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LEGIONELLA GVPC, BCYE (con Fe y Cys), BCYE-Cys, (AGAR BASE)

LEGIONELLA GVPC, BCYE (con Fe y Cys), BCYE-Cys, (AGAR BASE)

Aislamiento selectivo de Legionella por el método MF o por siembra directa

(ISO 11731:2017, ISO 11731-2:2004)

COMPOSICIÓN

Medio BASE:

  • Carbón activado                              2,0 g
  • Extracto de levadura                        10,0 g
  • Agar‑Agar                                        22,0 g
  • Alfa-ketoglutarato (sal  mono-K) *  1,0 g
  • (Fórmula por litro)
  • pH final: 6,9 ± 0,1

GVPC Suplemento Selectivo+Nutritivo estéril en solución 200 ml SBL604

Agite contundentemente y añada en asepsia 40 ml a 500 ml de medio enfriado a 50 ºC (o bien 8 ml a 100 ml de medio). Puede contener precipitados por su elevada concentración pero desaparecen al diluir en el medio BCYE base. c.s.p. 2’5 l de medio. Contiene las proporciones precisas, según ISO 11731, de: Tampón ACES, “-Cetoglutarato, KOH, Clorhidrato de L-Cisteina, Pirofosfato férrico, Vancomicina, Cicloheximida, Polimixina y Glicina. Contiene elementos tóxicos, evitar el contacto con la piel.

NOTA 1: La ref. SBL609 es idéntica al suplemento GVPC (con Fe y Cys) pero sin los tres antibióticos del GVPC selectivo, para elaborar el BCYE (con Fe y Cys). La ref. SBL605 es idéntica al suplemento GVPC pero sin la Cisteína, para elaborar el BCYE-Cys, aunque éste se puede sustituir por simple TSA.

NOTA 2: EL caldo GVPC para preenriquecimiento revitalizador, es idéntico al Agar GVPC pero sin Agar-Agar y con el carbón granulado (ver kit P/A Legionella en tubos preparados, ref.RPL330). Ideal para usar antes de la ISO 11731 y encontrar de forma mucho más eficaz la Legionella tras revitalización.

PREPARACIÓN (conversión del medio deshidratado en medio preparado)

Disolver 17 gramos de medio en 500 ml de agua bidestilada. Calentar hasta hervir para la total disolución. Autoclavar a 121 ºC, 15 minutos. El color final del medio es negro. Enfriar a 45-50 ºC y, para el medio selectivo GVPC, añadir asépticamente 40 ml de Legionella Supplement-200 ml (SBL604, tampón ACES/KOH; nutritivo con α-ketoglutarato, clorhidrato de L-cisteina y pirofosfato férrico; y selectivo, con Vancomicina, Polimixina, Cicloheximida y Glicina); para el medio no-selectivo BCYE con Fe y Cys, añadir 40 ml de SBL609 (con Fe y Cys pero sin los antibióticos). Para el medio BCYE-Cys,  añadir 40 ml de Legionella-Cys Supplement-200 ml (SBL605, tampón ACES/KOH, α-ketoglutarato y pirofosfato férrico), aunque como es para ver que en él no crecen las Legionellas, se puede sustituir por simple TSA, donde tampoco crecen.  Mezclar muy bien y verter 20 ml/placa cuando el medio esté a punto de solidificar, para que la distribución del carbón activo sea lo más homogénea posible. No sobrecalentar o el agar se volverá demasiado blando: Es posible que sea necesario añadir aún más Agar-agar (BCB006)  para minimizar la friabilidad del agar,  si se va a sembrar con asa (aceptado en ISO 11731).

PARA USO EXCLUSIVO

EN LABORATORIO.

MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO

EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO.

DESHIDRATADO CODIGO: DMT007

CONTROL DE CALIDAD DE LOS MEDIOS GVPC y BCYE + Fe + Cys

Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar laboratorio,

tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,…)

DESHIDRATADO: Polvo, Negro

PREPARADO: Estéril, Negro.

CONTROL DE CRECIMIENTO 2 semanas a 37°C aproximadamente:

Legionella pneumophila MKTN 12821 serogrupo1, Correcto, colonias gris-azuladas, cristalinas, mucosas, en 2-15 días, en medio suplementado GVPC y en BCYE+Fe+Cys. No crece en medio BCYE-Cys, sin suplemento nutritivo de hierro y cisteína. En el medio BCYE con suplemento nutritivo pero sin antibióticos, crece aproximadamente el doble de población que en el GVPC. Con respecto a PCA estandarizado y suplementado,* recuento 126 %, pero de forma selectiva.

Legionella pneumophila serogrupo 2-15, MKTLeg-2, Idem.

Escherichia coli, MKTA 25922 parcialmente inhibido. Con respecto a PCA estandarizado y suplementado,* recuento 27 %.

Micrococcus luteus MKTA 9341, inhibido en el GVPC selectivo.

* El que cumple con recuperación superior al 92-125% con respecto a cepas cuantitativas trazables a la cepa tipo. Incertidumbres detectadas entre todos los lotes a lo largo de un año (la mayoría de la incertidumbre se debe a la cepa y a la proporción de cepas acompañantes inoculadas, no al medio).

PRESENTACION: MEDIO DESHIDRATADO (BCYE BASE) Y SUPL. GVPC / BCYE+Fe+Cys,  KITS P/A caldo revitalizante, PLAQUIS HERMÉTICAS Y PLACAS MF GVPC, FRASCOS PREPARADOS 100 ml (BCYE-BASE) + SUPL. GVPC / BCYE+Fe+Cys.Suplemento selectivo + nutritivo para GVPC (SBL604). Suplemento sin Cysteina para BCYE-Cys. Suplemento nutritivo Fe + Cys sin antibióticos para BCYE.

Nuevo: Placa preparada GVPC (con glicina, cisteína, hierro, ACES y antibióticos) pH 6,8 s/ISO 11731:2017 (Ref: PPLM60) y placa preparada BCYE (idem sin antibióticos ni glicina)  pH 6,8 s/ISO 11731:2017 (Ref: PPLM61)

