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RAPIDSCREEN-RAPIDTEST

RAPIDSCREEN-RAPIDTEST

Tubos preparados para la valoración rápida del contenido bacteriano

Diferentes tonos de viraje en función de la carga microbiana y el tiempo de incubación

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Este kit, permite realizar una estimación rápida, sencilla y económica del contenido microbiano (recuento total de bacterias) en todo tipo de productos (alimentos, lácteos, aguas sucias, materias primas, productos químicos, orina…).

Con los tubos de RAPIDSCREEN podrá valorar en sólo unas horas los contenidos bacterianos altos, sin necesidad de aparataje (en casos extremos, ni siquiera se precisará una estufa de cultivos, mientras la temperatura de incubación de la fábrica, oficina o laboratorio sea siempre la misma).

RAPIDSCREEN se basa en reacciones metabólicas microbianas, que alteran las moléculas cromogénicas incluidas. El cambio se traduce a simple vista por un viraje del medio, de color amarillo a rojo púrpura (si el producto analizado tiene color propio, el viraje puede ser al color derivado de su mezcla; por ejemplo, la leche, blanca, hace virar el medio a rosa).

Sin la existencia de actividad metabólica microbiana con crecimiento de la población, no puede tener lugar el viraje, con lo que se eliminan los falsos positivos de otros métodos cromogénicos más conocidos.

El viraje es más rápido cuanto mayor sea la flora microbiana (desde 1 hora en muestras muy contaminadas, con 107 bacterias por mililitro). Siempre que el contenido bacteriano sea superior a 1.000 UFC/ml (o gramo), se obtienen resultados el mismo día!. Las muestras menos contaminadas se pueden concentrar por filtración (0,45 µm), introducir la membrana enrollada en el tubo de Rapidtest y extrapolar los resultados a los mililitros filtrados.

La incubación puede hacerse a temperatura ambiente (ideal 18-25ºC), pero es mejor realizarla a 30ºC ó a 37ºC (en un incubador/estufa –VMT051/VRP001-) para que el viraje sea más rápido. Una vez elegida la temperatura de incubación, no debe ser variada, para que los resultados de los diferentes lotes sean comparables.

El test puede ser realizado por personal no especializado, por lo que incluso industrias sin laboratorio, pueden ya realizar un screening rápido de la carga microbiana de sus proveedores -materias primas- y de su producto terminado. Es muy fácil de utilizar.

Cada tipo de producto, según su contenido en grasas, conservantes, transparencia, etc. tendrá un comportamiento diferente con el test, por lo que debe calibrarse el kit en cada caso. Para un mismo tipo de producto, la correlación entre el tiempo requerido para el viraje y la carga microbiana, es excelente. Por ello, si para un producto determinado se establece el tiempo de viraje en función de diferentes niveles de contaminación (ver más adelante, CALIBRACION), puede estimarse la contaminación de las muestras simplemente con el tiempo de viraje.

Validación

Para validar el kit con su producto, tome 10 muestras muy contaminadas y realice en cada una 10 diluciones decimales en tubos 9 ml APT (MICROKIT TPL007), para así obtener una población total de 100 submuestras. De cada una de ellas siembre 1 ml en un tubo de RAPIDSCREEN y 1 ml, en masa, mezclando en placa preparada con PCA (MICROKIT TPL071 fundido a 100 ºC y enfriado a 45 ºC antes de añadir el mililitro de muestra). Incube todo a una temperatura concreta (ideal 35 ºC) y compare resultados, registrándolos mediante una tabla cuyas ordenadas muestren el recuento en placa y cuyas abscisas muestren el tiempo de viraje.

Ejemplo realizado en una industria cárnica (no aplicable a otras industrias, ni siquiera del mismo sector):

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

De modo que en esta industria, cuando Rapidscreen vire en 2 horas indicará que hay nada menos que 108 microorganismos por gramo, cuando vire en 3 horas indicará que hay 106, cuando vire en 7 horas indicará que hay 105 y cuando vire en 13 ó más horas indicará que hay como máximo 103 microorganismos por gramo de muestra.

Modo de empleo y lectura de resultados

Añadir a un tubo 1 ml del producto o, en productos sólidos, 1 ml de la solución madre (disolución de 1 gramo en 10 ó 100 ml de agua peptonada tamponada MICROKIT; en este caso, los resultados se multiplicarán por 10 ó 100), o bien la membrana de filtración enrollada.

Los productos congelados o refrigerados tardan mucho más tiempo en producir el viraje, por lo que deben atemperarse antes de homogeneizarse.

Incubar a 35 ºC

Controlar el tiempo de viraje a rojo. El cambio de color se inicia por un rosado en el fondo del tubo, que se intensifica y extiende más adelante a la totalidad del tubo.

Compare con su tabla de calibración para interpolar de forma inmediata cuál es el recuento.

Si no desea mirar la estufa a intervalos cortos de tiempo, establezca cuál es el valor límite por encima del cual el producto no es válido y acuda a la estufa una vez transcurrido dicho tiempo; si el tubo está rojo, el lote no será aceptable y si no lo está, sí.

Caducidad y presentación

La caducidad es de 6 meses tras su fabricación. Ver la fecha exacta impresa en cada caja.

La presentación es de cajas de 20 tubos y de cajas de 200 tubos. Referencia: KAJ001.

La temperatura de conservación no es muy importante, aunque es preferible que sea de 2 a 8 ºC. Lo que sí es imprescindible es MANTENER PROTEGIDO DE LA LUZ! (No sacar de la caja cerrada hasta el momento de uso y mantener ésta en un armario oscuro o en una nevera). No congelar.

CONTROL DE CALIDAD:

Como control positivo rápido ( 24 h) puede utilizar una cepa de E.coli (CRIOSTRAIN MKTA 25922). Como control positivo lento ( 48 h) puede utilizar una cepa de Pseudomonas aeruginosa (CRIOSTRAIN MKTA 9027).

El usuario es el único responsable de la destrucción de los microorganismos generados en el interior del kit durante su uso, de acuerdo con la legislación medioambiental vigente. Destruir por inmersión en lejía. Mantener fuera del alcance de los niños. No ingerir.

Si desea más información sobre nuestro RAPIDSCREEN-RAPIDTEST rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto . O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16

DESINFECTEST ® – LAMINOCULTIVOS

DESINFECTEST ®

Laminocultivos “dipslides” para control microbiológico industrial y ambiental

 

INTRODUCCIÓN

DESINFECTEST® es la más moderna gama de laminocultivos de MICROKIT. Se trata de kits listos para su uso que permiten el análisis microbiológico de líquidos crudos, de superficies y de colonias obtenidas en medios de cultivo generales. Han sido especialmente diseñados para industria.

Están formados por una lámina que se inserta en el tapón de un tubo hermético y transparente. La lámina está rellena, por cada cara, de un medio de cultivo convexo, de ahí el nombre que le aplicamos de laminocultivo (en inglés, “dipslide”).

Cada tipo de DESINFECTEST® tiene dos medios de cultivo diferentes, uno en cada cara, específicos cada uno para un tipo de análisis, general o selectivo (ver la gama mas adelante).

Por su sencillez, DESINFECTEST® pueden ser utilizado por personal no especializado, tanto en trabajo de campo como de laboratorio. Los resultados obtenidos son perfectamente comparables a los de los métodos convencionales siempre que se sigan las instrucciones al pie de la letra.

DESINFECTEST® se basa en el principio de que todo microorganismo, alimentado por el medio agarizado adecuado a una temperatura y en un tiempo concretos, da lugar a una colonia característica que es observable a simple vista.

Para el análisis de líquidos crudos la ventaja es la comodidad y el ahorro de diluciones siempre que la contaminación esté entre 1.000 y 10.000.000 de microorganismos por mililitro. El apéndice final de la lamina permite que el líquido sobrante tras la inmersión resbale y no se acumule al final del medio de cultivo, lo que impide que se obtengan recuentos falseados y heterogéneamente distribuidos en el medio de cultivo, como pasa en otros laminocultivo

Para el análisis de superficies, la ventaja frente a las Placas de Contacto (ENVIROCOUNT®) es que el sistema hermético permite transportar el kit sin necesidad de un especial cuidado, incluso para análisis de campo.

Para el análisis de colonias obtenidas en medios de cultivo generales, DESINFECTEST® es una forma económica, y con larga caducidad, de tener un pequeño stock de medios de cultivo selectivos que nos orientarán sobre el tipo de microorganismo que hemos encontrado: Enterobacteria, Coliforme, Salmonella, E. coli, Estafilococo, Micrococo, Pseudomonas, Aeromonas, Bacillus, Lactobacillus, Listeria, Levadura, Moho u otro. El conjunto de los diversos tipos de DESINFECTEST® se convierte así en una batería completa de preidentificación de microorganismos.

LA SENSIBILIDAD DE LOS DIPSLIDES ES DE HASTA 1 ufc/mm2  Y DESDE 1000 ufc/ml.

Todo usuario de DESINFECTEST®, conoce las ventajas de este producto, que lleva más de una década resolviendo los problemas de control microbiológico de superficies y de líquidos crudos, en cientos de usuarios de España, resto de Europa y otros países.

La pega que ha tenido hasta ahora este producto es que la lámina no era flexible, por lo que para control de superficies recónditas, había que desmontarla del tapón. Además, su producción artesanal provocaba un nivel de contaminaciones al que no estabamos habituados en ningún otro producto.

Conscientes de estos problemas, de difícil solución, nos hemos decidido por fin a cambiar de proveedor, a fin de conseguir la completa satisfacción de todos nuestros clientes: Los nuevos DESINFECTEST® tendrán la lámina flexible para poder analizar superficies más cómodamente. Y su producción a nivel industrial limitará las contaminaciones y deslaminaciones a niveles muy inferiores.

El lado negativo del cambio es que, al ser desde ahora una producción a gran escala, en vez de artesanal, no podemos mantener una gama tan completa como hasta ahora, ya que nuestra producción mínima es de 1000 u, no de 200 u como hasta ahora (no obstante, consulte la posibilidad de otras combinaciones para programaciones de, al menos, 300 u/mes). Hemos rediseñado las combinaciones, con los medios más exitosos, quedando como siguen las cuatro únicas referencias que hemos desarrollado, para las que MICROKIT cuenta con los derechos de distribución exclusiva en el ámbito mundial:

DESINFECTEST®  Referencia       Medios-Utilidad                                                   Color Medio

 

AEM/AET              MBN101         TSA Neutralizing Agar TTC (AET)                             Incoloro

PCA + TTC-Recuento total (AEM)                              Incoloro

 

EC                          MBN103         Salmonella Cromogenic Agar                                   Crema

Coliformes + E. coli Cromogenic Agar                      Crema

 

ARICPC                MBN200         Neutralizing Agar incoloro +TTC  (AET)                 Incoloro

VRBG Agar + Inactivadores (E)                                Púrpura

 

MIX                       MBN407         Neutralizing Agar incoloro +TTC (AET)                 Incoloro

Rosa Bengala Caf.-Hongos ambientales (LM)          Rosa

MODO DE EMPLEO

(Leer además las instrucciones del tipo concreto de DESINFECTEST® con el que se va a trabajar, especificadas más adelante).

