio frente a los aerobios más lábiles, al permitir una mejor oxigenación del fondo de la placa. Este medio está diseñado para siembra en masa de productos que han sufrido esterilización UHT, de modo que los resultados no son concluyentes en productos no-UHT, con numerosos falsos positivos (sobre todo si no se añade polimixina B). Si desea sembrar en superficie, utilice 32 g/l de este mismo medio, en lugar de 27 g/l. Para minimizar la desecación en muestreos de aire y superficies, o para siembra en Spiral, añadir 2 gotas de antiburbujas (MICROKIT SBL001) por cada litro de agua, antes de añadir el medio y antes de autoclavar.

ANEXO FOTOGRÁFICO

B.sporothermodurans en Maxim Agar Cromogénico (MICROKIT BCD515) en 3 días a 35ºC

B.sporothermodurans en HRS cromogénico (MICROKIT DMT532). Obsérvese el mayor tamaño de las colonias en 3 días a 35ºC, que con lupa ya muestran su forma de volcán

B.sporothermodurans en HRS cromogénico (MICROKIT DMT532) al que hemos añadido 37 g/L de BHI Broth (MICROKIT DMT022). Obsérvese el espectacular tamaño de las colonias en 3 días a 35ºC, que muestran a simple vista su forma de volcán

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Mix de Acidolácticas en HRS cromogénico con polimixina (MICROKIT DMT532+SMS009): Colonias blancas o muy ligeramente rosadas

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Bacillus cereus en HRS cromogénico con polimixina (MICROKIT DMT532+SMS009): Colonias céreas, enormes, fucsia, lobuladas

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Bacillus subtilis en HRS cromogénico con polimixina (MICROKIT DMT532+SMS009): Colonias grandes, rojo burdeos, lobuladas

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Bacillus subtilis en HRS cromogénico con polimixina (MICROKIT DMT532+SMS009) al que hemos añadido 37 g/L de BHI Broth (MICROKIT DMT022): Colonias enormes, fucsia, lobuladas

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Enterococcus faecalis en HRS cromogénico con polimixina (MICROKIT DMT532+SMS009): Colonias pequeñas, redondas, con centro rojo y borde incoloro, aspecto similar a Listeria monocytogenes

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Listeria monocytogenes en HRS cromogénico con polimixina (MICROKIT DMT532+SMS009): Colonias pequeñas, redondas, con centro rojo y borde incoloro, aspecto similar a Enterococcus faecalis

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Staphylococcus aureus en HRS cromogénico con polimixina (MICROKIT DMT532+SMS009): Colonias grandes, rojo burdeos, mucosas, redondas

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Shigella flexneri en HRS cromogénico con polimixina (MICROKIT DMT532+SMS009): único Gram negativo testado que crece, con colonias enormes, fucsia, lobuladas

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

El usuario es el único responsable de la eliminación de los microorganismos según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.       

Si desea más información sobre nuestro BACILLUS SPOROTHERMODURANS CROMOKIT AGAR (HRS CROMOGENIC AGAR) rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto . O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16