MODO DE EMPLEO E INTERPRETACION DE RESULTADOS

Medio selectivo GVPC: Inocular  una membrana de filtración de 0’22 µm (VAC022,  no usar de 0,45 µm), o mejor 0´1 ml de un extracto del fondo del tubo tras la centrifugación a 2500 r.p.m., 20′ de una muestra rascada, o bien 0’1 ml del fondo del caldo de enriquecimiento concentrado (RPL330) sobre una placa. O aplicar una placa de contacto sobre la superficie, o bien introducirla en un aparato de control de aire. Preincubar estrictamente 30 minutos a 50 ºC para eliminar la flora competitiva acompañante. Incubar a 35 ºC aproximadamente, en atmósfera húmeda de 2 a 14 días. Las colonias de Legionella pneumophila son blanco-azuladas, brillantes, mucosas, de 1-2 mm Ø, circulares, lisas, algo elevadas y con los bordes enteros, fluorescentes (verde mate a menudo teñido de amarillo) en la oscuridad bajo luz UVA (linterna MICROKIT VMT050). Subcultivar 3 colonias en  BCYE+Fe+Cys  (sin antibióticos)  y en BCYE-Cys (o TSA), al menos 2 días a 36 ± 1°C.  Legionella crece en BCYE (con Fe y Cys) sin antibióticos (y en GVPC), pero no crece en BCYE-Cys (ni en medios generales tipo TSA, agar sangre, PCA, YEA, Nutrient Agar…). Las colonias deben confirmarse con oxidasa positivo, a menudo lento (KOT050), catalasa positiva (KMT299) y serotipado (MICROKIT-LEGIONELLA-VIRAPID VR002, QUE PUEDE USARSE DIRECTAMENTE EN EL PRIMER AISLAMIENTO DE GVPC Y AHORRARSE ASÍ EL TIEMPO Y COSTE DE LAS OTRAS PLACAS DE BCYE (con Fe y Cys) y BCYE-Cys (o TSA).  Contar sólo la placa de GVPC con más colonias de Legionella pneumophila. Si no se encuentra, expresar los resultados como “no detectada”, ya que a veces está presente y no crece. Peligro, microorganismos de alto riesgo para inmunodeprimidos, por inhalación de aerosoles (pero no llega a considerarse de Clase III).

NOTA: Los otros dos medios mencionados en la ISO 11731:2017 (BCYE con suplementos selectivos: BCYE+AB, Modified Wadowsky Yee: MWY) son alternativos, no son necesarios. Esta nueva versión 2017 de la Norma describe la fluorescencia de otras especies de Legionella: L.anisa, L.bozemanii, L.cherrii, L.dumoffii, L.gormanii, L.gratiana, L.parisiensis, L.steigerwaltii y L.tucsonensis) tienen autofluorescencia blanca brillante; L.erythra y L.rubrilucens aparecen rojas; L.pneumophila verde mate, a menudo teñido de amarillo .

El usuario final es el único responsable de la destrucción de los organismos que se hayan multiplicado, según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.

Si desea más información sobre nuestro  LEGIONELLA GVPC, BCYE (con Fe y Cys), BCYE-Cys, (AGAR BASE) rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto . O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16

Quanti-P/A Clostricult – Clostridium perfringens

Quanti-P/A Clostricult

Recuento de Clostridium perfringens y/o de Clostridios sulfito-reductores  en 1 g, 50 ml, 100 ml ó 250 ml de muestra

Quanti-P/A-Clostricult-TSC para detección y recuento fiables de Clostridium perfringens en 100 ml de muestra de aguas potables o en 1 gramo/ml de muestra de alimentos. Ref: QPA-CP (caja  20 u)

Quanti-P/A-Clostricult-SPS para detección y recuento fiables de Clostridium sulfito-reductores en 1 gramo/ml de muestra de alimentos/cosméticos o en 50 ml de muestra de aguas envasadas. Ref: QPA-CSR (caja  40 u)

Clostridium perfringens es un anaerobio estricto que por el método destructivo de filtración de membrana, aunque sea el método oficial, ve reducida su concentración a niveles inaceptables (baja al 10% e incluso al 1% respecto al valor inóculo, cuando debería recuperarse al menos un 50-95 % del valor inóculo) y además es incapaz de ofrecer una sensibilidad adecuada (el 49% de las aguas con este microorganismo, casi la mitad,  dan falso negativo con dicho sistema, cuando deberían dar como máximo un 5% de falsos negativos; y no sólo con el medio de la Directiva 2003 de aguas de consumo, el Agar m-CP, también con el medio de la Nueva Directiva 2015 de aguas de consumo, el Agar TSC).

Por otra parte el sistema DryPlates para recuento de microorganismos, por inclusión en masa de 1 ml de muestra, sin necesidad de calentar/enfriar agares, no puede emplearse en anaerobios estrictos, porque la fina capa de medio los oxigena demasiado. Desde la invención de las DryPlates en 2014, MICROKIT ha estado intentando encontrar el método idóneo para hacer recuentos de  Clostridium perfringens y de Clostridium sulfito-Reductores en 1 ml de muestra de alimento o cosmético, en 50 ml de aguas envasadas y en 100 ml de aguas de consumo humano. Y tras 3 años, en Junio de 2017 por fin lo ha conseguido! Damos la bienvenida al futuro a los pioneros, con criterio propio, que no se dejan cegar por la ortodoxia normativa! Sin duda pasarán años hasta que este nuevo método sea el oficial, pero de ninguna manera eso significa que no deba emplearlo desde ya y adelantarse al futuro normativo, que siempre es tan lento. La fiabilidad de resultados es lo más importante. Y actualmente, esta fiabilidad está gravemente comprometida en los recuentos de anaerobios.

Empleando el mismo hidragar de las DryPlates diseñado y patentado por MICROKIT, mezclado con el medio de cultivo TSC  (QPA-CP para Clostridium perfringens) o SPS (QPA-CSR para Clostridios sulfito-reductores) en bolsas transparentes, rígidas y herméticas, con tapón a rosca, se consigue una recuperación muy cercana al 100% del valor inóculo y una sensibilidad también muy cercana al 100% de las muestras realmente positivas. Hemos bautizado este nuevo método patentado por MICROKIT con el nombre Quanti P/A, porque utilizamos los mismos caldos P/A que diseñamos hace décadas, pero con el hidragar de las DryPlates para poder hacer recuentos.

Se añaden como ventajas a la fiabilidad mediante estos excelentes resultados, la comodidad del método (ahorro de filtraciones de membrana, que además son destructivas para las células subletales; siembra en masa sin necesidad de calentar y enfriar agares) y su extraordinaria caducidad (3 años desde fabricación). Además, se ahorra el empleo de jarras y de costosas atmósferas de anaerobiosis, ya que se incuba hermético en ausencia de aire (semivacío).

El Agar TSC es el medio Normativo para análisis de Clostridium perfringens, tanto en muestras de alimentos (ISO 13401), como de aguas de consumo humano (ISO 14189).

El Agar SPS es el medio Normativo (AOAC) para análisis de Clostridium sulfito-Reductores, tanto en muestras de alimentos, como de aguas envasadas.

¡Enhorabuena por utilizar el mejor método para recuento de anaerobios en aguas (o en alimentos y cosméticos) sin necesidad de calentar/enfriar agares, sin oxigenar por filtración y sin necesidad de atmósferas de anaerobiosis, sustituto del Siglo XXI de los medios deshidratados, de los medios preparados hidratados en tubo, frasco o botella y del método destructivo de Filtración de Membrana!