1.‑ Para líquidos:

Desenroscar el tapón e introducir la lámina en la muestra durante un instante (máximo 5 segundos). La calidad de la muestra no se ve afectada por la inmersión del laminocultivo, que es estéril y no contiene productos tóxicos.

Si se dispone de poco volumen de muestra, dejarla gotear sobre cada medio de cultivo con la ayuda de una pipeta Pasteur (MICROKIT VFR273)

El mismo tubo del laminocultivo puede servir de recipiente para ser llenado con el líquido de muestra y sumergir allí la lámina agarizada. En tal caso no debe olvidarse vaciarlo tras la inmersión.

Si el líquido es muy espeso, o incluso si se trata de un sólido previamente desmenuzado, debe diluirse a razón de 10 ml o 10 g) en un frasco de 100 ml de Agua Peptonada Tamponada (MICROKIT RPL007) y luego multiplicarse por 10 los resultados obtenidos.

Si la muestra se prevé muy contaminada (con más de 1.000.000 microorganismos por mililitro) debe diluirse 1 ml en un frasco de 100 ml de Agua Peptonada Tamponada estéril (MICROKIT RPL007) y luego multiplicarse por 100 los resultados obtenidos.

Si la muestra se prevé poco contaminada (con menos de 1.000 microorganismos por ml) se recomiendan otros métodos (consultar al Servicio Técnico de MICROKIT), aunque si sólo se precisa ver presencia/ausencia de algún microorganismo, puede enriquecerse en una caldo selectivo antes de usar el DESINFECTEST®.

En cualquier caso, dejar escurrir el líquido sobrante, depositando el apéndice del final de la lámina sobre un papel secante. No agitar nunca. Volver a enroscar el laminocultivo en su tubo sin apretar al máximo. Incubar en posición vertical, preferiblemente con el tapón arriba, el tiempo y a la temperatura indicados mas adelante para cada tipo de DESINFECTEST®.

2.‑ Para control de superficies:

Desenroscar el tapón con cuidado de no tocar los medios de cultivo con los dedos.

Tocar con un medio de cultivo la superficie de análisis, ejerciendo una ligera presión y sin desplazarlo, durante unos instantes (mejor unos 10 segundos). Repetir la operación con el otro medio en una superficie muy cercana a la primera, pero nunca exactamente en la misma. La flexibilidad de la lámina permite acceder a superficies difíciles sin necesidad de desmontarla del tapón.

Si la superficie de análisis es rugosa, curva o de difícil acceso, barrerla con una torunda estéril previamente humedecida en Agua Peptonada Tamponada estéril (MICROKIT RPL007) y, después, hacerla girar sobre la superficie de un medio extendiendo el inóculo por toda la superficie del agar. Repetir la operación con otro escobillón para el otro medio de cultivo.

Volver a enroscar el laminocultivo en su tubo sin apretar al máximo.

Incubar en posición vertical, preferiblemente con el tapón arriba, el tiempo y a la temperatura indicados más adelante para cada tipo de DESINFECTEST®.

3.‑ Para identificación de colonias:

Las colonias obtenidas en medios de cultivo generales pueden identificarse mediante dos pasos sucesivos:

1  Uso de medios de cultivo selectivos orientativos del tipo de microorganismo.

2  Identificación de las colonias aparecidas en éstos con kits bioquímicos e inmunológicos específicos (ver para cada tipo de DESINFECTEST® explicado más adelante o consultar al servicio técnico telefónico de MICROKIT).

Los medios de cultivo selectivos más rentables desde el punto de vista economía/caducidad son los laminocultivos. Por ello, tener un stock de una caja de cada tipo de DESINFECTEST® cada semestre, puede sacar de apuros a muchos laboratorios que habitualmente centran sus análisis en el recuento total.

La colonia obtenida en el medio de cultivo general (TSA, PCA, LPT100 Agar, Nutrient Agar, PCA‑Carbón, D/E Neutralizing Agar …) se toma con la ayuda de un asa de siembra estéril y se introduce en un tubo de 9 ml de Buffered Peptone Water (MICROKIT TPL007). Se agita bien y se deja reposar unos minutos. Se introduce un asa calibrada hasta la mitad del tubo, se saca y se deja gotear, sin agitar.

La película que queda en el círculo del asa se extiende en zig zag sobre una cara del laminocultivo, recorriendo la mayor extensión posible, sin pasar dos veces por el mismo punto, a fin de obtener colonias aisladas que luego puedan utilizarse en la identificación bioquímica o inmunológica. Se repite la operación con la misma asa calibrada estéril en la otra cara del laminocultivo, y así sucesivamente en los demás medios del resto de DESINFECTEST®.

Se cierra y se incuba cada laminocultivo en posición vertical, preferiblemente con el tapón arriba, el tiempo y a la temperatura indicados más adelante para cada tipo de DESINFECTEST®

LECTURA DE RESULTADOS

(Leer además las instrucciones del tipo concreto de DESINFECTEST® con el que se va a trabajar, especificadas más adelante).

Tras la incubación recomendada en cada tipo de DESINFECTEST®, se compara visualmente la concentración de colonias de cada medio con las tablas de resultados incluidas en cada caja de DESINFECTEST®.

1.‑ Para líquidos:

Los resultados obtenidos aquí serán semicuantitativos.

Existe una clara correlación entre la densidad de colonias desarrolladas en un laminocultivo y el número de microorganismos por mililitro que hay en la muestra (Mossel, Genner, etc).

Comparar la densidad de colonias de cada medio con las tablas de resultados incluidas en cada caja de DESINFECTEST®.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Así obtendremos el orden de magnitud de contaminación en valores exponenciales de 10 (1.000, 10.000, 100.000, 1.000.000…) cfu/ml. Si es superior a los valores permitidos por la legislación o por las normas internas del laboratorio para el producto concreto, el lote no es  válido. En caso contrario, tampoco debe olvidarse que es necesario continuar con los controles de forma rutinaria, al menos uno por cada lote.

Si el valor obtenido es superior a 100.000 cfu /ml en bacterias o levaduras, o a 30 colonias/cara en mohos, conviene repetir el test a partir de una dilución de la muestra en Agua Peptonada Tamponada estéril (MICROKIT RPL007), y luego multiplicar el resultado obtenido por el factor de dilución

Para los medios selectivos, no se suele buscar recuento, sino presencia o ausencia de alguna colonia a partir de caldos de enriquecimiento.

2.‑ Para control de superficies:

Los resultados obtenidos aquí serán cuantitativos. Cada colonia ha crecido a partir de un microorganismo inicial. Por tanto, el número de colonias de cada cara indica el número de microorganismos que había en los 8 cm2 de superficie analizados con cada medio.

Con las tablas de resultados se facilita el recuento para los valores altos: Comparar la densidad de colonias de cada cara con las tablas de resultados incluidas en cada caja de DESINFECTEST®

BACTERIAS Y LEVADURAS
Arriba, ufc/ml de muestra líquida.
Abajo, ufc/cm2 de muestra de superficies.
≤1×103 5×103 1×104 1×105 1×106 ≥1×107

MOHOS FILAMENTOSOS
Arriba, ufc/ml de muestra líquida.
Abajo, ufc/cm2 de muestra de superficies.
ligera moderada importante

 

 

 

 

 

 

 

 

Deben servir de alerta resultados superiores a 40 microorganismos por cara en superficies de trabajo de industrias poco higiénicas y en superficies de alimentos no cocidos, a 8 en suelos de restaurantes, cocinas, habitaciones de hospitales, baños, a 4 en retretes y a 1 en guarderías, lavabos, mesas de hospitales, superficies de catering y lavandería… De todas formas y, en general, nada mejor que la propia experiencia en su fábrica y su producto para saber cuando los valores se disparan de forma alarmante. Por ello es tan interesante el uso rutinario de DESINFECTEST®.

3.‑ Para identificación de colonias:

No se efectúa recuento. El medio selectivo en el que haya crecimiento será indicador del tipo de microorganismos de que se trata.

Debe confirmarse, antes de emitir un diagnóstico, con kits específicos adecuados, sean bioquímicos o sean inmunológicos (consultar al Servicio Técnico Telefónico de MICROKIT).

NOTA: Si la presencia de microorganismos es muy abundante, se puede obtener un crecimiento uniforme, formándose un velo que puede pasar desapercibido; en tal caso la superficie pierde su brillo. Para estos casos, debe analizarse de nuevo la muestra tras diluirla a razón de 0,1 g (o ml) en 100 ml de Agua Peptonada Tamponada estéril (MICROKIT RPL007), y después multiplicar el resultado obtenido por 1.000. A veces no aparecen colonias en el medio de cultivo, y sí entre éste y el plástico soporte. En tal caso, debe repetirse el análisis, pues es señal de que no se dejó gotear bien el líquido sobrante tras la inmersión. Algunos medios viran al color típico de las colonias cuando la concentración de éstas es tan alta que no se distinguen; así, su presencia no pasa desapercibida.

PRECAUCIONES

  • Leer bien las instrucciones para cada tipo de laminocultivo.
  • No tocar las láminas agarizadas.
  • No abrir más que en el momento de uso, para conservar la esterilidad.
  • No utilizar más que una sola vez cada laminocultivo.
  • Desechar los laminocultivos que, ocasionalmente, aparezcan contaminados, deslaminados, retraídos, caducados o secos.
  • Evitar los cambios de temperatura para que no aparezca agua de condensación y para que el agar no pierda convexidad. No congelar. Mantener a una temperatura ambiente comprendida entre 4 y 25 ºC, pero sin cambios diurnos/nocturnos importantes, lejos de las corriente de aire y de la luz (sobre todo el Agar Rosa Bengala).
  • Destruir los laminocultivos usados mediante incineración, inmersión prolongada en desinfectantes (lejía, alcohol …) o autoclavado.
  • Use cepas de referencia CRIOSTRAINS, de trabajo o cuantitativas, para validar los reactivos una vez llegados a fábrica o tras almacenamientos prolongados o inadecuados.

CADUCIDAD

La caducidad de los laminocultivos es de 6 meses desde fabricación (Cad. mínima de venta 2 meses). No obstante, puede prolongarse hasta 3 meses después de la fecha de caducidad impresa en la caja, si se mantienen en nevera a 8-12 ºC, sin variación de temperatura y siempre que los agares mantengan su convexidad por encima del reborde de plástico de la lámina.

LA GAMA MAS COMPLETA DE LAMINOCULTIVOS: DESINFECTEST ®

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

DESINFECTEST®-AEM/ AET: Recuento total, con inactivadores, de bacterias aerobias mesófilas y totales:

Este índice es indicador de higiene. Cuanto mayor sea el recuento, más rápidamente se degradará el producto.

Ambas caras tienen Agar Neutralizing sin púrpura y con TTC.

Bacillus subtilis crece con amplias colonias rugosas, Escherichia coli crece con colonias húmedas y cremosas, Pseudomonas aeruginosa crece con colonias incoloras y Staphylococcus aureus crece con colonias amarillas. Otros muchos microorganismos crecen con colonias más o menos características.

El TTC tiñe las colonias de rojo, permitiendo una clara diferenciación respecto al fondo. Si toda la cara se tiñe de rosado, es que el recuento es tan alto que las colonias compiten por el sustrato hasta el punto de ser diminutas y no verse. El Neutralizing inactiva los residuos de derivados de amonio cuaternario, fenoles, formoles, iodo, cloro, mercurio, glutaraldehido … que pueda haber en la muestra o superficie.

Este laminocultivo se incuba a 35‑37 ºC durante 24‑72 horas. Se leen todas las colonias (ver tabla de resultados superior).

Se obtiene el recuento total de aerobios mesófilos incluidos los de crecimiento lento y los subletales tras las desinfecciones.

DESINFECTEST®-MIX: Recuento total de hongos (levaduras y mohos) saprófitos-ambientales, alterativos y parásitos-patógenos:

Los hongos saprófitos, alterativos o ambientales son un índice indicador de higiene. Cuanto mayor sea el recuento, mas rápidamente se degradará el producto.

La cara rosa contiene Agar Rosa de Bengala con cloranfenicol, medio de color rosado especial para el crecimiento selectivo de hongos (levaduras y mohos) ambientales. La presencia de Rosa de Bengala restringe el tamaño de los mohos, impidiendo que los de crecimiento rápido invadan la superficie del medio, oculten a los más lentos e impidan el recuento. El cloranfenicol (CAF), antibacteriano de amplio espectro, proporciona una gran selectividad para los hongos.

Este medio es sensible a la luz, por lo que la preocupación general de guardar los laminocultivos en sus cajas y lejos de la luz se acentúa aquí. También la incubación, para este medio, debería hacerse en la oscuridad. La recuperación selectiva de levaduras y mohos en este medio es máxima, según demuestra un estudio comparativo de MICROKIT: Sanchis & Co. Técnicas de Laboratorio, Mayo de 1996.

La cara incolora es Neutralizing Agar incoloro y con TTC para recuento total  (como en AEM)

Este laminocultivo se incuba, para hongos ambientales, a 21-35 ºC durante 3-5 días. En general, a los tres días aparecen las levaduras y algunos mohos de crecimiento rápido, y a los 5 días aparecen todos los mohos Se leen todas las colonias (ver tabla de resultados inferior). Las colonias de levaduras aparecen con el mismo aspecto que la mayoría de bacterias, y también con colores diversos. Los mohos producen colonias filamentosas (no confundir con las colonias en “melena de león” de algunos Bacillus), pulverulentas y de colores diversos.

Candida albicans aparece en ambas caras con colonias exuberantes y blancas o rosadas. Confirmar la especie con galerías de identificación para levaduras (MICROKIT YEAST-IDENT).

Aspergillus niger y Rhizopus nigricans crecen en ambas caras con colonias filamentosas blancas o amarillas, que ennegrecen centrífugamente en unos días por formación de esporas.

Aspergillus flavus, aflatoxigénico, crece en ambas caras con colonias filamentosas amarillas.

Muchas especies de Alternaria crecen en ambas caras con colonias teñidas de marrón oscuro a causa de sus esporas.

Muchas especies de Penicillium y de Aspergillus crecen en ambas caras con colonias verdes, amarillas y azuladas a causa de sus esporas.

Las identificaciones de mohos deben hacerse con la ayuda de un microscopio y claves dicotómicas (MICROKIT regala unas si las solicita junto a su pedido).

Este laminocultivo se incuba, para bacterias ambientales (saprófitas), 1-3 días a temperatura ambiente (21-25 ºC). Todas las colonias crecerán rojas. Para bacterias patógenas y/o asociadas al hombre, se incuba a 35-37ºC, pero en este caso la cara de hongos sólo permitirá el crecimiento de homgos (levaduras y mohos) patógenos y oportunistas capaces de crecer a la temperatura de los animales de sangre caliente.

DESINFECTEST®-EC: Detección y recuento de Coliformes, Escherichia coli y Salmonella:

Los índices Coliformes y E. coli son diferentes indicadores de contaminación fecal por falta de higiene de las materias primas, los operarios, las aguas…

La aparición de Salmonella es extraordinariamente grave, pues es un serio patógeno que produce en nuestro país cerca de la mitad de las toxiinfecciones alimentarias.

Una cara contiene Agar cromogénico para Salmonella.

La búsqueda de Salmonella en superficies puede realizarse con este laminocultivo. Sin embargo, su búsqueda en productos requiere, además, un pre-enriquecimiento revitalizador (Agua Peptonada Tamponada Neutralizante estéril MICROKIT) y un postenriquecimiento multiplicador (Caldo Rappaport estéril MICROKIT o mucho mejor, caldo SS MICROKIT). Todo ello se incluye en el kit SALMOTEST de MICROKIT, que es perfectamente válido para búsqueda de ausencia de Salmonella en alimentos y otros productos.

La otra cara contiene Agar Cromogénico para E.coli y demás coliformes.

Este laminocultivo se incuba a 35-37 ºC durante 24 (-48) horas.

Salmonella crece en la cara de Agar cromogénico para Salmonella con colonias rojas o verdes. Otras enterobacterias pueden crecer, pero lo suelen hacer con otros colores. Confirmar sólo las colonias sospechosas, con KITS bioquímicos o inmunológicos de MICROKIT.

En la otra cara, las colonias púrpuras, rosas, rojizas o violáceas son de Coliformes y las colonias azules, violetas o turquesa que resultan indol positivas (Indol Kovacs SBH056, el reactivo vira de amarillo a rosa), son E.coli. Como E.coli tambien es coliforme, en el recuento de coliformes se suman todas las colonias rojizas y azules.

DESINFECTEST®-ARICPC:   

Una cara con Neutralizing Agar incoloro +TTC para recuento total (Ver AEM)

Otra cara con VRBG Agar + Inactivadores para recuento de Enterobacterias (colonias púrpura sobre medio púrpura)

SOLUCIONES A LAS LIMITACIONES DE LOS LAMINOCULTIVOS.

1.‑ Análisis cuantitativos

El sistema de laminocultivos o dipslides DESINFECTEST® es ideal para análisis de superficies, para análisis de campo, para laboratorios móviles y para pequeños laboratorios.

Sus resultados, excepto en el control de superficies, son semicuantitativos, por lo que también son ideales para muestras muy contaminadas. Pero si se requieren resultados cuantitativos o si se analizan productos con baja contaminación deben utilizarse tubos preparados MICROKIT con 20 ml de Agar adecuado, que se funden al Baño María y se añaden a 1 ml de la muestra vertida en una placa de Petri (Solicite catálogo de tubos MICROKIT).

Para realizar diluciones de la muestra se utilizarán tubos preparados MICROKIT con 9 ml del Caldo adecuado: Solución RINGER (TPL109), Agua Peptonada Tamponada (TPL007), Agua de Triptona (TPL034), Agua destilada estéril (TPL001) o LPT100 Neutralizing Broth (TPL023).

2.‑ Anaerobios

Los laminocultivos están pensados para la detección de microorganismos aerobios. Para anaerobios pueden utilizarse otras técnicas:

Anaerobios en general: Tubos parafinados con 9 ml de Agar Schaedler (TPL193) que se inoculan fundiendo el medio y añadiendo la muestra, volteando el tubo sin agitar y dejándolo solidificar en posición vertical.

Anaerobios Sulfito‑Reductores (Clostridios…): Tubos parafinados con 9 ml de Agar SPS (TPL049) o frascos parafinados con 50 ml de SPS a doble concentración (RPL062) que se inoculan como los anteriores.

Anaerobios Reductores del Sulfato (Desulfovibrio…): Tubos con 9 ml de Sulfate American Petroleum Institute Agar con capilar de inoculación (TPL048).

De todas formas, nada nos impide hacer un recuento de anaerobios con DESINFECTEST®-AEM/AET incubado, con el tapón sin apretar, en anaerobiosis (Bolsas de anaerobiosis KKM038 o generadores de atmósfera anaeróbica en jarra KKM036, e indicador de anaerobiosis KKM039). En tal caso, tomar la precaución de realizar un duplicado para los anaerobios esporulados, e incubar este segundo laminocultivo tras someterlo a un shock térmico a 65 ºC durante 3 horas, a fin de que germinen las esporas que de otra manera darían resultados falsamente negativos.

NOTAS FINALES SOBRE MUESTREO E INTERPRETACION DE RESULTADOS EN SUPERFICIES:

Después de evaluar el grado de contaminación ambiental, es necesario tener en cuenta los límites de aceptabilidad, que no pueden darse como norma general ya que no son comparables una sala estéril de un laboratorio farmacéutico con un almacén de cítricos, por ejemplo. Dichos limites deben ser fijados en función de las investigaciones propias, estudiando la correlación existente entre el nivel de la contaminación ambiental y el de la contaminación del producto, en el caso de la industria.

La investigación se hará siempre inmediatamente antes e inmediatamente después de la desinfección ambiental y, al menos, durante el primer mes (en Laboratorios Farmacéuticos, siempre), a diario. Posteriormente la frecuencia mínima será semanal. Un recuento similar  antes y después de la desinfección, es indicador de que el desinfectante elegido no es el adecuado. Recuentos ascendentes a lo largo de unos días seguidos, son indicadores de que ha llegado el momento de desinfectar de nuevo o de alternar el desinfectante.

Estudios internos inéditos demuestran que la distribución de microorganismos en superficies de ambientes humanos no es homogénea, sino heterogénea (contagiosa: muchas células junto a micropartículas de materia orgánica y pocas en grandes huecos). Por ello recomendamos una muestra mínima de 100 cm2 (10 caras de laminocultivo), que sí resulta representativa de la realidad.

Otro estudio interno, también inédito, demuestra que el medio sólido por contacto no toma el 100 % de la población de la superficie; depende de la naturaleza de la superficie y de la tensión superficial del medio (su hidratación y su composición). Al hacer un segundo contacto en la misma superficie exacta se vuelven a obtener recuentos de hasta un 40% con respecto a  la primera toma y en un tercer contacto de hasta un 10% con respecto a la primera toma. Por ello, recomendamos segundas tomas en la misma superficie para obtener resultados más cercanos a la realidad.