MODO DE EMPLEO

(ver tutorial en  https://www.youtube.com/watch?v=A8WifR8mZ1k ):

1) para detección y recuento de Clostridium perfringens y sus esporas en 100 ml de muestra de aguas de consumo humano:

  1. Tome un Quanti-P/A-CP, dele la vuelta para que el medio salga del fondo, doble el fondo de la bolsa para que no vuelva a depositarse allí, ponga la bolsa vertical con el fondo doblado, abra el tapón y añada por el orificio, con pulso para evitar derrames, 100 ml de la muestra de agua (tratada con Na TioSulfato si es clorada). Si lo que busca son esporas, caliente el agua de muestra a 75 ºC antes de añadirla al kit. Lo ideal es analizar una muestra de 100 ml a temperatura ambiente para formas vegetativas y un duplicado de 100 ml de la misma muestra a 75ºC para esporas. Los eventuales  artefactos negros, púrpura o rosados no afectan los resultados: son de contorno irregular, no crecen al incubar, es más: desaparecen, a diferencia de las colonias. Apriete para que el agua llegue casi al borde del tapón y quede muy poco aire.
  2. Cierre con fuerza el tapón. Amase el conjunto con las dos manos unas 10-30 veces (o bien con stomacher-masticator) para mezclar el medio con los 100 ml de muestra de agua. Si queda polvo o algún grumo de más de 1 cm, pellízquelo hasta que se disuelva o parta. No se preocupe por los pequeños grumos que queden, desaparecerán durante la incubación. Cuanto mejor amase mejores resultados obtendrá, al separar mejor las ufcs. Aplane la bolsa contra la poyata y planche el medio hidratado con la muestra, en toda la superficie interna de la bolsa, para que la capa de medio sea lo más homogénea y fina posible, y así luego pueda contar mejor las colonias al trasluz. Puede ayudarse con una caja de frascos MICROKIT llena de frascos de 100 mL (peso ideal para el mejor planchado). El agua fría se disuelve peor.
  3. Deposite la bolsa horizontal en la estufa de cultivos, verificando que el tapón sigue herméticamente cerrado. Puede apilar numerosas bolsas, alternando su posición (tapones al N en una capa, al S en otra, al E en otra, al W en otra…)
  4. Incube 24-48 horas a 35-45ºC (a 35ºC puede haber falsos positivos de colonias negras de fermentadores facultativos: Staphylococcus, Salmonella, Proteus, Klebsiella, Citrobacter…). Si se prolonga la incubación, las colonias se agrandan, se solapan y en caso extremo todo el medio ennegrece, impidiendo así el recuento que, por este motivo, debe hacerse entre 24 y 48 h desde iniciada la incubación. Si a las 24 h no hay crecimientos, espere a leer a las 48h. Durante la incubación, en caso positivo extremo, la bolsa se podría hinchar del gas generado.
  5. Extraiga la bolsa y cuente al trasluz todas las colonias o burbujas negras, que serán el número de ufc de Clostridium perfringens en 100 ml de muestra de agua. Cuente primero por una cara y repita el recuento por la otra, ya que el medio es traslúcido: Sume los recuentos de ambas caras evitando contar dos veces la misma colonia. En este sistema se cuentan perfectamente entre 0 y 200 colonias. Puede confirmar las colonias con el kit KMT008 (ISO 6461 y FDA) pinchando a través de la bolsa.

2) para detección y recuento de Clostridium perfringens y sus esporas en 1 g ó ml de muestra de alimentos o cosméticos (u otras matrices):

Siga exactamente los mismos pasos descritos en el apartado anterior, con las siguientes salvedades:

  1. Mezcle su ml ó gramo de muestra con 100 ml de medio estéril FTM (puede emplear agua peptonada tamponada, Ringer, Solución marina al 0,9 %, agua…, aunque FTM es lo ideal para conseguir los más óptimos resultados en anaerobios).
  2. Cuente todas las colonias o burbujas negras, que serán el número de ufc de Clostridium perfringens en 1 ml ó gramo de muestra de alimento, cosmético o la matriz que sea (aumenta x10 el límite inferior). En este sistema se cuentan perfectamente entre 1 y 100 colonias.

3)  para detección y recuento de Clostridium sulfito-reductores en 50-100 ml de muestra de aguas envasadas:

Siga exactamente los mismos pasos descritos en el apartado 1), con las siguientes salvedades:

  1. En este caso use la bolsa Quanti-P/A-CSR.
  2. Añada 100 ml del agua de muestra (o 50 ml de su agua de muestra más 50 ml de agua estéril) y amase sobre la pila para prevenir posibles derrames. Siga los demás pasos indicados en el apartado 1)
  3. Incube 24 horas a 35ºC aprox.
  4. Cuente todas las colonias o burbujas negras, que serán el número de ufc de Clostridium sulfito-reductores en 50-100 ml de agua envasada. En este sistema se cuentan perfectamente entre 1 y 100 colonias.

4)  para detección y recuento de Clostridium sulfito-reductores en 1 g ó ml de muestra de alimentos o cosméticos (u otras matrices):

Siga exactamente los mismos pasos descritos en los apartados 1) y 3), con las siguientes salvedades:

  1. Mezcle su ml o gramo de muestra con 100 ml de medio estéril FTM (puede emplear agua peptonada tamponada, Ringer, Solución marina al 0,9 %, agua,…, aunque FTM es la mejor opción en anaerobios). Aumenta x10 el límite inferior de cuantificación, al emplear directamente 1 g de alimento diluido en 100 ml de caldo: leerá ufc/g, no las hasta ahora habituales ufc/0,1 g.

CONSERVACIÓN Y PRECAUCIONES DE USO

Almacenar a temperatura ambiente (ideal 15-25ºC) ¡no en nevera!, ya que en ésta la humedad es más fácil que prehidrate y estropee los medios. Es imprescindible almacenar en lugar muy seco y oscuro, ya que la humedad y la luz dañan irreversiblemente los medios de cultivo deshidratados. Si trabaja en zonas de alta humedad atmosférica, almacene las Quanti-P/A, bien cerradas en su bolsa, dentro de una caja hermética “tupper” con sacos antihumedad (ej: VRB747).

VER FOTOGRAFIAS EXPLICATIVAS EN FOLLETO ANEXO

Con este sistema, con la destreza que da la experiencia, un analista puede controlar (de la muestra a la estufa incubadora) hasta 50 muestras por hora. Tambien en este mismo método, el Quanti-P/A-Enterocult (QPA-ETC) para recuento de Enterococos fecales (colonias pardas-negras) en 100-250 ml de muestra de agua, conseguido mezclando nuestro clásico P/A Enterocult con Hidragar en este tipo de envase. Para cuantificar Coliformes-E.coli y Pseudomonas aeruginosa emplee nuestros caldos P/A (MCC Colicult y Pseudocult, respectivamente) en las cubetas NMP. Esto ahorrará los elevados porcentajes de falsos negativos que también implica el método de filtración de membrana en estos tres parámetros (21% en E.coli-Coliformes, 6% en Enterococos fecales y 33% en P.aeruginosa).

El usuario final es el único responsable de la eliminación de los microorganismos según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.

Validado en base a la Norma UNE-EN-ISO 16140. Exactitud del 87,5 % al 100 % de ufcs, en función de lo correctos que sean el amasado- planchado de la muestra al mezclarla con el medio. Precisión de duplicados a 35-45ºC, medida en CV: 24,2%. Exclusividad a 45ºC: 100%. Inclusividad en muestras no calentadas a 75ºC: 100% (no disponíamos de esporas para evaluar a 75ºC). Límite inferior de cuantificación: 1-3 ufc/100 ml en muestras tanto frías como calientes (75ºC).