Para el recuento total, puede tenerse en cuenta la escala proporcionada por el Comite of Microbial Contamination of Surfaces of the Laboratory Section of the A.P.H.A. (Tras la desinfección):

LUGAR                                                          NUMERO DE COLONIAS POR 25 cm2

BUENO                     REGULAR                  MALO

 

Suelo habitación hospital                    0‑25                            26‑50                          más

 

Mesa habitación hospital                    0‑5                              6‑15                            más

 

Guardería                                           0‑5                              6‑15                            más

 

Suelo baño                                         0‑25                            26‑50                          más

 

Retrete baño                                       0‑15                            16‑25                          más

 

Tocador baño                                     0‑5                              6‑15                            más

 

En catering, Solberg and Co. (Food Technology 12‑1990) recomiendan recuentos inferiores a 1 colonia por 25 cm2 en productos recién lavados y a 4 colonias por 25 cm2 (3 caras de DESINFECTEST®)  en productos lavados hace dos semanas.

En Laboratorios Farmacéuticos, no es bueno obtener recuentos superiores a 5 UFC por 25 cm2-3 caras de DESINFECTEST®- (En zona estéril, el recuento deberá ser de 0).

En Superficies de fábricas de productos cárnicos, Niskanen and Pohja (1977) recomiendan un máximo de 480 cfu, de 25 Escherichia coli y de 25 Staphylococcus aureus por cada muestra de 25 cm2 (3 caras de DESINFECTEST®).

Por fin una Norma ISO termina con este caos de valores de aceptabilidad (UNE-EN-ISO 100.012), permitiendo que haya menos de 100 ufc/25 cm2 de bacterias y menos de 100 ufc/25 cm2 de hongos antes de la desinfección/limpieza; y que haya menos de 10 ufc/25 cm2 de bacterias y menos de 10 ufc/25 cm2 de hongos tras la limpieza o desinfección. Dado que un laminocultivo DESINFECTEST® tiene una superficie de 10 cm2, debe haber menos de 40 colonias de bacterias o de hongos por cara antes de la desinfección/limpieza  y menos de 4 colonias de bacterias o de hongos por cara tras la desinfección/limpieza. Ideal para ello resulta el DESINFECTEST®-MIX.

Lugares de muestreo

Es fundamental la elección de los puntos críticos de muestreo más representativos para controlar en ellos la higiene de forma rutinaria y realizar, así, las desinfecciones en el momento oportuno, ni antes ni después.

‑ Industria alimentaria: Zonas de procesado, equipos, cintas transportadoras, superficies de trabajo, salas de despiece, máquinas de escaldado, zonas de empaquetado, tanques de procesado, almacén de materias primas, almacén de producto terminado, manos y ropa de los manipuladores, suelos de oficinas, Laboratorio de Control Microbiológico, aparatos de aire acondicionado, W.C…

‑ Laboratorios de Control Microbiológico: Cabina de flujo laminar, superficies de manipulación microbiológica, estufas de cultivo, nevera, suelos, ropa y manos de los operarios, W.C…

‑ Hospitales: quirófanos (incluidos mesa de operaciones y utensilios), habitaciones de enfermos, salas de maternidad, U.C.I., salas de consulta, salas de espera, lavandería, cocina, aparatos de aire acondicionado, suelos de pasillos, W.C., laboratorios de bacteriología y micología…

‑ Otros lugares públicos: Guarderías, escuelas, residencias de ancianos, cocinas, oficinas, restaurantes, habitaciones de hoteles, lavabos, transportes públicos…

El usuario es el único responsable de la destrucción de los microorganismos generados en el interior del kit durante su uso, de acuerdo con la legislación medioambiental vigente. Destruir por inmersión en lejía. Mantener fuera del alcance de los niños. No ingerir.

Diseñado por LABORATORIOS MICROKIT, S.L. desde 1.989. Revisado en Octubre, 2016

DESINFECTEST ®  es marca registrada de Laboratorios MICROKIT, S.L.

El usuario final es el único responsable de la destrucción de los organismos que se hayan multiplicado, según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.

Si desea más información sobre nuestro  DESINFECTEST – LAMINOCULTIVOS rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto . O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16

 

LEGIONELLA GVPC, BCYE (con Fe y Cys), BCYE-Cys, (AGAR BASE)

LEGIONELLA GVPC, BCYE (con Fe y Cys), BCYE-Cys, (AGAR BASE)

Aislamiento selectivo de Legionella por el método MF o por siembra directa

(ISO 11731:2017, ISO 11731-2:2004)

COMPOSICIÓN

Medio BASE:

  • Carbón activado                              2,0 g
  • Extracto de levadura                        10,0 g
  • Agar‑Agar                                        22,0 g
  • Alfa-ketoglutarato (sal  mono-K) *  1,0 g
  • (Fórmula por litro)
  • pH final: 6,9 ± 0,1

GVPC Suplemento Selectivo+Nutritivo estéril en solución 200 ml SBL604

Agite contundentemente y añada en asepsia 40 ml a 500 ml de medio enfriado a 50 ºC (o bien 8 ml a 100 ml de medio). Puede contener precipitados por su elevada concentración pero desaparecen al diluir en el medio BCYE base. c.s.p. 2’5 l de medio. Contiene las proporciones precisas, según ISO 11731, de: Tampón ACES, “-Cetoglutarato, KOH, Clorhidrato de L-Cisteina, Pirofosfato férrico, Vancomicina, Cicloheximida, Polimixina y Glicina. Contiene elementos tóxicos, evitar el contacto con la piel.

NOTA 1: La ref. SBL609 es idéntica al suplemento GVPC (con Fe y Cys) pero sin los tres antibióticos del GVPC selectivo, para elaborar el BCYE (con Fe y Cys). La ref. SBL605 es idéntica al suplemento GVPC pero sin la Cisteína, para elaborar el BCYE-Cys, aunque éste se puede sustituir por simple TSA.

NOTA 2: EL caldo GVPC para preenriquecimiento revitalizador, es idéntico al Agar GVPC pero sin Agar-Agar y con el carbón granulado (ver kit P/A Legionella en tubos preparados, ref.RPL330). Ideal para usar antes de la ISO 11731 y encontrar de forma mucho más eficaz la Legionella tras revitalización.

PREPARACIÓN (conversión del medio deshidratado en medio preparado)

Disolver 17 gramos de medio en 500 ml de agua bidestilada. Calentar hasta hervir para la total disolución. Autoclavar a 121 ºC, 15 minutos. El color final del medio es negro. Enfriar a 45-50 ºC y, para el medio selectivo GVPC, añadir asépticamente 40 ml de Legionella Supplement-200 ml (SBL604, tampón ACES/KOH; nutritivo con α-ketoglutarato, clorhidrato de L-cisteina y pirofosfato férrico; y selectivo, con Vancomicina, Polimixina, Cicloheximida y Glicina); para el medio no-selectivo BCYE con Fe y Cys, añadir 40 ml de SBL609 (con Fe y Cys pero sin los antibióticos). Para el medio BCYE-Cys,  añadir 40 ml de Legionella-Cys Supplement-200 ml (SBL605, tampón ACES/KOH, α-ketoglutarato y pirofosfato férrico), aunque como es para ver que en él no crecen las Legionellas, se puede sustituir por simple TSA, donde tampoco crecen.  Mezclar muy bien y verter 20 ml/placa cuando el medio esté a punto de solidificar, para que la distribución del carbón activo sea lo más homogénea posible. No sobrecalentar o el agar se volverá demasiado blando: Es posible que sea necesario añadir aún más Agar-agar (BCB006)  para minimizar la friabilidad del agar,  si se va a sembrar con asa (aceptado en ISO 11731).

PARA USO EXCLUSIVO

EN LABORATORIO.

MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO

EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO.

DESHIDRATADO CODIGO: DMT007

CONTROL DE CALIDAD DE LOS MEDIOS GVPC y BCYE + Fe + Cys

Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar laboratorio,

tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,…)

DESHIDRATADO: Polvo, Negro

PREPARADO: Estéril, Negro.

CONTROL DE CRECIMIENTO 2 semanas a 37°C aproximadamente:

Legionella pneumophila MKTN 12821 serogrupo1, Correcto, colonias gris-azuladas, cristalinas, mucosas, en 2-15 días, en medio suplementado GVPC y en BCYE+Fe+Cys. No crece en medio BCYE-Cys, sin suplemento nutritivo de hierro y cisteína. En el medio BCYE con suplemento nutritivo pero sin antibióticos, crece aproximadamente el doble de población que en el GVPC. Con respecto a PCA estandarizado y suplementado,* recuento 126 %, pero de forma selectiva.

Legionella pneumophila serogrupo 2-15, MKTLeg-2, Idem.

Escherichia coli, MKTA 25922 parcialmente inhibido. Con respecto a PCA estandarizado y suplementado,* recuento 27 %.

Micrococcus luteus MKTA 9341, inhibido en el GVPC selectivo.

* El que cumple con recuperación superior al 92-125% con respecto a cepas cuantitativas trazables a la cepa tipo. Incertidumbres detectadas entre todos los lotes a lo largo de un año (la mayoría de la incertidumbre se debe a la cepa y a la proporción de cepas acompañantes inoculadas, no al medio).

PRESENTACION: MEDIO DESHIDRATADO (BCYE BASE) Y SUPL. GVPC / BCYE+Fe+Cys,  KITS P/A caldo revitalizante, PLAQUIS HERMÉTICAS Y PLACAS MF GVPC, FRASCOS PREPARADOS 100 ml (BCYE-BASE) + SUPL. GVPC / BCYE+Fe+Cys.Suplemento selectivo + nutritivo para GVPC (SBL604). Suplemento sin Cysteina para BCYE-Cys. Suplemento nutritivo Fe + Cys sin antibióticos para BCYE.

Nuevo: Placa preparada GVPC (con glicina, cisteína, hierro, ACES y antibióticos) pH 6,8 s/ISO 11731:2017 (Ref: PPLM60) y placa preparada BCYE (idem sin antibióticos ni glicina)  pH 6,8 s/ISO 11731:2017 (Ref: PPLM61)

MODO DE EMPLEO E INTERPRETACION DE RESULTADOS

Medio selectivo GVPC: Inocular  una membrana de filtración de 0’22 µm (VAC022,  no usar de 0,45 µm), o mejor 0´1 ml de un extracto del fondo del tubo tras la centrifugación a 2500 r.p.m., 20′ de una muestra rascada, o bien 0’1 ml del fondo del caldo de enriquecimiento concentrado (RPL330) sobre una placa. O aplicar una placa de contacto sobre la superficie, o bien introducirla en un aparato de control de aire. Preincubar estrictamente 30 minutos a 50 ºC para eliminar la flora competitiva acompañante. Incubar a 35 ºC aproximadamente, en atmósfera húmeda de 2 a 14 días. Las colonias de Legionella pneumophila son blanco-azuladas, brillantes, mucosas, de 1-2 mm Ø, circulares, lisas, algo elevadas y con los bordes enteros, fluorescentes (verde mate a menudo teñido de amarillo) en la oscuridad bajo luz UVA (linterna MICROKIT VMT050). Subcultivar 3 colonias en  BCYE+Fe+Cys  (sin antibióticos)  y en BCYE-Cys (o TSA), al menos 2 días a 36 ± 1°C.  Legionella crece en BCYE (con Fe y Cys) sin antibióticos (y en GVPC), pero no crece en BCYE-Cys (ni en medios generales tipo TSA, agar sangre, PCA, YEA, Nutrient Agar…). Las colonias deben confirmarse con oxidasa positivo, a menudo lento (KOT050), catalasa positiva (KMT299) y serotipado (MICROKIT-LEGIONELLA-VIRAPID VR002, QUE PUEDE USARSE DIRECTAMENTE EN EL PRIMER AISLAMIENTO DE GVPC Y AHORRARSE ASÍ EL TIEMPO Y COSTE DE LAS OTRAS PLACAS DE BCYE (con Fe y Cys) y BCYE-Cys (o TSA).  Contar sólo la placa de GVPC con más colonias de Legionella pneumophila. Si no se encuentra, expresar los resultados como “no detectada”, ya que a veces está presente y no crece. Peligro, microorganismos de alto riesgo para inmunodeprimidos, por inhalación de aerosoles (pero no llega a considerarse de Clase III).

NOTA: Los otros dos medios mencionados en la ISO 11731:2017 (BCYE con suplementos selectivos: BCYE+AB, Modified Wadowsky Yee: MWY) son alternativos, no son necesarios. Esta nueva versión 2017 de la Norma describe la fluorescencia de otras especies de Legionella: L.anisa, L.bozemanii, L.cherrii, L.dumoffii, L.gormanii, L.gratiana, L.parisiensis, L.steigerwaltii y L.tucsonensis) tienen autofluorescencia blanca brillante; L.erythra y L.rubrilucens aparecen rojas; L.pneumophila verde mate, a menudo teñido de amarillo .

El usuario final es el único responsable de la destrucción de los organismos que se hayan multiplicado, según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.

Si desea más información sobre nuestro  LEGIONELLA GVPC, BCYE (con Fe y Cys), BCYE-Cys, (AGAR BASE) rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto . O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16

Quanti-P/A Clostricult – Clostridium perfringens

Quanti-P/A Clostricult

Recuento de Clostridium perfringens y/o de Clostridios sulfito-reductores  en 1 g, 50 ml, 100 ml ó 250 ml de muestra

Quanti-P/A-Clostricult-TSC para detección y recuento fiables de Clostridium perfringens en 100 ml de muestra de aguas potables o en 1 gramo/ml de muestra de alimentos. Ref: QPA-CP (caja  20 u)

Quanti-P/A-Clostricult-SPS para detección y recuento fiables de Clostridium sulfito-reductores en 1 gramo/ml de muestra de alimentos/cosméticos o en 50 ml de muestra de aguas envasadas. Ref: QPA-CSR (caja  40 u)

Clostridium perfringens es un anaerobio estricto que por el método destructivo de filtración de membrana, aunque sea el método oficial, ve reducida su concentración a niveles inaceptables (baja al 10% e incluso al 1% respecto al valor inóculo, cuando debería recuperarse al menos un 50-95 % del valor inóculo) y además es incapaz de ofrecer una sensibilidad adecuada (el 49% de las aguas con este microorganismo, casi la mitad,  dan falso negativo con dicho sistema, cuando deberían dar como máximo un 5% de falsos negativos; y no sólo con el medio de la Directiva 2003 de aguas de consumo, el Agar m-CP, también con el medio de la Nueva Directiva 2015 de aguas de consumo, el Agar TSC).

Por otra parte el sistema DryPlates para recuento de microorganismos, por inclusión en masa de 1 ml de muestra, sin necesidad de calentar/enfriar agares, no puede emplearse en anaerobios estrictos, porque la fina capa de medio los oxigena demasiado. Desde la invención de las DryPlates en 2014, MICROKIT ha estado intentando encontrar el método idóneo para hacer recuentos de  Clostridium perfringens y de Clostridium sulfito-Reductores en 1 ml de muestra de alimento o cosmético, en 50 ml de aguas envasadas y en 100 ml de aguas de consumo humano. Y tras 3 años, en Junio de 2017 por fin lo ha conseguido! Damos la bienvenida al futuro a los pioneros, con criterio propio, que no se dejan cegar por la ortodoxia normativa! Sin duda pasarán años hasta que este nuevo método sea el oficial, pero de ninguna manera eso significa que no deba emplearlo desde ya y adelantarse al futuro normativo, que siempre es tan lento. La fiabilidad de resultados es lo más importante. Y actualmente, esta fiabilidad está gravemente comprometida en los recuentos de anaerobios.

Empleando el mismo hidragar de las DryPlates diseñado y patentado por MICROKIT, mezclado con el medio de cultivo TSC  (QPA-CP para Clostridium perfringens) o SPS (QPA-CSR para Clostridios sulfito-reductores) en bolsas transparentes, rígidas y herméticas, con tapón a rosca, se consigue una recuperación muy cercana al 100% del valor inóculo y una sensibilidad también muy cercana al 100% de las muestras realmente positivas. Hemos bautizado este nuevo método patentado por MICROKIT con el nombre Quanti P/A, porque utilizamos los mismos caldos P/A que diseñamos hace décadas, pero con el hidragar de las DryPlates para poder hacer recuentos.

Se añaden como ventajas a la fiabilidad mediante estos excelentes resultados, la comodidad del método (ahorro de filtraciones de membrana, que además son destructivas para las células subletales; siembra en masa sin necesidad de calentar y enfriar agares) y su extraordinaria caducidad (3 años desde fabricación). Además, se ahorra el empleo de jarras y de costosas atmósferas de anaerobiosis, ya que se incuba hermético en ausencia de aire (semivacío).

El Agar TSC es el medio Normativo para análisis de Clostridium perfringens, tanto en muestras de alimentos (ISO 13401), como de aguas de consumo humano (ISO 14189).

El Agar SPS es el medio Normativo (AOAC) para análisis de Clostridium sulfito-Reductores, tanto en muestras de alimentos, como de aguas envasadas.

¡Enhorabuena por utilizar el mejor método para recuento de anaerobios en aguas (o en alimentos y cosméticos) sin necesidad de calentar/enfriar agares, sin oxigenar por filtración y sin necesidad de atmósferas de anaerobiosis, sustituto del Siglo XXI de los medios deshidratados, de los medios preparados hidratados en tubo, frasco o botella y del método destructivo de Filtración de Membrana!

MODO DE EMPLEO

(ver tutorial en  https://www.youtube.com/watch?v=A8WifR8mZ1k ):

1) para detección y recuento de Clostridium perfringens y sus esporas en 100 ml de muestra de aguas de consumo humano:

  1. Tome un Quanti-P/A-CP, dele la vuelta para que el medio salga del fondo, doble el fondo de la bolsa para que no vuelva a depositarse allí, ponga la bolsa vertical con el fondo doblado, abra el tapón y añada por el orificio, con pulso para evitar derrames, 100 ml de la muestra de agua (tratada con Na TioSulfato si es clorada). Si lo que busca son esporas, caliente el agua de muestra a 75 ºC antes de añadirla al kit. Lo ideal es analizar una muestra de 100 ml a temperatura ambiente para formas vegetativas y un duplicado de 100 ml de la misma muestra a 75ºC para esporas. Los eventuales  artefactos negros, púrpura o rosados no afectan los resultados: son de contorno irregular, no crecen al incubar, es más: desaparecen, a diferencia de las colonias. Apriete para que el agua llegue casi al borde del tapón y quede muy poco aire.
  2. Cierre con fuerza el tapón. Amase el conjunto con las dos manos unas 10-30 veces (o bien con stomacher-masticator) para mezclar el medio con los 100 ml de muestra de agua. Si queda polvo o algún grumo de más de 1 cm, pellízquelo hasta que se disuelva o parta. No se preocupe por los pequeños grumos que queden, desaparecerán durante la incubación. Cuanto mejor amase mejores resultados obtendrá, al separar mejor las ufcs. Aplane la bolsa contra la poyata y planche el medio hidratado con la muestra, en toda la superficie interna de la bolsa, para que la capa de medio sea lo más homogénea y fina posible, y así luego pueda contar mejor las colonias al trasluz. Puede ayudarse con una caja de frascos MICROKIT llena de frascos de 100 mL (peso ideal para el mejor planchado). El agua fría se disuelve peor.
  3. Deposite la bolsa horizontal en la estufa de cultivos, verificando que el tapón sigue herméticamente cerrado. Puede apilar numerosas bolsas, alternando su posición (tapones al N en una capa, al S en otra, al E en otra, al W en otra…)
  4. Incube 24-48 horas a 35-45ºC (a 35ºC puede haber falsos positivos de colonias negras de fermentadores facultativos: Staphylococcus, Salmonella, Proteus, Klebsiella, Citrobacter…). Si se prolonga la incubación, las colonias se agrandan, se solapan y en caso extremo todo el medio ennegrece, impidiendo así el recuento que, por este motivo, debe hacerse entre 24 y 48 h desde iniciada la incubación. Si a las 24 h no hay crecimientos, espere a leer a las 48h. Durante la incubación, en caso positivo extremo, la bolsa se podría hinchar del gas generado.
  5. Extraiga la bolsa y cuente al trasluz todas las colonias o burbujas negras, que serán el número de ufc de Clostridium perfringens en 100 ml de muestra de agua. Cuente primero por una cara y repita el recuento por la otra, ya que el medio es traslúcido: Sume los recuentos de ambas caras evitando contar dos veces la misma colonia. En este sistema se cuentan perfectamente entre 0 y 200 colonias. Puede confirmar las colonias con el kit KMT008 (ISO 6461 y FDA) pinchando a través de la bolsa.

2) para detección y recuento de Clostridium perfringens y sus esporas en 1 g ó ml de muestra de alimentos o cosméticos (u otras matrices):

Siga exactamente los mismos pasos descritos en el apartado anterior, con las siguientes salvedades:

  1. Mezcle su ml ó gramo de muestra con 100 ml de medio estéril FTM (puede emplear agua peptonada tamponada, Ringer, Solución marina al 0,9 %, agua…, aunque FTM es lo ideal para conseguir los más óptimos resultados en anaerobios).
  2. Cuente todas las colonias o burbujas negras, que serán el número de ufc de Clostridium perfringens en 1 ml ó gramo de muestra de alimento, cosmético o la matriz que sea (aumenta x10 el límite inferior). En este sistema se cuentan perfectamente entre 1 y 100 colonias.