Si desea más información sobre nuestro  Quanti-P/A Clostricult rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto . O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16

CAMPYLOBACTER BLOOD FREE MEDIUM AGAR

CAMPYLOBACTER BLOOD FREE MEDIUM AGAR

(BASE) (mCCD Agar)

Aislamiento selectivo para Campylobacter s/ ISO 10272-1:2006

Campylobacter jejuni

COMPOSICIÓN

  • Extracto de carne                   10,00 g
  • Peptona de carne                    10,00 g
  • Triptona                                 3,00 g
  • Cloruro sódico                       5,00 g
  • Carbón activo                         4,00 g
  • Desoxicolato sódico               1,00 g
  • Sulfato ferroso                       0,25 g
  • Piruvato sódico                      0,25 g
  • Agar‑agar               13,00 g
  • Fórmula por litro)                  pH final: 7,4 ± 0,2

PREPARACIÓN

Disolver 46 g en 1 litro de agua bidestilada. Calentar hasta ebullición, agitar hasta la completa disolución. Autoclavar a 121 ºC durante 15 minutos. Enfriar a 50 ºC y añadir asépticamente 1 vial de suplemento SKIRROW (SBH020) (mejor que 2 viales de suplemento PRESTON-BOLTON -SLM131-).

PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO. AGITE EL BOTE ANTES DE USAR, PARA ASEGURAR  LA  HOMOGENEIZACIÓN DE LOS EVENTUALES GRADIENTES DE DENSIDAD DE LOS COMPONENTES. MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO.

DESHIDRATADO CODIGO: DMT184

CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO

Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar laboratorio, tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,…)

DESHIDRATADO: Polvo fino, Negro    PREPARADO: Estéril, Negro.

EVALUACIÓN DEL RENDIMIENTO ISO/TS 11133-2 (Aplicando el método ISO 10272, 18-72 h a 42 ºC en microaerofilia o el indicado en el Manual MICROKIT actualizado):

  • Campylobacter jejuni MKTA 29428, con acompañantes (E.coli MKTA 25922 y P.mirabilis MKTA 29906). Tras estriar  e incubar, aparecen colonias típicas.
  • Campylobacter coli MKTA 43478, tras estriar  e incubar, aparecen colonias típicas.
  • Escherichia coli MKTA 25922, inhibido: tras incubar, estriar e incubar, no aparecen casi colonias.
  • Staphylococcus aureus MKTN 6571, totalmente inhibido: tras incubar, estriar e incubar, no aparece ni una colonia.

Las colecciones TIPO prohiben el uso de su referencia por lo que indicamos la nuestra, directamente trazable a la colección TIPO.

PRESENTACIÓN: MEDIO DESHIDRATADO BASE + SUPLEMENTOS , TUBOS PREPARADOS INCLINADOS.

NOTA: Campylobacter jejuni puede contaminar aguas y alimentos, provocando infecciones a menudo mal clasificadas como salmonelosis muy frecuentes en bebés y por contaminaciones cruzadas en la nevera de alimentos crudos con otros ya cocinados. Para su búsqueda en alimentos y aguas,  enriquecer 25 g de alimento o 500 ml de agua en Campy Broth (DMT024) + Suplemento PRESTON-BOLTON (SLM131), o bien añadir a 225 ml de Agua de Peptona Tamponada con 25 g de alimento, o a 500 ml del agua, el contenido de un tubo de CAMPY P/A concentrado (RPL332). Incubar 14-48 h a 43°C aproximadamente y sembrar en estría en la placa de Campy Agar.

SIEMBRA

Inocular las placas preparadas sembrando la muestra o el enriquecimiento en estría a fin de aislar colonias. Incubar a durante 24‑48 horas a 43 ºC aproximadamente, en una atmósfera enriquecida en CO2 (5% de Oxígeno y 10% de Anhídrido Carbónico) mediante KKM101 (en jarras de anaerobiosis) o KKM037 (en bolsas), o con el método de la vela de microaerofilia. Normalmente, C. jejuni crece en 24 horas, pero es oportuno reincubar las placas negativas otras 24 horas. La flora acompañante no crece a 43 ºC.

Agotamiento del oxígeno y enriquecimiento en CO2 en jarrita de microaerofilia,, en sólo unos segundos, mediante el sistema de la vela.

INTERPRETACIÓN

Las colonias de C. jejuni no son hemolíticas y pueden presentarse como grises y planas, con el borde irregular, o bien elevadas y redondas con aspecto mucoso. Este aspecto depende del grado de humedad de la superficie del agar. Confirmar con M-IDENT CAMPYLOBACTER LÁTEX (KMB001).

El usuario es el único responsable de la eliminación de los microorganismos según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.

Si desea más información sobre nuestro  CAMPYLOBACTER BLOOD FREE MEDIUM AGAR rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto . O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16

 

M-IDENT®- Burkholderia cepacia

M-IDENT® Burkholderia cepacia

Kit de confirmación de Burkholderia cepacia en aguas y cosméticos

La confirmación de colonias de Burkholderia cepacia se ha convertido en el gran hándicap de los laboratorios cosméticos y a menudo la única solución era enviar las colonias a Identificación molecular (MICROKIT SFI004). Aunque ésta siga siendo la mejor opción, el mercado pedía un kit con el que poder orientarse antes de decidir.

El Agar BCPT (BCSA en otras marcas) se basa en la asimilación del piruvato como fuente de C y el rojo fenol como indicador de la acidificación, por crecimiento de B.cepacia con viraje del medio de naranja a fucsia alrededor de las colonias diana. El Agar OFPBL es un O/F modificado con lactosa como fuente de C y azul de bromotimol como indicador de la acidificación por crecimiento de B.cepacia con viraje de azul a amarillo. Es menos selectivo que el Agar BCPT. El BCPT Cromogénico de MICROKIT es un BCPT al que se ha añadido un cromógeno que permite un mayor contraste de las colonias, que crecen de color rojo intenso, con los mismos virajes del medio que el BCPT clásico.

Antes de emplear el kit M-Ident-B.cepacia, cercíorese que las colonias son oxidasa positivas y no son fluorescentes bajo luz UV de 366 nm

Burkholderia cepacia es citocromo-oxidasa positiva (viraje a azul de las tiras estables MICROKIT KOT050)

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Burkholderia cepacia no provoca fluorescencia (luz azul-verde-amarilla) en BCPT ni en OFPBL ni siquiera cuando se observa bajo luz UVA de 366 nm (linterna MICROKIT VMT050)

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Según Bacdive DSMZ, estas son las pruebas que distinguen las cepas que hemos detectado capaces de crecer en BCPT o que podrían ser confundidas con B.cepacia al ser también oxidasa positivas:

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

El kit distingue no solo la B.cepacia, sino además todas las Burkholderias declaradas como patógenas, con las mismas características de B.cepacia: Ox+ ADH- MNE+ PAC+ (B.ambifaria, B.arboris, B.cenocepacia, B.contaminans, B.diffusa, B.dolosa, B.gladioli, B.latens, B.metallica, B.multivorans, B.pseudomultivorans, B.seminalis, B.stabilis) y también las patógenas que a diferencia de las demás, son  ADH+ (B.oklahomensis, B.thailandensis y B.ubonensis).