3)  para detección y recuento de Clostridium sulfito-reductores en 50-100 ml de muestra de aguas envasadas:

Siga exactamente los mismos pasos descritos en el apartado 1), con las siguientes salvedades:

  1. En este caso use la bolsa Quanti-P/A-CSR.
  2. Añada 100 ml del agua de muestra (o 50 ml de su agua de muestra más 50 ml de agua estéril) y amase sobre la pila para prevenir posibles derrames. Siga los demás pasos indicados en el apartado 1)
  3. Incube 24 horas a 35ºC aprox.
  4. Cuente todas las colonias o burbujas negras, que serán el número de ufc de Clostridium sulfito-reductores en 50-100 ml de agua envasada. En este sistema se cuentan perfectamente entre 1 y 100 colonias.

4)  para detección y recuento de Clostridium sulfito-reductores en 1 g ó ml de muestra de alimentos o cosméticos (u otras matrices):

Siga exactamente los mismos pasos descritos en los apartados 1) y 3), con las siguientes salvedades:

  1. Mezcle su ml o gramo de muestra con 100 ml de medio estéril FTM (puede emplear agua peptonada tamponada, Ringer, Solución marina al 0,9 %, agua,…, aunque FTM es la mejor opción en anaerobios). Aumenta x10 el límite inferior de cuantificación, al emplear directamente 1 g de alimento diluido en 100 ml de caldo: leerá ufc/g, no las hasta ahora habituales ufc/0,1 g.

CONSERVACIÓN Y PRECAUCIONES DE USO

Almacenar a temperatura ambiente (ideal 15-25ºC) ¡no en nevera!, ya que en ésta la humedad es más fácil que prehidrate y estropee los medios. Es imprescindible almacenar en lugar muy seco y oscuro, ya que la humedad y la luz dañan irreversiblemente los medios de cultivo deshidratados. Si trabaja en zonas de alta humedad atmosférica, almacene las Quanti-P/A, bien cerradas en su bolsa, dentro de una caja hermética “tupper” con sacos antihumedad (ej: VRB747).

VER FOTOGRAFIAS EXPLICATIVAS EN FOLLETO ANEXO

Con este sistema, con la destreza que da la experiencia, un analista puede controlar (de la muestra a la estufa incubadora) hasta 50 muestras por hora. Tambien en este mismo método, el Quanti-P/A-Enterocult (QPA-ETC) para recuento de Enterococos fecales (colonias pardas-negras) en 100-250 ml de muestra de agua, conseguido mezclando nuestro clásico P/A Enterocult con Hidragar en este tipo de envase. Para cuantificar Coliformes-E.coli y Pseudomonas aeruginosa emplee nuestros caldos P/A (MCC Colicult y Pseudocult, respectivamente) en las cubetas NMP. Esto ahorrará los elevados porcentajes de falsos negativos que también implica el método de filtración de membrana en estos tres parámetros (21% en E.coli-Coliformes, 6% en Enterococos fecales y 33% en P.aeruginosa).

El usuario final es el único responsable de la eliminación de los microorganismos según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.

Validado en base a la Norma UNE-EN-ISO 16140. Exactitud del 87,5 % al 100 % de ufcs, en función de lo correctos que sean el amasado- planchado de la muestra al mezclarla con el medio. Precisión de duplicados a 35-45ºC, medida en CV: 24,2%. Exclusividad a 45ºC: 100%. Inclusividad en muestras no calentadas a 75ºC: 100% (no disponíamos de esporas para evaluar a 75ºC). Límite inferior de cuantificación: 1-3 ufc/100 ml en muestras tanto frías como calientes (75ºC).

Si desea más información sobre nuestro  Quanti-P/A Clostricult rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto . O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16

CAMPYLOBACTER BLOOD FREE MEDIUM AGAR

CAMPYLOBACTER BLOOD FREE MEDIUM AGAR

(BASE) (mCCD Agar)

Aislamiento selectivo para Campylobacter s/ ISO 10272-1:2006

Campylobacter jejuni

COMPOSICIÓN

  • Extracto de carne                   10,00 g
  • Peptona de carne                    10,00 g
  • Triptona                                 3,00 g
  • Cloruro sódico                       5,00 g
  • Carbón activo                         4,00 g
  • Desoxicolato sódico               1,00 g
  • Sulfato ferroso                       0,25 g
  • Piruvato sódico                      0,25 g
  • Agar‑agar               13,00 g
  • Fórmula por litro)                  pH final: 7,4 ± 0,2

PREPARACIÓN

Disolver 46 g en 1 litro de agua bidestilada. Calentar hasta ebullición, agitar hasta la completa disolución. Autoclavar a 121 ºC durante 15 minutos. Enfriar a 50 ºC y añadir asépticamente 1 vial de suplemento SKIRROW (SBH020) (mejor que 2 viales de suplemento PRESTON-BOLTON -SLM131-).

PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO. AGITE EL BOTE ANTES DE USAR, PARA ASEGURAR  LA  HOMOGENEIZACIÓN DE LOS EVENTUALES GRADIENTES DE DENSIDAD DE LOS COMPONENTES. MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO.

DESHIDRATADO CODIGO: DMT184

CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO

Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar laboratorio, tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,…)

DESHIDRATADO: Polvo fino, Negro    PREPARADO: Estéril, Negro.

EVALUACIÓN DEL RENDIMIENTO ISO/TS 11133-2 (Aplicando el método ISO 10272, 18-72 h a 42 ºC en microaerofilia o el indicado en el Manual MICROKIT actualizado):

  • Campylobacter jejuni MKTA 29428, con acompañantes (E.coli MKTA 25922 y P.mirabilis MKTA 29906). Tras estriar  e incubar, aparecen colonias típicas.
  • Campylobacter coli MKTA 43478, tras estriar  e incubar, aparecen colonias típicas.
  • Escherichia coli MKTA 25922, inhibido: tras incubar, estriar e incubar, no aparecen casi colonias.
  • Staphylococcus aureus MKTN 6571, totalmente inhibido: tras incubar, estriar e incubar, no aparece ni una colonia.

Las colecciones TIPO prohiben el uso de su referencia por lo que indicamos la nuestra, directamente trazable a la colección TIPO.

PRESENTACIÓN: MEDIO DESHIDRATADO BASE + SUPLEMENTOS , TUBOS PREPARADOS INCLINADOS.

NOTA: Campylobacter jejuni puede contaminar aguas y alimentos, provocando infecciones a menudo mal clasificadas como salmonelosis muy frecuentes en bebés y por contaminaciones cruzadas en la nevera de alimentos crudos con otros ya cocinados. Para su búsqueda en alimentos y aguas,  enriquecer 25 g de alimento o 500 ml de agua en Campy Broth (DMT024) + Suplemento PRESTON-BOLTON (SLM131), o bien añadir a 225 ml de Agua de Peptona Tamponada con 25 g de alimento, o a 500 ml del agua, el contenido de un tubo de CAMPY P/A concentrado (RPL332). Incubar 14-48 h a 43°C aproximadamente y sembrar en estría en la placa de Campy Agar.

SIEMBRA

Inocular las placas preparadas sembrando la muestra o el enriquecimiento en estría a fin de aislar colonias. Incubar a durante 24‑48 horas a 43 ºC aproximadamente, en una atmósfera enriquecida en CO2 (5% de Oxígeno y 10% de Anhídrido Carbónico) mediante KKM101 (en jarras de anaerobiosis) o KKM037 (en bolsas), o con el método de la vela de microaerofilia. Normalmente, C. jejuni crece en 24 horas, pero es oportuno reincubar las placas negativas otras 24 horas. La flora acompañante no crece a 43 ºC.

Agotamiento del oxígeno y enriquecimiento en CO2 en jarrita de microaerofilia,, en sólo unos segundos, mediante el sistema de la vela.

INTERPRETACIÓN

Las colonias de C. jejuni no son hemolíticas y pueden presentarse como grises y planas, con el borde irregular, o bien elevadas y redondas con aspecto mucoso. Este aspecto depende del grado de humedad de la superficie del agar. Confirmar con M-IDENT CAMPYLOBACTER LÁTEX (KMB001).

El usuario es el único responsable de la eliminación de los microorganismos según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.

Si desea más información sobre nuestro  CAMPYLOBACTER BLOOD FREE MEDIUM AGAR rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto . O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16

 

M-IDENT®- Burkholderia cepacia

M-IDENT® Burkholderia cepacia

Kit de confirmación de Burkholderia cepacia en aguas y cosméticos

La confirmación de colonias de Burkholderia cepacia se ha convertido en el gran hándicap de los laboratorios cosméticos y a menudo la única solución era enviar las colonias a Identificación molecular (MICROKIT SFI004). Aunque ésta siga siendo la mejor opción, el mercado pedía un kit con el que poder orientarse antes de decidir.

El Agar BCPT (BCSA en otras marcas) se basa en la asimilación del piruvato como fuente de C y el rojo fenol como indicador de la acidificación, por crecimiento de B.cepacia con viraje del medio de naranja a fucsia alrededor de las colonias diana. El Agar OFPBL es un O/F modificado con lactosa como fuente de C y azul de bromotimol como indicador de la acidificación por crecimiento de B.cepacia con viraje de azul a amarillo. Es menos selectivo que el Agar BCPT. El BCPT Cromogénico de MICROKIT es un BCPT al que se ha añadido un cromógeno que permite un mayor contraste de las colonias, que crecen de color rojo intenso, con los mismos virajes del medio que el BCPT clásico.

Antes de emplear el kit M-Ident-B.cepacia, cercíorese que las colonias son oxidasa positivas y no son fluorescentes bajo luz UV de 366 nm

Burkholderia cepacia es citocromo-oxidasa positiva (viraje a azul de las tiras estables MICROKIT KOT050)

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Burkholderia cepacia no provoca fluorescencia (luz azul-verde-amarilla) en BCPT ni en OFPBL ni siquiera cuando se observa bajo luz UVA de 366 nm (linterna MICROKIT VMT050)

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Según Bacdive DSMZ, estas son las pruebas que distinguen las cepas que hemos detectado capaces de crecer en BCPT o que podrían ser confundidas con B.cepacia al ser también oxidasa positivas:

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

El kit distingue no solo la B.cepacia, sino además todas las Burkholderias declaradas como patógenas, con las mismas características de B.cepacia: Ox+ ADH- MNE+ PAC+ (B.ambifaria, B.arboris, B.cenocepacia, B.contaminans, B.diffusa, B.dolosa, B.gladioli, B.latens, B.metallica, B.multivorans, B.pseudomultivorans, B.seminalis, B.stabilis) y también las patógenas que a diferencia de las demás, son  ADH+ (B.oklahomensis, B.thailandensis y B.ubonensis).