En nuestros controles, la prueba que distingue claramente las especies de Burkholderia de las de Pseudomonas es el ADH: Pseudomonas deja el medio rojo mientras Burkholderia lo vira  a naranja o amarillo, según la cepa (por ejemplo la B.cepacia DSMZ 50181 vira a amarillo, mientras la B.cepacia ATCC™ 25416 y la B.cepacia NCTC 10743 viran a naranja, en 24 horas de incubación.

PRESENTACION:

M-IDENT®-Burkholderia cepacia, kit 4 test para confirmar 5 colonias sospechosas de este patógeno y otras Burkholderias patógenas en agares BCPT/BCSA/OFPBL. Todas ellas coinciden en estas pruebas diferenciales: Oxidasa + (azul), ADH- (amarillo), MNE+ (amarillo), PAC+ (amarillo).

Kit 4 test suficiente para confirmar 5 colonias. Caducidad 1 año

– 5 tiras estables para el test de la Citocromo-oxidasa (KOT0505)

– 5 tubos  líquidos de Caldo ADH (rojo).

– 5 tubos  líquidos de Caldo MNE (verde).

– 5 tubos  líquidos de Caldo PAC  (verde).

CODIGO: KMT006

EL KIT NO INCLUYE:

  • Cepas cuantitativas MICROKIT para validar los reactivos una vez llegados a fábrica o tras almacenamientos prolongados o inadecuados.
  • Participación en servicios intercomparativos como SEILAGUA® y SEILAPARFUM para validar los procedimientos y los operarios
  • Lámpara de luz ultravioleta de 366 nm (ver Linterna MICROKIT VMT050)

PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO. MANTENGA LA CAJA CERRADA, EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO

VENTAJA: Su extremadamente larga caducidad, de 1 año asegurado.

CONTROL DE CALIDAD DEL KIT

Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar laboratorio, tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,…)

TIRAS Citocromo-oxidasa: NO estéril, color rosa pálido

TUBOS PREPARADOS de Caldo ADH: Estéril, líquido, rojo, transparente.

TUBOS PREPARADOS de Caldo MNE: Estéril, líquido, verde, transparente. TUBOS PREPARADOS de Caldo PAC: Estéril, líquido, verde, transparente.

CONTROL DE CRECIMIENTO a 37°C durante 24 horas, en aerobiosis:

  • Tiras oxidasa: Burkholderia cepacia ATCC™ 25416 vira a azul oscuro de inmediato.
  • Caldo ADH: Pseudomonas aeruginosa WDCM00026, crece con turbidez y permanece de color rojo. Burkholderia cepacia ATCC™ 25416, crece con turbidez y vira de rojo a naranja o amarillo.
  • Caldo MNE: Pseudomonas aeruginosa WDCM00026, crece con turbidez y permanece de color verde. Burkholderia cepacia ATCC™ 25416, crece con turbidez y permanece de color verde, igual que Burkholderia cepacia NCTC 10743. Algunas otras cepas de Burkholderia cepacia (ej: ATCC™ 17759, DSMZ 50181) viran de verde a amarillo.
  • Caldo PAC: Pseudomonas aeruginosa, WDCM00114 crece con turbidez y permanece de color verde. Otras cepas de Pseudomonas aeruginosa (ej: WDCM00026) viran de verde a amarillo. Burkholderia cepacia ATCC™ 25416, crece con turbidez y vira de verde a verde-amarillento o amarillo, igual que Burkholderia cepacia NCTC 10743. Algunas otras cepas de Burkholderia cepacia (ej: DSMZ 50181) permanece verde.

IZQDA: P.aeruginosa WDCM00114
DCHA: B.cepacia ATCC™ 25416

MODO DE EMPLEO E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

-Inocular una porción de la colonia sospechosa, procedente de Agar BCPT  o OFPBL, en la zona reactiva de la tira de oxidasa.

-Sembrar por dilución otra porción de colonia en un tubo de caldo ADH, otra en un tubo de caldo MNE y otra en un tubo de caldo PAC.

-Incubar a 36 ± 2º C durante 20 ± 4 horas, en aerobiosis.

-Burkholderia cepacia es toda colonia típica en BCPT o en OFPBL, no fluorescente, oxidasa positiva (viraje a azul oscuro), ADH positivo (vira de rojo a naranja o amarillo). Además, según sea la cepa, virará o no de verde a amarillo en MNE y en PAC.

El usuario es el único responsable de la eliminación de los microorganismos según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.

Si desea más información sobre nuestro  M-IDENT®- Burkholderia cepacia rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto . O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16

 

BACILLUS COAGULANS (Thermoacidurans) AGAR

BACILLUS COAGULANS (Thermoacidurans) AGAR

Medio sólido diseñado para aislar y enumerar Bacillus coagulans (ahora llamado Bacillus thermoacidurans).

COMPOSICIÓN

  • Glucosa                                                 5 g/L
  • Peptona proteosa de carne              5 g/L
  • Extracto de Levadura                         5 g/L
  • K2HPO4                                                4 g/L
  • Agar-agar                                             20 g/L

pH final:  5 ± 0,2

Suplementos termolábiles:

  • MnSO4.4H2O    0,05 mg en 10 mL de agua, esterilizar por MF y añadir al medio tras autoclavarlo
  • CaCl2    0,045 mg en 10 mL de agua, esterilizar por MF y añadir al medio tras autoclavarlo

PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO. MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO. AGITE EL BOTE ANTES DE USAR.

PREPARACIÓN

Disolver 39 g de medio en 990 ml de agua bidestilada. Calentar hasta ebullición, agitando, para su total homogeneización. Autoclavar a 121 ºC durante 15 minutos. Enfriar a 48 ºC y añadir asépticamente 10 ml del suplemento SMT041. Mezclar y repartir en placas, sin recalentar.

PRESENTACIÓN

Medio deshidratado (100 g, 500 g, 5 Kg): DMT241

Suplemento en frasco pinchable 100 mL, esterilizado por filtración, para 10 L de medio, contiene 0,05 mg MnSO4.4H2O y 0,045 mg CaCl2 cada 10 mL de agua: SMT041

NOTA
Este microorganismo es uno de los mejores probióticos que existen, porque produce ácido láctico pero, a diferencia de los lactobacilos, forma esporas resistentes. Se toma contra los trastornos intestinales (diarreas, incluyendo las diarreas de tipo infeccioso como son la diarrea por rotavirus en los niños y la diarrea del viajero; también se usa para la diarrea producida por el uso de antibióticos. El Bacillus coagulans se utiliza también para problemas digestivos en general, para el síndrome del intestino irritable (SII), para las enfermedades inflamatorias intestinales (EII, la enfermedad de Crohn y la colitis ulcerosa), para la colitis por Clostridium difficile, contra el crecimiento excesivo de bacterias “malas” en el síndrome de intestino corto y para una infección debida al Helicobacter pylori que es el que produce úlceras. Algunas personas utilizan el Bacillus coagulans para prevenir las infecciones respiratorias y para reforzar el sistema inmunológico.

Sin embargo, puede contaminar conservas alimenticias y darles un gusto ácido. Esto incluye la comida que es normalmente demasiado ácida para la mayor parte de bacterias; el B. coagulans (thermoacidurans) puede crecer en un pH tan bajo como 4,2. Este medio también sirve para detectar Clostridios acidófilos que estropean ciertos alimentos envasados.

CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO

Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar laboratorio, tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,…)

DESHIDRATADO: Polvo grueso, Color crema.               PREPARADO: Estéril, Color paja.

EVALUACIÓN DEL RENDIMIENTO ISO/TS 11133-2: 24-48 h a 30-37 ºC,

aplicando el método ISO 7932, o el indicado en el Manual MICROKIT actualizado:

Bacillus coagulans (thermoacidurans) WDCM 00002, Excelente, PR > 90% de colonias respecto al número de ufc certificadas e inoculadas en TSA.

Bacillus subtillis MKTA 6633, crecimiento excelente.

SIEMBRA

Sembrar 0,1 ml de la muestra y su serie de diluciones decimales,  en superficie, repartiendo con el asa de Digralsky (VRR154, desechables VCL155). Incubar a 37 ºC aproximadamente, durante 24-72 horas. Al no ser un medio selectivo, deben identificarse las colonias que, si proceden de conservas ácidas, es muy probable que se trate de esta especie y si proceden de inóculos puros, el medio sirve para enumerar y conocer la concentración del preparado probiótico.

El usuario es el único responsable de la eliminación de los microorganismos según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.

Si desea más información sobre nuestro  BACILLUS COAGULANS (Thermoacidurans) AGAR rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto . O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16

Quanti-P/A Enterocult

Quanti-P/A Enterocult

Recuento de Enterococos fecales en 1 g, 50 ml, 100 ml ó 250 ml de muestra

Quanti-P/A-Enterocult-BEA para detección y recuento fiables de Enterococos fecales en 100/250 ml de muestra de aguas potables o en 1 gramo/ml de muestra de alimentos. Ref: QPA-ETC (caja  20 u)

Mediante este nuevo método de recuento por inclusión en masa de muestras grandes (ej: 100/250 mL de agua, o bien 1 g de alimento) sin tener que fundir ni enfriar medios de cultivo agarizados, puede Ud. enumerar las colonias crecidas como ufc/100-250 mL de agua (o en 1 g de alimento en vez de en 0,1 g) sin necesidad de filtración de membrana en aguas (ni de diluciones en alimentos, que impedían el auténtico recuento en 1 g completo y obligaban a expresar los resultados como “<10 ufc/g”). Incluso en trabajos de campo.

 

 

 

 

 

 

Damos la bienvenida al futuro a los pioneros, con criterio propio, que no se dejan cegar por la ortodoxia normativa! Sin duda pasarán años hasta que este nuevo método sea el oficial, pero de ninguna manera eso significa que no deba emplearlo desde ya y adelantarse al futuro normativo, que siempre es tan lento. La fiabilidad de resultados es lo más importante. ¿Por qué conformarse con un recuento en 0,1 g de muestra, cuando ahora ya puede hacerse en 1 g completo?

Empleando el mismo hidragar de las DryPlates diseñado y patentado por MICROKIT, mezclado con el medio de cultivo Bilis Esculina Azida Agar (BEA) en bolsas transparentes, rígidas y herméticas, con tapón a rosca, se consigue una recuperación muy cercana al 100% del valor inóculo y una sensibilidad también muy cercana al 100% de las muestras realmente positivas. Hemos bautizado este nuevo método patentado por MICROKIT con el nombre Quanti P/A, porque utilizamos los mismos caldos P/A que diseñamos hace décadas, pero con el hidragar de las DryPlates para poder hacer recuentos.

Se añaden como ventajas a la fiabilidad mediante estos excelentes resultados, la comodidad del método (ahorro de filtraciones de membrana, que además son destructivas para las células subletales; siembra en masa sin necesidad de calentar y enfriar agares) y su extraordinaria caducidad (3 años desde fabricación). A pesar de la hermeticidad del kit, los enterococos crecen perfectamente, dejemos o no cámara de aire.

El Agar BEA es el medio Normativo para confirmación de Enterococos fecales, tanto en muestras de alimentos (KAA CENAN modificado), como de aguas de consumo humano (ISO 7899). En la validación del método de Noviembre de 2017,  demostramos que se puede acortar el tiempo de incubación de la Norma ISO 7899 de 48 h (Slanetz-Bartley Agar) +2 h (Bilis Esculina Azida Agar) a sólo 18-24 h (directamente en Bilis Esculina Azida Agar, sea en versión placa tras filtración de membrana, sea en versión Quanti-P/A ETC sin necesidad de filtrar). Y obteniendo incluso exactitudes y precisiones superiores a las del método convencional.

¡Enhorabuena por utilizar el mejor método para recuento de anaerobios en aguas (o en alimentos y cosméticos) sin necesidad de calentar/enfriar agares, sin oxigenar por filtración y sin necesidad de atmósferas de anaerobiosis, sustituto del Siglo XXI de los medios deshidratados, de los medios preparados hidratados en tubo, frasco o botella y del método destructivo de Filtración de Membrana!

MODO DE EMPLEO (ver tutorial en  https://www.youtube.com/watch?v=A8WifR8mZ1k ):

1) para detección y recuento de Enterococos fecales en 100/250 ml de muestra de aguas de consumo humano, envasadas, baño…:

  1. Tome un Quanti-P/A-ETC, dele la vuelta para que el medio salga del fondo, doble el fondo de la bolsa para que no vuelva a depositarse allí, ponga la bolsa vertical con el fondo doblado, abra el tapón y añada por el orificio, con pulso para evitar derrames, 100 ml/250 ml de la muestra de agua (tratada con Na TioSulfato si es clorada).
  2. Cierre con fuerza el tapón. Coloque la bolsa horizontal sobre la superficie de trabajo.
  3. Amase el conjunto con las manos unas 30 veces (o bien vertical con stomacher-masticator) para mezclar el medio con los 100 ml de muestra de agua. Dele la vuelta y repita la operación. Si queda polvo o algún grumo de más de 1 cm, pellízquelo hasta que se disuelva o parta. No se preocupe por los pequeños grumos que queden, desaparecerán durante la incubación.
  4. Ponga la bolsa de pie –tapón arriba-, abra el tapón, golpee el fondo de la bolsa contra la poyata para que el medio interno que se haya colocado cerca del tapón, caiga dentro; deje escapar el aire con cuidado, apretando desde abajo del todo con las manos el medio con muestra, que burbujeará, hasta que el medio hidratado suba hasta el borde del tapón y desaparezca todo el aire.
  5. Cierre entonces de nuevo el tapón con fuerza, sin dejar cámara de aire y vuelva a amasar para repartir, esta vez sin bolsitas de aire (con las manos o con stomacher-masticator). Cuanto mejor amase mejores resultados obtendrá, por separar mejor las ufcs. No se preocupe por los grumos que todavía quedarán, ya que se reabsorberán durante la incubación.
  6. Deposite la bolsa horizontal en la estufa de cultivos, verificando que el tapón sigue herméticamente cerrado. Si lo desea, hágalo en una cubeta para prevenir eventuales vertidos. Extienda el medio con muestra en toda la superficie interna de la bolsa para que la capa de medio sea lo más homogénea posible, y así luego pueda contar mejor las colonias al trasluz.
  7. Incube 18-24 horas a 35-45ºC (dada la selectividad del medio BEA, se puede incubar a 35ºC aprox, aunque los protocolos oficiales digan que es mejor a 44ºC aprox).
  8. Extraiga la bolsa, déjela horizontal y cuente todas las colonias color beige (rodeadas o no de ennegrecimiento), que serán el número de ufc de Enterococos fecales en 100 ml de muestra de agua. Cuente al trasluz la colonias opacas. O bien cuente primero por una cara y repita el recuento por la otra, ya que el medio es traslúcido: Sume los recuentos de ambas caras. En este sistema se cuentan perfectamente entre 1 y 100 colonias. Si lo desea, según nuestros datos de validación, puede aplicar el siguiente factor de corrección, calculado a causa de la opacidad del medio: Recuento < 50 colonias, no corregir. Recuento >50 colonias, multiplicar por 1,3. La presencia de artefactos negros de Citrato Férrico-Amónico no afecta los resultados, al ser de contorno irregular y no confundirse con colonias. Puede extraer colonias para confirmarlas, simplemente pinchando a través de la bolsa.