En nuestros controles, la prueba que distingue claramente las especies de Burkholderia de las de Pseudomonas es el ADH: Pseudomonas deja el medio rojo mientras Burkholderia lo vira  a naranja o amarillo, según la cepa (por ejemplo la B.cepacia DSMZ 50181 vira a amarillo, mientras la B.cepacia ATCC™ 25416 y la B.cepacia NCTC 10743 viran a naranja, en 24 horas de incubación.

PRESENTACION:

M-IDENT®-Burkholderia cepacia, kit 4 test para confirmar 5 colonias sospechosas de este patógeno y otras Burkholderias patógenas en agares BCPT/BCSA/OFPBL. Todas ellas coinciden en estas pruebas diferenciales: Oxidasa + (azul), ADH- (amarillo), MNE+ (amarillo), PAC+ (amarillo).

Kit 4 test suficiente para confirmar 5 colonias. Caducidad 1 año

– 5 tiras estables para el test de la Citocromo-oxidasa (KOT0505)

– 5 tubos  líquidos de Caldo ADH (rojo).

– 5 tubos  líquidos de Caldo MNE (verde).

– 5 tubos  líquidos de Caldo PAC  (verde).

CODIGO: KMT006

EL KIT NO INCLUYE:

  • Cepas cuantitativas MICROKIT para validar los reactivos una vez llegados a fábrica o tras almacenamientos prolongados o inadecuados.
  • Participación en servicios intercomparativos como SEILAGUA® y SEILAPARFUM para validar los procedimientos y los operarios
  • Lámpara de luz ultravioleta de 366 nm (ver Linterna MICROKIT VMT050)

PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO. MANTENGA LA CAJA CERRADA, EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO

VENTAJA: Su extremadamente larga caducidad, de 1 año asegurado.

CONTROL DE CALIDAD DEL KIT

Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar laboratorio, tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,…)

TIRAS Citocromo-oxidasa: NO estéril, color rosa pálido

TUBOS PREPARADOS de Caldo ADH: Estéril, líquido, rojo, transparente.

TUBOS PREPARADOS de Caldo MNE: Estéril, líquido, verde, transparente. TUBOS PREPARADOS de Caldo PAC: Estéril, líquido, verde, transparente.

CONTROL DE CRECIMIENTO a 37°C durante 24 horas, en aerobiosis:

  • Tiras oxidasa: Burkholderia cepacia ATCC™ 25416 vira a azul oscuro de inmediato.
  • Caldo ADH: Pseudomonas aeruginosa WDCM00026, crece con turbidez y permanece de color rojo. Burkholderia cepacia ATCC™ 25416, crece con turbidez y vira de rojo a naranja o amarillo.
  • Caldo MNE: Pseudomonas aeruginosa WDCM00026, crece con turbidez y permanece de color verde. Burkholderia cepacia ATCC™ 25416, crece con turbidez y permanece de color verde, igual que Burkholderia cepacia NCTC 10743. Algunas otras cepas de Burkholderia cepacia (ej: ATCC™ 17759, DSMZ 50181) viran de verde a amarillo.
  • Caldo PAC: Pseudomonas aeruginosa, WDCM00114 crece con turbidez y permanece de color verde. Otras cepas de Pseudomonas aeruginosa (ej: WDCM00026) viran de verde a amarillo. Burkholderia cepacia ATCC™ 25416, crece con turbidez y vira de verde a verde-amarillento o amarillo, igual que Burkholderia cepacia NCTC 10743. Algunas otras cepas de Burkholderia cepacia (ej: DSMZ 50181) permanece verde.

IZQDA: P.aeruginosa WDCM00114
DCHA: B.cepacia ATCC™ 25416

MODO DE EMPLEO E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

-Inocular una porción de la colonia sospechosa, procedente de Agar BCPT  o OFPBL, en la zona reactiva de la tira de oxidasa.

-Sembrar por dilución otra porción de colonia en un tubo de caldo ADH, otra en un tubo de caldo MNE y otra en un tubo de caldo PAC.

-Incubar a 36 ± 2º C durante 20 ± 4 horas, en aerobiosis.

-Burkholderia cepacia es toda colonia típica en BCPT o en OFPBL, no fluorescente, oxidasa positiva (viraje a azul oscuro), ADH positivo (vira de rojo a naranja o amarillo). Además, según sea la cepa, virará o no de verde a amarillo en MNE y en PAC.

El usuario es el único responsable de la eliminación de los microorganismos según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.

Si desea más información sobre nuestro  M-IDENT®- Burkholderia cepacia rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto . O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16

 

BACILLUS COAGULANS (Thermoacidurans) AGAR

BACILLUS COAGULANS (Thermoacidurans) AGAR

Medio sólido diseñado para aislar y enumerar Bacillus coagulans (ahora llamado Bacillus thermoacidurans).

COMPOSICIÓN

  • Glucosa                                                 5 g/L
  • Peptona proteosa de carne              5 g/L
  • Extracto de Levadura                         5 g/L
  • K2HPO4                                                4 g/L
  • Agar-agar                                             20 g/L

pH final:  5 ± 0,2

Suplementos termolábiles:

  • MnSO4.4H2O    0,05 mg en 10 mL de agua, esterilizar por MF y añadir al medio tras autoclavarlo
  • CaCl2    0,045 mg en 10 mL de agua, esterilizar por MF y añadir al medio tras autoclavarlo

PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO. MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO. AGITE EL BOTE ANTES DE USAR.

PREPARACIÓN

Disolver 39 g de medio en 990 ml de agua bidestilada. Calentar hasta ebullición, agitando, para su total homogeneización. Autoclavar a 121 ºC durante 15 minutos. Enfriar a 48 ºC y añadir asépticamente 10 ml del suplemento SMT041. Mezclar y repartir en placas, sin recalentar.

PRESENTACIÓN

Medio deshidratado (100 g, 500 g, 5 Kg): DMT241

Suplemento en frasco pinchable 100 mL, esterilizado por filtración, para 10 L de medio, contiene 0,05 mg MnSO4.4H2O y 0,045 mg CaCl2 cada 10 mL de agua: SMT041

NOTA
Este microorganismo es uno de los mejores probióticos que existen, porque produce ácido láctico pero, a diferencia de los lactobacilos, forma esporas resistentes. Se toma contra los trastornos intestinales (diarreas, incluyendo las diarreas de tipo infeccioso como son la diarrea por rotavirus en los niños y la diarrea del viajero; también se usa para la diarrea producida por el uso de antibióticos. El Bacillus coagulans se utiliza también para problemas digestivos en general, para el síndrome del intestino irritable (SII), para las enfermedades inflamatorias intestinales (EII, la enfermedad de Crohn y la colitis ulcerosa), para la colitis por Clostridium difficile, contra el crecimiento excesivo de bacterias “malas” en el síndrome de intestino corto y para una infección debida al Helicobacter pylori que es el que produce úlceras. Algunas personas utilizan el Bacillus coagulans para prevenir las infecciones respiratorias y para reforzar el sistema inmunológico.

Sin embargo, puede contaminar conservas alimenticias y darles un gusto ácido. Esto incluye la comida que es normalmente demasiado ácida para la mayor parte de bacterias; el B. coagulans (thermoacidurans) puede crecer en un pH tan bajo como 4,2. Este medio también sirve para detectar Clostridios acidófilos que estropean ciertos alimentos envasados.

CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO

Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar laboratorio, tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,…)

DESHIDRATADO: Polvo grueso, Color crema.               PREPARADO: Estéril, Color paja.

EVALUACIÓN DEL RENDIMIENTO ISO/TS 11133-2: 24-48 h a 30-37 ºC,

aplicando el método ISO 7932, o el indicado en el Manual MICROKIT actualizado:

Bacillus coagulans (thermoacidurans) WDCM 00002, Excelente, PR > 90% de colonias respecto al número de ufc certificadas e inoculadas en TSA.

Bacillus subtillis MKTA 6633, crecimiento excelente.

SIEMBRA

Sembrar 0,1 ml de la muestra y su serie de diluciones decimales,  en superficie, repartiendo con el asa de Digralsky (VRR154, desechables VCL155). Incubar a 37 ºC aproximadamente, durante 24-72 horas. Al no ser un medio selectivo, deben identificarse las colonias que, si proceden de conservas ácidas, es muy probable que se trate de esta especie y si proceden de inóculos puros, el medio sirve para enumerar y conocer la concentración del preparado probiótico.

El usuario es el único responsable de la eliminación de los microorganismos según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.

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Quanti-P/A Enterocult

Quanti-P/A Enterocult

Recuento de Enterococos fecales en 1 g, 50 ml, 100 ml ó 250 ml de muestra

Quanti-P/A-Enterocult-BEA para detección y recuento fiables de Enterococos fecales en 100/250 ml de muestra de aguas potables o en 1 gramo/ml de muestra de alimentos. Ref: QPA-ETC (caja  20 u)

Mediante este nuevo método de recuento por inclusión en masa de muestras grandes (ej: 100/250 mL de agua, o bien 1 g de alimento) sin tener que fundir ni enfriar medios de cultivo agarizados, puede Ud. enumerar las colonias crecidas como ufc/100-250 mL de agua (o en 1 g de alimento en vez de en 0,1 g) sin necesidad de filtración de membrana en aguas (ni de diluciones en alimentos, que impedían el auténtico recuento en 1 g completo y obligaban a expresar los resultados como “<10 ufc/g”). Incluso en trabajos de campo.

 

 

 

 

 

 

Damos la bienvenida al futuro a los pioneros, con criterio propio, que no se dejan cegar por la ortodoxia normativa! Sin duda pasarán años hasta que este nuevo método sea el oficial, pero de ninguna manera eso significa que no deba emplearlo desde ya y adelantarse al futuro normativo, que siempre es tan lento. La fiabilidad de resultados es lo más importante. ¿Por qué conformarse con un recuento en 0,1 g de muestra, cuando ahora ya puede hacerse en 1 g completo?

Empleando el mismo hidragar de las DryPlates diseñado y patentado por MICROKIT, mezclado con el medio de cultivo Bilis Esculina Azida Agar (BEA) en bolsas transparentes, rígidas y herméticas, con tapón a rosca, se consigue una recuperación muy cercana al 100% del valor inóculo y una sensibilidad también muy cercana al 100% de las muestras realmente positivas. Hemos bautizado este nuevo método patentado por MICROKIT con el nombre Quanti P/A, porque utilizamos los mismos caldos P/A que diseñamos hace décadas, pero con el hidragar de las DryPlates para poder hacer recuentos.

Se añaden como ventajas a la fiabilidad mediante estos excelentes resultados, la comodidad del método (ahorro de filtraciones de membrana, que además son destructivas para las células subletales; siembra en masa sin necesidad de calentar y enfriar agares) y su extraordinaria caducidad (3 años desde fabricación). A pesar de la hermeticidad del kit, los enterococos crecen perfectamente, dejemos o no cámara de aire.