2) para detección y recuento de Enterococos fecales en 1 g ó ml de muestra de alimentos, cosméticos u otras matrices:

Siga exactamente los mismos pasos descritos en el apartado anterior, con las siguientes salvedades:

  1. Mezcle su ml ó gramo de muestra con 100 ml de agua peptonada tamponada neutralizante, Ringer, Solución marina al 0,9 %, agua…
  2. Cuente todas las colonias color beige (rodeadas o no de ennegrecimiento), que serán el número de ufc de Enteroccos fecales en 1 ml ó gramo de muestra de alimento, cosmético o la matriz que sea (aumenta x10 el límite inferior de cuantificación/detección). En este sistema se cuentan perfectamente entre 1 y 100 colonias.

CONSERVACIÓN Y PRECAUCIONES DE USO

Almacenar a temperatura ambiente (ideal 15-25ºC) ¡no en nevera!, ya que en ésta la humedad es más fácil que prehidrate y estropee los medios. Es imprescindible almacenar en lugar muy seco y oscuro, ya que la humedad y la luz dañan irreversiblemente los medios de cultivo deshidratados. Si trabaja en zonas de alta humedad atmosférica, almacene las Quanti-P/A, bien cerradas en su bolsa, dentro de una caja hermética “tupper” con sacos antihumedad (ej: VRB747).

Con este sistema, una vez alcanzada la destreza que da la experiencia, un analista puede controlar (de la muestra a la estufa incubadora) hasta 50 muestras por hora. Ver también Quanti-P/A Clostricult-TSC (QPA-CP) para Clostridium perfingens y sus esporas y Quanti-P/A Clostricult-SPS (QPA-CSR) para Clostridium Sulfito-Reductores, conseguidos mezclando (TSC Agar y SPS Agar, respectivamente) con Hidragar en este tipo de envase. Para cuantificar Coliformes-E.coli y Pseudomonas aeruginosa emplee nuestros caldos P/A (MCC Colicult y Pseudocult, respectivamente) en las cubetas NMP. Esto ahorrará los elevados porcentajes de falsos negativos que también implica el método de filtración de membrana en estos tres parámetros (21% en E.coli-Coliformes, 6% en Enterococos fecales y 33% en P.aeruginosa).

El usuario final es el único responsable de la eliminación de los microorganismos según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.

Validado en base a la Norma UNE-EN-ISO 16140. Exactitud del 99,59 % respecto a Slanetz-Bartley Agar (SB) en placa por filtración de membrana (117,42 % en el rango bajo de recuento, 103,78 % en el rango medio y 77,58 % en el rango alto). Precisión CV 22% (20,79% en el rango bajo, 24,26 % en el rango medio y 21% en el rango alto), frente al 29,7 % en SB. Exclusividad: 100%. Inclusividad: 100 %. Límite inferior de cuantificación: 1-5 ufc/100 ml.

Si desea más información sobre nuestro  Quanti-P/A Enterocult rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto . O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16

AIRESANO ESPORICIDA – GERMOSAN

AIRESANO ESPORICIDA – GERMOSAN

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Si desea más información sobre nuestro  Airesano esporicida .- Germosan rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto . O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16

Vibrio cholerae MPT Broth – Vibrio cholerae MPT AGAR

Vibrio cholerae MPT Broth – Vibrio cholerae MPT AGAR

Medios diseñados por MICROKIT para revitalizar y aislar Vibrio cholerae

 

                                                                     COMPOSICIÓN CALDO                     COMPOSICIÓN AGAR

 

Triptona                                                                               17,0 g/L                                                17,0 g/L

Peptona de soja                                                                 3,0 g/L                                                  3,0 g/L

Cloruro sódico                                                                    25,0 g/L                                                25,0 g/L

Fosfato dipotásico                                                              2,5 g/L                                                  2,5 g/L

Glucosa                                                                                2,5 g/L                                                  2,5 g/L

Agar-Agar MICROKIT-E                                                      0,75 g/L                                                15 g/L

Extracto de 50 g/L de nutrientes específicos MPT      c.s.                                                         c.s.

 

pH final:  8,6 ± 0,2

 

PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO. MANTENGA LOS TUBOS BIEN CERRADOS EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO.

 

PRESENTACIÓN

A causa de sus componentes revitalizadores, no existe versión deshidratada, sino tubos 10 mL de caldo (TPL507) para revitalizar extraordinariamente V.cholerae y tubos 18 mL de agar  (TPL508) para fundir en una placa y aislar por estría colonias de V.cholerae procedentes del caldo.

 

NOTA
Este microorganismo es uno de los más difíciles de mantener vivo. Por eso tras años de investigaciones, MICROKIT ha encontrado los nutrientes específicos que faltaban en los medios habituales y hemos denominado “nutrientes específicos MPT”, dejando  su composición en secreto industrial para evitar malas copias. Cepas que llevaban “muertas” más de 1 año en placas completamente secas de TCBS, han sido perfectamente revitalizadas gracias a estos dos medios, y de ninguna manera han crecido con ninguno de los medios clásicos.

 

CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO Y MODO DE INCUBACIÓN

Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar laboratorio, tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,…)

DESHIDRATADO: No existe.               PREPARADO: Estéril, Color paja/crema.

EVALUACIÓN DEL RENDIMIENTO ISO/TS 11133-2: 18-24 h a 28 ± 1  ºC,

aplicando el indicado en el Manual MICROKIT actualizado:

Vibrio cholerae Eltor biovar. Serovar O:7 WDCM 00203: Crecimiento excelente tanto en caldo, como en agar, en estría de una alícuota procedente del caldo.

Vibrio cholerae Eltor biovar. Serovar O:1 MKTC 652: Crecimiento excelente tanto en caldo, como en agar, en estría de una alícuota procedente del caldo.

 

El usuario es el único responsable de la eliminación de los microorganismos según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.

Si desea más información sobre nuestro  Vibrio cholerae MPT Broth – Vibrio cholerae MPT AGAR rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto . O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16

Quanti-P/A Clostricult (QPA-CP y QPA-CSR)

Quanti-P/A Clostricult (QPA-CP y QPA-CSR)

Vea también el video del modo de empleo: https://www.youtube.com/watch?v=A8WifR8mZ1k

 3 fases de la disolución de un artefacto negro, después convertido, mediante amasado con pellizcos, en una nube azul oscuro, y luego bien disuelto, sin residuos.

Necesidad de contar por ambas caras (cara 1: 15 colonias, cara 2: 32 colonias). La destreza en su uso permite distinguir con el tiempo las colonias que solo se ven por una cara, de las que se ven por ambas, permitiendo así un recuento más exacto.

En muestras de alimentos, se puede incluir 1 g del alimento completo y analizarlo junto con los 99-100 ml del diluyente, no es necesario emplear bolsas Stomacher con filtro. Las partículas del alimento (en la foto, salmón) se distinguen perfectamente de las 4 colonias negras.

Colocación durante su incubación.

Linealidad en QPA-CP

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Si desea más información sobre nuestro MICROKIT® P/A COLICULT rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto . O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16

MICROKIT® P/A COLICULT-MCC

MICROKIT® P/A COLICULT-MCC

COLIFORMES / Escherichia coli

Detección Presencia / Ausencia (P/A) en 100 (250) ml de agua

   INTRODUCCIÓN:

Medio estéril COLICULT Cromofluorogénico (MCC Broth DMT900) para detección P/A (o recuento NMP empleando cubetas NMP Ref:1001020) de E.coli (fluorescente azul bajo luz de 366 nm VMT050 e indol + con reactivo de Kovacs SBH056) y demás

coliformes (viraje a azul), que puede elegir en tres formatos diferentes:

  1. RPL303 Frascos tomamuestras con caldo estéril hidratado y tapón a rosca para añadir en ellos 100 mL de la muestra de agua. Cajas 10u ó 9x10u
  2. FPA900 Viales prepesados de polvo estéril con tapón a rosca para añadir a 100 mL de la muestra de agua (no incluido bote 100 mL VML155 o bolsa standup 100 mL B2787B estériles). Cajas 40u ó 10x40u
  3. DMTI900- Botes 100 g de polvo estéril y cucharilla dosificadora para añadir a 100 mL de la muestra de agua (no incluido bote 100 mL VML155 o bolsa standup 100 mL B2787B estériles), Bote para 100 test

De gran utilidad como screening negativo de muestras rutinarias, al ser un método más fácil de emplear que la filtración de membrana y más fiable (escasez de falsos positivos y de falsos negativos, que en filtración de membrana es de nada menos que el 21% de las muestras analizadas en el mundo, por el estrés provocado durante la filtración).

 

También muy útil para que las potabilizadoras no dejen de analizar en festivos y fines de semana, ya que este método puede ser empleado por personal no especialista en microbiología, el mismo guarda de la depuradora puede hacerlo. La única precaución es que el operario no toque ni el agua ni el polvo con sus manos, para evitar contaminaciones artificiales.

 

MODO DE EMPLEO: Es necesario tratar previamente el agua clorada, mediante Tiosulfato Sódico, para que las células dañadas subletalmente se recuperen, excepto en los frascos tomamuestras RPL303, que ya lo incluyen.

Añadir los 100 mL de agua de muestra en el frasco o en el recipiente estéril que se va a utilizar; en el caso de los viales, añadir todo el contenido sobre el agua; en el caso de los botes de 100g, añadir una cucharadita rasa sobre el agua y cerrar el bote con la cucharilla dentro para los posteriores usos. Agitar para homogeneizar. Incubar 8-48 horas a 35-37° C (Coliformes totales y E.coli) ó a 44° C (Coliformes Fecales y E.coli). La muestra inoculada sirve también de medio de transporte, por lo que no es necesario incubar inmediatamente después de la toma de la muestra, pudiendo transcurrir varias horas entre toma e incubación.

Para aguas envasadas o de baño, se analizan 250 mL, por lo que debe añadir 2 viales ó dos cucharaditas por muestra (no se pueden usar los frascos RPL303 para 250 mL, al haber sido diseñados sólo para 100 mL). El medio funciona correctamente desde mitad hasta el doble de concentración, por lo que no es necesario afinar 2,5 viales ó 2,5 cucharaditas)

 

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS: El viraje a color azul (XGal) demuestra la Presencia de Coliformes (totales o fecales según la Tª  de incubación) en la muestra de agua. La Fluorescencia azul (luz azul por MUG) que se observa en la oscuridad bajo U.V.A. de 366 nm (linterna VMT050) demuestra la presencia de E.coli en la muestra de agua (confirmar con 0,5 ml de KOVACS-SBH056): anillo rojo de Indol en superficie es prueba positiva. E.coli   O157 H7 se detecta por ser XGal + (vira a azul), de acuerdo con la definición moderna de coliforme;  MUG – (no fluorescente a pesar de ser E.coli) e indol + (anillo rojo).

Es necesaria la ausencia (no viraje), que equivale a 0 ufc/100 mL (ó en 250 mL). Sólo en caso positivo debería repetirse la muestra por método cuantitativo si se requiere un recuento concreto, aunque la legislación exige 0 y por tanto no importa si hay 2 ó 950, en ambos casos el agua no es potable.

 

Material necesario no incluído: Tiosulfato Sódico para eliminar el cloro (SMT976) excepto en los frascos tomamuestras RPL303, que ya lo incluyen. Bote estéril 100ml (VML155), o bolsa estéril autosellable Stand-Up (B2787B). Estufa o incubador 35-37ºC (SIL12AR ó SIL24AR).

En homenaje a nuestro querido amigo, el Dr. Juan José Marcén, que falleció antes de conocer el éxito mundial de la fantástica idea que nos regaló en los años 90, este kit se regala a todas las ONGs que nos los pidan junto con otros parámetros P/A.

PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO O PARA ANÁLISIS DE CAMPO. MANTENER FUERA DEL ALCANCE Y DE LA VISTA DE LOS NIÑOS Y ANIMALES.

EXTREMADAMENTE HIGROSCÓPICO: MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO. AGITE EL BOTE ANTES DE USAR. EN ZONAS DE ELEVADA HUMEDAD AMBIENTAL, GUARDAR EL BOTE BIEN CERRADO EN UN TUPPER HERMÉTICO CON SILICAGEL.

 

CONTROL DE CALIDAD: Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar laboratorio, tras largos fletes, tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,…)

DESHIDRATADO: Polvo crema    PREPARADO: Paja

CONTROL DE CRECIMIENTO 8-24 h a 37°C aproximadamente:

  • E.coli WDCM 000013, vira a azul, da fluorescencia azul en la oscuridad bajo 366 nm y genera anillo rosa de indol, en 8h si el inóculo es alto y no procede de muestras estresadas, en 18-24h en caso contrario.
  • Enterobacter aerogenes  WDCM 00175: Vira a azul-turquesa en 18 h. No da fluorescencia con 366 nm. Indol – (no rojo en superficie)
  • Pseudomonas aeruginosa WDCM 00026, no vira a azul, no da fluorescencia azul en la oscuridad bajo 366 nm y no genera anillo rosa de indol.
  • Enterococcus faecalis WDCM 00009: Inhibido.

El usuario es el único responsable de la eliminación de los microorganismos según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.

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