El Agar BEA es el medio Normativo para confirmación de Enterococos fecales, tanto en muestras de alimentos (KAA CENAN modificado), como de aguas de consumo humano (ISO 7899). En la validación del método de Noviembre de 2017,  demostramos que se puede acortar el tiempo de incubación de la Norma ISO 7899 de 48 h (Slanetz-Bartley Agar) +2 h (Bilis Esculina Azida Agar) a sólo 18-24 h (directamente en Bilis Esculina Azida Agar, sea en versión placa tras filtración de membrana, sea en versión Quanti-P/A ETC sin necesidad de filtrar). Y obteniendo incluso exactitudes y precisiones superiores a las del método convencional.

¡Enhorabuena por utilizar el mejor método para recuento de anaerobios en aguas (o en alimentos y cosméticos) sin necesidad de calentar/enfriar agares, sin oxigenar por filtración y sin necesidad de atmósferas de anaerobiosis, sustituto del Siglo XXI de los medios deshidratados, de los medios preparados hidratados en tubo, frasco o botella y del método destructivo de Filtración de Membrana!

MODO DE EMPLEO (ver tutorial en  https://www.youtube.com/watch?v=A8WifR8mZ1k ):

1) para detección y recuento de Enterococos fecales en 100/250 ml de muestra de aguas de consumo humano, envasadas, baño…:

  1. Tome un Quanti-P/A-ETC, dele la vuelta para que el medio salga del fondo, doble el fondo de la bolsa para que no vuelva a depositarse allí, ponga la bolsa vertical con el fondo doblado, abra el tapón y añada por el orificio, con pulso para evitar derrames, 100 ml/250 ml de la muestra de agua (tratada con Na TioSulfato si es clorada).
  2. Cierre con fuerza el tapón. Coloque la bolsa horizontal sobre la superficie de trabajo.
  3. Amase el conjunto con las manos unas 30 veces (o bien vertical con stomacher-masticator) para mezclar el medio con los 100 ml de muestra de agua. Dele la vuelta y repita la operación. Si queda polvo o algún grumo de más de 1 cm, pellízquelo hasta que se disuelva o parta. No se preocupe por los pequeños grumos que queden, desaparecerán durante la incubación.
  4. Ponga la bolsa de pie –tapón arriba-, abra el tapón, golpee el fondo de la bolsa contra la poyata para que el medio interno que se haya colocado cerca del tapón, caiga dentro; deje escapar el aire con cuidado, apretando desde abajo del todo con las manos el medio con muestra, que burbujeará, hasta que el medio hidratado suba hasta el borde del tapón y desaparezca todo el aire.
  5. Cierre entonces de nuevo el tapón con fuerza, sin dejar cámara de aire y vuelva a amasar para repartir, esta vez sin bolsitas de aire (con las manos o con stomacher-masticator). Cuanto mejor amase mejores resultados obtendrá, por separar mejor las ufcs. No se preocupe por los grumos que todavía quedarán, ya que se reabsorberán durante la incubación.
  6. Deposite la bolsa horizontal en la estufa de cultivos, verificando que el tapón sigue herméticamente cerrado. Si lo desea, hágalo en una cubeta para prevenir eventuales vertidos. Extienda el medio con muestra en toda la superficie interna de la bolsa para que la capa de medio sea lo más homogénea posible, y así luego pueda contar mejor las colonias al trasluz.
  7. Incube 18-24 horas a 35-45ºC (dada la selectividad del medio BEA, se puede incubar a 35ºC aprox, aunque los protocolos oficiales digan que es mejor a 44ºC aprox).
  8. Extraiga la bolsa, déjela horizontal y cuente todas las colonias color beige (rodeadas o no de ennegrecimiento), que serán el número de ufc de Enterococos fecales en 100 ml de muestra de agua. Cuente al trasluz la colonias opacas. O bien cuente primero por una cara y repita el recuento por la otra, ya que el medio es traslúcido: Sume los recuentos de ambas caras. En este sistema se cuentan perfectamente entre 1 y 100 colonias. Si lo desea, según nuestros datos de validación, puede aplicar el siguiente factor de corrección, calculado a causa de la opacidad del medio: Recuento < 50 colonias, no corregir. Recuento >50 colonias, multiplicar por 1,3. La presencia de artefactos negros de Citrato Férrico-Amónico no afecta los resultados, al ser de contorno irregular y no confundirse con colonias. Puede extraer colonias para confirmarlas, simplemente pinchando a través de la bolsa.

2) para detección y recuento de Enterococos fecales en 1 g ó ml de muestra de alimentos, cosméticos u otras matrices:

Siga exactamente los mismos pasos descritos en el apartado anterior, con las siguientes salvedades:

  1. Mezcle su ml ó gramo de muestra con 100 ml de agua peptonada tamponada neutralizante, Ringer, Solución marina al 0,9 %, agua…
  2. Cuente todas las colonias color beige (rodeadas o no de ennegrecimiento), que serán el número de ufc de Enteroccos fecales en 1 ml ó gramo de muestra de alimento, cosmético o la matriz que sea (aumenta x10 el límite inferior de cuantificación/detección). En este sistema se cuentan perfectamente entre 1 y 100 colonias.

CONSERVACIÓN Y PRECAUCIONES DE USO

Almacenar a temperatura ambiente (ideal 15-25ºC) ¡no en nevera!, ya que en ésta la humedad es más fácil que prehidrate y estropee los medios. Es imprescindible almacenar en lugar muy seco y oscuro, ya que la humedad y la luz dañan irreversiblemente los medios de cultivo deshidratados. Si trabaja en zonas de alta humedad atmosférica, almacene las Quanti-P/A, bien cerradas en su bolsa, dentro de una caja hermética “tupper” con sacos antihumedad (ej: VRB747).

Con este sistema, una vez alcanzada la destreza que da la experiencia, un analista puede controlar (de la muestra a la estufa incubadora) hasta 50 muestras por hora. Ver también Quanti-P/A Clostricult-TSC (QPA-CP) para Clostridium perfingens y sus esporas y Quanti-P/A Clostricult-SPS (QPA-CSR) para Clostridium Sulfito-Reductores, conseguidos mezclando (TSC Agar y SPS Agar, respectivamente) con Hidragar en este tipo de envase. Para cuantificar Coliformes-E.coli y Pseudomonas aeruginosa emplee nuestros caldos P/A (MCC Colicult y Pseudocult, respectivamente) en las cubetas NMP. Esto ahorrará los elevados porcentajes de falsos negativos que también implica el método de filtración de membrana en estos tres parámetros (21% en E.coli-Coliformes, 6% en Enterococos fecales y 33% en P.aeruginosa).

El usuario final es el único responsable de la eliminación de los microorganismos según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.

Validado en base a la Norma UNE-EN-ISO 16140. Exactitud del 99,59 % respecto a Slanetz-Bartley Agar (SB) en placa por filtración de membrana (117,42 % en el rango bajo de recuento, 103,78 % en el rango medio y 77,58 % en el rango alto). Precisión CV 22% (20,79% en el rango bajo, 24,26 % en el rango medio y 21% en el rango alto), frente al 29,7 % en SB. Exclusividad: 100%. Inclusividad: 100 %. Límite inferior de cuantificación: 1-5 ufc/100 ml.

Si desea más información sobre nuestro  Quanti-P/A Enterocult rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto . O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16

AIRESANO ESPORICIDA – GERMOSAN

AIRESANO ESPORICIDA – GERMOSAN

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Si desea más información sobre nuestro  Airesano esporicida .- Germosan rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto . O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16

Vibrio cholerae MPT Broth – Vibrio cholerae MPT AGAR

Vibrio cholerae MPT Broth – Vibrio cholerae MPT AGAR

Medios diseñados por MICROKIT para revitalizar y aislar Vibrio cholerae

 

                                                                     COMPOSICIÓN CALDO                     COMPOSICIÓN AGAR

 

Triptona                                                                               17,0 g/L                                                17,0 g/L

Peptona de soja                                                                 3,0 g/L                                                  3,0 g/L

Cloruro sódico                                                                    25,0 g/L                                                25,0 g/L

Fosfato dipotásico                                                              2,5 g/L                                                  2,5 g/L

Glucosa                                                                                2,5 g/L                                                  2,5 g/L

Agar-Agar MICROKIT-E                                                      0,75 g/L                                                15 g/L

Extracto de 50 g/L de nutrientes específicos MPT      c.s.                                                         c.s.

 

pH final:  8,6 ± 0,2

 

PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO. MANTENGA LOS TUBOS BIEN CERRADOS EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO.

 

PRESENTACIÓN

A causa de sus componentes revitalizadores, no existe versión deshidratada, sino tubos 10 mL de caldo (TPL507) para revitalizar extraordinariamente V.cholerae y tubos 18 mL de agar  (TPL508) para fundir en una placa y aislar por estría colonias de V.cholerae procedentes del caldo.

 

NOTA
Este microorganismo es uno de los más difíciles de mantener vivo. Por eso tras años de investigaciones, MICROKIT ha encontrado los nutrientes específicos que faltaban en los medios habituales y hemos denominado “nutrientes específicos MPT”, dejando  su composición en secreto industrial para evitar malas copias. Cepas que llevaban “muertas” más de 1 año en placas completamente secas de TCBS, han sido perfectamente revitalizadas gracias a estos dos medios, y de ninguna manera han crecido con ninguno de los medios clásicos.

 

CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO Y MODO DE INCUBACIÓN

Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varíen las condiciones (más de 3 meses sin usar, tras desinfectar laboratorio, tras conservar a alta Tª, cuando adquiere aspectos extraños aunque no haya llegado la fecha de caducidad teórica de la etiqueta,…)

DESHIDRATADO: No existe.               PREPARADO: Estéril, Color paja/crema.

EVALUACIÓN DEL RENDIMIENTO ISO/TS 11133-2: 18-24 h a 28 ± 1  ºC,

aplicando el indicado en el Manual MICROKIT actualizado:

Vibrio cholerae Eltor biovar. Serovar O:7 WDCM 00203: Crecimiento excelente tanto en caldo, como en agar, en estría de una alícuota procedente del caldo.

Vibrio cholerae Eltor biovar. Serovar O:1 MKTC 652: Crecimiento excelente tanto en caldo, como en agar, en estría de una alícuota procedente del caldo.

 

El usuario es el único responsable de la eliminación de los microorganismos según la legislación medioambiental vigente. Autoclavar antes de desechar a la basura.

Si desea más información sobre nuestro  Vibrio cholerae MPT Broth – Vibrio cholerae MPT AGAR rellene nuestro formulario de contacto http://www.medioscultivo.com/contacto . O si lo prefiere póngase en contacto con nosotros a través de nuestro correo electrónico microkit@microkit.es o por teléfono en el nº 91-897 46 16